关键词： 转化生长因子β3   基因转染   稳定表达系统   成纤维细胞  

摘要： 目的构建人转化生长因子β3的真核表达载体pcDNA3.1(-)TGFβ3转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统,研究转基因TGFβ3对成纤维细胞生长增殖活性的影响。方法通过脂质体介导的转染技术和G418细胞筛选法,将真核表达载体pcDNA3.1(-)TGFβ3质粒导入NIH3T3成纤维细胞,应用RTPCR与Westernblot检测hTGFβ3在真核细胞中的表达。经相差显微镜形态观察及四唑蓝比色实验法(MTT)检测细胞增殖活性。结果在10株转染和经G418反复筛选的NIH3T3成纤维细胞系中,有7株hTGFβ3mRNA及其蛋白的表达明显增强,其余3株细胞相对较弱或者没有表达。TGFβ3转基因稳定表达的NIH3T3成纤维细胞系的生长增殖明显减缓(P<0.05)。结论pcDNA3.1(-)TGFβ3真核表达载体转染NIH3T3成纤维细胞的稳定表达系统构建成功,转基因hTGFβ3在体外培养条件下可抑制成纤维细胞的增殖。

关键词： 急性白血病   白细胞介素-3   转化生长因子-β1  

摘要： 目的探讨白细胞介素-3(IL-3)、转化生长因子-β1(TGF-β1)在急性白血病(AL)中的临床意义。方法采用酶联免疫试验(ELISA)动态检测83例AL患者化疗前、完全缓解期以及长期缓解期等不同时间段血清IL-3,TGF-β1水平。结果AL初诊患者血清IL-3,TGF-β1水平明显低于正常对照组(P<0.05),完全缓解期IL-3,TGF-β1水平恢复正常;未缓解和复发患者IL-3,TGF-β1水平与初诊患者差异无统计学意义(P>0.05)。直线相关分析表明,IL-3水平与TGF-β1呈正相关(r=0.817,P<0.05)。长期缓解的患者IL-3,TGF-β1水平维持正常。结论检测IL-3,TGF-β1水平变化有助于AL病情观察,作为疗效观察的辅助指标。

关键词： 骨髓基质细胞   神经元样细胞   分化   转化生长因子β   神经营养因子3  

摘要： 前言 骨髓基质细胞（Bone marrow stromal cells, BMSCs）是骨髓内的非造血干细胞,是造血干细胞分化增殖微环境的重要组成部分,具有自我更新和多向分化潜能,可以向多种来源于外胚层和中胚层的组织分化,形成骨、软骨、肌腱、脂肪和神经等组织细胞。在特定诱导条件下可转化为神经干细胞,并继续向神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞等细胞分化。另外有研究表明BMSCs能够通过血脑屏障,在脑中成活并迁移,促进多种神经营养因子的分泌,减少脑内细胞坏死和凋亡,促进脑创伤后神经功能的恢复,从而使得“自体骨髓源性神经干细胞”在中枢神经系统疾病的研究及应用成为可能,深入研究骨髓基质细胞的体外分化调控机制具有重要的临床意义。目前体外定向诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的实验条件尚未成熟,诱导分化率较低。因此,本实验从成年大鼠骨髓基质细胞的分离、纯化及扩增方案的实验参数优化出发,探讨NT3与TGF-β联合诱导骨髓基质细胞向神经细胞方向分化的可行性,为骨髓基质细胞的体外分化研究提供实验依据。 材料与方法 1.1 主要试剂和仪器MSCGM培养基,TGF-β,NT3,bFGF（Hyclone公司）,兔抗大鼠CD34,CD44单克隆抗体,Nestin、NSE、β-catenin、GFAP（Sigma公司）,胰蛋白酶,胎牛血清,辣根酶标记链亲和素,DAB显色液,封闭用山羊血清,二抗试剂盒（华美公司）。CO2恒温培养箱,生物净化工作台,离心机,干燥箱,组化常用器皿,Olympus CK40倒置显微镜。 1.2 骨髓基质细胞的分离、培养和鉴定在无菌条件下取1个月龄Wistar大鼠股骨和胫骨的骨髓细胞做原代培养。根据骨髓基质细胞与其他细胞的密度不同而采用Percoll分离液将其分离,根据细胞贴壁不同,筛选易

关键词： 转化生长因子β3   基因重组   成纤维细胞   真核表达   DNA   瘢痕  

摘要： 目的为研究成纤维细胞基因转染的可行性创造条件,从而为转化生长因子(TGF) β3转基因治疗创面与病理性瘢痕的研究奠定基础。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pcDNA3．1(-)-hTGFβ3真核表达载体,经脂质体LipofectamineTM 2000介导质粒转染NIH3T3细胞后应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTGFβ3 mRNA在真核细胞中的表达。结果重组真核表达载体pcDNA 3．1(-)-hTGFβ3经限制性内切酶BamH I、HindⅢ酶切,电泳后显示1 253 bp的hTGFβ3目的片段和5．40 kb的pcDNA 3．1(-)载体片段,测序证实酶切片段与GenBank中登记的TGFβ3全长序列相同,证实pcDNA3．1(-)-hTGFβ3真核表达载体构建成功, 经RT-PCR检测了hTGFβ3在转录水平mRNA的表达情况,表明质粒转染NIH3T3细胞后 hTGFβ3 mRNA的表达明显增强。结论重组真核表达载体构建正确,并能在NIH3T3成纤维细胞中表达hTGFβ3 mRNA,为其在创面与病理性瘢痕的转基因治疗奠定了基础。

关键词： pcDNA3+转化生长因子-β1   基因转染   pAT153+胰岛素样生长因子-1   兔   软骨细胞   骨性关节炎   基因治疗  

摘要： 目的探讨重组大鼠转化生长因子β1基因(pcDNA3+TGFβ1)单独转染及其与重组大鼠胰岛素样生长因子1基因(pAT153+IGF1)共转染兔软骨细胞后细胞增殖及所分泌的TGFβ1因子、IGF1因子、Ⅱ型胶原的变化。方法兔软骨细胞体外分别用pcDNA3+TGFβ1单转染、pcDNA3+TGFβ1和pAT153+IGF1共转染,筛选阳性克隆后,进行原位杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测、流式细胞仪检测、3HTdR(3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷)检测。结果基因转染组与空白组相比,TGFβ1、IGF1、Ⅱ型胶原的含量均明显提高,空白组、基因单转染组、基因双转染组软骨细胞位于S期的比例分别为5.6%、33.4%、40.1%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基因pcDNA3+TGFβ1、pAT153+IGF1转染软骨细胞后,细胞分泌的TGFβ1、IGF1及Ⅱ型胶原显著增多,细胞增殖明显增强,上述基因转染有助于软骨细胞活力的提高;pcDNA3+TGFβ1和pAT153+IGF1双基因共转染软骨细胞后,细胞分裂增生活跃程度及分泌的TGFβ1、IGF1和Ⅱ型胶原含量高于pcDNA3+TGFβ1单基因转染,多基因共转染作为将来骨性关节炎基因治疗的方法,其治疗效果可能会优于单基因转染。

关键词： 清肺口服液   人胚肺成纤维细胞   腺病毒   转化生长因子-β1   血小板衍生生长因子-BB  

摘要： 目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGFβ1、PDGFBB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGFβ1、PDGFBB含量均明显增多(P<0.01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGFβ1、PDGFBB含量显著降低(P<0.01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGFβ1、PDGFBB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGFβ1、PDGFBB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。

关键词： 转化生长因子   绒毛组织   HIF-1α   表达及   实时定量PCR方法   Western   正常对照组   缺氧诱导因子   mRNA表达   蛋白表达水平   体外培养   诱导作用   调控作用   条件培养   blot   表达降低   孕早期   正义   核甘酸   低氧   检测  

摘要： 目的　探讨低氧对体外培养的绒毛组织转化生长因子 3β(TGF - 3β)表达的诱导作用 ,以及缺氧诱导因子 1 (HIF - 1 )对TGF- 3β表达的调控作用。 方法　取孕早期绒毛组织分 4组培养 :正常对照组、缺氧组、HIF - 1α反义组和HIF- 1α正义组。HIF -1α反义组和HIF 1α正义组先加入HIF - 1α寡核甘酸 ,低氧条件培养 4 8h。 4 8h后 ,收集培养的绒毛组织 ,实时定量PCR方法检测TGF - 3β和HIF - 1αmRNA表达水平 ;Westernblot方法检测TGF - 3β和HIF - 1α蛋白表达水平。 结果　与正常对照组相比 ,缺氧组的HIF - 1αmRNA和蛋白表达增加 ,TGF - 3βmRNA和蛋白表达也升高 ;与HIF 1α正义组比较 ,HIF - 1α反义组HIF- 1αmRNA和蛋白表达降低 ,TGF - 3βmRNA和蛋白表达也下降。 结论　缺氧可以诱导体外培养的绒毛组织TGF - 3β表达 ,且缺氧对TGF- 3β表达的诱导作用可能通过HIF- 1调控。

关键词： 缺氧   滋养层   缺氧诱导因子-1   转化生长因子-β  

摘要： 目的:探讨低氧对滋养细胞转化生长因子3β (TGF 3β)的表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF 1)对 TGF 3β表达的调控作用.方法:滋养细胞来源的BeWo细胞 系分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF 1α反义组和HIF 1α正义组.HIF 1α反义组和HIF 1α正义组先加入HIF 1α寡核 苷酸,常氧条件培养6h,再低氧条件培养48h.48h后,收集 细胞,实时定量PCR方法检测TGF 3β和HIF 1αmRNA表达 水平,Westernblot方法检测TGF 3β和HIF 1α蛋白表达水 平.结果:与正常对照组相比,缺氧组的HIF 1αmRNA和蛋 白表达增加,TGF 3βmRNA和蛋白表达也升高;与HIF 1α正 义组比较,HIF 1α反义组HIF 1αmRNA和蛋白表达降低, TGF 3βmRNA和蛋白表达也下降.结论:缺氧可以诱导滋养 细胞TGF 3β表达,并且缺氧对TGF 3β表达的诱导作用可能 通过HIF 1调控.

关键词： TGF-β3   EH   SNP   转化生长因子β3   高血压病   基因   关联研究   内含子   编码区   单核苷酸多态性  

摘要： 目的　探讨转化生长因子β3 (TGF β3 )基因单核苷酸多态性 (singlenucleotidepolymorphisms, SNP)与中国人高血压病(EH)的关系。方法　通过直接测序法筛选位于TGF β3基因启动子、编码区和部分内含子中SNP,作为关联研究的遗传标记。采用病例 对照研究,利用限制性片段长度多态性 (RFLP)及等位基因专一PCR法,在 396例EH患者及 214例正常对照人群中,进行TGF β3基因编码区Thr63Asn、内含子区SS5608219、SS5608220三个多态性基因型检测,比较病例与对照组间基因型分布及基因频率的差异。结果　TGF β3基因测序总长度 5457bp,共发现 7个SNP,位于内含子区 5个、编码区和 3′非翻译区各 1个。其中 2个为新发现的SNP,包括 1个位于编码区能引起氨基酸改变的Thr63Asn多态性。在病例 对照研究中,Thr63Asn、SS5608219和SS5608220三个多态性的基因型分布和等位基因频率,在EH组与正常对照组之间差异无统计学意义 (P>0 05 )。结论　在中国人TGF β3基因中,新发现 2个SNP,其中 1个位于外显子 1第 63密码子(A→C),可引起组氨酸替代天门冬酰胺。但在关联研究中,未发现TGF β3基因的三个SNP与中国汉族人群EH有关。

关键词： 妊高征   胎盘   TGF-3β  

摘要： 目的　探讨转化生长因子 3β(TGF - 3β)蛋白及mRNA在妊高征和正常妊娠胎盘组织中表达的差异。方法　取 10例妊高征和 10例年龄配对的正常妊娠的胎盘组织 ,应用Westernblot方法 ,检测妊高征和正常妊娠胎盘组织中TGF -3β蛋白的表达水平 ;应用定量PCR方法 ,检测妊高征和正常妊娠胎盘组织中TGF - 3βmRNA表达水平。结果　与正常妊娠胎盘组织TGF - 3β蛋白和mRNA表达水平相比 ,妊高征胎盘组织中的TGF - 3βmRNA表达水平增加 ,妊高征胎盘组织中的TGF - 3β蛋白表达水平也明显增加。结论　TGF - 3β在妊高征胎盘组织中表达增加 ,妊高征胎盘中TGF - 3β高表达可能与妊高征的病因有关。