关键词： 转化生长因子β3   兔牙髓干细胞(rDPSCs)   成骨向分化  

摘要： 目的:探讨转化生长因子β3(TGF-β3)体外诱导兔牙髓干细胞(rDPSCs)骨向分化的效果及其作用机制。方法:酶解组织块法分离的rDPSCs分为实验组(rDPSCs+80 ng/ml TGF-β3),对照组(rDPSCs+矿化液)和空白组(rDPSCs),免疫细胞化学染色法行COL-I、OCN, Runx-2染色;RT-qPCR检测各组ALP、COL-I、OCN、Runx-2表达水平;茜素红(ARS)染色观察矿化结节。结果:免疫细胞化学染色结果示实验组成骨蛋白表达明显强于其余2 组;RT-qPCR结果显示实验组中成骨基因的表达均高于其余2 组(P<0.05);实验组矿化结节形成数高于其余2组(P<0.05)。结论:TGF-β3能促进rDPSCs骨向分化。

关键词： 转化生长因子β受体   2,3,7,8-四氯二苯二噁英   腭裂胚胎发育  

摘要： 目的探讨转化生长因子β受体(TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ)基因变化与2,3,7,8-四氯二苯二噁恶(TCDD)所致胎鼠腭发育障碍的相关性。方法将24只C57BL/6 J孕鼠随机分为TCDD组和对照组,每组再根据怀孕时间分成3个亚组,每组4只孕鼠。在妊娠第10日(GD10)一次性分别灌胃20μg/kg TCDD(TCDD组)和等量玉米油(对照组)。在GD13、GD14和GD15分别剖腹取各组胎鼠腭组织,提取总RNA,逆转录成cDNA,利用q-PCR技术检测各组胎鼠腭组织中TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA表达变化。结果对照组TβR-Ⅰ mRNA相对表达量在GD13、GD14和GD15分别为(2.06±0.21)、(1.38±0.12)和(0.78±0.17);TCDD组分别为(0.98±0.26)、(0.75±0.14)和(1.22±0.05)。对照组TβR-Ⅱ mRNA相对表达量在GD13~GD15分别为(1.84±0.08)、(1.14±0.09)、(0.81±0.13);TCDD组分别为(0.91±0.22)、(0.96±0.06)、(1.30±0.13)。TβR-Ⅲ mRNA在对照组的相对表达量分别为(1.86±0.10)、(1.11±0.11)、(0.67±0.15);TCDD组分别为(0.85±0.05)、(0.93±0.09)、(1.17±0.16)。TCDD组的TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA在GD13和GD14相对表达量均低于对照组(P<0.05);而在GD15,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA高于对照组(P<0.05)。结论 TCDD诱导的胎鼠在腭发育关键时期GD13与GD14,TβR-Ⅰ、TβR-Ⅱ及TβR-Ⅲ mRNA的低表达很可能参与了TCDD诱发胎鼠腭部融合障碍的过程。

关键词： 转化生长因子β1   半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3   生存素   肝内胆管结石   胆管狭窄  

摘要： 目的探讨肝内胆管结石合并胆管狭窄患者肝内胆管组织中转化生长因子(TGF)β1、Survivin和Caspase-3三种标志物的表达及意义。方法收集中国人民解放军联勤保障部队第904医院病理科2013年至2018年患者肝内胆管组织蜡块标本130例。应用免疫组化法检测50例肝内胆管结石合并胆管狭窄患者肝内胆管组织(狭窄组)和40例肝内胆管结石仅合并慢性炎症患者肝内胆管组织(炎症组)及40例正常肝内胆管组织(正常组)中TGFβ1、Survivin和Caspase-3三种标志物的表达,比较各组三种标志物表达的差异,并分析三种标志物表达与肝内胆管结石相关胆管狭窄患者临床病理特征的关系。结果TGFβ1阳性表达率分别为狭窄组72.0%、炎症组37.5%、正常组15.0%,各组间差异均有统计学意义(均P<0.05);Survivin阳性表达率分别为狭窄组78.0%、炎症组47.5%、正常组25.0%,各组间差异均有统计学意义(均P<0.05);Caspase-3阳性表达率分别为狭窄组10.0%、炎症组42.5%、正常组75.0%,各组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。肝内胆管结石相关胆管狭窄患者胆管组织中TGFβ1表达与Caspase-3蛋白呈显著负相关(r=-0.882,P<0.05),与Survivin呈显著正相关(r=0.889,P<0.05),Survivin与Caspase-3呈显著负相关(r=-0.923,P<0.05)。结论TGFβ1、Survivin和Caspase-3蛋白的异常表达,可能共同参与肝内胆管结石相关胆管狭窄形成的过程。

关键词： Nod样受体蛋白3   转化生长因子β   增生性玻璃体视网膜疾病   视网膜色素上皮细胞   白细胞介素-18   白细胞介素-1β  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)刺激下Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体在视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增殖中的表达变化及意义。方法利用TGF-β刺激RPE细胞增殖模拟增生性玻璃体视网膜病变模型,随机分为空白对照组(Sham组)和TGF-β诱导RPE细胞增殖组(TGF-β组),TGF-β组再根据浓度(0.5μg·L^(-1)、2.5μg·L^(-1)、10.0μg·L^(-1)、12.5μg·L^(-1))分组。利用MTT微量酶比色法检测RPE细胞增殖情况;Western blot观察NLRP3蛋白的表达变化;利用标准ELISA试剂盒检测白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18表达情况。结果与Sham组比较,0.5μg·L^(-1) TGF-β组RPE细胞增殖不明显,差异无统计学意义(P>0.05),但NLRP3、IL-1β和IL-18表达明显提高(均为P<0.01);2.5μg·L^(-1)、10.0μg·L^(-1)和12.5μg·L^(-1)TGF-β组RPE细胞增殖明显,NLRP3、IL-1β和IL-18表达均提高(均为P<0.05);与0.5μg·L^(-1) TGF-β组相比,2.5μg·L^(-1)、10.0μg·L^(-1)和12.5μg·L^(-1)TGF-β组RPE细胞增殖显著增加,NLRP3、IL-1β和IL-18表达均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论不同浓度TGF-β诱导RPE细胞增殖中NLRP3炎症小体表达变化不同,两者可能相互调控影响RPE细胞增殖,在增生性玻璃体视网膜疾病发生发展中具有重要的作用。

关键词： 转化生长因子β3   兔牙髓干细胞   成骨向分化   Smad通路  

摘要： 目的探讨转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)体外联合兔牙髓干细胞(rabbit dental pulp stem cells,r DPSCs)诱导其成骨向分化的作用机制。方法酶解组织块法分离获得r DPSCs;将r DPSCs分为实验组(r DPSCs+80μg/L TGF-β3)、对照组(r DPSCs+矿化液)和空白组(r DPSCs),3组细胞分别培养7、14 d后行ALP活性定量检测; RT-qPCR检测COL-1A1、Runx-2、OPN、BSP和Smad4基因的表达; Western blot法检测COL-1A1和Runx-2蛋白的表达情况;茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果成功分离获得r DPSCs;实验组ALP含量明显高于对照组和空白组(P<0.05); COL-1A1、Runx-2、OPN、BSP、Smad4基因的表达均高于空白组(P<0.05); COL-1A1、Smad4基因的表达高于对照组(P<0.05); Western blot结果示实验组COL-1A1和Runx-2蛋白的表达均强于其余两组(P<0.05);实验组矿化结节较其余两组明显。结论 TGF-β3体外促进r DPSCs成骨向分化; TGF-β3促进r DPSCs成骨向分化可能通过激活Smad通路来实现。

关键词： 增生性瘢痕   成纤维细胞   脉冲染料激光   转化生长因子β1   转化生长因子β3  

摘要： 目的探讨不同能量脉冲染料激光(Pulsed dye laser,PDL)对体外人瘢痕成纤维细胞转化生长因子(TGF)-β1和TGF-β3表达的影响。方法按组织块法体外培养人瘢痕成纤维细胞,分别用4、6、8、10、11、12 J/cm2能量的PDL照射细胞,观察不同能量PDL对细胞周期的影响,酶联免疫吸附测定(ELLSA)法检测激光照射后TGF-β1、TGF-β3的分泌量。结果 PDL照射后,处于G1期的瘢痕成纤维细胞较对照组明显增多;不同能量PDL照射瘢痕成纤维细胞后,TGF-β1的分泌量随激光能量密度的升高而降低,TGF-β3的分泌量则增加,差异有统计学意义。结论 PDL对瘢痕的治疗作用可能与抑制细胞增殖,减少瘢痕成纤维细胞TGF-β1分泌,增加TGF-β3的分泌有关。

关键词： 牙髓干细胞   转化生长因子-β3   骨形成蛋白-2   成骨向分化  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β_3(transforming growth factor-β_3,TGF-β_3)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的影响。方法健康新西兰幼兔4只,取牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,镜下观察细胞形态及生长状况。将培养的第3代DPSCs分为BMP-2组和TGF-β_3组,分别加入浓度为80μg/L的BMP-2、TGF-β_3的完全培养液,采用免疫组织化学法于诱导第3、7天检测Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表达,于第7、14天检测骨钙素(osteocalcin,OC)表达;诱导第7、14天,对BMP-2组、TGF-β_3组行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色后,倒置显微镜下观察ALP活性染色结果。结果兔DPSCs分离、培养48h,组织块周围有细胞游出、贴壁生长,培养的第3代兔DPSCs大多为长梭形,也可为多角形,呈巢式或集落生长;TGF-β_3组诱导第3天COL-1表达的累计吸光度(integrated optiacal density,IOD)值(159 676.79±63 959.56)高于BMP-2组(44 047.33±15 853.65)(P<0.05),诱导第7天COL-1表达的IOD值(245 378.26±60 084.60)与BMP-2组(223 294.43±80 266.72)比较差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β_3组诱导第7天OC表达的IOD值(109 568.82±14 079.88)高于BMP-2组(55 168.57±1 694.93)(P<0.05),诱导第14天OC表达的IOD值(411 544.95±82 803.24)与BMP-2组(360 103.54±20 835.36)比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP-2组、TGF-β_3组诱导第7天出现少量淡蓝色ALP阳性区,诱导第14天蓝色ALP阳性区增大且蓝染颜色加重,镜下观察2组无明显差异。结论与BMP-2比较,TGF-β_3对早期兔DPSCs向成骨细胞分化有较明显的促进作用。

关键词： 关节软骨细胞   骨髓间充质干细胞   共培养   增殖   分化   糖胺聚糖   Ⅱ型胶原   转化生长因子β3   缝隙连接   连接蛋白   干细胞   软骨细胞   骨髓   间质干细胞   共同培养技术   转化生长因子β3   连接蛋白43   组织工程  

摘要： 背景:在关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养环境中,软骨细胞功能活跃,增殖速度加快,骨髓间充质干细胞促进了软骨细胞的表型维持,而且少量软骨细胞提供的微环境能够诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,降低了软骨分化过程中出现的肥大表型和软骨内骨化,但是影响共培养系统中细胞增殖分化的因素和细胞间相互作用的机制尚不明确。目的:观察软骨细胞和骨髓间充质干细胞接触共培养对细胞增殖分化的影响,进一步优化共培养方式,为探讨共培养系统中二者的相互作用机制提供依据。方法:分离和培养新西兰兔(南京医科大学实验动物中心提供)软骨细胞和骨髓间充质干细胞,取第2代软骨细胞和骨髓间充质干细胞,以1∶3的比例直接混合在24孔板进行接触共培养为接触共培养组,以1∶3比例分别在Transwell的上室和下室进行非接触共培养为非接触共培养组,共培养21d。细胞爬片进行甲苯胺蓝染色、COL2a1及Cx43细胞免疫化学染色。应用CCK8检测共培养系统中细胞的增殖情况,ELISA检测共培养细胞上清液中糖胺聚糖和转化生长因子β3水平,Western blot检测共培养细胞COL2a1和Cx43的表达。然后添加转化生长因子β3进行软骨细胞和骨髓间充质干细胞接触共培养和非接触共培养,比较细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43蛋白表达的变化。结果与结论:(1)随着共培养时间的延长,细胞增殖能力逐渐增高,接触共培养组细胞吸光度值明显高于非接触共培养组(P <0.05),糖胺聚糖和转化生长因子β3水平以及COL2a1和Cx43的蛋白表达明显高于非接触共培养组;(2)添加10μg/L转化生长因子β3共培养21 d,接触共培养组细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43的表达与未添加转化生长因子β3比较无明显变化(P>0.05),而非接触共培养组的细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43蛋白表达明显提高(P<0.05),但仍明显低于未添加转化生长因子β3的接触共培养组(P <0.05);(3)结果表明,接触共培养比非接触共培养明显促进细胞的增殖和分化,Cx43在其中起重要作用。

关键词： 辛伐他汀   转化生长因子β1/Smad 3   牙槽骨成骨细胞  

摘要： 目的探讨辛伐他汀对牙槽骨成骨细胞的影响。方法本实验将牙槽骨成骨细胞分为对照组和低、中、高3个剂量实验组,分别为予以0,1,10,100nmol·L;辛伐他汀,孵育72 h。用噻唑蓝（MTT）法测定辛伐他汀干预24,48,72 h后的细胞增殖活力,用流式细胞仪法测定辛伐他汀干预后24 h细胞凋亡情况,用实时荧光聚合酶链式反应检测Smad 3 mRNA的表达水平,用酶联免疫吸附实验法检测转化生长因子β1（TGF-β1）的表达变化。结果干预48,72 h后,中剂量实验组的细胞存活率分别为（69. 10±2. 91）%和（83. 90±3. 56）%,均显著高于对照组的（52. 00±3. 63）%和（70. 00±2. 61）%,差异均有统计学意义（P <0. 05）。干预24 h后,低、中、高3个剂量实验组和对照组的细胞凋亡率分别为（17. 10±1. 10）%,（18. 90±1. 22）%,（27. 23±1. 14）%和（28. 70±1. 53）%,低、中剂量实验组的细胞凋亡率和对照组比较,差异均有统计学意义（均P <0. 05）。干预24 h后,低、中、高3个剂量实验组和对照组的Smad 3 mRNA分别为（2. 25±0. 46）,（1. 95±0. 37）,（1. 75±0. 31）和（2. 73±0. 37）,低、中、高3个剂量实验组的Smad 3 mRNA和对照组比较,差异均有统计学意义（均P <0. 05）。干预24 h后,低、中、高3个剂量实验组和对照组的TGF-β1表达量分别为（43. 42±2. 12）,（40. 16±2. 51）,（34. 24±3. 13）和（43. 57±3. 82）,中、高2个剂量实验组和对照组比较,差异均有统计学意义（均P <0. 05）。结论辛伐他汀通过调节TGF-β1/Smad 3通路抑制牙槽骨成骨细胞的凋亡。