关键词： 黄芪甲苷   非酒精性脂肪肝疾病   脂质积聚   氧化应激   炎症  

摘要： 第一章 黄芪甲苷经5-LO/LTB4途径防治NAFLD小鼠的作用及机制目的:评估黄芪甲苷（Astragaloside IV,ASIV）对非酒精性脂肪肝小鼠（Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）的防治作用,并探索该作用是否与5-脂氧酶（5-lipoxygenase）/白三烯（Leukotriene）通路有关。方法:1.将体重20-22 g左右的40只雄性昆明小鼠随机分为对照组（Control）,高脂饮食组（High-Fat diet,HFD）,HFD+ASIV低剂量组（20 mg/kg）,HFD+ASIV中剂量组（40 mg/kg）,HFD+ASIV高剂量组（80 mg/kg）,并在16周内接受不同的饮食,每组8只。给小鼠喂食HFD 16周,给对照动物喂标准的啮齿动物饮食。喂养三周后,喂食HFD的小鼠通过灌胃施用不同剂量的ASIV,对照组小鼠接受相同体积的0.5%的羧甲基纤维素钠（CMC）,每周测量体重,在16周后对所有动物实施安乐死,记录肝脏湿重。2.肝脏形态学:将收集的肝脏组织碎片进行组织切片和苏木精和曙红染色（hematoxylin and eosin staining,HE）,观察小鼠肝脏组织病理损伤的情况。3.血清中甘油三酸酯（triglyceride,TG）、丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）和天冬氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）含量的检测:使用TG、ALT和AST试剂盒检测对照组、HFD组和ASIV低、中、高组小鼠血清中TG、ALT和AST的含量。***检测对照组、HFD组和ASIV低、中、高组小鼠血清中白三烯B4（Leukotriene,LTB4）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF-α）和白介素6（Interleukin,IL-6）的含量。5.基因水平分析:q-PCR检测对照组、HFD组和ASIV低、中、高组小鼠肝脏组织5-LO和白三烯A4水解酶（Leukotriene A4 hydrolase,LTA4H）mRNA的表达变化。6.蛋白水平分析:蛋白印迹检测对照组、HFD组和ASIV低、中、高组小鼠肝脏组织5-LO和LTA4H的蛋白表达变化。结果:1.干预6周后,与对照组相比,HFD组的高脂饮食增加了小鼠体重（P＜0.001）。干预12周后,与HFD组相比,ASIV治疗显著减轻了体重增加。其中以ASIV高剂量组的小鼠体重降低最多（P＜0.001）。与HFD组相比,在接受16周ASIV治疗后,ASIV各剂量组小鼠的肝脏重量不同程度的降低,其中以ASIV高剂量组降低最多（P＜0.001）。2.与对照组相比,HFD组的血清TG,ALT和AST水平显著升高（P＜0.001）,而ASIV各剂量组均可不同程度降低小鼠血清中TG,AST和ALT水平,其中以ASIV高剂量降低水平最高。***切片表明对照组小鼠肝细胞肝索沿中央静脉呈放射状排列,而HFD组小鼠肝脏切片显示肝内大量脂质积聚,其间具有明显的脂肪空泡,ASIV低、中、高剂量各组小鼠切片显脂肪空泡出现不同程度减少。4.与对照组相比,HFD组小鼠血清中TNF-α和IL-6的含量明显升高（P＜0.001）,与HFD组相比,ASIV低、中、高剂量组不同程度的降低了小鼠血清中的TNF-α和IL-6的含量,高剂量组为最佳（P＜0.001）。5.与对照组相比,HFD组小鼠肝脏中5-LO（P＜0.001）和LTA4H（P＜0.01）mRNA的表达明显升高,而ASIV低、中、高剂量组不同程度的降低了小鼠肝脏中的5-LO和LTA4H mRNA的表达。6.与对照组相比,HFD组小鼠肝脏中5-LO和LTA4H蛋白的表达明显升高,而ASIV低、中、高剂量组不同程度的降低了小鼠肝脏中的5-LO和LTA4H蛋白的表达。7.与对照组相比,HFD组小鼠血清中LTB4的表达明显升高（P＜0.001）,而ASIV低、中、高剂量组不同程度的降低了小鼠血清中LTB4的表达。结论:1.低、中、高剂量组ASIV均可明显降低NAFLD模型小鼠体重和肝脏湿重,并且改善NAFLD模型小鼠肝脏病理损伤,显示ASIV具有防治NAFLD小鼠的作用。***对NAFLD模型小鼠的保护作用可能与其降低NAFLD模型小鼠血清炎症因子TNF-α和IL-6的含量有关。***对NAFLD模型小鼠的保护作用可能与其降低小鼠血清中LTB4的含量有关。***可能通过下调NAFLD模型小鼠肝脏组织中5-LO和LTA4H的基因和蛋白表达,产生保护NAFLD模型小鼠的作用。第二章 黄芪甲苷对PA诱导LO2细胞的保护作用及机制目的:评估黄芪甲苷对NAFLD体外模型-棕榈酸（Pa

关键词： 非酒精性脂肪肝   参苓白术散   肠道菌群   短链脂肪酸  

摘要： 目的:本研究采用临床经典健脾方剂参苓白术散,通过观察模型小鼠的血清生化指标、肝脏病理、肠道菌群及短链脂肪酸的变化,初步探讨该方治疗NAFLD的生物学基础,可为临床上采用健脾法治疗NAFLD提供实验依据。方法:1.复制模型:采用高脂饮食喂养的方法,除正常组外的小鼠给予高脂饲料,喂养到8周末。2.药物干预:于第4周末开始给予药物干预。参苓白术散低(2.34g/kg)、中(4.68g/kg)、高剂量组(9.36g/kg)给予参苓白术散灌胃,连续给药28天,双歧杆菌组给予双歧杆菌(8.4 g/kg)灌胃,正常组和模型组给予等量的生理盐水灌胃。3.指标检测:(1)血清生化指标:AST、ALT、TC、TG、LDL-C、HDL-C、TBIL。(2)病理指标:通过对比病理切片观察小鼠肝脏病理变化。(3)肠道微生态相关指标:用基因高通量测序检测小鼠肠道菌群的丰度和多样性变化;通过GC-MS法检测肠道内容物短链脂肪酸的含量。结果:1.血清生化指标的变化(1)与正常组相比,模型组和参苓白术散低、中、高组、双歧杆菌组小鼠血清生化指标ALT、AST、TC、TG、LDL-C、HDL-C显著上升(P<0.01),模型组的TBIL呈显著上升(P<0.01),其余用药组无明显差异(P>0.05)。(2)与模型组相比,参低组、参中组血清生化指标ALT、AST、TC、TG、LDLC、HDL-C、TBIL呈显著下降趋势(P<0.01);参高组AST、TC、TG、LDL-C、HDLC、TBIL呈显著下降趋势(P<0.01),ALT无明显差异(P>0.05);双歧杆菌组AST、TC、TG、LDL-C、HDL-C、TBIL呈显著下降趋势(P<0.01),ALT存在显著差异(P<0.05)。2.病理切片观察第8周正常组小鼠肝脏呈鲜红,表明较光滑。模型组的肝脏肉眼可见为淡黄色,表面有明显颗粒感;双歧组与正常组比无明显差异。与正常组相比,模型组小鼠模型组开始出现脂肪空泡,肝索排列紊乱、有部分肝细胞破裂,肝细胞核染色后颜色加深部分,区域出现炎性因子侵润。与模型组相比,参低组肝细胞结构、肝索排列及肝小叶结构无明显异常;中剂量组有散在的脂肪小空泡,肝索清晰;参高组存在小脂肪空泡,与模型组相比空泡变小变少。双歧杆菌组,可看到少量脂肪空泡,肝细胞形态正常,肝索排列规则。3.肠道菌群相对丰度变化(1)门水平丰度变化:与正常组相比,模型组小鼠肠内容物菌群有2个菌门相对丰度升高,8个菌门相对丰度降低。与模型组相比,参苓白术散低、中、高组小鼠肠内容物菌群有2个菌门相对丰度升高,2个菌门相对丰度降低;双歧杆菌组有3个菌门相对丰度升高,4个菌门相对丰度降低。(2)属水平丰度变化:与正常组相比,模型组小鼠肠内容物菌群以Lachnospiraceae NK4A136 group(8.70%)和Dubosiella(杜氏藻属)(2.74%)和Helicobacter(螺杆菌属)(5.08%)为主的16个菌属相对丰度升高,以Lactobacillus(乳酸菌属)(28.66%)为主的4个菌属相对丰度下降。与模型组相比,参苓白术散低、中、高组以Lachnospiraceae NK4A136 group、Dubosiella(杜氏藻属)和Lactobacillus(乳酸菌属)为主的5个菌属相对丰度升高,以Helicobacter(螺杆菌属)和Lachnospiraceae UCG-008为主的9个菌属相对丰度降低;双歧杆菌组以Dubosiella(杜氏藻属)和Lactobacillus(乳酸菌属)为主的9个菌属相对丰度升高,以Lachnospiraceae NK4A136 group和Helicobacter(螺杆菌属)为主的11个菌属相对丰度降低。4.短链脂肪酸含量的变化与正常组相比,模型组丙酸(Propionic acid)、丁酸(Butyric acid)含量有显著上升(P<0.01)。与模型组相比,参低、中、高组、双歧杆菌组丙酸有下降趋(P>0.05),乙酸、丁酸变化无明显趋势。结论:1.参苓白术散能够改善NAFLD模型的肝脏的脂肪变性,降低血脂,改善肝功能。2.参苓白术散基于中医“治肝实脾”治法,健脾治疗NAFLD,其作用机理可能与调节肠道微生态有关,具体表现为双歧杆菌属和乳酸菌属上升,螺杆菌属下降,以及肠道短链脂肪酸含量发生变化等。

关键词： 丹参   泽泻   非酒精性脂肪肝   大鼠   氧化应激  

摘要： 目的:研究丹参、泽泻对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂代谢及氧化应激的影响。方法:将60只Wista大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药(东宝甘泰)对照组和丹参水煎剂组、泽泻水煎剂组、丹参配伍泽泻(丹泽)水煎剂组,共6组,每组10只。通过喂饲高脂饲料方法复制NAFLD大鼠模型,然后分别给予相应药物治疗,8周后,观察大鼠血清TC、TG、FFA、ALT、AST、SOD和MDA含量或活性的变化及肝组织病理形态学改变。结果:丹参、泽泻和丹泽水煎剂均能降低血清TC、TG、FFA、ALT、AST和MDA含量,升高SOD活性(P<0.05或P<0.01)。结论:丹参、泽泻和丹泽水煎剂能显著改善非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢紊乱,改善肝功能,其机制可能与抑制氧化应激有关。

关键词： NAFLD   丹参泽泻汤   炎症反应   氧化应激   Nrf2   NLRP3  

摘要： 目的:观察丹参泽泻汤对高脂饮食诱导的NAFLD动物模型的保护作用,探讨丹参泽泻汤防治NAFLD的作用机制,为临床治疗提供实验依据。方法:第一部分丹参泽泻汤对NAFLD金黄地鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响选用48只清洁级雄性金黄地鼠,体重90～120g,自由饮水进食,饲养于18℃～22℃明暗各12小时的清洁级动物实验室内。正常喂养1周后,随机分为6组:正常组、模型组、阳性药(立普妥)对照组、丹参泽泻汤高、中、低剂量组。正常组给予正常饲料,其余组都继续给予高脂饲料。正常组和模型组给予等量蒸馏水,其他各组边造模边进行治疗,各组1次/d灌胃,每次用药体积均按1m L/100g计算,用药8周。第8周实验结束后,禁食12小时,麻醉状态下股动脉取血取肝组织,检测血脂(TC、TG、LDL、HDL)水平,FFA含量及肝功能(AST、ALT);采用HE和油红染色法观察肝组织病理形态。第二部分丹参泽泻汤对NAFLD大鼠Nrf2/NLRP3通路的影响选用60只清洁级雄性SD大鼠,体重160～180g,正常喂养1周后,随机分为6组:正常组、模型组、阳性药(立普妥)对照组、丹参泽泻汤高、中、低剂量组,每组各10只。正常组给予普通饲料,其余各组给予高脂词料喂养,造模同时,正常组和模型组给予蒸馏水,丹参泽泻汤各剂量组给予相应浓度的药液灌胃,各组1次/d灌胃,每次用药体积均按1m L/100g计算,用药8周。第8周实验结束后,禁食12小时,麻醉状态下股动脉取血取肝组织,检测血脂(TC、TG、LDL、HDL)水平,FFA含量及肝功能(AST、ALT);通过ELISA法检测血清IL-1β和IL-18的水平;采用HE和油红染色法观察肝组织病理形态,透射电镜观察肝细胞线粒体超微结构变化。比色法测定SOD和GSH的活性及MDA的含量,免疫荧光检测肝组织ROS的含量,PCR法和Western Blot法检测肝脏组织氧化应激(Nrf2、Keap1、HO1、GCLC、GCLM、NQO1)和炎症反应(NLRP3、caspase1、GSDMD、GSDMD-N)相关基因蛋白的表达情况。结果:第一部分丹参泽泻汤对NAFLD金黄地鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响与正常组相比,模型组血清和肝组织中TC、TG、LDL、FFA含量显著上升,HDL含量显著下降,血清中的AST、ALT活性均上升(P<0.01或P<0.05)。肝脏病理也显示模型组有脂肪变性。与模型组相比,丹参泽泻汤各剂量组和阳性药组血清和肝组织中TC、TG、LDL、FFA含量均下降,HDL含量上升,血清中的AST、ALT活性均下降(P<0.01或P<0.05)。肝脏切片中的脂滴分布显著减少,细胞体积缩小,大小均匀,炎症浸润程度也都得到了显著改善。丹参泽泻汤高剂量组的治疗效果最好。第二部分丹参泽泻汤对NAFLD大鼠Nrf2/NLRP3通路的影响与正常组相比,模型组TC、TG、LDL、FFA含量和AST、ALT活性升高,HDL含量下降,SOD和GSH的活性下降而MDA的含量升高,血清IL-1β和IL-18的水平升高,ROS含量升高(P<0.01或P<0.05)。Nrf2、HO1、GCLC、GCLM、NQO1基因和蛋白表达下降,Keap1基因和蛋白表达升高,NLRP3、caspase1、GSDMD、GSDMD-N表达则升高(P<0.01或P<0.05)。与模型组相比,丹参泽泻汤各剂量组血清中TC、TG、LDL含量下降,HDL含量上升,肝组织中TC、TG、FFA含量下降,AST、ALT活性下降,血清和肝组织中SOD和GSH的活性上升而MDA的含量下降,血清IL-1β和IL-18的水平下降,ROS含量下降(P<0.01或P<0.05)。Nrf2、HO1、GCLC、GCLM、NQO1基因和蛋白表达增加,Keap1基因和蛋白表达下降,NLRP3、caspase1、GSDMD、GSDMD-N表达则下降(P<0.01或P<0.05)。电镜显示,丹参泽泻汤各组的肝细胞内部脂质体相对减少,线粒体空泡化、不规则性的异常变化均有不同程度的改善。结论:1.丹参泽泻汤能显著降低实验金黄地鼠血清和肝组织内异常升高的TC、TG、FFA的含量,降低血清中的LDL,升高HDL,抑制血清内ALT和AST活性的异常升高,具有良好的调节脂质代谢改善肝功能的作用。丹参泽泻汤可明显改善NAFLD金黄地鼠肝组织的病变程度,肝细胞内脂滴空泡明显减少,对NAFLD有很好地防治作用。2.在丹参泽泻汤干预下,Nrf2信号通路蛋白和m RNA表达增加,有效降低了NLRP3信号通路m RNA和蛋白表达,血清和肝组织中的SOD和GSH活性上升,MDA含量下降,肝脏中的ROS也明显下降。丹参泽泻汤治疗NAFLD的作用机制可能与其能够上调Nrf2信号通路基因表达,减轻氧化应激反应,抑制NLRP3炎

摘要： 脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变(>5%肝细胞发生脂肪变性)。脂肪肝的病因多种多样,例如长期嗜酒、摄食过多等不健康的生活方式,同时,肥胖、糖尿病、高血脂以及长期服用四环素、肾上腺皮质激素、嘌呤霉素、环已胺等也是脂肪肝发病的高危因素。此外,脂肪肝并非肥胖人群的专属,瘦人同样要警惕,例如近期体重突增>3%,腹部肥胖、隐性肥胖人群以及乳糜泻患者等。

关键词： NAFLD   当归芍药散   肠道菌群   肠黏膜机械屏障   LPS   TLR4   ERK1/2   JNK  

摘要： 目的:通过观察当归芍药散对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素10(Interleukin-10,IL-10)和肝组织中TC、TG、游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)的含量或活性变化、肝脏、回肠和结肠的病理形态学变化、肠道菌群组成结构、小肠绒毛的高度和宽度、回肠和结肠中occludin、闭锁小带蛋白1(zonula occludens 1,ZO-1)的蛋白表达以及肝组织中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)通路相关基因和蛋白表达的影响,探讨该方对NAFLD的防治作用及机制。方法:60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组及当归芍药散低、中、高剂量组。通过喂饲高脂饲料复制NAFLD大鼠模型,造模同时给予相应药物治疗。给药8周后,麻醉状态取血,检测血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST、LPS、TNF-α和IL-10的含量或活性;剖取肝脏、回肠和结肠,检测肝脏中TC、TG、FFA含量;HE染色法观察肝脏、回肠和结肠病理形态学及小肠绒毛的高度和宽度;油红O染色法观察肝脏脂质蓄积情况;免疫组织化学法检测回肠和结肠中occludin、ZO-1的蛋白表达水平;q RT-PCR法和Western Blot法检测肝脏中TLR4、髓样分化细胞因子88(Myeloid different factory 88,My D88)、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Extracellular signal regulated kinase messenger1/2,ERK1/2)、c-Jun-N-末端蛋白激酶(C-Jun n-terminal kinase,JNK)的基因和蛋白表达以及p-ERK1/2、p-JNK的蛋白表达情况;收集各组的粪便,16s RNA测序法分析粪便肠道菌群组成结构。结果:与正常组比,模型组大鼠肝细胞出现大量脂滴空泡蓄积和气球样变,回肠和结肠黏膜上皮出现水肿,血清中TC、TG、LDL-C、ALT、AST、LPS、TNF-α的含量或活性、肝组织中TC、TG、FFA的含量、TLR4、My D88、ERK1/2和JNK的基因和蛋白表达以及p-ERK1/2、p-JNK的蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),HDL-C和IL-10的含量、小肠绒毛的高度和宽度、回肠和结肠中occludin和ZO-1蛋白表达均显著降低(P<0.01),Simpon指数、厚壁菌门、梭菌纲和毛螺菌科的相对丰度以及厚壁菌门/拟杆菌门的数值显著升高(P<0.01),Chao1、Ace、Shannon指数、拟杆菌门、拟杆菌纲和S24-7的相对丰度显著下降(P<0.01)。与模型组比,当归芍药散能改善肝细胞脂滴空泡积聚、气球样变和回肠、结肠的黏膜上皮水肿等现象,显著降低血清中TC、TG、LDL-C、ALT、AST、LPS、TNF-α的活性或含量、肝组织中TC、TG、FFA的含量以及肝组织中TLR4、My D88、ERK1/2和JNK的基因和蛋白表达以及p-ERK1/2、p-JNK的蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05),显著上调血清中HDL-C和IL-10的含量、小肠绒毛的高度和宽度以及肠道组织中occludin和ZO-1蛋白表达(P<0.01或P<0.05),显著升高Chao1、Ace、Shannon指数、拟杆菌门、拟杆菌纲和S24-7的相对丰度(P<0.01),显著降低Simpon指数、厚壁菌门、梭菌纲和毛螺菌科的相对丰度以及厚壁菌门/拟杆菌门的数值(P<0.01)。结论:当归芍药散对NAFLD有较好的防治效果,其机制可能与调节肠道菌群紊乱,保护肠黏膜机械屏障,调节TLR4信号通路,减轻炎症反应有关。

关键词： 治未病   脂肪肝   防治  

摘要： 中医“治未病”是预防医学的重要组成部分,其理念涵盖了未病先防、既病防变、瘥后防复三个层面。脂肪性肝病是我国最常见慢性肝病,文章将中医“治未病”理念贯穿脂肪肝的防治始末,对脂肪肝早防御、早发现、早治疗,从而降低治疗成本,提高治疗效率,为临床实践提供新思路。

关键词： 院长助理   保健中心   新华医院   健康促进   执行董事   脂肪肝   专项基金管理   基金会  

摘要： 2020年11月12日,中国健康促进基金会脂肪肝防治专项基金管理委员会在京成立。中国健康促进基金会徐卸古常务副理事长兼秘书长、上海交通大学医学院附属新华医院消化内科主任范建高、浙江大学医学院附属第二医院院长助理兼国际保健中心主任宋震亚、重庆市汇人健康管理有限责任公司执行董事吴心芬。

关键词： 蛋鸡   脂肪肝综合征   病因分析   临床症状   鉴别诊断   治疗  

摘要： 蛋鸡脂肪肝综合征(FLS)是由于脂肪代谢失调而引起的一种营养代谢性疾病,主要特征是肝脏脂肪变性、沉积过多脂肪、血管壁和肝细胞病变,从而导致肝脏出血。该病通常是产蛋鸡多发,特别是笼养蛋鸡的产蛋高峰期更易发生。产蛋鸡发病后会导致产蛋量降低,病死率升高,严重损害养鸡户的经济效益。由于该病早期没有明显症状,常被忽视,当产蛋率明显降低时才被重视,但已经没有治疗价值,现概述该病的防治措施。