关键词： 人转化生长因子β3   克隆   表达  

摘要： 目的 :构建能高效表达人转化生长因子 β3 (TGF β3 )的基因工程菌。方法 :用PCR方法扩增人转化生长因子 β3 的cDNA ,将该cDNA片段插入表达载体pET3c的表达框架中 ,构建了表达菌株BL2 1/pET TGF β3 。IPTG诱导表达。通过阳离子交换、变性分子筛层析纯化重组蛋白。用Western blot杂交检测重组蛋白的免疫原性。结果 :所构建的表达菌株 ,其TGF β3 的表达量占菌体总蛋白 2 5 %以上。经纯化获得了银染一条带的重组蛋白。免疫学检测表明重组蛋白具有较强的抗原特异性。结论 :人转化生长因子 β3 在大肠杆菌中实现了高效表达 ,获得了具有免疫原性的重组TGF β3 。

关键词： 转化生长因子-β   诱导   活化蛋白-1   NIH3T3细胞   α2Ⅰ型胶原   表达   病理性瘢痕  

摘要： 目的　研究活化蛋白 1(AP 1)在转化生长因子 β(TGF β)促进Ⅰ型胶原基因表达中的作用 ,探讨病理性瘢痕的形成机制。方法　用 5 μg/LTGF β刺激鼠成纤维细胞株NIH 3T3细胞 ,分别采用凝胶迁移变动分析 (EMSA)和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术研究TGF β对AP 1的活化及其对α2 Ⅰ型胶原mRNA水平的影响。结果　 5 μg/LTGF β刺激NIH3T3细胞 ,0 .5h即可检测到AP 1被活化 ,随时间推移AP 1的活性逐渐增强 ,6h达到峰值 ,而后活性逐渐减弱 ,2 4h仍然可检测到AP 1的活性。用TGF β刺激NIH3T3细胞 ,2 4h后提取总RNA ,经RT PCR分析 ,与对照组相比α2 Ⅰ型胶原mRNA水平明显增高。结论　TGF β刺激NIH3T3细胞 ,可激活AP 1并可以上调α2 Ⅰ型胶原的表达。

关键词： 表皮生长因子   转化生长因子β3   妊娠高血压综合征   免疫组织化学  

摘要： 妊娠高血压综合征(妊高征)的发生与滋养细胞的侵蚀力下降有关。表皮生长因子(epidermal growth factor，ECF)及其受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)以及转化生长因子β3(transforming growth factor,TGF-β3)在滋养细胞的形成和发育中发挥重要作用~[1]。本研究通过测定妊高征患者血清EGF浓度和胎盘滋养细胞中EGFR和TGF-β3的表达情况，探讨其与妊高征发病的关系。

关键词： 转化生长因子-β1   瘢痕疙瘩   成纤维细胞   Smad3   Smad7   mRNA表达  

摘要： 目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)影响瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3,7mRNA表达的调控机制。方法用放线菌酮(CHX)和放线菌素D预处理KFB,以分别阻断KFB内源性蛋白质的合成及mR-NA合成。采用逆转录PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3,7mRNA表达水平。结果经CHX预处理后,KFB的Smad3mRNA表达轻度上调,并完全抑制了TGF-β1对KFBSmad3mRNA的下调作用,而CHX预处理对KFB的Smad7mRNA表达及TGF-β1上调Smad7mRNA的作用并无明显影响。经放线菌素D预处理后,随TGF-β1作用时间延长,KFB的Smad3mRNA表达水平无明显下降。结论TGF-β1对KFBSmad3mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与;但对Smad7mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与,KFB细胞中的Smad7可能也是活化的Smads的直接靶基因。

关键词： 1,25双羟维生素D3   转化生长因子β1   成骨细胞   细胞增殖   细胞分化   原发性骨质疏松症  

摘要： 目的　研究 1,2 5双羟维生素D3 [1,2 5 (OH) 2 VD3 ]及人转化生长因子 β1(hTGF β1)对人胚成骨细胞增殖和分化的影响。方法　体外培养人胚成骨细胞 ,经 1,2 5 (OH) 2 VD3 及hTGF β1作用后 ,通过四唑盐 (MTT)比色法观察细胞增殖 ;检测细胞培养液中碱性磷酸酶 (ALP)活性及骨钙素 (OC)含量 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法观察细胞中TGF β信号传导关键蛋白 SMAD蛋白mRNA水平的变化。结果　MTT比色发现 1,2 5 (OH) 2 VD3 组的吸光度值 (OD值 )较对照组下降 30 6 % (0 0 86±0 0 2 2比 0 12 4± 0 0 31,P <0 0 5 )。细胞培养液中ALP活性在 1,2 5 (OH) 2 VD3 组、hTGF β1组以及二者联合应用组均有显著增高 ,为对照组的 1 3～ 2 0倍 (P <0 0 5 )。其中 ,当hTGF β1浓度为 1× 10 -6g/L时 ,1,2 5 (OH) 2 VD3 及hTGF β1对人胚成骨细胞ALP的分泌存在协同刺激作用。 1,2 5 (OH) 2 VD3 与 1×10 -6g/L和 1× 10 -5g/L浓度的hTGF β1合用使得细胞培养液中OC水平增加 (P <0 0 5 ) ,但未发现二者的协同作用。当 1,2 5 (OH) 2 VD3 与 1× 10 -6g/L的hTGF β1合用时SMAD3mRNA水平达高峰 ,约为对照组的 6倍。结论　 1,2 5 (OH) 2 VD3 抑制人胚成骨细胞增殖 ,促进其分化。 1,2 5 (OH) 2 VD3 及hTGF β1?

关键词： 子宫肌瘤   转化生长因子-β1   转化生长因子-β3   受体   mRNA   原位杂交   免疫组织化学  

摘要： 人体内卵巢雌孕激素通过局部的生长因子以自分泌或旁分泌的形式调节肌瘤细胞的生长和分化,转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是备受关注的一种.其在哺乳动物中存在3种形式(β1、β2、β3)及3种受体(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型).人体组织纤维化、免疫抑制、肿瘤发生以及其他功能失调均与TGF-β1、TGF-β3行为异常有关.本研究通过免疫组织化学、原位杂交2种方法,分别从基因和蛋白水平上了解TGF-β1、TGF-β3及其受体TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ在子宫肌瘤及邻近健康肌层中的表达,初步探讨TGF-β1、TGF-β3及其受体与子宫肌瘤发生发展的关系,现报告如下.

关键词： 重组人转化生长因子β3   成纤维细胞   增生性瘢痕   胶原  

摘要： 目的　观察重组人转化生长因子 β3(recombinehumantransforminggrowthfactorβ3,rhTGFβ3)对成纤维细胞的作用 ,探讨其可能机制。　 方法　取体外培养的人正常皮肤成纤维细胞(normalskinfibroblast,NSFb)和增生性瘢痕成纤维细胞 (hypertrophicscarfibroblast,HSFb) ,经不同浓度的rhTGFβ3处理 ;另设不含rhTGFβ3的DMEM培养液相应细胞组作为对照。通过放射免疫和Northernblot杂交法 ,观察NSFb和HSFb中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及转录水平mRNA表达的变化。　结果　 (1)NSFb和HSFb中Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达有明显不同 ;(2 )与对照组相比 ,经rhTGFβ3处理的各实验组Ⅰ、Ⅲ型前胶原合成明显增加 (P <0 .0 0 1) ,Ⅰ Ⅲ型前胶原的比例变小 ;(3)rhTGFβ3对NSFb和HSFb生物学作用的影响呈明显的量效关系。在相同剂量作用下 ,HSFb的PCⅠ、PCⅢ含量高于NSFb。　结论　rhTGFβ3能有效提高成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和Ⅰ、Ⅲ型构成比中Ⅲ型胶原的相对含量 。

关键词： 牙髓细胞   Smad2   Smad3   转化生长因子β1   信号转导   光转录  

摘要： 目的　探讨人牙髓细胞内Smad 2、3在转化生长因子 β1 (transforminggrowthfactor β1 ,TGF β1 )信号转导过程中的作用。方法　原代培养人牙髓细胞 ,用激光共聚焦显微镜观察TGF β1 刺激初期牙髓细胞内Smad 2、3由胞质向胞核转位的现象 ,同时采用Westernblot方法检测刺激后期Smad 2、3蛋白表达的变化。结果　TGF β1 刺激 2h内 ,Smad 2、3在胞质中表达渐弱 ,在胞核内表达渐强 ,呈现由胞质向胞核逐步转位的趋势。Smad 2蛋白总量在TGF β1 刺激前后几乎无变化 ,而Smad 3在刺激后 2 4h表达量明显下降 ,48h后表达十分微弱。结论　Smad 2、3可能是人牙髓细胞内TGF β1 的信号转导分子。TGF β1 刺激初期Smad 2、3通过发生转位参与转导TGF β1 信号至核内 ,刺激后期Smad 3表达水平的下调可能与TGF β1

关键词： 转化生长因子β1   体外培养   小梁细胞   基质金属蛋白酶   原发性开角型青光眼   房水引流阻力  

摘要： 目的　探讨转化生长因子 β1(TGF β1)对培养的牛眼小梁细胞基质金属蛋白酶 (MMPs)的影响 ,房水引流阻力在原发性开角型青光眼 (POAG)发病机制中的作用。方法　对牛眼小梁细胞进行体外原代及传代培养。对传三代小梁细胞分别施加含TGF β1终浓度为 0、0 .5、1、5ng/ml的培养液 ,48h后行MMP3 及MMP9免疫组化SP法染色 ,结果进行计算机图像分析并行统计学检验。结果　体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP3 及MMP9,TGF β1可抑制小梁细胞MMP3 及MMP9表达。结论　TGF β1在一定范围内抑制小梁细胞MMP3 及MMP9表达 ,造成小梁网ECM的异常堆积 ,导致房水引流阻力增高。

关键词： 人类转化生长因子   细胞外基质   黏附蛋白   βig-h3   圆锥角膜   原位杂交   信使RNA  

摘要： 目的　观察圆锥角膜患者角膜组织及正常人角膜组织中人类转化生长因子诱导的细胞外基质黏附蛋白 βig h3的表达 ,探讨细胞外基质结构成分在圆锥角膜病变中的作用。 方法　采用原位杂交技术 ,以BIGH3基因的cDNA探针对圆锥角膜患者的角膜组织及正常人角膜组织中 βig h3mRNA进行细胞定位 ,检测角膜组织中 βig h3表达水平。结果　正常角膜组织中βig h3表达主要在基质层 ;圆锥角膜患者角膜基质层中 βig h3的表达随角膜病变的程度加深而减弱 ,严重者无 βig h3阳性表达。在圆锥角膜病变区与正常角膜交界处 ,βig h3表达呈强阳性。 结论　细胞外基质结构成分βig h3在角膜纤维间质有序化的发育中起细胞黏附作用 ;圆锥角膜病变的发生过程可能与 βig