关键词： 糖尿病肾病   转化生长因子β   蛋白质Smad2/3   信号转导   大鼠  

摘要： 目的:动态观察大鼠糖尿病肾病发生发展过程中TGF-β1及其下游信号分子Sm ad2/3在肾脏的表达及定位变化,探讨TGF-β1-Sm ad2/3信号通路在糖尿病肾病(DN)肾纤维化发病机制中的作用。方法:链脲菌素诱导大鼠糖尿病肾病,以免疫组化、W estern b lotting及荧光实时定量PCR(RT-PCR)的方法动态观察糖尿病肾病发生发展过程中大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2/3蛋白及mRNA表达,并以RT-PCR方法观察结缔组织生长因子(CTGF)、胶原-3(COL-Ⅲ)、纤溶酶原激活剂抑制因子-1(PAI-1)mRNA表达。结果:TGF-β1在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管表达明显多于正常组(P<0.05);Sm ad2/3蛋白主要以胞浆表达阳性为主,部分呈胞核表达阳性;Sm ad2/3蛋白及mRNA从2周起表达明显多于正常对照组(P<0.05),且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势。16周DN组大鼠肾脏TGF-β1、Sm ad2、CTGF、COL-Ⅲ、PAI mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.05)。结论:TGF-β1-Sm ad2/3信号转导通路参与了糖尿病肾病肾脏纤维化形成的信号转导过程,伴随着Sm ad2/3信号蛋白表达的增多及入核增加,CTGF、COL-Ⅲ、PAI-1等基因转录增加,导致肾脏细胞外基质的大量沉积,这是细胞因子TGF-β1导致糖尿病肾病肾纤维化进展可能的信号转导途径之一。

关键词： 气道平滑肌细胞   磷脂酰肌醇3激酶   核因子-κB   增殖   凋亡   转化生长因子β1  

摘要： 目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PB-K)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖、凋亡和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及PI3-K特异性抑制剂wortmannin作为工具药,分别将TNF-α、TNF-α+wortmannin接种ASMC,置37℃,5％CO_2培养箱中培养。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PB-K p85α、TGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测PI3-K p85α、PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位,Sandwich ELISA检测NF-κB活性,四甲基偶氮唑蓝(MTY)微量比色法测定ASMC增殖,Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡,ELISA测定TGF-β1蛋白质含量。结果(1)培养的ASMC PB-K p85α的阳性定位在胞浆。TNF-α组ASMC PI3-K p85αmRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0．01)；(2)TNF-α组ASMC NF-κB活性与对照组相比显著增高(P＜0．01),TNF-α+wortmannin组NF-κB活性与TNF-α组相比显著降低(P＜0．01)；(3)TNF-α组ASMC的增殖反应与对照组及TNF-α+wortmannin组相比显著增加(P＜0．01)；TNF-α组细胞凋亡率与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05),TNF-α+wortmannin组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P＜0．01)。(4)TNF-α组ASMC的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0．01)；(5)TNF-α组ASMC的TGF-β1的mRNA表达水平、培养液上清TGF-β1的蛋白质含量均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0．01)。结论P13-K可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β1的表达和分泌,NF-κB作为PI3-K的下游信号参与此过程。

关键词： 转化生长因子β3   腺病毒   基因转染   骨髓间充质干细胞  

摘要： 目的构建转化生长因子β3（transforming growth factor β3，TGF-β3）的腺病毒载体，并通过腺病毒载体将TGF-β3基因转染骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MSCs），使其在细胞内得到表达。方法将人TGF-β3质粒定向克隆进入穿梭质粒pAdTrack—CMV中，与pAdEasy-1共同转入细菌并重组，获得TGF-β3重组腺病毒质粒，用脂质体法导入包装细胞HEK293中，48～96h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。取1月龄新西兰大白兔5只，取其胫骨骨髓。采用密度梯度离心法分离纯化MSCs，并进行传代。取传至第3代细胞采用TGF-β3腺病毒载体转染，10h后荧光显微镜观察绿色荧光表达，转染TGF-β3重组腺病毒4d后的MSCs用免疫细胞化学方法观察TGF-β3在细胞内的表达。结果pAdEasy—TGF-β3转染HEK293细胞48～96h后，荧光显微镜可见明显的绿色荧光表达。兔骨髓分离培养10d后，培养MSCs融合达70％～80％、贴壁紧密，细胞形态均一，似成纤维细胞；14d完成原代细胞培养。TGF-β3重组腺病毒转染MSCs17h后，荧光显微镜下出现少量绿色荧光，48～72h荧光加强，荧光与MSCs轮廓一致。免疫细胞化学观察，转染TGF-β3重组腺病毒MSCs胞浆内有棕黄色阳性颗粒表达。结论TGF-β3基因重组腺病毒载体的成功构建并在MSCs内的表达，为创伤愈合的基因治疗提供了研究基础。

关键词： 转化生长因子β基质金属蛋白酶3   椎间盘退变  

摘要： 采用ELISA法检测退变椎间盘和正常椎间盘组织中的转化生长因子β(TGF-β)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)。退变椎间盘组织TGF-β、MMP-3的表达明显高于正常者,P均<0.05。提示TGF-β、MMP-3在椎间盘的退变过程中可能发挥重要作用。

关键词： 转化生长因子   皮肤衰老   紫外线   聚合酶链反应/方法  

摘要： 目的:获取人转化生长因子β3的编码基因,开发抗衰老的皮肤药物。方法:采用重叠PCR的方法,设计4对引物,进行4次PCR合成人转化生长因子β3的编码基因。结果:4次PCR后,经2%的琼脂糖凝胶电泳可见一357 bp的条带,将电泳产物回收,连接入pMD-18T载体,经测序分析证实,所获得DNA片段为人转化生长因子β3的编码基因。结论:利用重叠PCR方法能够成功构建人转化生长因子β3的编码基因。

关键词： TGF beta 1   Smad2   protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B)   PI3K/AKT   IN Cell Analyzer  

摘要： Insulin is known to modulate transforming growth factor-beta (TGF beta) signaling. In this report, by using the IN Cell Analyzer 1000, the fluorescence cell imaging instrument, we demonstrated that protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) could regulate TGF beta 1-induced Smad2 activation in a PI3 kinase-dependent manner. By using the CHO cells stably expressing EGFP-Smad2, we showed that TGF beta 1 effectively stimulated Smad2 nuclear translocation in CHO cells. When pretreated with insulin, TGF beta 1-induced Smad2 nuclear entry was dramatically decreased. Furthermore, both the PI3K inhibitor LY294002 and the dominant negative AKT (DN-AKT) abolished the inhibitory effects of insulin, demonstrating that the inhibition of Smad2 activation by insulin was PI3K/AKT dependent. Since PTP1B negatively modulates insulin: signaling, we further addressed the effects of PTP1B on insulin -mediated inhibition of Smad2 activation. Our data showed that overexpression of PTP1B effectively attenuated insulin-induced inhibition of Smad2 stimulation. Moreover, the PTP1B inhibitor, 3-(3,5-dibromo-4-hydroxy-benzoyl)-2-ethyl-benzofuran-6-sulfonicacid-(4-(thiazo1-2-ylsulfamyl)-phenyl)-amide (Compound-2), recovered insulin inhibition of Smad2 activation. In conclusion, our data revealed the insulin inhibitory effects on TGF beta 1-induced Smad2 activation and the regulation role of PTP1B in the inhibition events. (c) 2006 Elseviei Ltd. All rights reserved.

关键词： 上皮细胞间质转化   诱导细胞凋亡   信号转导分子   转化生长因子-β1   蛋白激酶A   转录激活子   TGF-β1   调节  

关键词： 泛素-蛋白酶体降解系统   E3泛素连接酶   Smurf   骨形态发生蛋白   转化生长因子β   成骨细胞   软骨细胞  

摘要： 泛素-蛋白酶体降解系统广泛存在于各种真核细胞中,参与调控细胞多种生理进程.作为该系统中行使调控降解功能的核心成员,E3泛素连接酶的重要作用已经越来越引起人们的重视.BMP和TGF-β是骨组织中调控成骨细胞和软骨细胞增殖、分化和凋亡的关键分子,通过不同的信号通路体系调控骨生理代谢,参与骨组织的多种生理进程.最近的研究表明,泛素-蛋白酶体降解系统在骨细胞和骨组织中具有十分重要的作用,E3泛素连接酶Smurf作为这一系统的核心,参与调控骨组织中BMP和TGF-β两个家族的分子信号转导过程.在前期成果的基础上,结合最新的研究进展,系统阐述了骨组织中E3泛素连接酶的发现,及其调控BMP和TGF-β信号通路的机制以及其对成骨细胞和软骨细胞增殖和分化的影响.

关键词： 转化生长因子β3   生物学功能   临床应用  

摘要： TGF-β3是一种多功能的生物活性调节因子,广泛调控细胞增殖与分化、机体的生长和发育、组织修复、各种癌变等生理和病理过程,具有重要的生物学功能和广阔的临床应用前景。文章综述TGF-β3的生物学特性、功能及临床应用研究进展。

关键词： 组织工程软骨   骨髓基质干细胞   转化生长因子β1   基因转染   兔  

摘要： 目的探讨将编码细胞转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)的重组PGL3-TGF-β1质粒转染兔骨髓基质干细胞(marrowstromalstemcells,MSCs),体外通过自分泌、诱导作用向软骨细胞方向分化的可行性,为基因加强组织工程学修复软骨损伤提供体外实验依据。方法兔MSCs体外密度梯度离心及贴壁筛选法分离培养,脂质体法转染重组PGL3-TGF-β1,转染后绘制不同时期细胞生长曲线,MTT法分析转染后细胞(实验组)生长活性,以未转染空载体细胞为实验对照组,未转染细胞为空白对照组;转染后第2、7天,分别进行抗TGF-β1和抗型胶原蛋白的免疫组织化学染色(SABC法),以未转染细胞为实验对照组,PBS作为一抗为空白对照组,进行图像定量分析。结果MSCs体外分离培养,脂质体法转染后,生长曲线显示转染后细胞生长活性较对照组降低,MTT法显示实验组及实验对照组吸光度(A)值较空白对照组低,差异有统计学意义(P<0.01);实验组转染细胞第2天,抗TGF-β1免疫组织化学染色可见细胞内阳性颗粒,实验对照组及空白对照组均为阴性;转染细胞第7天,抗型胶原免疫组织化学染色实验组可见细胞内阳性颗粒,实验对照组及空白对照组均为阴性。图像分析示,实验组抗TGF-β1及抗型胶原免疫组织化学染色阳性值与实验对照组及空白对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论脂质体法重组PGL3-TGF-β1基因可成功转染兔MSCs,但对细胞生长有一定影响,转染细胞表达TGF-β1,通过其自分泌、诱导作用,细胞分泌型胶原蛋白,表现出软骨细胞样生理特征,并向软骨细胞方向分化。