关键词： 转化生长因子β_(3)   牙髓干细胞   再生医学   应用进展  

摘要： 转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一个具有多种生物学功能的多肽生长因子家族,TGF-β基因家族具有调控细胞分化、转移和分裂等多种功能,日益受到人们的关注。牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)是一种间充质来源的口腔成体干细胞,具有自我更新的有丝分裂活动和向几种特殊细胞类型分化的能力,如可分化成软骨细胞、脂肪细胞、成牙本质细胞等特殊细胞。现就转化因子生长β_(3)(transforming growth factor-β_(3),TGF-β_(3))诱导牙髓干细胞生成各种不同组织在再生医学中的应用作一综述。

关键词： 拟穴青蟹   转化生长因子-β受体   NF-κB   抗菌肽   先天性免疫   生长发育  

摘要： 拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)的栖息地在我国东南沿海,尤其喜欢在江河入海口和潮间带区域,在我国海水养殖品种中占有重要一席。然而,由于我国集约化养殖系统发展迅速,随之而来的各种疾病也造成了养殖蟹类种群的大量死亡。这类报道屡见不鲜,给拟穴青蟹的养殖产业带来了严重的经济损失。因此,青蟹生长发育以及先天性免疫的研究可能有助于设计更好的蟹类养殖生产策略。作为TGF-β超家族的共同受体,转化生长因子-β受体3(TβR3)通过向其他受体递呈配体,在脊椎动物的生长发育以及某些疾病中起关键作用。然而,尚未在无脊椎动物中有过关于TβR3基因鉴别和功能分析的报道。在本研究中,TβR3首次在拟穴青蟹中鉴定并表征。通过基因克隆获得的SpTβR3 cDNA长度为2,424 bp,其中SpTβR3基因的开放阅读框(ORF)长度为1,854 bp,SpTβR3的ORF编码了一个长度为617个氨基酸的蛋白序列,包含典型的跨膜区和透明带(Zona pellucida,ZP)结构域。实时荧光定量PCR结果表明,SpTβR3主要在胚胎发育早期和蜕皮后早期表达,表明其参与了生长发育。本研究首次报道在无脊椎动物中,溶藻弧菌和Poly(I:C)的刺激都可能改变SpTβR3基因的表达模式。值得注意的是,当SpTβR3受到体内干扰时,SpIKK和两个NF-κB成员(SpRelish和SpDorsal)以及五个抗菌肽基因(SpCrustin和SpALF1-4)的表达水平会被显著抑制。其次,通过双荧光素酶报告基因检测系统得出,SpTβR3基因的体外过表达可以激活NF-κB信号通路的传导。此外在SpTβR3基因被体内干扰后,细菌清除试验进一步突显了该基因在激活先天免疫应答中的潜力。以上的所有结果表明拟穴青蟹的SpTβR3基因可以通过调节NF-κB信号通路进而参与到拟穴青蟹的先天性免疫反应。本研究首先表明TβR3基因存在于无脊椎动物中,不仅参与了拟穴青蟹的生长和发育,而且还参与了其先天性免疫调节。它还为甲壳类动物甚至无脊椎动物中转化生长因子-β受体的起源和进化提供了新见解。

关键词： 人牙髓干细胞   转化生长因子β3   成骨向转化   Smad蛋白   细胞增殖  

摘要： 目的:探讨转化生长因子β3(transforminggrowthfactorβ3，TGF-β3)体外诱导人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells，hDPSCs)成骨向转化的效果以及Smad蛋白在此过程中的表达情况。方法:使用流式细胞技术检测原代hDPSCs的CD90、CD73、CD105，免疫荧光染色检测STRO-1。倒置显微镜观察细胞形态及增殖变化。第7dqRT-PCR检测各组OCN、Runx-2、TGF-βRI、Smad2、Smad4、Smad3基因表达水平，WB检测各组OCN、Runx-2、TGF-βRI、Smad2/Smad3、p-Smad2/Smad3、Smad4蛋白的表达，培养第14、21d茜素红染色观察钙结节沉积。结果:原代细胞的CD90、CD73、CD105、STRO-1为阳性表达;显微镜观察可见细胞增殖，形态逐渐为长条状梭形，茜素红染色观察TGF-β3实验组钙化结节较其余两组更多且更明显。qRT-PCR检测TGF-β3实验组Runx-2、OCN、TGF-βRI、Smad3、Smad2、Smad4基因与空白组相比表达量高(P＜0.05)，其中基因Smad2、Smad4的表达量高于对照组(P＜0.05)。WB检测TGF-β3实验组Runx-2、OCN、TGF-βRI、Smad4、P-Smad2/Smad3、Smad2/Smad3蛋白表达量高于空白组(P＜0.05)，与对照组相比Smad4、OCN、Runx-2蛋白表达量高(P＜0.05)。结论:在体外TGF-β3可有效促进hDPSCs的成骨向转化，促进hDPSCs成骨向转化的机制可能是通过提高了Smad2、Smad4基因表达，增加了相关成骨蛋白OCN、Runx-2的表达量。

关键词： 胰腺癌   长链非编码RNA转化生长因子-β诱导HOXA转录物   肿瘤转移   肿瘤干细胞  

摘要： 目的研究长链非编码RNA(LncRNA)转化生长因子(TGF)-β诱导HOXA转录物(HIT)在胰腺癌组织中的表达及其与细胞转移间的关系及机制。方法培养人肾上皮细胞系293T并进行HIT干扰载体的慢病毒细胞包装,构建Capan-1干扰HIT细胞模型,分为对照组、干扰1#组及干扰2#组,以Transwell侵袭及迁移实验检测各组细胞侵袭及迁移数量的变化,以蛋白质印迹(Western Blot)法检测各组细胞KHDRBS3及CD44的蛋白表达变化。结果对照组、干扰#1组及干扰#2组中HIT mRNA表达水平分别为1.00±0.07,0.36±0.02及0.30±0.03,KHDRBS3 mRNA表达水平分别为1.00±0.11,1.22±0.13及0.93±0.09,CD44 mRNA表达水平分别为1.00±0.09,0.61±0.06及0.46±0.04,KHDRBS3蛋白相对表达水平分别为0.81±0.06,0.12±0.01及0.18±0.02,CD44蛋白相对表达水平分别为0.57±0.06,0.19±0.02及0.23±0.03,每视野侵袭细胞数分别为(66.0±7.4),(32.5±5.1)和(26.1±5.8)个,每视野迁移细胞数分别为(71.6±8.0),(21.5±3.7)及(24.9±4.2)个,干扰#1组及干扰#2组侵袭及迁移细胞数显著低于对照组(P<0.01);干扰1#组及干扰2#组KHDRBS3蛋白及CD44 mRNA和蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。结论 LncRNA HIT在胰腺癌组织中高表达,且可通过激活KHDRBS3/CD44通路,促进胰腺癌细胞的侵袭转移能力。

关键词： 转化生长因子β3   良性前列腺增生   细胞凋亡   细胞增殖   上皮-间质转化  

摘要： 目的:良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)是老龄男性中一种与年龄有关的最常见的尿路疾病。但其确切的病因尚未研究清楚。近来,转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)家族受到广泛关注,它们是一类具有调控多种生物学功能的二聚体蛋白。该家族的许多成员已被证实在BPH中上调并与BPH的发病有关。然而,TGF-β3作为该家族的重要成员,与BPH的关系尚待研究。本课题旨在阐明TGF-β3在BPH发病中的潜在作用及其机制。 材料和方法:通过Oncomine在线数据库分析TGF-β3在人增生和正常前列腺组织中的基因表达水平,进一步采用q RT-PCR、Western blot和免疫荧光染色技术检查我们收集的人增生和正常前列腺组织中TGF-β3的m RNA和蛋白表达水平及定位。通过转染技术下调或过表达WPMY-1和BPH-1两种前列腺细胞系中的TGF-β3,然后通过CCK-8法检测细胞的增殖变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡及周期变化,Western blot和免疫荧光染色检测上皮-间质转化(epithelialalmesenchymal transition,EMT)相关的标记物变化,同时采用特异性MAPK通路抑制剂探究其信号机制。 结果:Oncomine在线数据库分析结果显示,BPH中TGF-β3的基因表达显著上调,q RT-PCR、Wb和免疫荧光的检测结果显示,与对照组相比,BPH组织中的TGF-β3在m RNA和蛋白水平表达均增加且TGF-β3在前列腺间质和上皮中均有表达。过表达TGF-β3有效促进了WPMY-1和BPH-1细胞的增殖、抑制了细胞凋亡并使细胞G0/G1期比例减少;下调TGF-β3使细胞G0/G1期比例明显增多并抑制了细胞的增殖,下调TGF-β3促进了WPMY-1细胞的凋亡但对BPH-1细胞的凋亡没有显著影响。而MAPK信号通路的抑制剂能明显回复TGF-β3对细胞的增殖、凋亡及周期的影响。此外,下调TGF-β3可以明显抑制BPH-1细胞发生EMT转化,而TGF-β3的过量表达则会促使BPH-1细胞发生EMT转化。 结论:人前列腺组织的上皮和间质中均有TGF-β3的表达,而且在BPH组织中的TGF-β3被明显上调。此外,在BPH的发病过程中TGF-β3发挥的作用包括促进前列腺上皮细胞发生间质转化并通过激活MAPK信号通路调控细胞增殖、凋亡及周期变化。

关键词： 三七总皂苷   肝纤维化   转化生长因子β1   重组人SMAD家族成员3  

摘要： 目的观察三七总皂苷对肝纤维化小鼠肝转化生长因子-β1（TGF-β1）及重组人SMAD家族成员3（smad3）表达的影响。方法小鼠皮下注射四氯化碳构建肝纤维化模型。将模型小鼠随机分为模型组和实验组,每组15只;另取15只健康小鼠作为空白组。空白组和模型组均给予5 mL·kg-1橄榄油,皮下注射,每3天1次;实验组按400 mg·kg-1的剂量腹腔灌注30 g·L-1三七总皂苷,qd。3组小鼠均连续给药8周。用全自动生化分析仪测定小鼠血清中的总胆固醇（TC）和三酰甘油（TG）,用聚合酶链反应检测肝组织TGF-β1和smad3基因的表达水平。结果给药8周后,实验组、模型组和空白组的TG分别为（1.11±0.17）,（4.02±0.33）和（0.83±0.06）mmol·L-1,TC分别为（2.20±0.99）,（3.94±0.44）和（1.57±0.57）mmol·L-1,TGF-β1mRNA表达量分别为1.05±0.46,3.97±0.14和1.00±0,smad3 mRNA表达量分别为1.15±0.48,4.27±0.23和1.00±0,实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论三七总皂苷对肝纤维化的肝组织有保护作用,这可能与三七总皂苷显著降低肝组织TGF-β1及smad3表达有关。

关键词： 微小RNAs   成骨细胞   细胞凋亡   转化生长因子  

摘要： 目的构建转化生长因子-β2(TGF-β2)基因3'UTR双荧光素酶报告质粒,分析microRNA-212-3p(miR-212-3p)与其潜在靶基因TGF-β2的靶向关系。方法将TGF-β23'UTR片段构建至双荧光素酶报告载体pYr-MirTarget上,随后将重组质粒与miR-212-3p核苷类、无核苷类及其抑制剂共同转染Saos-2细胞(人成骨肉瘤细胞),通过双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,RT-PCR检测Hsa-miR-212及TGF-β2基因的mRNA相对表达量,Western blotting检测TGF-β2蛋白相对表达量。结果miR-212-3p-mimics+TGF-β23'UTR共转染组荧光素酶活性较对照组低(P<0.05)。miR-212-3p-mimics+TGF-β23'UTR共转染组Has-miR-212 mRNA相对表达量最高,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β23'UTR共转染组最低(P<0.05)。miR-212-3p-mimics+TGF-β23'UTR共转染组TGF-β2 mRNA相对表达量最低,miR-212-3p-inhibitor+TGF-β23'UTR共转染组最高(P<0.05)。miR-212-3p-inhibitor+TGF-β23'UTR共转染组TGF-β2蛋白相对表达量最高,miR-212-3p-mimics+TGF-β23'UTR共转染组最低(P<0.05)。结论该实验成功构建了TGF-β2基因3'UTR荧光素酶重组质粒,而且miR-212-3p可以与TGF-β2基因的3'UTR结合,抑制荧光素酶活性,由此推断TGF-β2是miR-212-3p的靶基因。

关键词： 壳聚糖复合水凝胶   转化生长因子β3   半月板缺损   Ⅱ型胶原   蛋白聚糖  

摘要： 目的研究骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)与负载转化生长因子β3(TGF-β3)的壳聚糖复合水凝胶的复合物修复半月板缺损的效果。方法利用60只新西兰大白兔制作半月板前角全层缺损模型。将模型兔随机分为:对照组(未植入任何材料)、修复Ⅰ组(缺损处注入壳聚糖复合水凝胶与骨髓间充质干细胞复合物)、修复Ⅱ组(缺损处注入负载TGF-β3的壳聚糖复合水凝胶与骨髓间充质干细胞复合物)。术后12周取材,进行放射学检查、大体和组织学观察;利用Western blot检测Ⅱ型胶原、蛋白聚糖蛋白水平。结果对照组的半月板前角全层缺损,无明显修复迹象;修复Ⅰ组的缺损部位大部分被修复组织填充;修复Ⅱ组的缺损部位完全被修复组织填充。修复Ⅱ组的Ⅱ型胶原、蛋白聚糖蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞与负载TGF-β3的壳聚糖水凝胶联合可促进兔半月板缺损的修复。

关键词： 转化生长因子β3   聚乳酸-羟基乙酸   缓释微球   兔脂肪间充质干细胞   增殖   迁移   软骨损伤   组织工程  

摘要： 背景:转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球系统可使药物在作用部位维持有效药物浓度,提高生长因子的利用率。目的:优化转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球制备工艺,探究其对脂肪间充质干细胞增殖和迁移的影响。方法:采用乳化-溶剂挥发法制备转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球,并对微球的形态、粒径大小、药物空间分布、包封率、载药量和缓释性能进行表征。将转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球溶解于PBS中,于相应的时间点检测上清液中转化生长因子β3浓度,对应时间点扫描电镜观察微球形态。将脂肪间充质干细胞分6组培养,分别加入培养基(阴性对照)、含转化生长因子β3的培养基、含空白聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基、含10,100,1000 g/L转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基,于对应的时间点CCK-8法检测增殖。将脂肪间充质干细胞分别与培养基(阴性对照)、含转化生长因子β3的培养基、含聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基、含10,100,1000 g/L转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球的培养基以非接触方式共培养24 h,检测细胞迁移数量。结果与结论:①转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸微球呈球形,表面光滑,无粘连,粒径均匀分布,微球直径2-50μm,微球内的蛋白药物分布均匀,具有较高的包封率与载药量;②缓释微球具有良好的降解性能,体外可于6个月后完全降解;同时具有良好的缓释性能,体外可缓慢释放转化生长因子β3长达45d;③空白微球及含转化生长因子β3的缓释微球对脂肪间充质干细胞增殖无影响;④空白微球对脂肪间充质干细胞的迁移无影响,转化生长因子β3及含转化生长因子β3的缓释微球可促进脂肪间充质干细胞的迁移,不同质量浓度缓释微球间的促进效果无差异;⑤结果表明,转化生长因子β3/聚乳酸-羟基乙酸缓释微球可在不影响脂肪间充质干细胞增殖的情况下促进其迁移。

关键词： 盆腔脏器脱垂   补中益气汤   转化生长因子β-3  

摘要： 目的观察中药补中益气汤对盆腔脏器脱垂模型大鼠子宫骶韧带组织中转化生长因子β-3(TGFβ-3)、微小核糖核酸-30d(miR-30d)表达的影响。方法数字抽签分组,16只空白对照组大鼠分为两组(每组8只):(1)A1组:饲养4周;(2)A2组:卵巢切除,生理盐水灌胃8周。64只盆腔脏器脱垂模型大鼠分为8组(每组8只):(1)B1组:饲养4周;(2)B2组:生理盐水灌胃8周;(3)C1组、C2组:低浓度补中益气汤(3.5 ml·kg-1·d-1)灌胃4周、8周;(4)D1组、D2组:中浓度补中益气汤(7.0 ml·kg-1·d-1)灌胃4周、8周;(5)E1组、E2组:高浓度补中益气汤(14.0 ml·kg-1·d-1)灌胃4周、8周。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组大鼠子宫骶韧带组织胶原蛋白COL1A1、COL3A1和TGFβ-3、miR-30d的表达。结果 B1组较A1组COL1A1、COL3A1表达下降(均P<0.01),TGFβ-3、miR-30d表达升高(均P<0.01);治疗4周组组间比较,COL1A1表达E1组较C1组升高(P<0.01),COL3A1相对表达量随补中益气汤剂量升高,D1组较C1、E1组较D1组均升高(均P<0.01)。TGFβ-3表达D1、E1组较C1组升高(P<0.01);miR-30d表达D1、E1组较C1组下降(均P<0.01)。治疗8周组组间比较,COL1A1表达D2组较C2组升高(P<0.01),而E2组较D2组下降(P<0.01);COL3A1 、TGFβ-3表达D2组较C2组升高(均P<0.01),TGFβ-3表达E2组较D2组下降(P<0.01);miR-30d表达D2组较C2组下降(P<0.01),E2组较D2组升高(P<0.01);补中益气汤治疗4周组与B1组比较,D1、E1组COL1A1、COL3A1、TGFβ-3表达升高(P<0.01),C1、D1、E1组miR-30d表达下降(P<0.01);补中益气汤治疗8周组与B2组比较,D2、E2组COL1A1、COL3A1表达升高(P<0.01),C2、D2、E2组TGFβ-3表达升高、miR-30d表达均下降(均P<0.01)。结论补中益气汤可增加盆腔脏器脱垂模型大鼠子宫骶韧带组织中胶原蛋白COL1A1、COL3A1的合成,其作用机制可能与上调大鼠子宫骶韧带组织中TGFβ-3的表达和降低组织中miR-30d的表达水平有关。