关键词： 软骨疾病   转化生长因子β3   间质干细胞   转染   角蛋白质类   组织支架   疾病模型,动物   兔  

摘要： 目的通过构建新西兰种大白兔的软骨缺损模型,探讨角蛋白支架联合转化生长因子-β3(TGF-β3)基因过表达载体质粒转染的骨髓间充质干细胞(BMSC)复合物对软骨缺损的修复作用。方法构建大白兔的软骨缺损模型;将新西兰大白兔随机分为模型组(A组)、支架组(B组)、联合BMSC组(C组)和联合过表达质粒转染BMSC组(D组),每组5只,B组软骨缺损处填充角蛋白支架,C组软骨缺损处填充角蛋白支架联合BMSC复合物,D组软骨缺损处填充角蛋白支架联合TGF-β3基因过表达载体转染的BMSC复合物。利用苏木精-伊红(HE)染色、番红-固绿染色和免疫组织化学染色检测各组大白兔缺损软骨修复情况,并且利用改良O′Driscoll评分系统评估HE染色结果,利用改良Mankin评分系统评估番红-固绿染色结果。结果HE染色和番红-固绿染色结果显示,D组软骨缺损基本愈合,愈合处多为软骨组织。A组、B组、C组和D组O′Driscoll评分比较差异有显著性(F=9.342,P<0.05),其中D组O′Driscoll评分明显低于其他组(q=2.018~2.498,P<0.05);A组、B组、C组和D组Mankin评分比较差异均具有显著性(F=8.549,P<0.05);其中D组Mankin评分明显高于其他组(q=2.237~3.457,P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,C组和D组软骨缺损处填充物均可见Ⅱ型胶原蛋白表达,D组表达量更多。结论角蛋白支架联合TGF-β3基因过表达载体质粒转染的BMSC复合物可以促进缺损软骨的修复。

关键词： MC3T3-E1细胞   转化生长因子β   骨形成蛋白2   成骨   细胞增殖   细胞分化  

摘要： 背景:生长因子是骨组织形成、改建、修复的关键要素之一,多种生长因子联合诱导骨干细胞成骨分化相较于单一生长因子具有一定的优势,但是何种类型的联合、什么样的浓度组合才能发挥最佳的诱导作用?目前该方向研究较少。目的:探索转化生长因子β和骨形成蛋白2联合诱导对小鼠MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响。方法:将不同质量浓度的转化生长因子β和骨形成蛋白2与小鼠MC3T3-E1细胞混合诱导培养,共设置6个组,含1个对照组和5个实验组。在不同时间点进行检测,MTT法检测细胞的增殖情况;实时定量RT-PCR检测Runx2、骨钙素基因表达;碱性磷酸酶染色观察成骨细胞活性及功能状态;茜素红染色观察钙结节形成的数量。结果与结论:①转化生长因子β和骨形成蛋白2单独或联合使用时,都可以明显促进小鼠MC3T3-E1细胞增殖,促进Runx2、骨钙素基因的表达,增加碱性磷酸酶活性及矿化能力(P<0.05);②两者联合使用时,在实验浓度范围内促成骨效果与浓度正相关,低浓度的联合能达到或优于单独使用的效果,联合质量浓度为1μg/L转化生长因子β+100μg/L骨形成蛋白2是最优组;③提示转化生长因子β和骨形成蛋白2单独或联合诱导均能明显促进小鼠MC3T3-E1细胞增殖分化及成骨作用,二者联合诱导在增殖、分化的不同阶段既各自侧重又相互协同;在此次实验浓度范围内,1μg/L转化生长因子β+100μg/L骨形成蛋白2联合组为最优促进效果。

关键词： 流产,自然   孕酮   转化生长因子-β   妊娠结局   受试者工作特征曲线   共刺激分子可溶性B7-H3  

摘要： 目的探讨血清孕酮、转化生长因子-β(TGF-β)、共刺激分子可溶性B7-H3(sB7-H3)在自发性流产(SA)病人中的表达及预测价值。方法选取周口市西华县妇幼保健院2015年5月至2018年1月妊娠者240例作为研究对象,根据妊娠情况分为SA病人35例作为观察组,正常妊娠者205例作为对照组。妊娠第6周、第7周、第10周、第12周检测对比两组血清孕酮、TGF-β、sB7-H3水平,logistic回归分析SA影响因素,Pearson相关系数分析血清孕酮、TGF-β、sB7-H3间相关性,受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清孕酮、TGF-β、sB7-H3对SA的预测价值。结果两组年龄、既往流产史、甲状腺功能差异有统计学意义(P<0.05);观察组妊娠第7周、第10周、第12周孕酮(26.38±4.12)μg/L、(28.13±5.66)μg/L、(30.16±6.16)μg/L、TGF-β(4407.60±710.38)ng/L、(5801.20±953.25)ng/L、(6531.52±1,280.92)ng/L、sB7-H3(901.52±250.56)ng/L、(1308.27±339.78)ng/L、(1718.03±417.38)ng/L水平低于对照组(29.84±5.28)μg/L、(33.29±6.38)μg/L、(38.95±8.88)μg/L、(5151.07±780.19)ng/L、(6776.44±995.61)ng/L、(8032.10±1500.17)ng/L、(1176.17±281.44)ng/L、(1675.91±378.75)ng/L、(2183.08±470.18)ng/L(P<0.05);年龄≥30岁、既往流产史、甲状腺功能异常、血清孕酮、TGF-β、sB7-H3是SA发生的独立危险因素(P<0.05);血清TGF-β与sB7-H3呈正相关,孕酮与TGF-β、sB7-H3呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,第7周血清孕酮预测SA的AUC值最高0.864,大于TGF-β、sB7-H3。结论SA病人血清孕酮、TGF-β、sB7-H3呈低表达,因子间协同作用可能是造成流产的主要原因,临床加强高危SA病人上述因子监测,对超早期干预、改善妊娠结局具有重要意义。

关键词： 骨   生长因子   成骨   成骨细胞   细胞增殖   碱性磷酸酶   基因  

摘要： 背景:转化生长因子β3对成骨细胞增殖和成骨能力的影响相关研究甚少。目的:观察不同质量浓度的转化生长因子β3对成骨细胞生长增殖和成骨能力的影响。方法:采用课题组前期方法改良酶消化法分离获得新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞,差速贴壁法纯化并鉴定。将成骨细胞分为对照组和实验组,对照组为常规培养的成骨细胞,实验组为分别含0.1,1,10,100μg/L的转化生长因子β3培养。各组每天观察细胞生长情况;培养1,3,5,7,9,11,13 d采用MTT法检测各组细胞增殖情况并绘制细胞生长曲线;培养1,3,5,7,9,11,13,15 d检测各组碱性磷酸酶水平;培养第7,14天用RT-qPCR法检测各组胶原蛋白1A1、Runx-2和骨钙素基因表达情况;培养21d茜素红染色法检测各组细胞矿化能力。实验方案经新疆医科大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:①成功分离培养、纯化并鉴定成骨细胞;②10μg/L转化生长因子β3组细胞增殖活性明显高于对照组(P<0.05);10,100μg/L转化生长因子β3组碱性磷酸酶水平高于对照组(P<0.05);③10μg/L转化生长因子β3组胶原蛋白1A1、Runx-2和骨钙素基因表达量始终高于对照组(P<0.05),100μg/L转化生长因子β3组胶原蛋白1A1,Runx-2和骨钙素基因表达量在第7天时高于对照组(P<0.05);④10,100μg/L转化生长因子β3组矿化结节较对照组大且多,其中10μg/L转化生长因子β3组的矿化结节数明显多于对照组(P<0.05);⑤结果说明,转化生长因子β3在10-100μg/L范围内可促进成骨细胞的增殖和成骨能力,其中10μg/L质量浓度的转化生长因子β3效果最佳。

关键词： 骨髓间充质干细胞   干细胞膜片   转化生长因子β3   抗坏血酸   成软骨分化  

摘要： 目的:探索转化生长因子β3(TGF-β3)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞膜片成软骨分化的潜能。方法:体外分离培养兔骨髓间充质BMSCs细胞,用含抗坏血酸培养基构建干细胞膜片,添加TGF-β3对干细胞膜片成软骨诱导分化。光镜、HE染色和Masson染色观察细胞形态、大体结构及组织学改变,阿利新蓝染色、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组化染色和RT-qPCR检测成软骨标志物ColⅡ和蛋白聚糖(PG)的mRNA表达及蛋白合成情况。结果:TGF-β3诱导成软骨分化14 d,镜下间充质干细胞生长良好,可用镊子钳夹起膜片状结构,可卷缩成团再展开成膜。HE染色显示细胞质及细胞外基质成分均被染成粉红色,其胞核为蓝色,细胞间呈分层状排列结构。Masson染色可见胞核染成蓝黑色,其细胞质染成粉红色,周围包绕着大量染成蓝色的胶原成分。阿利新蓝染色与ColⅡ免疫组化染色均为阳性,对照组阴性。实验组高表达软骨细胞特异性ColⅡ和PG的mRNA(P<0.05)。结论:抗坏血酸诱导构建的干细胞膜片经TGF-β3诱导,能成功向软骨分化及构建软骨细胞膜片。

关键词： 骨形态生产蛋白-7   转化生长因子β3   间充质干细胞   软骨  

摘要： 目的:探讨体外骨形态生产蛋白-7(BMP-7)联合转化生长因子β3(TGF-β3)在诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞及软骨中的作用。方法:在完全培养基中加入不同浓度的BMP-7和TGF-β3(10 ng/mL∶10 ng/mL,25 ng/mL∶25 ng/mL,50 ng/mL∶50 ng/mL,100 ng/mL∶100 ng/mL)制成分化培养基,分别记为低浓度、中低浓度、中浓度和高浓度组,完全培养基作为对照组。每组分别用上述不同浓度分化培养基培养4×10~4个比格犬股骨骨髓间充质干细胞,悬浮沉淀细胞团,并定期更换分化培养基。分别于7、14、21、28、35、42 d观察细胞团分化及聚集成团情况。随后多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片后行HE染色,阿利辛蓝染色,免疫荧光染色。结果:比格犬骨髓间充质干细胞生长情况良好,对照组及不同浓度分化培养基的干细胞在第7天均未见细胞聚集,在第14天,中浓度和高浓度组干细胞聚集成团,而对照组、低浓度组和中低浓度干细胞呈散在点状结构,未见明显聚集成团;在第21、28、35、42天,中浓度和高浓度组聚集成团的结构大小未见明显变化,呈乳白色胶状,结构更为紧密,且富有弹性,高浓度组聚集成团结构直径大于中浓度组(1.2 mm vs.0.6 mm),而对照组、低浓度组和中低浓度组干细胞仍呈分散状态,未见聚集成团。经HE染色、阿利辛蓝染色、免疫荧光反应证实聚集成团的结构表达丰富的酸性粘多糖和II型胶原蛋白。免疫荧光反应定量结果显示干细胞的值为(1.126±0.030),诱导细胞的值为(23.211±0.816),软骨细胞的值为(9.669±0.278),各组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:BMP-7和TGF-β3联合作用能有效诱导骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞及软骨。

关键词： 转化生长因子β_(3)   牙髓干细胞   再生医学   应用进展  

摘要： 转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一个具有多种生物学功能的多肽生长因子家族,TGF-β基因家族具有调控细胞分化、转移和分裂等多种功能,日益受到人们的关注。牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)是一种间充质来源的口腔成体干细胞,具有自我更新的有丝分裂活动和向几种特殊细胞类型分化的能力,如可分化成软骨细胞、脂肪细胞、成牙本质细胞等特殊细胞。现就转化因子生长β_(3)(transforming growth factor-β_(3),TGF-β_(3))诱导牙髓干细胞生成各种不同组织在再生医学中的应用作一综述。

关键词： 拟穴青蟹   转化生长因子-β受体   NF-κB   抗菌肽   先天性免疫   生长发育  

摘要： 拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)的栖息地在我国东南沿海,尤其喜欢在江河入海口和潮间带区域,在我国海水养殖品种中占有重要一席。然而,由于我国集约化养殖系统发展迅速,随之而来的各种疾病也造成了养殖蟹类种群的大量死亡。这类报道屡见不鲜,给拟穴青蟹的养殖产业带来了严重的经济损失。因此,青蟹生长发育以及先天性免疫的研究可能有助于设计更好的蟹类养殖生产策略。作为TGF-β超家族的共同受体,转化生长因子-β受体3(TβR3)通过向其他受体递呈配体,在脊椎动物的生长发育以及某些疾病中起关键作用。然而,尚未在无脊椎动物中有过关于TβR3基因鉴别和功能分析的报道。在本研究中,TβR3首次在拟穴青蟹中鉴定并表征。通过基因克隆获得的SpTβR3 cDNA长度为2,424 bp,其中SpTβR3基因的开放阅读框(ORF)长度为1,854 bp,SpTβR3的ORF编码了一个长度为617个氨基酸的蛋白序列,包含典型的跨膜区和透明带(Zona pellucida,ZP)结构域。实时荧光定量PCR结果表明,SpTβR3主要在胚胎发育早期和蜕皮后早期表达,表明其参与了生长发育。本研究首次报道在无脊椎动物中,溶藻弧菌和Poly(I:C)的刺激都可能改变SpTβR3基因的表达模式。值得注意的是,当SpTβR3受到体内干扰时,SpIKK和两个NF-κB成员(SpRelish和SpDorsal)以及五个抗菌肽基因(SpCrustin和SpALF1-4)的表达水平会被显著抑制。其次,通过双荧光素酶报告基因检测系统得出,SpTβR3基因的体外过表达可以激活NF-κB信号通路的传导。此外在SpTβR3基因被体内干扰后,细菌清除试验进一步突显了该基因在激活先天免疫应答中的潜力。以上的所有结果表明拟穴青蟹的SpTβR3基因可以通过调节NF-κB信号通路进而参与到拟穴青蟹的先天性免疫反应。本研究首先表明TβR3基因存在于无脊椎动物中,不仅参与了拟穴青蟹的生长和发育,而且还参与了其先天性免疫调节。它还为甲壳类动物甚至无脊椎动物中转化生长因子-β受体的起源和进化提供了新见解。

关键词： 人牙髓干细胞   转化生长因子β3   成骨向转化   Smad蛋白   细胞增殖  

摘要： 目的:探讨转化生长因子β3(transforminggrowthfactorβ3，TGF-β3)体外诱导人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells，hDPSCs)成骨向转化的效果以及Smad蛋白在此过程中的表达情况。方法:使用流式细胞技术检测原代hDPSCs的CD90、CD73、CD105，免疫荧光染色检测STRO-1。倒置显微镜观察细胞形态及增殖变化。第7dqRT-PCR检测各组OCN、Runx-2、TGF-βRI、Smad2、Smad4、Smad3基因表达水平，WB检测各组OCN、Runx-2、TGF-βRI、Smad2/Smad3、p-Smad2/Smad3、Smad4蛋白的表达，培养第14、21d茜素红染色观察钙结节沉积。结果:原代细胞的CD90、CD73、CD105、STRO-1为阳性表达;显微镜观察可见细胞增殖，形态逐渐为长条状梭形，茜素红染色观察TGF-β3实验组钙化结节较其余两组更多且更明显。qRT-PCR检测TGF-β3实验组Runx-2、OCN、TGF-βRI、Smad3、Smad2、Smad4基因与空白组相比表达量高(P＜0.05)，其中基因Smad2、Smad4的表达量高于对照组(P＜0.05)。WB检测TGF-β3实验组Runx-2、OCN、TGF-βRI、Smad4、P-Smad2/Smad3、Smad2/Smad3蛋白表达量高于空白组(P＜0.05)，与对照组相比Smad4、OCN、Runx-2蛋白表达量高(P＜0.05)。结论:在体外TGF-β3可有效促进hDPSCs的成骨向转化，促进hDPSCs成骨向转化的机制可能是通过提高了Smad2、Smad4基因表达，增加了相关成骨蛋白OCN、Runx-2的表达量。

关键词： 胰腺癌   长链非编码RNA转化生长因子-β诱导HOXA转录物   肿瘤转移   肿瘤干细胞  

摘要： 目的研究长链非编码RNA(LncRNA)转化生长因子(TGF)-β诱导HOXA转录物(HIT)在胰腺癌组织中的表达及其与细胞转移间的关系及机制。方法培养人肾上皮细胞系293T并进行HIT干扰载体的慢病毒细胞包装,构建Capan-1干扰HIT细胞模型,分为对照组、干扰1#组及干扰2#组,以Transwell侵袭及迁移实验检测各组细胞侵袭及迁移数量的变化,以蛋白质印迹(Western Blot)法检测各组细胞KHDRBS3及CD44的蛋白表达变化。结果对照组、干扰#1组及干扰#2组中HIT mRNA表达水平分别为1.00±0.07,0.36±0.02及0.30±0.03,KHDRBS3 mRNA表达水平分别为1.00±0.11,1.22±0.13及0.93±0.09,CD44 mRNA表达水平分别为1.00±0.09,0.61±0.06及0.46±0.04,KHDRBS3蛋白相对表达水平分别为0.81±0.06,0.12±0.01及0.18±0.02,CD44蛋白相对表达水平分别为0.57±0.06,0.19±0.02及0.23±0.03,每视野侵袭细胞数分别为(66.0±7.4),(32.5±5.1)和(26.1±5.8)个,每视野迁移细胞数分别为(71.6±8.0),(21.5±3.7)及(24.9±4.2)个,干扰#1组及干扰#2组侵袭及迁移细胞数显著低于对照组(P<0.01);干扰1#组及干扰2#组KHDRBS3蛋白及CD44 mRNA和蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。结论 LncRNA HIT在胰腺癌组织中高表达,且可通过激活KHDRBS3/CD44通路,促进胰腺癌细胞的侵袭转移能力。