关键词： 缺氧   滋养细胞   缺氧诱导因子   转化生长因子-3β  

摘要： 【目的】探讨低氧对滋养细胞转化生长因子-3β(TGF- 3β)的表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF -1)对TGF -3β表达的调控作用。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF- 1α反义组和HIF -1α正义组。HIF -1α反义组和HIF -1α正义组先加入HIF -1α寡核甘酸,常氧条件培养6h ,再低氧条件培养4 8h。4 8h后,收集细胞,实时定量PCR方法检测TGF- 3β和HIF -1αmRNA表达水平,Westernblot方法检测TGF- 3β和HIF 1α蛋白表达水平。【结果】与正常对照组相比,缺氧组的HIF -1αmRNA和蛋白表达增加,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也升高;与HIF- 1α正义组比较,HIF- 1α反义组HIF -1αmRNA和蛋白表达降低,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也下降。【结论】缺氧可以诱导滋养细胞TGF- 3β表达,并且缺氧对TGF- 3β表达的诱导作用可能通过HIF 1调控。

关键词： 真皮模板   TGF-β1   创面   受体   阳性表达率   自体   患者   蛋白   表达水平   Smad3  

摘要： 目的观察真皮模板对深度烧伤创面愈合过程中转化生长因子(TGF)β1及其受体和信号转导蛋白Smad3表达的影响。方法20例烧伤患者四肢Ⅲ度创面切痂后分为两部分,进行同体对照试验其一移植真皮模板(异体脱细胞真皮基质)+自体刃厚皮片,设为模板干预组;另一部分单纯移植自体刃厚皮片,为对照组。分别在术后1、2、3、4周取患者移植创面组织标本进行免疫组织化学染色,采用图像分析系统测定标本中TGFβ1、TGFβ1受体(TβR)Ⅰ、TβRⅡ及Smad3蛋白的阳性表达率。结果移植术后1—4周两组创面组织切片中均可见TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3蛋白呈阳性表达。随着创面逐渐愈合,四者的阳性表达率均逐渐减少,术后1周模板干预组TGFβ1的表达率为(13.08±4.65)%,4周时为(9.03±1.89)%。相同时相点下模板干预组各项指标的阳性表达率均低于对照组(P<0.05)。结论真皮模板与自体刃厚皮复合移植可降低深度烧伤创面TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3蛋白的表达水平,这可能是真皮模板减轻创面瘢痕增生的机制之一。

关键词： 转化生长因子β3   基因转染   基因重组   成纤维细胞  

摘要： 目的 构建人转化生长因子β3的真核表达载体pcDNA3.1（一）/TGFβ3,以及 该重组质粒转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统,检测TGFβ3基因在成纤 维细胞中的表达和该系统细胞的生长增殖性状。 方法 利用重组DNA技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定真核表达载体 pcDNA3.1（一）/TGFβ3。通过脂质体介导的转染技术和G418细胞筛选法,将 所构建的重组质粒导入NIH3T3成纤维细胞,构建TGFβ3转基因NIH3T3成纤 维细胞系,应用RT-PCR检测hTGFβ3在真核细胞中的表达。经四唑蓝比色实 验法（MTT）分别对hTGFβ3重组质粒稳定表达细胞组、空载体组和NIH3T3 对照组进行检测。 结果 经琼脂糖凝胶电泳及测序证实,酶切片段与GenBank中登记的TFGFβ3全 长序列相同,pcDNA3.1（一）/TGFβ3酶切片段的长度与理论大小相符。在10 株转染和经G418反复筛选的NIH3T3成纤维细胞系中,有7株hTGF β3mRNA的 表达明显增强,其余3株细胞相对较弱或者没有表达。TGF β3转基因NIH3T3 成纤维细胞系的生长速度下降,以4-5天尤为显著。 结论 pcDNA3.1（一）/TGF β3真核表达载体以及该重组质粒转染NIH3T3成纤 维细胞的稳定表达系统构建成功,转基因hTGFβ3在体外培养条件下可抑制成 纤维细胞的增殖,由此推论与展望, 转基因TGF β3可能对瘢痕增生有较好的 抑制作用。

关键词： 垂体腺瘤   转化生长因子   半乳凝素   视网膜母细胞瘤蛋白   蛋白表达  

摘要： 1 TGF-β、Gal-3、Rb的蛋白表达和垂体腺瘤的增殖活性的关系2 TGF-β、Gal-3和Rb的蛋白表达与垂体泌乳素腺瘤的侵袭性的关系小结***-β作为细胞信号转导由膜外到膜内的起点,在垂体腺瘤中其蛋白表达水平增强,可引起垂体腺瘤细胞过渡的增殖,是导致垂体腺瘤侵袭性的基础信号.研究证实此传导途径在垂体腺瘤中的GH型腺瘤、TSH型腺瘤、ACTH型腺瘤、无功能型腺瘤的类型中是存在的.2.在垂体侵袭性PRL腺瘤中,galectin-3的表达是独特的,在TGF-β的作用下,细胞外信号至胞浆使得本应抑制的galectin-3却激活,同时高尔基体与galectin-3连接,对其进行修复3.三种蛋白表达在侵袭性组与非侵袭组中阳性率比较蛋白表达率水平较非侵袭性组比较均增高,统计学差异显著.

关键词： 甲状腺转录因子-2   转化生长因子β3   载体   腭突   Southern Blotting   免疫组织化学  

摘要： 甲状腺转录因子-2(TTF-2)是由titf2/foxel基因编码,为仅含有一个外显子的基因,全长为2807bp,定位于鼠4C2。TTF-2蛋白在个体发生中的表达具有高度组织特异性和发育阶段特异性,其表达受激素和细胞因子调节控制。 TTF-2蛋白具有双向调节作用,即TTF-2蛋白的转录活化作用和转录抑制作用。TTF-2蛋白通过其叉头DNA结合域与编码甲状腺过氧化物酶(TPO)和甲状腺球蛋白(Tg)基因的启动子的特殊DNA调节序列结合,调节Tg和TPO转录;TTF-2蛋白通过羧基末端抑制结构域与甲状腺特异性基因有关的辅助因子(TTF-1、PaX-9)相互作用,特异性抑制其转录活化,是启动子特异性转录抑制子。 转基因动物是将外源基因引入基因组的基因转移技术,它主要目的是把外源DNA导入动物细胞核内改变动物遗传性状,是从四维时空观察转基因的整体效应,是将外源基因转移从细胞水平到机体水平的一大飞跃。利用转基因动物技术可以建立人类疾病相关基因的转基因动物模型,以探讨目的基因的表达调控规律。 titf-2小鼠和人类titf-2基因纯合缺陷表现为腭裂及甲状腺发

关键词： 慢性   肾功能衰竭   转化生长因子-β1   血小板源性生长因子-β1  

摘要： 目的 :观察慢性肾功能衰竭 ( CRF)转化生长因子β1 ( TGFβ1 )的表达 ,探讨中药肾衰 3号颗粒剂缓解 CRF恶化的作用机制。方法 :6 0只 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药低剂量组、中药高剂量组和洛丁新组。从大鼠尾静脉注射阿霉素 7.5 m g/kg造成阿霉素肾病模型 ;观察 2 4 h尿蛋白量、血肌酐 ( SCr)、尿素氮 ( BU N)、肌酐清除率 ( CCr)及肾小管间质病理变化 ;免疫组化法观察 TGFβ1 、血小板源性生长因子 β( PDGFβ)在肾脏的表达及药物影响。结果 :中药高剂量组尿蛋白含量、SCr、BUN改善程度均较其他治疗组明显 ,与模型组相比差异显著 ( P均 <0 .0 1) ;肾小管间质病变减轻最为明显 ;TGFβ1 主要表达于肾小球内皮细胞和肾小管上皮细胞 ,PDGFβ主要表达于肾小球系膜区及肾小管近曲和远曲上皮细胞 ,且阳性表达率均为各组最低 ( TGFβ1 为 2 5 .0 % ,PDGFβ为 33.3% )。结论 :肾衰 3号颗粒剂对 CRF的保护作用机制可能是通过下调 TGFβ1 表达而减少肾小球细胞外基质沉积 ,下调 PDGFβ表达而减少肾小球系膜细胞过度增殖。

关键词： TGF-β3   Ⅲ型胶原   转染   瘢痕成纤维细胞   转化生长因子-β3   基因   真核表达质粒   RNA   质粒   RT—PCR  

摘要： 目的　观察转染人转化生长因子 β3 (hTGF β3 )基因对瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法　通过脂质体介导的方法 ,将人表皮细胞生长因子基因真核表达质粒 (pBK CMV) TGF β3 质粒转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞 ,采用RT PCR法检测TGF β3 mRNA的表达 ,放射免疫 (RIA)法测定细胞培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原的浓度。结果　构建的TGF β3 质粒可成功转染成纤维细胞 ,并增强Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达 ,下调Ⅰ /Ⅲ型胶原比值。结论　转染hTGF β3

关键词： 转化生长因子β3   颌下腺细胞   淀粉酶   细胞培养  

摘要： 目的　研究转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)对鼠颌下腺细胞 (ratsubmandibular gland cells,RSGCs)分泌淀粉酶功能的影响。　方法　原代及传代培养 Wistar大鼠 RSGCs,免疫组织化学鉴定细胞来源 ,按加入不同浓度 TGF-β3(0 .5、1.0、5 .0、10 .0、2 5 .0 ng/ ml)分组 ,未加入 TGF-β3的为对照组。采用噻唑蓝 (MTT)比色法、自动生化分析仪和免疫印迹法检测 2 4、4 8、72和 96小时后 TGF-β3对细胞增殖及淀粉酶分泌功能的影响。　结果　培养的 RSGCs免疫组织化学鉴定 CK 8.13、S- 10 0蛋白染色呈阳性 ,波形丝蛋白染色呈阴性。 MTT法检测各组细胞吸光度 A值与对照组比较 ,差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。 72和 96小时后 ,0 .5～ 10 .0 ng/ ml TGF-β3组与对照组比较 ,细胞分泌的淀粉酶明显增加 ,差异有统计学意义 (P<0 .0 1)。免疫印迹法检测颌下腺组织及培养细胞的淀粉酶提取物形成蛋白表达一致的电泳带。　结论　 TGF-β3能促进 RSGCs的分化和淀粉酶的分泌功能 。

关键词： 肾组织   βig-h3   糖尿病大鼠   表达   治疗组   TGF-β1   黄芪   克隆   RNA   人类  

摘要： 目的探讨人类转化生长因子β诱导基因-克隆3(TGF-β-inducedgene-human,clone3,βig-h3)在糖尿病大鼠肾组织中的表达意义,以及血管紧张素受体拮抗剂洛沙坦losartan和中药黄芪对糖尿病大鼠肾组织βig-h3表达的影响。方法采用链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型。将SD大鼠随机分成5组,每组6只:正常对照组(N组)、糖尿病组(D组)、losartan治疗组(DL组)、黄芪治疗组(DA组)和losartan黄芪联合治疗组(DLA组)。治疗8周后取肾组织,观察肾脏病理改变;半定量RT-PCR法检测各组肾组织中βig-h3和TGF-β1mRNA的表达;免疫组化方法检测各组肾组织中βig-h3和TGF-β1蛋白质的表达水平。结果处理8周后,与N组相比,D组肾小球系膜增生、基质大量堆积,部分肾小球出现硬化;各治疗组系膜增生均有减轻。D组肾组织βig-h3、TGF-β1mRNA和蛋白表达均明显升高(与C组比较,P<0.05);各治疗组上述指标均有不同程度的下降(与D组相比,P<0.05)。βig-h3的表达与TGF-β1呈正相关(r=0.81,P<0.05)。结论βig-h3在糖尿病肾病发生发展过程中可能起重要作用;losartan和黄芪可能部分通过下调肾组织βig-h3mRNA和蛋白的表达对糖尿病肾病发挥抗纤维化作用。

关键词： 前软骨干细胞   免疫磁珠   磁性细胞分选系统   成纤维细胞生长因子受体-3   细胞培养   转化生长因子β   软骨形成   细胞外基质   软骨细胞   增强型绿色荧光蛋白   基因转染   骨基质明胶   藻酸盐水凝胶   骺板样组织   转化生长因子β3  

摘要： 研究目的 建立PSC<,s>的分离纯化方法及PSC<,s>细胞库,探讨TGFβ(transforming growth factorβ)诱导PSC<,s>向成软骨方向定向分化的可行性及特异性软骨细胞外基质的表达机制;评价增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因修饰PSC<,s>的效果及其与骨基质明胶(BMG)复合物异位移植的成软骨能力;探讨藻酸盐水凝胶(alginate hydrogel,AH)与PSC<,s>复合物体内构建骺板样组织的可行性.研究方法 利用磁性细胞分选术分离纯化有FGFR-3表面标志的骨骺PSC<,s>,用流式细胞术(FACS)、免疫组化、免疫荧光等技术鉴定纯化后的PSC<,s>.将PSC<,s>体外扩增至第3代,采用液氮深低温保存细胞,应用RT-PCR、免疫组化免疫荧光等技术定期对复苏PSC<,s>行生物学特性鉴定.采用藻酸盐凝胶培养,分别以TGFβ3诱导分离纯化的PSC<,s>向成软骨方向分化,应用免疫组化、RT-PCR、免疫沉淀、western blot和分光光度等技术测定PSC<,s>向成软骨方向分化过程中特异性软骨细胞外基质成分的表达.用脂质体介导法将EGFP基因表达载体pEGFP转染PSC<,s>,G418筛选得到EGFP基因修饰PSC<,s>,将EGFP基因修饰PSC<,s>与BMG复合体体外培养后植入大鼠体内,荧光显微镜下定期观察复合体GFP表达,免疫组化检测Ⅱ型胶原表达.用多聚赖氨酸和藻酸盐制备AH,将PSC<,s>在含有TGF-β3的藻酸盐微珠中培养,分别于7、14、21d将被诱导的PSC<,s>包埋入AH制备成AH-PSC<,s>复合物;分别将AH-PSC<,s>自体植入大鼠背部肌肉中,定期取材测定移植物的重量、细胞数,并行组织学检查及Ⅱ型胶原免疫组化检测.研究结论 磁性细胞分选术可有效地分离纯化PSC<,s>.可用液氮深低温保存的方法建立新生大鼠PSC<,s>细胞库.TGFβ能诱导PSC<,s>向成软骨方向定向分化,此分化过程伴随特异性软骨细胞外基质成分的沉积.EGFP基因修饰PSC<,s>在体外能长期稳定表达GFP,EGFP基因修饰PSC<,s>与BMG共移植时可形成软骨组织及骨组织,但无骺板样结构.TGF-β3诱导PSC<,s>7d的AH-PSC<,s>复合物在体内能构建骺板样组织,可望成为修复骺板组织的有效方法.