关键词： 转化生长因子β基质金属蛋白酶3   椎间盘退变  

摘要： 采用ELISA法检测退变椎间盘和正常椎间盘组织中的转化生长因子β(TGF-β)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)。退变椎间盘组织TGF-β、MMP-3的表达明显高于正常者,P均<0.05。提示TGF-β、MMP-3在椎间盘的退变过程中可能发挥重要作用。

关键词： 转化生长因子   皮肤衰老   紫外线   聚合酶链反应/方法  

摘要： 目的:获取人转化生长因子β3的编码基因,开发抗衰老的皮肤药物。方法:采用重叠PCR的方法,设计4对引物,进行4次PCR合成人转化生长因子β3的编码基因。结果:4次PCR后,经2%的琼脂糖凝胶电泳可见一357 bp的条带,将电泳产物回收,连接入pMD-18T载体,经测序分析证实,所获得DNA片段为人转化生长因子β3的编码基因。结论:利用重叠PCR方法能够成功构建人转化生长因子β3的编码基因。

关键词： TGF beta 1   Smad2   protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B)   PI3K/AKT   IN Cell Analyzer  

摘要： Insulin is known to modulate transforming growth factor-beta (TGF beta) signaling. In this report, by using the IN Cell Analyzer 1000, the fluorescence cell imaging instrument, we demonstrated that protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) could regulate TGF beta 1-induced Smad2 activation in a PI3 kinase-dependent manner. By using the CHO cells stably expressing EGFP-Smad2, we showed that TGF beta 1 effectively stimulated Smad2 nuclear translocation in CHO cells. When pretreated with insulin, TGF beta 1-induced Smad2 nuclear entry was dramatically decreased. Furthermore, both the PI3K inhibitor LY294002 and the dominant negative AKT (DN-AKT) abolished the inhibitory effects of insulin, demonstrating that the inhibition of Smad2 activation by insulin was PI3K/AKT dependent. Since PTP1B negatively modulates insulin: signaling, we further addressed the effects of PTP1B on insulin -mediated inhibition of Smad2 activation. Our data showed that overexpression of PTP1B effectively attenuated insulin-induced inhibition of Smad2 stimulation. Moreover, the PTP1B inhibitor, 3-(3,5-dibromo-4-hydroxy-benzoyl)-2-ethyl-benzofuran-6-sulfonicacid-(4-(thiazo1-2-ylsulfamyl)-phenyl)-amide (Compound-2), recovered insulin inhibition of Smad2 activation. In conclusion, our data revealed the insulin inhibitory effects on TGF beta 1-induced Smad2 activation and the regulation role of PTP1B in the inhibition events. (c) 2006 Elseviei Ltd. All rights reserved.

关键词： 上皮细胞间质转化   诱导细胞凋亡   信号转导分子   转化生长因子-β1   蛋白激酶A   转录激活子   TGF-β1   调节  

摘要： 细胞凋亡和上皮细胞间质转化(EMT)对于正常发育和机体自稳非常重要。凋亡和上皮细胞间质转化这些事件的改变常与一些病理过程相关,比如肿瘤形成和转移、肝脏与肾脏的纤维化疾病、胚胎发育异常等。TGF-β1诱导凋亡和EMT同时发生的机制尚未完全明了。作者研究了TGF-G1诱导细胞凋亡和EMT的潜在机制。TGF-β1诱导细胞凋亡和EMT与蛋白激酶A、信号转导分子、转录激活子3(STAT3)的活化相关。[第一段]

关键词： 泛素-蛋白酶体降解系统   E3泛素连接酶   Smurf   骨形态发生蛋白   转化生长因子β   成骨细胞   软骨细胞  

摘要： 泛素-蛋白酶体降解系统广泛存在于各种真核细胞中,参与调控细胞多种生理进程.作为该系统中行使调控降解功能的核心成员,E3泛素连接酶的重要作用已经越来越引起人们的重视.BMP和TGF-β是骨组织中调控成骨细胞和软骨细胞增殖、分化和凋亡的关键分子,通过不同的信号通路体系调控骨生理代谢,参与骨组织的多种生理进程.最近的研究表明,泛素-蛋白酶体降解系统在骨细胞和骨组织中具有十分重要的作用,E3泛素连接酶Smurf作为这一系统的核心,参与调控骨组织中BMP和TGF-β两个家族的分子信号转导过程.在前期成果的基础上,结合最新的研究进展,系统阐述了骨组织中E3泛素连接酶的发现,及其调控BMP和TGF-β信号通路的机制以及其对成骨细胞和软骨细胞增殖和分化的影响.

关键词： 转化生长因子β3   生物学功能   临床应用  

摘要： TGF-β3是一种多功能的生物活性调节因子,广泛调控细胞增殖与分化、机体的生长和发育、组织修复、各种癌变等生理和病理过程,具有重要的生物学功能和广阔的临床应用前景。文章综述TGF-β3的生物学特性、功能及临床应用研究进展。

关键词： 组织工程软骨   骨髓基质干细胞   转化生长因子β1   基因转染   兔  

摘要： 目的探讨将编码细胞转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)的重组PGL3-TGF-β1质粒转染兔骨髓基质干细胞(marrowstromalstemcells,MSCs),体外通过自分泌、诱导作用向软骨细胞方向分化的可行性,为基因加强组织工程学修复软骨损伤提供体外实验依据。方法兔MSCs体外密度梯度离心及贴壁筛选法分离培养,脂质体法转染重组PGL3-TGF-β1,转染后绘制不同时期细胞生长曲线,MTT法分析转染后细胞(实验组)生长活性,以未转染空载体细胞为实验对照组,未转染细胞为空白对照组;转染后第2、7天,分别进行抗TGF-β1和抗型胶原蛋白的免疫组织化学染色(SABC法),以未转染细胞为实验对照组,PBS作为一抗为空白对照组,进行图像定量分析。结果MSCs体外分离培养,脂质体法转染后,生长曲线显示转染后细胞生长活性较对照组降低,MTT法显示实验组及实验对照组吸光度(A)值较空白对照组低,差异有统计学意义(P<0.01);实验组转染细胞第2天,抗TGF-β1免疫组织化学染色可见细胞内阳性颗粒,实验对照组及空白对照组均为阴性;转染细胞第7天,抗型胶原免疫组织化学染色实验组可见细胞内阳性颗粒,实验对照组及空白对照组均为阴性。图像分析示,实验组抗TGF-β1及抗型胶原免疫组织化学染色阳性值与实验对照组及空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论脂质体法重组PGL3-TGF-β1基因可成功转染兔MSCs,但对细胞生长有一定影响,转染细胞表达TGF-β1,通过其自分泌、诱导作用,细胞分泌型胶原蛋白,表现出软骨细胞样生理特征,并向软骨细胞方向分化。

关键词： 转化生长因子β3   基因转染   稳定表达系统   成纤维细胞  

摘要： 目的构建人转化生长因子β3的真核表达载体pcDNA3.1(-)TGFβ3转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统,研究转基因TGFβ3对成纤维细胞生长增殖活性的影响。方法通过脂质体介导的转染技术和G418细胞筛选法,将真核表达载体pcDNA3.1(-)TGFβ3质粒导入NIH3T3成纤维细胞,应用RTPCR与Westernblot检测hTGFβ3在真核细胞中的表达。经相差显微镜形态观察及四唑蓝比色实验法(MTT)检测细胞增殖活性。结果在10株转染和经G418反复筛选的NIH3T3成纤维细胞系中,有7株hTGFβ3mRNA及其蛋白的表达明显增强,其余3株细胞相对较弱或者没有表达。TGFβ3转基因稳定表达的NIH3T3成纤维细胞系的生长增殖明显减缓(P<0.05)。结论pcDNA3.1(-)TGFβ3真核表达载体转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统构建成功,转基因hTGFβ3在体外培养条件下可抑制成纤维细胞的增殖。

关键词： 急性白血病   白细胞介素-3   转化生长因子-β1  

摘要： 目的探讨白细胞介素-3(IL-3)、转化生长因子-β1(TGF-β1)在急性白血病(AL)中的临床意义。方法采用酶联免疫试验(ELISA)动态检测83例AL患者化疗前、完全缓解期以及长期缓解期等不同时间段血清IL-3,TGF-β1水平。结果AL初诊患者血清IL-3,TGF-β1水平明显低于正常对照组(P<0.05),完全缓解期IL-3,TGF-β1水平恢复正常;未缓解和复发患者IL-3,TGF-β1水平与初诊患者差异无统计学意义(P>0.05)。直线相关分析表明,IL-3水平与TGF-β1呈正相关(r=0.817,P<0.05)。长期缓解的患者IL-3,TGF-β1水平维持正常。结论检测IL-3,TGF-β1水平变化有助于AL病情观察,作为疗效观察的辅助指标。

关键词： 骨髓基质细胞   神经元样细胞   分化   转化生长因子β   神经营养因子3  

摘要： 前言 骨髓基质细胞（Bone marrow stromal cells, BMSCs）是骨髓内的非造血干细胞,是造血干细胞分化增殖微环境的重要组成部分,具有自我更新和多向分化潜能,可以向多种来源于外胚层和中胚层的组织分化,形成骨、软骨、肌腱、脂肪和神经等组织细胞。在特定诱导条件下可转化为神经干细胞,并继续向神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞等细胞分化。另外有研究表明BMSCs能够通过血脑屏障,在脑中成活并迁移,促进多种神经营养因子的分泌,减少脑内细胞坏死和凋亡,促进脑创伤后神经功能的恢复,从而使得“自体骨髓源性神经干细胞”在中枢神经系统疾病的研究及应用成为可能,深入研究骨髓基质细胞的体外分化调控机制具有重要的临床意义。目前体外定向诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的实验条件尚未成熟,诱导分化率较低。因此,本实验从成年大鼠骨髓基质细胞的分离、纯化及扩增方案的实验参数优化出发,探讨NT3与TGF-β联合诱导骨髓基质细胞向神经细胞方向分化的可行性,为骨髓基质细胞的体外分化研究提供实验依据。 材料与方法 1.1 主要试剂和仪器MSCGM培养基,TGF-β,NT3,bFGF（Hyclone公司）,兔抗大鼠CD34,CD44单克隆抗体,Nestin、NSE、β-catenin、GFAP（Sigma公司）,胰蛋白酶,胎牛血清,辣根酶标记链亲和素,DAB显色液,封闭用山羊血清,二抗试剂盒（华美公司）。CO2恒温培养箱,生物净化工作台,离心机,干燥箱,组化常用器皿,Olympus CK40倒置显微镜。 1.2 骨髓基质细胞的分离、培养和鉴定在无菌条件下取1个月龄Wistar大鼠股骨和胫骨的骨髓细胞做原代培养。根据骨髓基质细胞与其他细胞的密度不同而采用Percoll分离液将其分离,根据细胞贴壁不同,筛选易