关键词： 祛瘀生肌   糖尿病   创面愈合   TGF—β  

摘要： 目的:探讨祛瘀生肌中药对糖尿病大鼠愈创模型创面TGF-β1、TGF-β3水平的动态影响。方法:72只SD大鼠分别造成正常创面模型和糖尿病模型,随机分为生肌化瘀方组、化瘀方组和糖尿病创面生理盐水组。分别于不同干预时段(3d、7d、11d)取材,EnVision二步法免疫组化测定,并行图像扫描定量分析TGF-β1、TGF-β3水平变化。结果:生肌化瘀方及化瘀方组各时段(3d、7d、11d)TGF-β1及TGF-β3水平均高于糖尿病创面生理盐水组(P<0.05)。化瘀方TGF-β1均低于生肌化瘀方组(P<0.05),但TGF-β3各组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:生肌化瘀方促进创面TGF-β1及TGF-β3分泌,有利于创面愈合,同时减少瘢痕形成。

关键词： 基因,即早   成纤维细胞   转化生长因子β   肌动蛋白类  

摘要： 目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)促进 BALB/c 313成纤维细胞向肌成纤维细胞转化及对早期生长反应基因1(Egr-1)表达的影响。方法实验组用 TGF-β_1 10 ng/ml 处理 BALB/c3T3成纤维细胞,对照组不给予 TGF-β_1。采用流式细胞仪检测孵育24、48、72 h 的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性细胞百分比,用免疫细胞化学方法及 Western 免疫印迹法检测 TGF-β_1处理15、30、60、90、120、180、240 min 的 Egr-1表达情况。结果用 TGF-β_1 10 ng/ml 培养24 h,实验组和对照组的α-SMA 阳性细胞百分率分别为(6.65±0.48)%和(5.53±0.62)%;继续培养至48和72 h,实验组的α-SMA 阳性细胞百分率[(28.38±3.60)%和(36.04±O.73)%]显著高于对照组[(9.49±0.21)%和(15.23±0.33)%]。免疫细胞化学染色检测 Egr-1的结果显示,培养90 min 时实验组细胞中出现棕黄色阳性染色颗粒,而对照组阳性染色细胞较少。Western 免疫印迹法检测 Egr-1的结果显示,实验组培养15 min 时的灰度水平(55±26)和对照组(38±18)无明显差别;随着给予 TGF-β_1时间延长,实验组灰度水平逐渐增加,60和90 min 时(115±14和129±22)显著高于对照组,之后实验组灰度水平逐渐降低,在240 min 时达最低点(39±7)。结论 TGF-β_1能诱导 BALB/c 3T3成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,并且在此过程的早期 Egr-1表达增加。

关键词： 补体片段C3f   去精氨酸C3f   转化生长因子β1   皮肤成纤维细胞  

摘要： 目的观察补体C3水解片段C3f和去精氨酸C3f(C3f-des-arginine,DRC3f)对皮肤成纤维细胞合成与分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的影响。方法采用人工合成的C3f(17肽)和DRC3f(16肽)刺激培养的正常成人皮肤成纤维细胞(NHDF-Ad),通过半定量逆转录多聚酶链式反应方法(RT-PCR)和酶联免疫法(ELISA)从mRNA和蛋白水平检测TGF-β1生成量。结果培养的正常成纤维细胞生成极微量TGF-β1(8 pg/ml)。C3f和DRC3f能够提高皮肤成纤维细胞TGF-β1生成量(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论补体C3水解片段C3f和DRC3f提高皮肤成纤维细胞TGF-β1生成量的作用,可能对皮肤胶原纤维过度沉积起着促进作用。

关键词： 缺氧诱导因子-1α   转化生长因子-β   重度子痫前期  

摘要： 目的 研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和转化生长因子-β3（TGF-β3）在重度子痫前期胎盘组织中的表达及意义。方法 采用免疫组化方法和图像分析系统分别对20例正常孕妇（正常组）和30例重度子痫前期患者（重度子痫前期组）胎盘组织中的HIF-1仅和TGF—B，的表达进行分析。结果 ①HIF-1α主要表达于胎盘绒毛滋养细胞和蜕膜细胞,与正常组胎盘组织（68±6）比较，重度子痫前期组HIF-1仅的平均光密度（86±6）显著升高（P〈0.05）。②TGF—B，主要表达于胎盘绒毛滋养细胞和蜕膜细胞，与正常组胎盘组织（66±4）比较，重度子痫前期组TGF一艮的平均光密度（81±6）显著升高。③重度子痫前期组HIF-1α和TGF-β3的表达呈正相关性（r=0．501，P〈0．05）。结论 胎盘滋养细胞HIF-1仅和TGF—B，表达升高可能与重度子痫前期的发病有关。

关键词： 子痫前期   胎盘   转化生长因子-β3  

摘要： 【目的】探讨转化生长因子β3(TGF-β3)mRNA及蛋白在子痫前期胎盘组织中的表达变化及意义。【方法】应用实时定量PCR,检测10例子痫前期和10例正常妊娠的胎盘组织中TGF-β3mR-NA表达的水平,应用Western blot检测两组胎盘组织中TGF-β3蛋白表达水平。【结果】与正常妊娠胎盘组织相比,子痫前期胎盘组织中TGF-β3mRNA和蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。【结论】TGF-β3在子痫前期胎盘组织中表达增高,可能与子痫前期的发病机制有关。

关键词： 牵张成骨   转化生长因子β   Smad2/3   信号蛋白   信号转导  

摘要： 目的通过对牵张成骨新骨生成早期转化生长因子β及Smad2/3的表达情况的观察,分析转化生长因子β和Smad2/3在牵张成骨中的意义,初步探讨牵张成骨的机制。方法20只成年大耳白兔随机分为5组,每组4只。非手术组作为空白对照,其余用自制的垂直型牵张器按1mm/天,每天4次的速率牵张牙槽骨,分别于牵张后4、7、10、14天处死动物取材。标本进行X线、组织学观察和免疫组织化学的检测。结果两周内牵张区有新生骨小梁生成,沿牵张方向排列,免疫组化结果可见在新生骨的区域有Smad2/3的表达,其中第4天起表达水平升高,至第10天仍维持高水平,在14天开始有下降趋势,主要在间充质细胞、成纤维细胞、成骨细胞及增厚的骨膜细胞中表达。结论Smad2/3和转化生长因子β参与兔下颌骨牵张成骨新骨的生成,在牵张成骨早期发挥重要作用。

关键词： 子宫肌瘤细胞   过氧化物酶体增殖体激活受体γ   转化生长因子β3   雌激素受体   孕激素受体   子宫肌瘤   过氧化物酶体增殖体激活受体γ   转化生长因子β3   细胞增殖   细胞凋亡   体外   子宫肌瘤细胞   过氧化物酶体增殖体激活受体γ激动剂   转化生长因子β3   Bcl-2   Bax   细胞凋亡  

摘要： 目的：本研究对比了体外培养的人子宫肌瘤细胞和同源子宫肌瘤组织以及子宫正常平滑肌组织的ER、PR、PPAR—γ及TGF—β3的表达，以期说明它们在子宫肌瘤发病机制中的意义，并验证体外培养的子宫肌瘤细胞具有和人体内子宫肌瘤细胞相似的生物学特性。 方法：应用胶原酶消化法分离获得子宫肌瘤细胞并体外培养。通过免疫组化的方法鉴定培养的细胞为子宫肌瘤细胞。同时应用RT—PCR法和免疫荧光的方法分别检测肌瘤组织、正常平滑肌组织和体外培养的子宫肌瘤细胞的ER、PR、PPAR—γ及TGF—β3的mRNA和蛋白的表达情况。 结果：应用胶原酶消化法可以获得大量纯度较高的子宫肌瘤细胞，RT—PCR检测发现培养4代的子宫肌瘤细胞与子宫肌瘤组织的ER、PR、PPAR—γ和TGF—β3的mRAN的表达无明显差异（P＞0.05），但是二者较子宫正常平滑肌组织的表达均明显增强（P＜0.05）。免疫荧光检测显示体外培养的子宫肌瘤细胞与子宫肌瘤组织的ER、PR、PPAR—γ、TGF—β3蛋白表达无明显差异（P＞0.05），但是二者较子宫正常平滑肌组织的表达均明显增强（P＜0.05）。 结论：应用胶原酶消化法获得的体外子宫肌瘤细胞具有和人体内子宫肌瘤细胞相似的生物学特性，此外ER、PR、PPAR—γ和TGF—β3在子宫肌瘤的发生机制中发挥重要作用。 目的：观察PPAR-γ特异性激动剂罗格列酮对体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖、凋亡以及PPAR-γ、TGF-β3、Bcl—2和Bax表达的影响，明确罗格列酮对体外人子宫肌瘤细胞生长的作用。 方法：应用胶原酶消化法分离、获得子宫肌瘤细胞，将体外培养的肌瘤细胞分为5组：不同罗格列酮浓度(10-7mol／l，10-8mol／l，10-9mol／l，10-10mol／l)的4个实验组和不加任何药物的对照组。分别于加药后36h和72h：应用MTT观察各组细胞的增殖率：应用RT—PCR检测各组子宫肌瘤的P（?）AR-γ、TGF-β3、Bcl—2和Bax mRNA表达情况；应用免疫荧光法分析PPAR-γ、TGF-β3的蛋白表达情况：应用TUNEL法检测各组肌瘤细胞凋亡情况。 结果：加药36h，各组之间子宫肌瘤细胞的增殖率差异无统计学意义（P＞0.05）。加药72h，各实验组子宫肌瘤细胞的增殖率明显降低，与相同药物浓度实验组作用36h的子宫肌瘤细胞增殖率相比较具有明显的差异（P＜0.05）。最大抑制作用发生在加药72h的10-7mol／l实验组（P＜0.05）：RT—PCR结果显示：加药36h，10-7mol／l实验组肌瘤细胞PPAR-γmRNA的表达明显提高，与其他相同作用时间的各组相比较有明显差异（P＜0.05）；其他各组在加药36h后与对照组相比较PPAR-γmRNA的表达无明显差异（P＞0.05）。在加药72h各实验组肌瘤细胞的PPAR-γmRNA表达伴随药物浓度的提高而增加，10-7mol／l实验组肌瘤细胞在加药72h PPAR-γmRNA表达提高最明显（P＜0.01）。罗格列酮作用36h对子宫肌瘤细胞TGF-β3 mRNA表达的影响不明显（P＞0.05）。不同浓度的罗格列酮在作用72h对各实验组子宫肌瘤细胞的TGF-β3 mRNA表达水平有显著的影响，伴随药物浓度的提高，肌瘤细胞的TGF-B3 mRNA表达降低（P＜0.05），10-7mol／l实验组的肌瘤细胞在加药72h TGF-β3 mRNA表达降低最明显（P＜0.01）。在罗格列酮作用36h，10-7mol／l实验组与其他4组比较细胞Bcl-2 mRNA的表达明显降低（P＜0.05），其余各组差异不明显（P＞0.05）。在罗格列酮作用72h时，各实验组子宫肌瘤细胞的Bcl-2 mRNA表达明显降低，差别有统计学意义（P＜0.05）。在10-7mol／l实验组在加药72h时，Bcl-2 mRNA表达降低最明显（P＜0.01）。在罗格列酮作用36h，各实验组Bax mRNA的表达改变不明显（P＞0.05）。罗格列酮作用72h时可以明显提高肌瘤细胞Bax mRNA的表达，与其他3个实验组相比较，10-7mol／l实验组Bax mRNA的表达上调最明显（P＜0.05）。伴随药物浓度的提高和作用时间的延长，Bax mRNA的表达增加（P＜0.05）。免疫荧光检测分析显示：只有10-7mol／l实验组在加药36h时肌瘤细胞PPAR-γ蛋白表达有所增加（P＜0.05），其他组别PPAR-γ蛋白表达增加不明显（P＞0.05）。各实验组在加药72h后，肌瘤细胞PPAR-γ的表达伴随罗格列酮浓度的增加而明显增加（P＜0.05）。各实验组TGF—β3蛋白表达在加药3

关键词： 早期生长反应基因-1   肌成纤维细胞   BALB/c 3T3成纤维细胞   转化生长因子β1   α平滑肌肌动蛋白  

摘要： 前言 肺纤维化的发病机制复杂，其特征是异常沉积的细胞外基质破坏了正常的肺泡结构。肌成纤维细胞是细胞外基质的重要来源，也是肺纤维化的主要效应细胞，但其起源尚不清楚，大多数研究显示，肺纤维化病灶中的肌成纤维细胞来源于预先存在于支气管周围和血管周围血管外膜的成纤维细胞，研究显示体外培养的成纤维细胞在转化生长因子β(TGF-β)等细胞因子的作用下，可被诱导分化为肌成纤维细胞。 早期生长反应基因1(early growth response gene-1，Egr-1)是一个与增长、分化和凋亡有关的锌指转录因子，近年来研究显示Egr-1与肺纤维化的发病有关。Chun Geun Lee等将TGF-β1基因导入小鼠体内，产生了明显的肺泡上皮细胞凋亡，随后发生了以单核细胞增多为主的炎症、组织纤维化、肌成纤维细胞增生、肺泡间隔破裂和蜂窝肺改变，而敲除Egr-1基因后，上述改变显著减轻，此研究提示Egr-1可能介导了TGF-β1诱导的肺泡结构细胞凋亡和肺纤维化，但Egr-1是否直接参与成纤维细胞向肌成纤维细胞转化目前尚未见报道。本研究以BALB／c 3T3成纤维细胞株为靶细胞，探讨了TGF-β1诱导其向肌成纤维细胞转化过程中Egr-1表达的变化，为进一步针对Egr-1进行干预研究奠定了基础。 实验材料与方法 1、材料 (1) BALB／c 3T3成纤维细胞株 (2)人重组转化生长因子β1 (3)α平滑肌肌动蛋白抗体 (4) Egr-1抗体 (5)辣根过氧化物酶标记二抗 (6)羊抗小鼠荧光素异氰酸酯标记抗体 (7)胎牛血清 (8)DMEM培养基 2、方法 (1)细胞培养 (2)流式细胞仪分析 (3)免疫细胞化学分析 (4)Western免疫印记分析 实验结果 1、α-SMA阳性细胞百分率的变化 实验组培养24 hα-SMA阳性细胞百分率(6.65±0.48)％与对照组(5.53±0.62)的差异无统计学意义(P＞0.05)，继续培养至48 h后，实验组(28.38±3.60)％与对照组(9.49±0.21)％比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，培养至72 h后，实验组(36.04±0.73)％与对照组(15.23±0.33)％比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。 2、免疫细胞化学检测细胞内Egr-1表达水平 实验组孵育60 min时细胞内Egr-1表达增加，孵育90 min时Egr-1表达明显增加，而对照组阳性染色细胞较少。 3、Western blot免疫印迹法检测细胞内Egr-1水平 对照组灰度值为(37.66±18.00)，而实验组孵育15min的灰度值为(55.30±26.03)，与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，随着孵育时间延长，实验组灰度值逐渐增加，60 min时为(114.68±14.38)，90 min时为(128.68±22.08)，与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)，随后灰度值逐渐降低，240 min时为(38.99±6.80)与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 讨论 TGF-β1是具有调节细胞增殖、生长、分化和迁移的多功能的细胞因子，体内实验表明应用TGF-β1干预导致了表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的肌成纤维细胞聚集形成了肉芽组织，而且TGF-β1能诱导体外培养的皮肤成纤维细胞表达α-SMA，显示在纤维化形成和皮肤伤口愈合过程中TGF-β1对肌成纤维细胞分化起作用，我们的研究也证明，TGF-β1能诱导BALB／c 3T3成纤维细胞向肌成纤维细胞分化。 Egr-1是锌指转录因子家族中即刻早期基因编码的产物，有cys2-his2锌指结构。Egr-1是组织炎症和重塑的重要中介，最近研究显示Egr-1与肺纤维化有关。 我们猜测Egr-1可能是成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中重要中介，为了明确上述观点，我们在TGF-β1诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中应用免疫细胞化学和Western blot免疫印记方法探讨了Egr-1表达。研究显示Egr-1表达高峰在90min，而α-SMA表达于72h明显，说明Egr-1表达先于α-SMA，Egr-1表达增加发生在成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的早期，但Egr-1是否具有直接诱导α-SMA表达的作用还需进

关键词： 腺相关病毒   腺病毒   转化生长因子β3   转化生长因子β1   髓核   蛋白多糖  

摘要： 目的:比较转化生长因子(TGF)β3腺相关病毒(AAV-TGFβ3)与TGFβ1腺病毒(AV-TGFβ1)表达系统对反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖合成的生物学效应。方法:制备具有感染活性的AAV-TGFβ3并采用酶切电泳和免疫荧光对其进行鉴定。将AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1分别转染反分化早、晚期髓核细胞,采用免疫印迹法检测TGFβ3和TGFβ1蛋白的表达,并通过Antonopulos法分别检测AAV-TGFβ3和AV-TGFβ1对蛋白多糖合成的生物学效应。结果:AAV-TGFβ3转染可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ3蛋白的表达,并促进其蛋白多糖的合成。转染后第12天,蛋白多糖含量达到峰值,分别为0.399±0.029和0.152±0.011,此后蛋白多糖含量缓慢降低;于转染后第2个月,蛋白多糖含量稳定在较高水平,分别为0.309±0.021和0.115±0.009。AV-TGFβ1转染亦可提高反分化早、晚期髓核细胞TGFβ1蛋白的表达,但其仅促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,转染后第10天蛋白多糖含量达到峰值(0.413±0.041),此后蛋白多糖含量快速降低,转染后第2个月时蛋白多糖含量降至较低水平(0.198±0.013);对于反分化晚期髓核细胞,AV-TGFβ1则抑制其蛋白多糖的合成。结论:AAV-TGFβ3可稳定地促进反分化早、晚期髓核细胞蛋白多糖的合成;AV-TGFβ1仅一过性地促进反分化早期髓核细胞蛋白多糖的合成,而且抑制反分化晚期髓核细胞蛋白多糖的合成。

关键词： 贫血   再生障碍性   T淋巴细胞亚群   转化生长因子β  

摘要： 目的测定重型再生障碍性贫血(SAA)患者外周血辅助性T细胞Ⅲ型(Th3)、CD+ CD25+调节T细胞(Tr)数量和血浆中转化生长因子β1(TGF-β1)水平,探索SAA患者细胞免疫耐受被打破的机制。方法用流式细胞术检测20例发病期和10例免疫抑制治疗(IST)后恢复期的SAA患者外周血表达TGF-β1的CD4+细胞(Th3)数量;用流式细胞术检测12例新发SAA患者、9例IST后未恢复和10例恢复期SAA患者的Tr数量,并与12名正常对照比较,分析其与CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞及CD3+CD4+／CD3+CD8+细胞比值的相关性;采用ELISA法检测25例SAA患者血浆中TGF-β1水平,分析其与Th3细胞、血小板计数的相关性。结果正常对照组Th3细胞、CD8+TGF-β1+细胞及Th3／CD8+TGF-β1+细胞比值分别为(5．10±0．91)％,(4．93±0．97)％、1．20±0．19;SAA发病组分别为(1．33±0．20)％,(1．72±0．24)％,1．00±0．25,Th3细胞、CD8+TGF-β1+细胞比例明显下降(P< 0．01和P<0．05);SAA恢复组分别为(2．19±0．21)％,(2．07±0．33)％,1．71±0．52,Th3细胞、CD8+ TGF-β1+细胞比例均较SAA发病组升高,但仍明显低于正常对照组(P值均<0．05);正常对照组Tr比例为(8．25±1．96)％;新发SAA组为(3．32±0．81)％,明显低于正常对照组;SAA治疗后未恢复组Tr为(7．09±1．84)％,较新发SAA组明显升高(P<0．05),与正常对照组差异无统计学意义;SAA恢复组Tr为(7．49±1．27)％,较新发SAA组明显升高(P<0．05),与正常对照组差异无统计学意义;SAA患者Tr与CD3+CD4+细胞、CD4+／CD8+细胞比值呈正相关(r=0．855,P<0．01:r=0．729,P< 0．01),而与CD3+CD8+细胞呈负相关(r=-0．488,P<0．05);正常对照组血浆TGF-β1水平为(11．06±0．49)μg／L,SAA组为(2．49±0．51)μg／L,较正常对照组明显下降(P<0．01);SAA组血浆TGF-β1水平与Th3细胞呈正相关(r=0．396,P<0．05),与血小板水平呈正相关(r=0．701,P<0．01)。结论SAA患者外周血Th3细胞、Tr数量和血浆中TGF-β1水平下降可能导致SAA患者细胞免疫耐受被打破。