关键词： 食管-胃交界腺癌   孕激素和脂联素分子受体3   转化生长因子-β/Smad信号通路   上皮-间充质转化   转移  

摘要： 目的探讨孕激素和脂联素分子受体3(PAQR3)在食管-胃交界腺癌中的作用及相关分子机制。方法采用免疫组织化学(IHC)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测食管-胃交界腺癌组织和细胞系中PAQR3、转化生长因子(TGF)-β等蛋白表达水平。食管-胃交界腺癌细胞株及人正常胃黏膜和食管黏膜细胞株购自中国科学院上海细胞库;60例食管-胃交界腺癌(Siewert Ⅱ型)组织及配对癌旁正常组织标本取自于2010年1月至2015年12月在浙江省肿瘤医院手术患者;以食管-胃交界腺癌细胞系(OE19)和近端胃癌细胞系(NCI-N87)为模型细胞株建立带绿色荧光蛋白(GFP)标签过量表达野生型PAQR3的稳定细胞株及相对应的过表达GFP的对照细胞株,通过一系列体外实验,检查过表达PAQR3对食管-胃交界腺癌细胞生长、转移和细胞功能的影响及其潜在的分子机制。组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),行配对t检验。结果与无转移组比较,转移组肿瘤组织中PAQR3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著下调(正常组织比肿瘤组织PAQR3 IHC平均分数为2.9比7.0,χ2=32.000,P<0.01),差异有统计学意义,TGF-β、卷曲蛋白(Twist)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达显著上调[无转移组比转移组PAQR3 IHC平均分数为5.2比0.7,χ2=28.000,P<0.05;无转移组比转移组E-cadherin IHC平均分数为4.1比0.9,χ2=11.600,P<0.05;无转移组比转移组TGF-β IHC平均分数为1.4比7.0,χ2=42.400,P<0.05;无转移组比转移组Twist IHC平均分数为6.4比11.2,χ2=9.700,P<0.05;无转移组比转移组Vimentin IHC平均分数为6.0比11.3,χ2=8.700,P<0.05],差异均有统计学意义,此过程伴随上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达量变化,以OE19细胞为例,与OE19-Vector比较,OE19-PAQR3 OV组中N-钙黏蛋白(N-cadherin)下调0.42倍(χ2=10.200,P<0.05)、蜗牛蛋白(Snail)下调0.38倍(χ2=9.700,P<0.05)、Twist蛋白下调0.32倍(χ2=8.400,P<0.05)、Vimentin蛋白下调0.29倍(χ2=14.300,P<0.05)、E-cadherin蛋白表达上调1.9倍(χ2=13.200,P<0.05),差异均有统计学意义;侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2下调0.36倍(χ2=7.900,P<0.05)、MMP-9下调0.31倍(χ2=8.700,P<0.05),差异有统计学意义;TGF-β/Smad通路关键蛋白分子Smad2/3表达水平无明显变化,与对照组比较,Smad2/3蛋白下调0.94倍(χ2=15.500,P<0.05),而p-Smad2下调0.24倍(χ2=14.300,P<0.05)、p-Smad3下调0.19倍(χ2=12.600,P<0.05)和TGF-β1下调0.21倍(χ2=9.700,P<0.05),差异均有统计学意义。结论 PAQR3在食管-胃交界腺癌组织和细胞中表达下调;PAQR3可抑制食管-胃交界腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力等生物学作用,起着抑癌基因功能;PAQR3通过抑制TGF-β/Smad信号通路抑制食管-胃交界腺癌细胞的上皮间质转换过程,并参与抑制食管-胃交界腺癌的进展。

关键词： 骨髓间充质干细胞   骨形态发生蛋白2   转化生长因子β3   成骨分化   脊柱融合  

摘要： 背景:组织工程人工骨中骨髓间充质干细胞(BMSCs)、骨生长因子和合适的载体发挥重要作用。研究编码人骨形态发生蛋白2(hBMP2)和转化生长因子β 3(TGF-β3)的慢病毒(LV)对BMSCs的体内外成骨分化,促进骨形成,协同提高脊柱融合效果。方法:构建编码hBMP2和/或hTGF-β3基因的慢病毒并转染大鼠BMSCs。转染后BMSCs成骨分子的表达使用qRT-PCR和蛋白质印迹进行检测。构建大鼠腰椎后外侧横突间融合模型。术后通过放射学、手工触诊、Micro-CT和组织学进行评估融合效果。结果:hBMP2和/或hTGF-β3基因通过聚合酶链反应扩增,DNA测序,以及BLAST分析来确认。编码hBMP2和/或hTGF-β3基因的慢病毒感染的BMSCs可有效地过表达hBMP2和hTGF-β3,以及上调培养上清液中hBMP2和hTGF-β3的水平。共转染hBMP2和hTGF-β3比单独转染hBMP2或hTGF-β3更有效地诱导BMSCs成骨分化。LV-hBMP2和LV-hTGF-β3共转染组(分别编码hBMP2和hTGF-β 3的LV转染的BMSCs混合使用)和LV-hBMP2-hTGF-β3组(编码hBMP2和hTGF-β3融合基因的LV转染的BMSCs)中骨桥蛋白(OPN),骨钙蛋白(OCN)和骨保护素(OPG)的表达水平显著高于LV-BMP2(LV携带hBMP2转染的BMSCs)组和 LV-hTGF-β3(LV 携带 hTGF-β3 转染的 BMSCs)组(P<0.05)。hBMP2和/或hTGF-β3过表达上调碱性磷酸酶(ALP)活性。大鼠腰椎后外侧植入术后2周、4周、6周、8周通过放射学评估骨生长情况。大鼠腰椎后外侧植入术后8周,通过手工触诊、Micro-CT和组织学进行评估。LV-hBMP2和LV-hTGF-β3组1只(共5只),和LV-hBMP2-hTGF-β3组4只(共8只)大鼠脊柱全部融合;LV-空载体组6只(共7只),LV-hBMP2组1只(共8只)和LV-hTGF-β3组1只(共10只)大鼠脊柱全部植入处均未见明显骨痂生长;其余各组大鼠脊柱植入处可见部分骨痂,但是无法融合。结论:本研究表明慢病毒载体能够成功转导hBMP2和/或hTGF-β3基因,靶向基因可在BMSCs中成功过表达。我们的体外实验表明,联合使用hBMP2和hTGF-β3基因可以协同诱导骨分化。本实验条件下,慢病毒携带hBMP2和hTGF-β3基因感染的BMSCs,分别单独产生BMP2和hTGF-β3,在免疫活性大鼠模型中能诱导成骨,但是无法获得脊柱融合。hBMP2和hTGF-β3融合基因转染比hBMP2和hTGF-β3混合转染的BMSCs更能诱导成骨,脊柱融合率更高。免疫活性大鼠模型中,hBMP2和hTGF-β3基因可以联合使用、融合基因效果更佳,均能协同诱导成骨、促进脊柱融合,预计这两种细胞因子的组合将在未来作为一种治疗策略。

关键词： 腱损伤   组织粘连   转化生长因子β1   转化生长因子β3   cAMP反应元件结合蛋白质  

摘要： 前言随着生活水平的提高和体育运动的推广,肌腱损伤成为日常生活中极为常见的问题。近些年来,肌腱损伤的综合治疗方式已十分成熟,但是术后出现的并发症仍难以解决,肌腱粘连就是其中最为突出的问题。屈指肌腱由于其特殊的生理结构和重要功能作用,损伤发生后愈合效果缓慢。因此,如何促进肌腱的愈合,减少瘢痕粘连的形成,是临床工作中需要解决的问题。常用的方法包括改进手缝合方式、使用生物物理学屏障、局部应用药物和术后物理治疗等。这其中早期机械牵伸活动作为主要的物理治疗方式已获得临床认可,但具体的机制不明确。有相关研究报道其机制与TGF-β信号通路有关。研究表明转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与组织愈合密切相关,其在肌腱组织的成纤维细胞募集,增殖和胶原纤维分泌,改建等多个环节发挥重要作用,但同时也是瘢痕形成的主要原因。而在动物胚胎的无瘢痕愈合过程中,TGF-β1的表达含量远低于其同分异构体TGF-β3,表明TGF-β3可能发挥对抗组织修复过程中粘连形成的作用,但其具体的作用机制并不清楚。另一方面,环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)作为转录因子TGF-β3的调节,在组织纤维化调控和瘢痕形成等方面发挥重要作用。但是TGF-β/CREB在肌腱愈合过程中的具体机制仍不明确,其与力学刺激的关系也未见相关报道。因此,本课题的研究目的是:1.验证周期性机械牵伸促进肌腱愈合的作用效果及对TGF-β1,TGF-β3和CREB的分布影响;2.初步探明周期性机械牵伸调节CREB/TGF-β的具体机制。方法1.健康雄性SD大鼠36只,随机分为3组,每组12只。A组为牵伸组,组内大鼠双侧后趾建立屈趾肌腱损伤修复模型,72小时后予以持续1周的被动机械牵伸;B组为损伤组,按上述方式建立模型后不予干预;C组为假手术组,仅切开皮肤而不损伤肌腱,不做干预。2.术后第1、2、4、8周分别在肌腱愈合处取材,通过解剖学观察,HE染色,生物力学检测,实时荧光定量PCR检测和免疫组织化学染色等方法观察肌腱愈合情况和TGF-β1、TGF-β3与CREB等目的基因在肌腱愈合过程中的表达情况。结果1.组织学观察显示牵伸组肌腱组织术后早期胶原纤维排布更加规则,炎症反应降低;损伤组肌腱组织与周围组织粘连广泛,分离暴露困难;统计分析表明愈合过程中各时间点牵伸组相较于损伤组成纤维细胞数目减少,粘连程度减轻,肌腱具有更好的滑动性(P<0.05)。2.生物力学检测显示牵伸组与损伤组肌腱各项生物力学指标均低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05);随着术后时间的延长,两组肌腱生物力学指标逐渐升高;牵伸组肌腱的生物力学指标稍低于损伤组,但没有统计学意义。3.实时荧光定量PCR显示牵伸组早期出现TGF-β1,TGF-β3和CREB的差异性表达,其中以TGF-β3的高表达出现、长时间持续为主要特点;损伤组肌腱组织中TGF-β1表达水平高于同时期牵伸组,TGF-β3和CREB表达水平低于同时期牵伸组,差异有统计学意义(P<0.05)。4.免疫组织化学染色显示牵伸组三种生长因子的表达存在时间差异,其中CREB表达的变化早于TGF-β1和TGF-β3表达的变化。结论1.早期施加的周期性被动机械牵伸可以促进肌腱愈合,并减少愈合过程中的瘢痕形成。2.早期施加的周期性被动机械牵伸可能通过TGF-β3促进肌腱内源性愈合。3.可能存在CREB调控的TGF-β信号通路,以影响肌腱愈合过程。4.适当的早期活动在促进肌腱愈合的过程中不会降低肌腱的愈合强度。

关键词： 转化生长因子β3   水凝胶   胶原Ⅰ型   胶原Ⅱ型   生物相容性材料   软骨细胞   去分化  

摘要： 目的探讨海藻酸钠水凝胶三维共培养体系对去分化的软骨细胞再分化的影响。方法将第1代(P1)软骨细胞及第4代(P4)软骨细胞分别与ATDC5按3∶1的比例在海藻酸钠水凝胶内进行三维共培养,即AP1组及AP4组。另建立单纯P1、P4及ATDC5的三维培养体系,即P1、P4及ATDC组,全部以软骨诱导液为培养基,提供外源性转化生长因子(TGF-β3)。培养28 d后,通过Q-PCR检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖基因的表达情况,组织学染色观察等手段,比较各组的Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因的表达水平,结果以Bonferroni检验法进行统计学分析。结果AP4组中Ⅱ型胶原及蛋白聚糖基因的表达明显上调,且与P1、P4组的差异有统计学意义(Ⅱ型胶原:F=38.41,P<0.01;蛋白聚糖:F=5,P<0.01),且在组织学染色上也能观察到相关蛋白产物明显沉积。结论三维共培养体系能让去分化的软骨细胞重新出现其特有的表型,其机制涉及细胞因子及细胞直接接触等方面。

关键词： 牙髓干细胞   恒定磁场   转化生长因子β3   成骨向分化  

摘要： 目的:探讨体外环境中恒定磁场(static magnetic field,SMF)作用下转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)对兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的潜能。方法:用酶解组织块法分离,提取兔DPSCs,观察SMF作用对其增殖的影响。实验分为空白对照组,SMF组,TGF-β3组和TGF-β3+SMF组,按各组条件培养DPSCs。培养不同阶段采用ALP活性检测,荧光定量PCR,免疫组织化学检测和茜素红染色来评估DPSCs成骨相关指标的表达。结果:通过酶解组织块法获取的兔DPSCs在诱导体系中生长良好。第5,7,9天SMF作用均促进了DPSCs增殖。SMF作用在TGF-β3基础上上调了部分成骨相关指标的表达。结论:SMF的应用在体外环境中对促进兔DPSCs增殖,提高TGF-β3对兔DPSCs成骨向分化的诱导能力。

关键词： 肾病   健脾   通络   中药疗法   转化生长因子β1  

摘要： 目的观察补脾益肾通络泄浊方治疗慢性肾脏病(CKD)3~4期患者的临床疗效及对血清转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法将64例CKD 3~4期患者按随机数字表法分为2组。对照组32例采用内科基础治疗;治疗组32例在对照组治疗基础上加用补脾益肾通络泄浊方治疗。2组疗程为2个月。比较2组治疗前后中医临床症状积分及血红蛋白(Hb)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、估算肾小球滤过率(eGFR)、TGF-β1水平的变化,比较2组临床疗效。结果治疗组总有效率87.50%,显著高于对照组68.75%(P<0.05)。治疗后2组中医临床症状积分均降低(P<0.05),且治疗组治疗后中医临床症状积分低于对照组(P<0.05)。治疗后2组BUN、Cr水平均降低(P<0.05),Hb、eGFR水平均升高(P<0.05);治疗组治疗后的BUN、Cr水平均低于对照组(P<0.05),Hb、eGFR水平均高于对照组(P<0.05)。治疗后2组TGF-β1水平均降低(P<0.05),治疗组治疗后TGF-β1水平低于对照组(P<0.05)。结论补脾益肾通络泄浊方可有效改善CKD 3~4期患者临床症状、肾功能,降低血清TGF-β1,从而改善肾纤维化,值得临床推广应用。

关键词： 转化生长因子-β1   甲胎蛋白异质体   原发性肝癌   诊断价值  

摘要： 分析转化生长因子-β1(TGFβ1)及甲胎蛋白异质体(AFPL3)对原发性肝癌(PHC)的诊断价值。方法 随机选择2017.5-2018.5本院采集的150例血清标本作为研究对象,其中有75例PHC患者血清,还有75例正常人血清,以75例PHC患者血清作为对照组,另以75例正常人血清作为观察组。对比两组的TGFβ1与AFPL3检测情况。结果 观察组的TGFβ1、AFPL3浓度水平与阳性率均显著高于对照组(P<0.05);TGFβ1+AFPL3检测灵敏度显著高于TGFβ1与AFPL3单项检测(P<0.05)。结论:TGFβ1+AFPL3联合检测具有更高的诊断PHC价值,可提升疾病诊断的灵敏度及特异性,具有临床推广使用的价值。

关键词： 神经肌肉刺激治疗仪   产后盆底功能障碍性疾病   转化生长因子β3   层粘连蛋白   松弛素  

摘要： 目的探讨神经肌肉刺激治疗仪在产后盆底功能障碍性疾病患者中的应用及对转化生长因子β3(TGF-β3)、层粘连蛋白(LN)及松弛素(RLX)表达的影响。方法选取2016年5月~2018年1月该院治疗的产后盆底功能障碍性疾病患者200例,根据治疗方案分为对照组100例和观察组100例。对照组采用经阴道哑铃锻炼治疗,观察组在对照组基础上联合神经肌肉刺激治疗仪治疗,两组均治疗6个月,治疗完毕后对患者效果进行评估。采用法国PHENIX神经肌肉刺激仪对两组治疗前、治疗后盆底功能进行检测,评估盆底肌肉肌力等级;采用WHOQol-BREF生活量表对两组治疗前、治疗后6个月生活质量进行评估;采用酶联免疫吸附试验测定两组治疗前、治疗后6个月TGF-β3、LN、RLX水平;记录并统计两组治疗后6个月子宫脱垂、痔疮、尿失禁、会阴伤口疼痛及腰骶痛发生率,比较两组临床疗效及对TGF-β3、LN、RLX水平的影响。结果观察组与对照组治疗后0级、Ⅰ级比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);观察组治疗后6个月Ⅱ、Ⅲ级率,均低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);观察组治疗后6个月Ⅳ、Ⅴ级率均高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);观察组治疗后6个月生理健康、心理状态、社会关系、周围环境、独立能力,均高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);观察组与对照组治疗后6个月TGF-β3、LN、RLX水平均低于治疗前,差异有统计学意义(均P<0.05);观察组治疗后6个月TGF-β3、LN、RLX水平,均低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);观察组治疗后6个月子宫脱垂、痔疮、尿失禁、会阴伤口疼痛及腰骶痛发生率与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论将神经肌肉刺激治疗仪用于产后盆底功能障碍性疾病患者中有助于降低TGF-β3、LN、RLX水平,提高患者生活质量,安全性较高,值得推广应用。

关键词： 积雪草苷   创伤修复   转化生长因子β   兔   模型,动物  

摘要： 目的观察积雪草苷对兔耳创伤修复不同时期及转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3免疫组织化学表达的影响。方法将24只新西兰白兔按照随机数字表法分为生理盐水1组、生理盐水2组、积雪草苷1组、积雪草苷2组4组,每组6只。积雪草苷干粉制备成1 000 mg/mL的注射液,现备现用。制作兔耳直径1 cm全层皮肤缺损模型,造模后5 d(创伤修复增殖期),生理盐水1组、积雪草苷1组每日8:00、20:00于兔耳创面处分别注射0.9%氯化钠注射液、积雪草苷液,每次0.2 mL,连用15 d。造模后30 d(创伤修复塑形期),生理盐水2组、积雪草苷2组每日8:00、20:00于兔耳创面处分别注射0.9%氯化钠注射液、积雪草苷液,每次0.2 mL,连用15 d。生理盐水1组、积雪草苷1组于造模后0、5、20 d进行拍照做肉眼观察,生理盐水2组、积雪草苷2组于造模后0、30、45 d进行拍照做肉眼观察;生理盐水1组和积雪草苷1组,生理盐水2组和积雪草苷2组分别于造模后20、45 d后处死动物,切取耳创伤面标本,进行免疫组织化学染色。结果与生理盐水1组比较,积雪草苷1组可以明显促进创伤修复,炎性细胞明显减少,可见大量的成纤维细胞和毛细血管形成。积雪草苷2组瘢痕组织增生层明显比生理盐水2组薄,且未见丰富的血管和成纤维细胞,胶原纤维含量降低,排列稀疏。积雪草苷1组TGF-β1、Smad3的表达量均高于生理盐水1组(P<0.05);积雪草苷2组TGF-β1、Smad3的表达量均低于生理盐水2组(P<0.05)。结论积雪草苷在兔耳创伤修复增殖期干预促进瘢痕形成,但在兔耳创伤修复塑形期干预减少瘢痕形成。

关键词： 腱损伤   组织粘连   转化生长因子β3   cAMP反应元件结合蛋白质   转化生长因子β1  

摘要： 目的观察机械牵伸促大鼠肌腱愈合、抗肌腱粘连的作用,并探讨其对转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)/环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(cAMP response element binding protein, CREB)信号通路的影响。方法 SD大鼠18只,双侧后趾建立屈趾肌腱损伤修复模型,按随机数字表法分为3组,每组6只。牵伸组术后予以持续1周的被动机械牵伸,损伤组术后不予以牵引,假手术组仅在手术中暴露肌腱,不损伤肌腱即关闭伤口。术后第1、2、4、8周通过解剖学观察、组织学检查、实时荧光定量PCR反应和免疫组化观察肌腱愈合情况和目的基因的表达水平。结果各时间点牵伸组肌腱较损伤组瘢痕粘连程度减轻,肉芽组织生成减少,细胞排列更加有序(P<0.05)。愈合过程中牵伸组TGF-β3与CREB的mRNA水平在各时间点均显著高于损伤组,TGF-β1 mRNA的表达在术后早期(术后1周内)较损伤组明显降低(P<0.05),1周后2组差异无统计学意义。免疫组化染色结果提示牵伸组术后TGF-β3与CREB阳性表达强于损伤组,而TGF-β1阳性表达在术后1周时降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论机械牵伸可促进屈趾肌腱愈合并减少术后粘连,与TGF-β3和CREB表达的增加及TGF-β1表达的降低密切相关。