关键词： 苦参碱   肌浆/内质网钙ATP酶   非酒精性脂肪肝   钙平衡   内质网应激  

摘要： 【背景】非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)属于代谢性疾病,发病率高且逐年增加。该病发病机制复杂,与肝脂肪变性、胰岛素抵抗、氧化应激、炎症反应等密切相关。近年研究表明持续的内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)是NAFLD发生发展的主要诱因,而内质网(endoplasmic reticulum,ER)中钙稳态的破坏是导致持续性内质网应激反应的关键。肌浆/内质网钙ATP酶(sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA)是内质网钙再摄取的关键通道。NAFLD病理条件下,SERCA活性抑制导致的钙离子再摄取障碍可引起内质网钙紊乱,诱发内质网应激的持续发生,进而促使NAFLD持续恶化。从传统中医药中提取的有效成分或单体已运用于临床多种疾病的治疗,其有效性显著且毒性较低。苦参碱(Matrine,Mat)是苦参的主要活性成分,具有抗炎、抗肿瘤、抗纤维化等多种药理作用。研究发现苦参碱可降低四氯化碳诱导的肝脏脂肪性病变及肝炎大鼠模型血清转氨酶水平;课题组前期研究显示苦参提取物可有效改善NAFLD小鼠肝脏脂肪性病变且对肝细胞钙离子具有一定调控作用;同时,现有的文献报道中苦参碱既可以抑制内质网应激改善纤维化及葡萄糖紊乱,也可以诱导内质网应激发挥抗癌作用,其在内质网应激中的双向调节作用尚有争议。因此,苦参碱对NAFLD/非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的保护作用及在该疾病中对内质网应激的影响与分子机制尚需探讨。【目的】1.通过不同动物模型实验,明确苦参碱对NAFLD及NASH的保护作用;2.通过细胞模型实验,进一步明确苦参碱对肝细胞内质网应激的调控作用;3.通过钙离子调控及分子对接实验,初步阐明苦参碱调控内质网应激的作用机制。【方法】1.将100只C57BL/6J小鼠随机均为10组。其中高脂饮食诱导的NAFLD模型5组(普通饲料组(Con组)、高脂饲料组(HFD组)、苦参碱低剂量干预组(HFD+Mat L组)、苦参碱中剂量干预组(HFD+Mat M组)、苦参碱高剂量干预组(HFD+Mat H组)),苦参碱干预于造模第5周开始,持续8周;蛋氨酸缺乏饮食诱导的NASH模型5组(普通饲料组(Con组)、蛋氨酸缺乏饲料组(MCD组)、苦参碱低剂量干预组(MCD+Mat L组)、苦参碱中剂量干预组(MCD+Mat M组)、苦参碱高剂量干预组(MCD+Mat H组)),苦参碱干预于造模第3周开始,持续4周。小鼠称重后处死,收集小鼠血液检测血清中甘油三酯(serum triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)水平,小鼠肝组织分别进行H&E、油红O染色及相关蛋白含量测定。2.采用L02人肝细胞,以软脂酸(palmitic acid,PA)为造模试剂,将细胞分为正常对照组(Con组)、软脂酸模型组(PA组)及软脂酸+低、中、高剂量苦参碱干预组(PA+Mat L组、PA+Mat M组、PA+Mat H组),分别进行油红O染色检测细胞内脂滴堆积、活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光检测细胞氧化应激状态、线粒体JC-1荧光检测细胞线粒体膜电位变化、免疫组化检测细胞内质网应激状态、Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡变化及免疫印迹实验检测细胞脂代谢、凋亡及内质网应激相关蛋白表达的变化。3.将L02细胞分为Con组、PA组、PA+Mat L组、PA+Mat M组、PA+Mat H组和不同剂量苦参碱组(Mat L组、Mat M组、Mat H组),培养12 h后使用Fura-3/AM钙离子荧光检测试剂及荧光酶标仪检测长时孵育时细胞内钙离子水平变化,同时对正常L02细胞使用苦参碱及钙通道抑制剂毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg)和2-氨基乙氧基二苯硼酸酯(2-Aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)进行瞬时刺激实验探索苦参碱对肝细胞钙平衡的影响,并进行计算机模拟分子对接验证苦参碱与SERCA之间的相互作用关系。最后通过检测SERCA活性验证苦参碱对SERCA的调控作用。【结果】1.(1)在

关键词： 非酒精性脂肪肝   肝纤维化   抗纤软肝方   TGF-β信号通路   TLR4信号通路  

摘要： 研究背景及目的非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指无过量饮酒史,以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征。其疾病谱随病程主要包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝纤维化和肝硬化。其中,纤维化阶段是肝相关疾病死亡率的最高阶段。因此,早期采取有效的治疗手段非常重要。2018年NAFLD防治指南(中华医学会肝病分会脂肪肝和酒精肝肝病学组)指出:存在NASH或进展性肝纤维化需要应用护肝药物(熊去氧胆酸等),但其治疗周期长、疗效仍需进一步临床试验证实。2017年NAFLD中西医结合诊疗共识(中国中西医结合学会消化系统疾病专业委员会)指出:存在肝损伤或者进展性肝纤维化者,应加用护肝和抗纤维化药物(熊去氧胆酸、安络化纤丸、扶正化瘀胶囊等),中西医结合治疗可以改善生活质量,提高临床疗效。近年来的基础实验及临床研究发现,中医药在防治肝纤维化有独特的效果。遵循配伍组方规律的验方--抗纤软肝方,前期研究表明,可以显著改善慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化及肝硬化患者的临床症状与肝功能、肝纤维化指标。同时在临床应用中,我们发现其联合熊去氧胆酸对非酒精性脂肪肝纤维化亦有较好的疗效,但其治疗NAFLD肝纤维化缺乏系统性临床对照研究,相关机制尚不明确。因此,本研究目的一是对比熊去氧胆酸单药,抗纤软肝方联合熊去氧胆酸的疗效和安全性。二是对比安络化纤丸联合熊去氧胆酸,抗纤软肝方联合熊去氧胆酸疗效是否更具优势。三是对NAFLD肝纤维化不同中医证型的疗效。四是防治NAFLD肝肝纤维化作用机制。为临床应用提供理论基础。研究方法本研究分为临床研究和动物实验研究两大部分。临床研究采用回顾性研究方法,对同时符合纳入标准和排除标准确诊为非酒精性脂肪肝病的患者按用药情况分为三组:A组:口服抗纤软肝方联合熊去氧胆酸;B组:口服安络化纤丸联合熊去氧胆酸;C组:单用熊去氧胆酸。分别分析三组患者治疗前后肝功能、肝纤四项、Child-Pugh分级、脾脏彩超、中医症候积分以及A组不同中医证型症候积分差异。动物实验分为两个部分,实验一:将56只SPF级Wistar大鼠自适应喂养一周后,随机分成7组,每组8只。(1)对照组(Control,CTRL);(2)模型组(Model,MOL);(3)扶正化瘀组(Fuzheng huayu,FZHY);(4)秋水仙碱组(Colchicine,COL);(5)正常剂量抗纤软肝方组(Normal Kangxian ruangan,N-KXRG);(6)中剂量抗纤软肝方组(Middle Kangxian ruangan,M-KXRG)和(7)高剂量抗纤软肝方组(High Kangxian ruangan,H-KXRG)。其中对照组大鼠正常投喂MCS对照饲料,而模型组及5个药物预处理组的大鼠均投喂MCD饲料。在正常投喂饲料的同时,各组大鼠均进行对应药物灌胃处理:(FZHY组:15 g/kg/d;COL组:0.1 mg/kg/d;N-KXRG组:9.2 g/kg/d;M-KXRG组:18.4 g/kg/d;H-KXRG组:36.8 g/kg/d),而对照(CTRL)组和模型(MOL)组大鼠做对照药物处理(均行2 m L/100g/d生理盐水灌胃)。整个过程持续8周。8周后,分别检测各组大鼠血清中各生化指标(丙氨酸转氨酶ALT、天冬氨酸转氨酶AST、γ-谷酰胺转酞酶GGT、总胆固醇CHOL以及甘油三酯TG)的水平;ELISA分别检测大鼠血清中透明质酸(HA)、层连蛋白(LN)、IV-胶原蛋白(IV-C)、III-前胶原蛋白(PC-III)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-10(IL-10)的分泌水平;苏木精-伊红(HE)染色和马森(Masson)染色检测各组大鼠肝组织病理学变化;TUNEL染色检测各组大鼠肝组织中肝细胞凋亡情况;Western blotting检测肝组织中线粒体凋亡信号通路上的相关蛋白(Caspases家族及Bcl-2家族)的表达量。实验二:30只SPF级Wistar大鼠自适应喂养一周后,被随机分为3组(每组10只):(1)对照组(Control,CTRL);(2)模型组(Model,MOL);(3)抗纤软肝方组(Kangxian ruangan,KXRG)。其中对照组大鼠正常投喂MCS对照饲料,而模型组及KXRG药物预处理组的大鼠均投喂MCD饲料。在正常投喂饲料的同时,各组大鼠均进行对应药物灌胃处理(KXRG组:36.8 g/kg/d),对照(CTRL)组和模型(MOL)组大鼠做对照药物处理(均行2 m L/100g/d生理盐水灌胃)。整个过程持续8周。8周后,ELISA检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)

关键词： 非酒精性脂肪肝   中医"治未病   应用价值   防治  

摘要： 目的:本次研究分析在非酒精性脂肪肝防治中采用中医"治未病"思想防治的应用价值.方法 :此次研究样本从本院非酒精性脂肪肝易发患者中选取100例,研究时间从2018年3月开始,截至2019年3月,将预防方式作为分组依据,实验组患者采用中医"治未病"思想防治,对照组患者采用常规预防方式,对比两组患者预防结果 .结果:统计分析两组患者不同时间的非酒精性脂肪肝发病率,研究得知,实验组患者不同时间的发病率明显低于对照组患者,两组对比符合统计学标准(P<0.05).结论 :通过此次研究得知,在非酒精性脂肪肝防治中采用中医"治未病"思想防治,能明显降低患者非酒精性脂肪肝发病率,能对该病进行更好的预防.

关键词： 中医药   精准医疗   脂肪肝   非酒精性  

摘要： 基于中医整体观念、辨证论治,分析中医药防治非酒精性脂肪性肝病的精准医疗研究思路。在中医基础理论指导下,辨识不同体质、人群、易感基因、非酒精性脂肪性肝病的患者,对患者进行准确分型、分层,精准诊断,借助基因组学、代谢组学等方法,运用中医药进行多靶点、多环节、多途径、多层次的整体精准调节、精准预防、精准治疗,对因治疗与对症治疗相结合,提高个体化防治非酒精性脂肪性肝病防治水平。应用现代科学技术和基础研究,发挥中医药全方位、多靶点的优势,对非酒精性脂肪性肝病患者进行个体化有效干预,对明确本病的发病机制、中医药的精准治疗具有的现实意义。

关键词： 非酒精性脂肪肝病   肠道菌群   饮食因素   生活方式   益生菌   益生元   合生元   抗生素   中草药   粪菌移植  

摘要： 非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是一种代谢综合征在肝脏的临床表现,发病率逐年上升。NAFLD的发病机制尚未完全阐述清楚,但近年发现肠道菌群在NAFLD的发生发展中发挥重要作用,肠道菌群可作为治疗NAFLD的新靶点,通过饮食、生活方式的干预(减肥、限制热量与锻炼)、益生菌、益生元、合生元、抗生素、中草药、粪菌移植的方法改变肠道菌群,从而可以预防和治疗NAFLD。

关键词： 围产期奶牛   能量负平衡   奶牛酮病   脂肪肝   治疗预防  

摘要： 围产期是奶牛生产中一个重要的时期,同时围产期也是奶牛能量代谢病的高发时期。主要从能量代谢病的危害、能量代谢病发病机制、临床症状、治疗、预防等方面进行阐述,为生产中缓解奶牛能量负平衡以及治疗和预防能量代谢障碍疾病提供科学依据。

关键词： 脂肪肝   诊断   治疗   代谢综合征   指南  

摘要： 非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）是一种与胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）和遗传易感密切相关的代谢应激性肝损伤,疾病谱包括非酒精性肝脂肪变（non-alcoholic hepatic steatosis）、非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis,NASH）、肝硬化和肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）.

关键词： 中国医科大学   防治指南   脂肪肝   沈阳   科普   大学附属医院   附属第二医院   西安交通大学  

摘要： 2018年7月8日上午，《中国脂肪肝防治指南科普版（第2版）》新书发布会在沈阳成功举办。本书主编庄辉院士、范建高教授，编委中国医科大学第一附属医院王炳元教授、杭州师范大学附属医院肝病科施军平教授、西安交通大学附属第二医院消化内科鲁晓岚教授，以及本书责任编辑、上海科学技术出版社《大众医学》杂志黄薏副主编出席了本次活动。

关键词： 内蒙古   防治指南   脂肪肝   鄂尔多斯市   科普   中国   感染病   医学会  

摘要： 2018年7月13日下午，在内蒙古医学会感染病学分会2018年会、内蒙古医学会结核病学分会2018年会、第二届鄂尔多斯感染及肝病学术会议期间，应鄂尔多斯市卫计委张文峻主任、鄂尔多斯第二人民医院刘永清院长邀请.