关键词:
大蒜油
酒精性脂肪肝
抗氧化
CYP2E1
摘要:
研究目的
酒精对肝脏有明显的毒性作用,酗酒是导致酒精性肝病(ALD)的首要因素。酒精性脂肪肝(AFLD)是ALD的一种早期表现,可以发展为酒精性肝炎、酒精性肝纤维化,甚至酒精性肝硬化。近年来我国酒类产量不断增加,酒精性脂肪肝在我国呈现逐年增多的趋势,已成为一大医学和社会问题。AFLD发病机制非常复杂,尚不完全清楚,目前临床上无有效的治疗药物,因而研发能够防治AFLD的药物具有重要的意义。
大蒜油为大蒜经水蒸气蒸馏制得的一种挥发油,含有大蒜的主要的活性成分,包括二烯丙基硫、二烯丙基二硫、二烯丙基三硫、大蒜烯等多种含硫的功效成分。近年来的研究证实,大蒜油具有拮抗化学性肝损伤的作用。国内外的研究发现:大蒜油能够拮抗乙醇、四氯化碳以及对乙酰氨基酚引起的急性肝损伤,并且大蒜油能够预防大鼠实验性的非酒精性脂肪肝。因而大蒜油可能具有防治酒精性脂肪肝的功效。
我们参考相关文献,灌胃给予小鼠酒精辅以高脂饲料成功建立酒精性脂肪肝模型,通过观察给予大蒜油后各组小鼠的生化、病理等关键指标,确定大蒜油是否对酒精性脂肪肝具有防治效果。并从机体抗氧化系统、肝脏CYP2E1的表达以及脂肪代谢等方面探讨大蒜油防治酒精性脂肪肝的机理。
研究方法
1.动物模型建立
参考范建高等人的造模方法并加以改良。健康雄性昆明小鼠SPF级,18-22 g,适应性喂养3天后,随机分为酒精性脂肪肝模型组和正常对照组。模型组小鼠每天喂养高脂饲料(脂肪10%、胆固醇2%、基础饲料88%)。并给予3 g/***的乙醇,正常组每天喂养基础饲料并给予等体积的蒸馏水。造模3周后,生化及病理结果显示确认造模成功。
2.动物分组与处理
2.1大蒜油预防小鼠酒精性脂肪肝
健康雄性昆明小鼠(90只)SPF级,18-22 g,适应性喂养3天后随机分为正常对照组、模型组、大蒜油低剂量(20 mg/kg)、中剂量(40 mg/kg)、高剂量(80 mg/kg)和凯西莱阳性药物对照组(150 mg/kg)。除正常组每天喂养基础饲料并给予等体积的蒸馏水外,其它各组小鼠每天喂养高脂饲料并给予3 g/***的乙醇灌胃;大蒜油和凯西莱组分别于给予乙醇后6小时给予相应剂量的大蒜油和凯西莱,正常组和模型组给予等体积蒸馏水,连续给药三周。末次给药后禁食12h,眼球取血分离血清,并取肝左叶冻存。
2.2大蒜油治疗小鼠酒精性脂肪肝
将造模成功的小鼠(90只)随机分为正常组、大蒜油低剂量(25 mg/kg)、中剂量(50 mg/kg)、高剂量(100 mg/kg)、凯西莱(150 mg/kg)和自然恢复组,每组15只。动物均给予基础饲料喂养,大蒜油和凯西莱组分别给予相应剂量的大蒜油和凯西莱,正常组和自然恢复组给予等体积蒸馏水,连续给药一周。末次给药后禁食12h,眼球取血分离血清,并取肝左叶冻存。
3.大蒜油防治酒精性脂肪肝的效果评价
计算肝体比值;测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性及甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)的含量;制备肝脏匀浆,测定肝脏TG、TC和FFA含量;制备肝脏冰冻切片,苏丹染色,观察脂肪蓄积情况。
4.大蒜油对机体抗氧化系统的影响
称取适量肝组织,制备10%肝组织匀浆,利用试剂盒测定肝匀浆中丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)。
5.大蒜油对肝脏细胞色素P4502E1(CYP2E1)蛋白水平的影响
取适量肝组织,用RIPA裂解液提取总蛋白,Western Blot技术测定CYP2E1蛋白表达。
研究结果
1.大蒜油预防小鼠酒精性脂肪肝
1.1血清ALT和AST变化
与正常组相比,模型组小鼠血清ALT和AST的活性分别增加了41.64%(P<0.01)和51.80%(P<0.01);与模型组相比,大蒜油组(20,40,80 mg/kg)小鼠血清ALT活性分别下降了10.10%、10.84%和12.43%(P<0.05);AST活性分别下降了22.34%、22.66%和25.80%(P<0.01);凯西组ALT和AST的活性亦有所下降,但不如大蒜油组明显。
1.2血清TG和TC的变化
与正常组相比,模型组小鼠血清TG和TC的含量分别增加了86.60%(P<0.01)和41.64%(P<0.01);与模型组相比,大蒜油组(20,40,80 mg/kg)和凯西莱组小鼠血清TG含量分别下降了14.92%(P<0.01)、21.55%(P<0.01)、33.15%(P<0.01),和11.05%(P<0.01);TC含量分别下降了15.38%(P<0.01)、18.90%(P<0.01)、22.42%(P<0.01)和2