关键词： 转化生长因子β3   基因重组   成纤维细胞   真核表达   DNA   瘢痕  

摘要： 目的为研究成纤维细胞基因转染的可行性创造条件,从而为转化生长因子(TGF) β3转基因治疗创面与病理性瘢痕的研究奠定基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pcDNA3．1(-)-hTGFβ3真核表达载体,经脂质体LipofectamineTM 2000介导质粒转染NIH3T3细胞后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTGFβ3 mRNA在真核细胞中的表达。结果重组真核表达载体pcDNA 3．1(-)-hTGFβ3经限制性内切酶BamH I、HindⅢ酶切,电泳后显示1 253 bp的hTGFβ3目的片段和5．40 kb的pcDNA 3．1(-)载体片段,测序证实酶切片段与GenBank中登记的TGFβ3全长序列相同,证实pcDNA3．1(-)-hTGFβ3真核表达载体构建成功, 经RT-PCR检测了hTGFβ3在转录水平mRNA的表达情况,表明质粒转染NIH3T3细胞后 hTGFβ3 mRNA的表达明显增强。结论重组真核表达载体构建正确,并能在NIH3T3成纤维细胞中表达hTGFβ3 mRNA,为其在创面与病理性瘢痕的转基因治疗奠定了基础。

关键词： pcDNA3+转化生长因子-β1   基因转染   pAT153+胰岛素样生长因子-1   兔   软骨细胞   骨性关节炎   基因治疗  

摘要： 目的探讨重组大鼠转化生长因子β1基因(pcDNA3+TGFβ1)单独转染及其与重组大鼠胰岛素样生长因子1基因(pAT153+IGF1)共转染兔软骨细胞后细胞增殖及所分泌的TGFβ1因子、IGF1因子、Ⅱ型胶原的变化。方法兔软骨细胞体外分别用pcDNA3+TGFβ1单转染、pcDNA3+TGFβ1和pAT153+IGF1共转染,筛选阳性克隆后,进行原位杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测、流式细胞仪检测、3HTdR(3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷)检测。结果基因转染组与空白组相比,TGFβ1、IGF1、Ⅱ型胶原的含量均明显提高,空白组、基因单转染组、基因双转染组软骨细胞位于S期的比例分别为5.6%、33.4%、40.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基因pcDNA3+TGFβ1、pAT153+IGF1转染软骨细胞后,细胞分泌的TGFβ1、IGF1及Ⅱ型胶原显著增多,细胞增殖明显增强,上述基因转染有助于软骨细胞活力的提高;pcDNA3+TGFβ1和pAT153+IGF1双基因共转染软骨细胞后,细胞分裂增生活跃程度及分泌的TGFβ1、IGF1和Ⅱ型胶原含量高于pcDNA3+TGFβ1单基因转染,多基因共转染作为将来骨性关节炎基因治疗的方法,其治疗效果可能会优于单基因转染。

关键词： 清肺口服液   人胚肺成纤维细胞   腺病毒   转化生长因子-β1   血小板衍生生长因子-BB  

摘要： 目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGFβ1、PDGFBB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGFβ1、PDGFBB含量均明显增多(P<0.01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGFβ1、PDGFBB含量显著降低(P<0.01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGFβ1、PDGFBB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGFβ1、PDGFBB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

关键词： 转化生长因子   绒毛组织   HIF-1α   表达及   实时定量PCR方法   Western   正常对照组   缺氧诱导因子   mRNA表达   蛋白表达水平   体外培养   诱导作用   调控作用   条件培养   blot   表达降低   孕早期   正义   核甘酸   低氧   检测  

摘要： 目的　探讨低氧对体外培养的绒毛组织转化生长因子 3β(TGF - 3β)表达的诱导作用 ,以及缺氧诱导因子 1 (HIF - 1 )对TGF- 3β表达的调控作用。 方法　取孕早期绒毛组织分 4组培养 :正常对照组、缺氧组、HIF - 1α反义组和HIF- 1α正义组。HIF -1α反义组和HIF 1α正义组先加入HIF - 1α寡核甘酸 ,低氧条件培养 4 8h。 4 8h后 ,收集培养的绒毛组织 ,实时定量PCR方法检测TGF - 3β和HIF - 1αmRNA表达水平 ;Westernblot方法检测TGF - 3β和HIF - 1α蛋白表达水平。 结果　与正常对照组相比 ,缺氧组的HIF - 1αmRNA和蛋白表达增加 ,TGF - 3βmRNA和蛋白表达也升高 ;与HIF 1α正义组比较 ,HIF - 1α反义组HIF- 1αmRNA和蛋白表达降低 ,TGF - 3βmRNA和蛋白表达也下降。 结论　缺氧可以诱导体外培养的绒毛组织TGF - 3β表达 ,且缺氧对TGF- 3β表达的诱导作用可能通过HIF- 1调控。

关键词： 缺氧   滋养层   缺氧诱导因子-1   转化生长因子-β  

摘要： 目的:探讨低氧对滋养细胞转化生长因子3β (TGF 3β)的表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF 1)对 TGF 3β表达的调控作用.方法:滋养细胞来源的BeWo细胞 系分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF 1α反义组和HIF 1α正义组.HIF 1α反义组和HIF 1α正义组先加入HIF 1α寡核 苷酸,常氧条件培养6h,再低氧条件培养48h.48h后,收集 细胞,实时定量PCR方法检测TGF 3β和HIF 1αmRNA表达 水平,Westernblot方法检测TGF 3β和HIF 1α蛋白表达水 平.结果:与正常对照组相比,缺氧组的HIF 1αmRNA和蛋 白表达增加,TGF 3βmRNA和蛋白表达也升高;与HIF 1α正 义组比较,HIF 1α反义组HIF 1αmRNA和蛋白表达降低, TGF 3βmRNA和蛋白表达也下降.结论:缺氧可以诱导滋养 细胞TGF 3β表达,并且缺氧对TGF 3β表达的诱导作用可能 通过HIF 1调控.

关键词： TGF-β3   EH   SNP   转化生长因子β3   高血压病   基因   关联研究   内含子   编码区   单核苷酸多态性  

摘要： 目的　探讨转化生长因子β3 (TGF β3 )基因单核苷酸多态性 (singlenucleotidepolymorphisms, SNP)与中国人高血压病(EH)的关系。方法　通过直接测序法筛选位于TGF β3基因启动子、编码区和部分内含子中SNP,作为关联研究的遗传标记。采用病例 对照研究,利用限制性片段长度多态性 (RFLP)及等位基因专一PCR法,在 396例EH患者及 214例正常对照人群中,进行TGF β3基因编码区Thr63Asn、内含子区SS5608219、SS5608220三个多态性基因型检测,比较病例与对照组间基因型分布及基因频率的差异。结果　TGF β3基因测序总长度 5457bp,共发现 7个SNP,位于内含子区 5个、编码区和 3′非翻译区各 1个。其中 2个为新发现的SNP,包括 1个位于编码区能引起氨基酸改变的Thr63Asn多态性。在病例 对照研究中,Thr63Asn、SS5608219和SS5608220三个多态性的基因型分布和等位基因频率,在EH组与正常对照组之间差异无统计学意义 (P>0 05 )。结论　在中国人TGF β3基因中,新发现 2个SNP,其中 1个位于外显子 1第 63密码子(A→C),可引起组氨酸替代天门冬酰胺。但在关联研究中,未发现TGF β3基因的三个SNP与中国汉族人群EH有关。

关键词： 妊高征   胎盘   TGF-3β  

摘要： 目的　探讨转化生长因子 3β(TGF - 3β)蛋白及mRNA在妊高征和正常妊娠胎盘组织中表达的差异。方法　取 10例妊高征和 10例年龄配对的正常妊娠的胎盘组织 ,应用Westernblot方法 ,检测妊高征和正常妊娠胎盘组织中TGF -3β蛋白的表达水平 ;应用定量PCR方法 ,检测妊高征和正常妊娠胎盘组织中TGF - 3βmRNA表达水平。结果　与正常妊娠胎盘组织TGF - 3β蛋白和mRNA表达水平相比 ,妊高征胎盘组织中的TGF - 3βmRNA表达水平增加 ,妊高征胎盘组织中的TGF - 3β蛋白表达水平也明显增加。结论　TGF - 3β在妊高征胎盘组织中表达增加 ,妊高征胎盘中TGF - 3β高表达可能与妊高征的病因有关。

关键词： 缺氧   滋养细胞   缺氧诱导因子   转化生长因子-3β  

摘要： 【目的】探讨低氧对滋养细胞转化生长因子-3β(TGF- 3β)的表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF -1)对TGF -3β表达的调控作用。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF- 1α反义组和HIF -1α正义组。HIF -1α反义组和HIF -1α正义组先加入HIF -1α寡核甘酸,常氧条件培养6h ,再低氧条件培养4 8h。4 8h后,收集细胞,实时定量PCR方法检测TGF- 3β和HIF -1αmRNA表达水平,Westernblot方法检测TGF- 3β和HIF 1α蛋白表达水平。【结果】与正常对照组相比,缺氧组的HIF -1αmRNA和蛋白表达增加,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也升高;与HIF- 1α正义组比较,HIF- 1α反义组HIF -1αmRNA和蛋白表达降低,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也下降。【结论】缺氧可以诱导滋养细胞TGF- 3β表达,并且缺氧对TGF- 3β表达的诱导作用可能通过HIF 1调控。

关键词： 真皮模板   TGF-β1   创面   受体   阳性表达率   自体   患者   蛋白   表达水平   Smad3  

摘要： 目的观察真皮模板对深度烧伤创面愈合过程中转化生长因子(TGF)β1及其受体和信号转导蛋白Smad3表达的影响。方法20例烧伤患者四肢Ⅲ度创面切痂后分为两部分,进行同体对照试验其一移植真皮模板(异体脱细胞真皮基质)+自体刃厚皮片,设为模板干预组;另一部分单纯移植自体刃厚皮片,为对照组。分别在术后1、2、3、4周取患者移植创面组织标本进行免疫组织化学染色,采用图像分析系统测定标本中TGFβ1、TGFβ1受体(TβR)Ⅰ、TβRⅡ及Smad3蛋白的阳性表达率。结果移植术后1—4周两组创面组织切片中均可见TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3蛋白呈阳性表达。随着创面逐渐愈合,四者的阳性表达率均逐渐减少,术后1周模板干预组TGFβ1的表达率为(13.08±4.65)%,4周时为(9.03±1.89)%。相同时相点下模板干预组各项指标的阳性表达率均低于对照组(P<0.05)。结论真皮模板与自体刃厚皮复合移植可降低深度烧伤创面TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3蛋白的表达水平,这可能是真皮模板减轻创面瘢痕增生的机制之一。

关键词： 转化生长因子β3   基因转染   基因重组   成纤维细胞  

摘要： 目的 构建人转化生长因子β3的真核表达载体pcDNA3.1（一）/TGFβ3,以及 该重组质粒转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统,检测TGFβ3基因在成纤 维细胞中的表达和该系统细胞的生长增殖性状。 方法 利用重组DNA技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定真核表达载体 pcDNA3.1（一）/TGFβ3。通过脂质体介导的转染技术和G418细胞筛选法,将 所构建的重组质粒导入NIH3T3成纤维细胞,构建TGFβ3转基因NIH3T3成纤 维细胞系,应用RT-PCR检测hTGFβ3在真核细胞中的表达。经四唑蓝比色实 验法（MTT）分别对hTGFβ3重组质粒稳定表达细胞组、空载体组和NIH3T3 对照组进行检测。 结果 经琼脂糖凝胶电泳及测序证实,酶切片段与GenBank中登记的TFGFβ3全 长序列相同,pcDNA3.1（一）/TGFβ3酶切片段的长度与理论大小相符。在10 株转染和经G418反复筛选的NIH3T3成纤维细胞系中,有7株hTGF β3mRNA的 表达明显增强,其余3株细胞相对较弱或者没有表达。TGF β3转基因NIH3T3 成纤维细胞系的生长速度下降,以4-5天尤为显著。 结论 pcDNA3.1（一）/TGF β3真核表达载体以及该重组质粒转染NIH3T3成纤 维细胞的稳定表达系统构建成功,转基因hTGFβ3在体外培养条件下可抑制成 纤维细胞的增殖,由此推论与展望, 转基因TGF β3可能对瘢痕增生有较好的 抑制作用。