关键词： 人参二醇   非酒精性脂肪肝   β2   cAMP通路   线粒体生物合成  

摘要： 研究背景及目的:非酒精性脂肪肝作为一种临床综合征,常伴有肥胖、血脂紊乱等相关症状,但可以通过治疗逆转。非酒精性脂肪肝发病的主要原因是线粒体功能障碍,其功能的下降或者上升,会影响肝脏脂肪变性,进而影响疾病的进程。线粒体生物合成是细胞内产生新线粒体的过程,对于线粒体代谢、细胞的信号转导有重要意义。于是,寻找到安全有效并能改善线粒体生物合成的药物防治非酒精性脂肪肝前景广阔。人参作为被广泛使用的珍贵药用植物,主要成分为人参皂苷。已有报道研究发现人参皂苷可以通过恢复自噬来缓解肝的脂肪积累,进而改善非酒精性脂肪性肝病,但人参成分复杂靶点众多,并不知晓其防治非酒精性脂肪肝的确切机制。本研究前期已通过实验验证:人参活性成分人参二醇(Panaxadiol,PD)可通过调节c AMP通路促进产热并改善线粒体生物合成而发挥减肥作用,故思考PD是否具有抗非酒精性脂肪肝的作用。本课题意在探讨人参二醇是否可以诱导线粒体生物合成达到防治非酒精性脂肪肝的目的及其分子作用机制。方法与结果:1.人参二醇防治非酒精性脂肪肝与c AMP通路促进线粒体生物合成的关联体内实验中,我们通过高脂饲料喂养小鼠建立肥胖模型,分组为:对照组、模型组及PD给药组,PD治疗5周后,检测小鼠的体重、血清生化指标和口服葡萄糖耐量,同时对肝脏组织进行形态学检测,之后提取小鼠肝脏蛋白,测定其PGC-1α、NRF1、TFAM、UQCRC2的表达情况,mt DNA拷贝数的变化、c AMP浓度及通路蛋白CREB磷酸化的表达情况,研究PD防治肥胖引起的非酒精性脂肪肝作用及相关通路。结果显示,高脂饲养的肥胖小鼠体重远高于对照组;葡萄糖耐量、甘油三酯、总胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶表达明显升高;肝HE染色显示细胞排列紊乱、明显出现脂滴。WB结果显示,模型组PGC-1α、NRF1、TFAM、UQCRC2表达明显下调,CREB磷酸化(P-CREB)程度降低。c AMP浓度和mt DNA拷贝数明显降低。在PD治疗后,与模型组相比较,葡萄糖耐量、甘油三酯、总胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶表达明显下降;染色观察显示药物可改善细胞形态、减少脂滴。给药组PGC-1α、NRF1、TFAM、UQCRC2等蛋白的表达水平显著提高,mt DNA拷贝数增加,此外c AMP浓度和通路蛋白CREB磷酸化也增加,这说明PD可能通过调节c AMP/CREB,促进线粒体生物合成,进而发挥防治非酒精性脂肪肝的作用。2.明确人参二醇通过激活β受体调节c AMP通路进而防治非酒精性脂肪肝随后建立ob/ob肥胖小鼠模型,设立四组:对照组(C57小鼠)、模型组、PD给药组、同时给予PD和β受体抑制剂ICI118551组,给药8周,检测指标同上述高脂喂养的肥胖模型治疗实验,另使用透射电镜观察了小鼠的肝脏线粒体变化;体外研究通过给予Hep G2细胞棕榈酸(palmitate,PA)诱导损伤模型,使用PD处理,同时在PD处理基础上进行β受体抑制剂ICI118551干预,测定甘油三酯含量,检测PGC-1α等线粒体生物合成相关蛋白和CREB磷酸化情况。通过以上体内及体外实验研究PD是否通过β受体发挥防治肝脏脂肪变的作用。结果显示,在PD治疗后,ob/ob肥胖小鼠葡萄糖耐量、甘油三酯、总胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶表达明显下降;HE染色及超微结构观察结果显示药物可改善细胞形态、减少脂滴、修复线粒体损伤。WB结果中,给药组PGC-1α、NRF1、TFAM和CREB磷酸化水平均增加,c AMP浓度及mt DNA拷贝数增加。β受体抑制剂干预组与PD组比较,体重、葡萄糖耐量、甘油三酯、总胆固醇明显升高,细胞脂滴增多、线粒体损伤,c AMP水平及CREB磷酸化水平降低,PD的治疗效果被削弱。体外研究中,给予PA刺激,甘油三酯含量增加明显,PGC-1α、UQCRC2、P-CREB表达显著下降;PA刺激的同时给予PD干预后,结果显示甘油三酯含量减少、NRF1表达增加;PD干预同时给予β受体抑制剂,结果发现甘油三酯含量增加,PGC-1α表达增加。以上体内、体外实验结果说明PD可以通过激活β受体调节c AMP通路,进而促进线粒体生物合成,最终发挥防治非酒精性脂肪肝的作用。结论:人参二醇可以通过激活β/c AMP/PKA/CREB通路诱导线粒体生物合成进而发挥防治非酒精性脂肪肝的作用。

关键词： 小花清风藤   酒精性脂肪肝   预防   保护   作用机制  

摘要： 研究背景:酒精已成为我国继病毒性肝炎后导致肝损害的第二大病因。酒精性脂肪性肝病目前未有特效药物用于治疗及防护,临床上对于酒精性脂肪性肝病及其损伤的治疗主要通过相应药物的对症支持治疗。目前治疗酒精性脂肪性肝病所用的戒酒、营养支持、化学药物等方法存在疗效不明显,不良反应及并发症多等问题。小花清风藤为清风藤科清风藤属藤本植物,是我国布依族、苗族等少数民族地区的民间用药,其具有清热利湿、祛风止痛、保肝护肝之功效,曾被民间广泛用于防治肝炎且是相关保肝护肝中成药的组方药。但目前其对肝脏的保护作用的相关分子机制及作用靶点尚不明确,限制了小花清风藤的应用及进一步发展。目的:研究并探讨小花清风藤水提物对酒精性脂肪性的影响,探讨小花清风藤提取物对其的防治作用机制,为小花清风藤的应用及开发提供理论依据。方法:(1)将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,正常组、液体饲料对照组、酒精液体饲料组、高脂饲料组。实验正式开展前适应性喂养2周,第三周正常组普通大小鼠维持饲料饲养,自由进食进水。液体饲料对照组,按液体对照饲料指导说明饲养。酒精液体饲料组,酒精液体饲料饲养按照Gao-Binge模型建立酒精性脂肪肝模型。高脂饲料组,60%高脂饲料饲养自由进食,20%(v/v)酒精溶液自由饮用。各组记录每日饲料消耗量及体重变化情况。第16天时处死后测定血清转氨酶活性及血清血脂、血糖含量。制备肝组织石蜡切片及冰冻切片,分别HE染色和油红O染色。(2)将33只C57BL/6J雄性小鼠分随机分为6组,正常组、酒精性脂肪肝模型组、多烯磷脂酰胆碱组、小花清风藤水提物低、高剂量组各6只,备用组3只。各组先适应性喂养一周。第二周开始,正常组,普通大小鼠维持饲料饲养。酒精性脂肪性肝病模型组按照Gao-Binge模型建立,酒精液体饲料指导说明饲养。多烯磷脂酰胆碱组、小花清风藤水提物低、高剂量组,按照Gao-Binge模型建立及TP 4030D酒体饲料指导说明饲养。同时,第5天至15天,各按200mg/kg(多烯磷脂酰胆碱-CMC-Na)、400mg/kg、800mg/kg小花清风藤水提物-CMC-Na溶液灌胃。第16天时,各组小鼠进行相应处理后处死。留取相应样本测定血清肝肾功能、血脂、血糖含量,肝组织氧化应激指标等。制备肝、肾、心、脾等组织石蜡切片及冰冻切片,分别HE染色和油红O染色。另取部分肝组织,进行Western-Blot蛋白印迹分析相应组织蛋白表达情况。(3)将33只C57BL/6J雄性小鼠分随机分为6组,正常组、酒精性脂肪肝模型组、美他多辛组、小花清风藤水提物低、高剂量组各6只,备用组3只。各组先适应性喂养一周。第二周开始,正常组,普通大小鼠维持饲料饲养。模型组酒精液体饲料饲养,按照Gao-Binge模型建立。美他多辛组、小花清风藤水提物低、高剂量组,酒精液体饲料饲养按照Gao-Binge模型建立酒精性脂肪肝模型。第16天开始普通大小鼠维持饲料饲养。同时,分别每日按150mg/kg美他多辛-CMC-Na、400mg/kg、800mg/kg小花清风藤水提物-CMC-Na溶液灌胃。第26天各组禁食禁水12小时后,各组小鼠处死后取材。留取相应样本测定血清肝肾功能、血脂、血糖含量,肝组织氧化应激指标等。制备肝、肾、心、脾等组织石蜡切片及冰冻切片,分别HE染色和油红O染色。取部分肝组织,进行转录组学高通量测序以分析小花清风藤水提物对各组小鼠基因表达差异的影响。结果:(1)液体饲料对照组、酒精液体饲料组、高脂饲料组3组小鼠体重、肝质量与肝质量指数明显低于正常组。酒精液体饲料组ALT、AST、TC、血糖水平显著高于正常组且高于液体饲料对照组。高脂饲料组血清TC、AST、血糖显著高于正常组,血糖高于液体饲料对照组。酒体酒精饲料组小鼠肝中有大量脂质沉积,高脂饲料组次之。(2)小花清风藤水提物能预防且减轻酒精引起的肝脏脂质沉积,降低血清肝功能指标AST、ALT、ALP的活性,增加肝脏抗氧化剂SOD和GSH-PX水平,降低MDA水平,降低血清CR水平,改善肾损伤,降低血脂水平,维持血糖正常。该药物对多种器官无毒性损伤,免疫印迹实验表明它能上调多种蛋白的表达,如ASC、My D88、TLR-4、NLR-P3、NF-κB等,并下调SREBP1蛋白的表达。(3)小花清风藤水提物能治疗性的改善酒精性脂肪肝肝脏脂质沉积,降低血清AST、ALT、ALP活性,提高肝组织SOD、GSH-PX水平,降低MDA含量,降低血清CR水平,改善肾损伤,降低血脂水平,维持血糖浓度正常,且无明显毒性损伤。肝组织转录组学测序结果表明,小花清风藤水提物对胆汁分泌、细胞周期、细胞色素P450代谢外源物质和P53等相关信号转导通路调节有影响。结论:(1)短期Gao-Binge模型与酒精加高脂饲料模型都能成功诱导C57BL/6J

关键词： 枯草芽孢杆菌   急性酒精性脂肪肝   肠-肝轴   肠粘膜屏障   肠道菌群  

摘要： 酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,AFLD)作为肝脏对乙醇摄入后一种最常见的早期反应,其主要特征表现为肝细胞不同程度的脂肪变性,是阻止或延缓酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)发生或发展的最佳阶段。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是最常见的益生菌产品之一,并已被广泛用作功能性补充剂,以改善人类健康。枯草芽孢杆菌可形成芽孢,因此具有热稳定、耐低p H值(胃部环境)、耐受多种环境应激源等特性。目前,国内外相关研究主要针对乳酸菌类益生菌对ALD保护作用的研究,但枯草芽孢杆菌对急性酒精性脂肪肝的保护作用及机制研究鲜见报道。因此,明确枯草芽孢杆菌对治疗急性酒精性脂肪肝损伤的作用及其机制有重要意义。本研究探讨了枯草芽孢杆菌对急性AFLD的防治作用。用肝脏体重比、脂肪肝相关生化指标、肝脏病理组织学变化等指标评价枯草芽孢杆菌对急性AFLD的影响;通过F4/80免疫组化、q PCR检测相关促炎因子水平,利用Western Blotting(WB)技术对NF-κB、NLRP3炎症相关通路的蛋白进行分子水平的研究。采用ELISA测定了血清中LPS和TNF-α的含量,用WB、病理组织切片染色以及q PCR的方式对肠粘膜相关蛋白表达进行研究,进而使用16S r RNA高通量测序方式,研究枯草芽孢杆菌干预对肠道菌群多样性的变化。研究内容主要分为三个部分:1、枯草芽孢杆菌对急性AFLD的防治作用研究。ICR小鼠40只,随机分成Control组、Ethanol组、Ethanol+BS组和BS组,灌胃给予枯草芽孢杆菌菌液7天后,采用5.5 g/kg·bw的乙醇,连续给予三次,成功建立了急性AFLD小鼠模型。结果显示,模型组小鼠肝重体重比明显增加,血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平明显上升,肝功能中甘油三酯(TG)含量也有所增加。枯草芽孢杆菌干预后,以上指标均显著降低,病理学检查结果表明,肝细胞结构保持完好,脂肪空泡的数量也明显下降,从而减轻了酒精性脂肪肝的发展。2、枯草芽孢杆菌干预对抑制急性AFLD引起的小鼠肝巨噬细胞募集和促炎极化研究。通过免疫组化和q PCR检测发现,Ethanol组肝脏中F4/80阳性细胞的数量和巨噬细胞M1极化相关m RNA的水平显著增加,而枯草芽孢杆菌干预显著抑制了这些。此外,本研究通过WB技术研究了肝损伤发病机制中两条关键的信号通路:NF-κB、NLRP3通路。结果显示,与Control组相比,Ethanol组小鼠肝脏中p-IκBα、p-p65、i NOS、COX2、NLRP3、ASC、IL-1β和Caspase-1蛋白水平显著升高。枯草芽孢杆菌干预显著减弱了NF-κB、NLRP3通路的激活和蛋白表达,从而减轻了炎症发展。3、枯草芽孢杆菌干预对急性AFLD小鼠肠粘膜屏障功能的保护作用。通过H&E染色和ELISA测定,发现枯草芽孢杆菌可以改善小肠肠绒毛缩短,上皮细胞和杯状细胞被破坏的现象,可以减少LPS和TNF-α的入血;通过免疫荧光染色和WB检测了紧密连接蛋白的情况,发现被酒精破坏的紧密连接蛋白在菌干预后得到了保护;通过阿尔新蓝染色、q PCR和WB测定发现,由杯状细胞产生的MUC 2在Ethanol组中较Control组显著增多,粘蛋白Reg 3β、Reg 3γ明显减少,在枯草芽孢杆菌处理后均得到了缓解;通过对小鼠粪便基因组DNA的提取,构建基因文库,并进行肠道菌群多样性高通量测序分析,分析结果表明,枯草芽孢杆菌干预后,有益菌如拟杆菌属(Bacteroides)、乳杆菌属(Lactobacillus)、扁杆菌科(Bacteroides vulgatus)等相对丰度升高,有害菌Alloprevotella和Dubosiella等相对丰度降低,从而对肠道屏障起到保护作用。综上所述,枯草芽孢杆菌可以有效抑制急性AFLD的发生发展,其保护机制可能与枯草芽孢杆菌可抑制NF-κB、NLRP3信号通路和维持肠粘膜屏障功能稳态有关。

关键词： 蛋鸡品种   脂肪肝综合征   产蛋期间   日粮能量水平   营养因素   遗传因素   海兰褐   产蛋鸡  

摘要： 1发病原因1.1遗传因素脂肪肝综合征的发生与蛋鸡品种有关。常见蛋鸡品种,如海兰褐和白来杭等在产蛋期间发生脂肪肝综合征的概率高于其他品种的产蛋鸡。这主要是因不同的蛋鸡品种肝脏组织中的脂肪含量有高低之分,有的品种的蛋鸡肝脏中脂肪含量较高,从而导致发病率升高。1.2营养因素饲喂高能量和低蛋白的饲料易使产蛋鸡发生脂肪肝综合征。日粮能量水平不断升高会导致多余的能量物质转化为脂肪,脂肪类物质不能及时转运出肝外,最终导致本病发生。

关键词： 蛋鸡   脂肪肝出血综合征   诊断   防治  

摘要： 蛋鸡脂肪肝出血综合征(FLHS)是一种慢性营养代谢性疾病。患鸡表现肥胖、鸡冠苍白、产蛋率下降、突然猝死等,严重影响了蛋鸡养殖的经济效益。该文从发病情况、临床症状、剖检病变、组织切片等方面对鸡脂肪肝出血综合征进行诊断,并提出防治措施。

关键词： 大蒜   非酒精性脂肪肝   活性成分   保肝  

摘要： 非酒精性脂肪肝是一种胰岛素抵抗,与动脉粥样硬化、代谢综合征、高血压、糖尿病、心血管疾病密切相关。近年来许多探究并证明了大蒜及其活性成分在抗炎、降压、代谢、氧化应激、抗肿瘤、防治血栓和治疗肝损伤方面具有功效。而大蒜活性成分对非酒精性脂肪肝的防治研究还处于初级阶段,随着大蒜药效的研究发展,表明非酒精性脂肪肝的影响是多维度且复杂的,对已有的关于大蒜防治酒精肝的文献进行了综述,揭示了大蒜及其活性成分对非酒精性脂肪肝的防治研究进展。

关键词： 蛋鸡脂肪肝综合症   发病原因   诊断   防治  

摘要： 脂肪肝综合症是蛋鸡养殖领域发生流行率相对较高的一种疾病,该类疾病不仅会造成蛋鸡的生产性能显著下降,甚至引发鸡出现严重的死亡,危害较为严重,给养殖户带来较大的增进损失。从当前对该种情况的研究现状来看,蛋鸡脂肪肝综合征属于营养代谢性疾病的范畴,其中在笼养蛋鸡中具有极高的发生流行率。从当前蛋鸡养殖产业的发展现状来看,随着养殖规模的不断扩大,养殖密度增加背景下,蛋鸡脂肪肝综合症的爆发流行率逐年提升。如若不能掌握引起各种疾病的发病原因,及时采取疾病进行有效的诊断,由于防治措施不到位,错过最佳的防治时期,导致大量蛋鸡的生产能力逐渐下降,甚至引发严重的发病死亡。该文主要论述蛋鸡脂肪肝综合症的发病原因,分析蛋鸡脂肪肝综合症的诊断和综合防治。

关键词： 蛋鸡脂肪肝综合征   诊断   防治  

摘要： 蛋鸡脂肪肝综合征是一种脂类代谢紊乱疾病,往往发病时蛋鸡体况较好,但产蛋率突然下降,从86%减到50%,发病率达40%,出现突然死亡,死亡率达6%,对蛋鸡生产构成严重影响。本文以1例蛋鸡脂肪肝综合征案例为基础,重点分析介绍该病的发病情况、临床症状和病理变化,介绍发病原因、机理等,以及病变鉴别和病理镜检等诊治过程。最终提出系列防治措施,供养殖户参考。

关键词： 蛋鸡   脂肪肝综合征   防治  

摘要： 蛋鸡脂肪肝综合征(Fatty Liver Syndrome,FLS)是饲养蛋鸡常见的一种营养代谢疾病,主要是由鸡只脂肪代谢出现紊乱而引发。通常此病多发于中小养殖鸡场内的看似健康状况良好的鸡只,甚至处于产蛋高峰期的蛋鸡也会突然发病,可导致产蛋数量明显减少,产蛋高峰期持续时间明显缩短。在生产实践中严重的病鸡会出现死亡现象,死亡率在6%~27%。常给养殖户带来巨大的经济损失。本文主要分析该病的临床表现、病理剖检进行阐述,并提出综合防治措施。

关键词： 非酒精性脂肪肝   微小RNA   中医药   防治  

摘要： NAFLD被认为是代谢综合征在肝脏的体现,其发病机制尚未完全明确。大量研究表明NAFLD的发生与胰岛素抵抗密切相关,胰岛素抵抗被认为是肝细胞脂肪变性的始动因子。微小RNA(microRNA,miRNA)可能是参与调控生物体内生理代谢过程的关键分子之一,并参与某些疾病的发生发展过程,中医药治疗NAFLD的作用机理可能与调控miRNA密切相关,在这篇综述中,笔者总结了相关miRNA参与NAFLD作用机制的最新研究进展,从分子角度阐述了中医药治疗NAFLD的可能性,以期推动中医药治疗的现代化发展,为防治NAFLD提供新的思路。