关键词： 鼻黏膜间充质干细胞   骨髓间充质干细胞   转化生长因子β3   软骨损伤   成软骨分化  

摘要： 背景:目前骨髓间充质干细胞已在软骨损伤治疗中取得了显著成效,但与其相比,鼻黏膜间充质干细胞移植具有更多优势,例如取材方便患者更易接受、可安全活检不损伤嗅觉。目的:探索骨髓间充质干细胞和鼻黏膜间充质干细胞在转化生长因子β3作用下的成软骨诱导效果差异。方法:体外分离培养SD大鼠鼻黏膜间充质干细胞和骨髓间充质干细胞,用含有转化生长因子β3的成软骨诱导分化培养基分别进行成软骨诱导,相应的对照组用不含有转化生长因子β3的成软骨诱导分化培养基培养。在第7,14天行整体结构观察,并提取细胞RNA与蛋白,采用RT-PCR和Western blot检测软骨细胞相关COL2A1、SOX-9、Aggrecan的表达。结果与结论:①经过7 d成软骨诱导后骨髓间充质干细胞和鼻黏膜间充质干细胞均能形成半透明膜片结构,离心后成团吹打难以分散;②与对照组相比,加入转化生长因子β3成软骨诱导分化后COL2A1、Aggrecan mRNA表达均显著上调(P<0.01),其中鼻黏膜间充质干细胞组的COL2A1、Aggrecan mRNA表达高于骨髓间充质干细胞组(P<0.01);干预7 d,骨髓间充质干细胞实验组中SOX-9 mRNA表达与其对照组无明显差异(P>0.05),而在鼻黏膜间充质干细胞实验组中SOX-9 mRNA表达较其对照组显著增高(P<0.01);③与对照组相比,加入转化生长因子β3成软骨诱导分化后COL2A1、SOX-9蛋白表达均显著上调(P<0.01);干预14 d,骨髓间充质干细胞实验组的COL2A1蛋白表达高于鼻黏膜间充质干细胞实验组,差异有显著性意义(P<0.01);干预7,14 d,鼻黏膜间充质干细胞实验组的SOX-9蛋白表达高于骨髓间充质干细胞实验组,差异有显著性意义(P<0.01);④结果表明,转化生长因子β3对鼻黏膜间充质干细胞和骨髓间充质干细胞均有成软骨的刺激作用,鼻黏膜间充质干细胞也是未来软骨修复策略的潜在候选者。

关键词： 痹通   IL-17   TGF-β   Foxp3   SIRT1   Th17/Treg  

摘要： 目的探讨中药痹通(BT)对佐剂性关节炎(AA)大鼠白介素17(IL-17)、转化生长因子β(TGF-β)、叉头蛋白P3(Foxp3)及沉默调节蛋白1(SIRT1)表达影响,并分析其治疗作用机理。方法建立AA大鼠模型,分别以痹通高、中、低剂量为干预因素,观测大鼠踝关节病理,酶联免疫吸附法(Elisa)检测外周血IL-17、TGF-β表达,免疫组织化学法(IHC)检测踝关节Foxp3表达、免疫荧光法(IF)检测踝关节SIRT1表达。结果BT高、中、低剂量组IL-17的表达显著降低(P<0.01),TGF-β、Foxp3、SIRT1的表达显著增加(P<0.05);痹通高、中、剂量对AA大鼠踝关节病理评分结果有显著改善(P<0.05)。结论痹通对AA大鼠足踝关节肿胀有显著改善作用,其机理可能与调节辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡有关。

关键词： 鼻咽癌   放射性皮肤损伤   25-羟维生素D3   转化生长因子β1  

摘要： 目的探讨鼻咽癌患者放疗致放射性皮肤损伤程度与血清25-羟维生素D[25(OH)D]、血清转化生长因子β1基因多态性的相关性。方法选取河南科技大学第一附属医院2020-02-01-2021-02-01收治的90例行放疗的鼻咽癌患者为研究对象。随访3个月,根据是否发生放射性皮肤损伤分为发生组(n=30)和未发生组(n=60)。分析转化生长因子β1基因多态性分布情况及其与放射性皮肤损伤的关系,比较2组患者放疗前、放疗1个周期和放疗结束后血清25(OH)D水平。结果30例发生放射性皮肤损伤的患者中,Ⅰ~Ⅱ级损伤12例,Ⅲ~Ⅳ级损伤18例。-509C/T突变中,TT等位发生Ⅲ~Ⅳ级损伤的患者多于CC基因型患者,P=0.034;CT/TT基因患者发生Ⅲ~Ⅳ级损伤的风险高于CC基因型,P=0.041。869T/C突变中,TC/CC基因型(P=0.031)和CC基因型(P=0.037)发生Ⅲ~Ⅳ级损伤的风险高于TT基因型,转化生长因子β1与Ⅰ~Ⅱ级损伤关系不大。发生组放疗前血清25(OH)D水平为13.96±1.33,低于未发生组的16.79±2.01,t=6.976,P<0.001;放疗1个周期血清25(OH)D水平为12.33±1.20,低于未发生组的14.94±0.98,t=11.037,P<0.001;放疗结束后血清25(OH)D水平为10.67±1.13,低于未发生组的12.96±1.01,t=9.744,P<0.001。结论鼻咽癌患者血清25(OH)D均呈低表达,25(OH)D水平越低发生放射性皮肤损伤的风险越大;血清转化生长因子β1基因多态性与患者放射性皮肤损伤有关,其可作为患者放疗不良反应评价的预测指标。

关键词： 转化生长因子β3   牙髓干细胞   甲基丙烯酰化肝素   成骨分化  

摘要： 目的:探讨载转化生长因子β3(TGF-β3)甲基丙烯酰化肝素(HepMA)对牙髓干细胞(DPSCs)成骨分化能力的促进作用,阐明其可能的作用机制。方法:体外分离培养人牙髓干细胞(hDPSCs)并通过流式细胞术进行细胞鉴定。合成光固化HepMA水凝胶,利用扫描电子显微镜观察材料表面形态特征。合成载不同浓度(20、40、60、80和100μg·L^(-1))TGF-β3的HepMA(TGF-β3-HepMA),采用其浸提液分别培养hDPSCs 1、3和5 d,同时设对照组,采用CCK-8法筛选出载TGF-β3的最适浓度。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各时间点TGF-β3-HepMA中TGF-β3的累积释放量并绘制药物释放曲线。hDPSCs分为对照组、HepMA组和载最适浓度TGF-β3的HepMA(TGF-β3-HepMA)组,加入含有相对应浸提液的培养基培养24 h,配制成骨诱导液分别诱导hDPSCs 7、14和21 d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色法检测各组细胞ALP染色及钙结节形成情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中成骨相关因子mRNA表达水平。结果:分离培养的hDPSCs在光学显微镜下观察呈长梭形;流式细胞术检测,培养的hDPSCs中CD105和CD90呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达,验证本研究中分离培养的细胞为hDPSCs。扫描电子显微镜(SEM)观察,HepMA平均孔径为50~70μm。ELISA法检测,TGF-β3在7 d内呈突释阶段后缓慢释放,21 d左右达到平衡。CCK-8法检测,与0μg·L^(-1) TGF-β3-HepMA组比较,20、40和60μg·L^(-1) TGF-β3-HepMA组hDPSCs增殖率呈剂量依赖性升高(P<0.05),故载TGF-β3的最适浓度为60μg∙L^(-1)。成骨诱导7和14 d时,与对照组和HepMA组比较,TGF-β3-HepMA组细胞中ALP染色面积最大且染色颜色最深,14 d时细胞中ALP染色较7 d时更加明显;成骨诱导21 d时,与对照组和HepMA组比较,TGF-β3-HepMA组细胞中茜素红染色的矿化钙结节面积最大。RT-qPCR法检测,培养7和14 d时,与对照组比较,HepMA组和TGF-β3-HepMA组细胞中Runt相关转录因子2(Runx2)、ALP、骨钙桥素(OCN)和Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)mRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与HepMA组比较,TGF-β3-HepMA组细胞中Runx2、ALP、OCN和COL-ⅠmRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:载TGF-β3的HepMA能够提高hDPSCs成骨分化能力,其机制可能与上调成骨相关因子的表达有关。

关键词： 胰腺癌   微小RNA   转化生长因子-β诱导基因-克隆3   侵袭性  

摘要： 目的观察微小RNA-200c(miR-200c)对人胰腺癌细胞株PANC-1中转化生长因子-β诱导基因-克隆3(βig-h3)表达的影响。方法将miR-200c前体片段和阴性对照片段分别转染到PANC-1细胞中。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后的PANC-1细胞中miR-200c和βig-h3的表达。应用Transwell实验检测转染后PANC-1细胞的侵袭能力。采用t检验。结果转染miR-200c前体片段和阴性对照片段的PANC-1细胞中miR-200c的相对表达值分别为1.00±0.12和0.17±0.06,差异有统计学意义(t=3.008,P<0.05)。βig-h3的相对表达值分别为0.21±0.16和0.71±0.23,差异有统计学意义(t=2.236,P<0.05)。转染miR-200c前体片段和阴性对照片段的PANC-1细胞平均穿膜细胞数分别为(65.00±18.19)和(308.00±5.73)个,差异有统计学意义(t=2.107,P<0.05)。结论miR-200c可以抑制胰腺癌细胞的侵袭能力,可能与下调βig-h3的表达有关。

关键词： 软骨   材料   水凝胶   转化生长因子β3   海藻酸钠水凝胶   软骨缺损   软骨组织工程  

摘要： 背景:已经有大量研究报道转化生长因子β3与藻酸盐、间充质干细胞复合修复软骨缺损的动物实验,但是关于转化生长因子β3与海藻酸钠水凝胶复合间充质干细胞修复软骨损伤的研究较少。目的:对比海藻酸钠水凝胶与负载转化生长因子β3的海藻酸钠水凝胶分别复合骨髓间充质干细胞修复骨缺损的效果。方法:体外分离培养兔骨髓间充质干细胞备用;制备转化生长因子β3海藻酸钠水凝胶复合物;移植前,将骨髓间充质干细胞悬液与水凝胶等体积混合。取48只新西兰大白兔制备膝关节软骨缺损,随机分3组:损伤组不作任何处理,对照组植入海藻酸钠水凝胶与骨髓间充质干细胞悬液,观察组植入转化生长因子β3海藻酸钠水凝胶复合物与骨髓间充质干细胞悬液。术后12周时取材,分别进行大体、组织学观察、Ⅱ型胶原免疫组化染色与RT-PCR检测。结果与结论:(1)大体观察:术后12周时,损伤组缺损部位由大量肉芽组织填充,对照组由半透明状软骨样组织填充,观察组由新生组织填满;(2)组织学观察:术后12周苏木精-伊红染色与番红O染色可见,损伤组缺损部位被较多的纤维组织填充,中央部位存在较大的缝隙;对照组可见较多的软骨样组织与成纤维组织,表面欠规则,材料大部分降解,材料周围由大量的骨小梁包绕;观察组可见大量的软骨样组织,表面较光滑且结构较致密,类似于周围正常软骨组织;(3)Ⅱ型胶原免疫组化染色:损伤组仅见极其微弱的阳性染色,对照组、观察组可见阳性染色,并且观察组的阳性着色程度明显强于对照组;(4)RT-PCR检测:对照组再生软骨组织的Ⅱ型胶原、Sox9、糖胺多糖mRNA表达均低于观察组(P<0.05);(5)结果表明:负载转化生长因子β3的海藻酸钠水凝胶-骨髓间充质干细胞复合物可促进关节软骨缺损的修复,提升关节软骨基因的表达。

关键词： 鼻窦炎   炎症   转化生长因子β3   组织重塑  

摘要： 目的 探究2型和非2型慢性鼻窦炎不伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)患者的临床特征及组织重塑差异。方法 收集26例CRSsNP患者鼻窦黏膜组织和临床资料,回访患者复发情况。根据组织内白细胞介素5(IL-5)表达将CRSsNP分为2型和非2型两组。天狼猩红染色检测CRSsNP组织的胶原沉积情况。RT-qPCR和Luminex检测转化生长因子β1(TGF-β1)、TGF-β2和TGF-β3的mRNA和蛋白表达情况,明确IL-5与CRSsNP组织重塑的相关性。结果 与非2型CRSsNP相比,2型CRSsNP合并过敏的比例(21.05% vs 71.43% P=0.061)、术前Lund-Mackay CT评分(13.00±4.40 vs 8.50±4.19,P<0.05)、组织内IL-5[(120.23±83.93)pg/ml vs(4.95±2.75)pg/ml,P<0.001]、TGF-β3[(315.0±304.7)pg/ml vs(93.93±132.4)pg/ml,P<0.05]显著升高。活化的TGF-β3与IL-5表达水平呈正相关(r=0.6813,P<0.05)。此外,2型CRSsNP总胶原沉积程度更高,Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维表达面积百分比较非2型CRSsNP均增加。结论 与非2型CRSsNP患者相比,2型CRSsNP患者临床症状和组织重塑更严重,组织重塑与2型炎症反应呈正相关,揭示以2型炎症为靶点的治疗方案可适用于2型CRSsNP患者。

关键词： 瘢痕疙瘩   微RNA-133a-3p   转化生长因子-β_(1)   增殖   凋亡  

摘要： 目的探讨微RNA(miR)-133a-3p靶向调控转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法选择2020年2月至2021年2月焦作市人民医院皮肤科收治的瘢痕疙瘩患者29例为研究对象,手术切取瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤组织,分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NF)。取对数生长期KF细胞,随机分为空白对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-133a-3p组、miR-133a-3p+pcDNA3.1组、miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组;空白对照组细胞不做任何转染,miR-NC组细胞转染miR-NC,miR-133a-3p组细胞转染miR-133a-3p mimic,miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1,miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1-TGF-β_(1)。实时荧光定量聚合酶链反应法检测组织和细胞中miR-133a-3p和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。应用TargetScan数据库通过生物信息分析预测miR-133a-3p与TGF-β_(1)的3′非翻译区(3′-UTR)存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)和突变型(Mt)TGF-β_(1)3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体,分别将用脂质体2000包裹的Wt TGF-β_(1)或Mt TGF-β_(1)报告基因载体与miR-133a-3p mimics或miR-NC共转染入KF细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组,双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞双荧光素酶活性。Western blot检测空白对照组、miR-NC组、miR-133a-3p组KF细胞中TGF-β_(1)、Smad3蛋白的相对表达量。结果瘢痕疙瘩组织中miR-133a-3p相对表达量显著低于正常皮肤组织(t=18.988,P<0.05)。KF细胞中miR-133a-3p相对表达量显著低于NF细胞(t=18.679,P<0.05)。miR-133a-3p组细胞中miR-133a-3p相对表达量显著高于空白对照组和miR-NC组,CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量显著低于空白对照组和miR-NC组(P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞中miR-133a-3p和CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。miR-133a-3p组细胞凋亡率显著高于空白对照组和miR-NC组,细胞增殖活力显著低于空白对照组和miR-NC组(t=13.912、14.227、-8.020、-6.947,P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞凋亡率、细胞增殖活力比较差异无统计学意义(t=-0.607、0.448,P>0.05)。miR-133a-3p+Wt TGF-β_(1)组细胞相对荧光素酶活性显著低于miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组(t=-15.729、-19.490、-16.186,P<0.05)。miR-NC+Wt TGF-β_(1)组、miR-NC+Mt TGF-β_(1)组、miR-133a-3p+Mt TGF-β_(1)组细胞相对荧光素酶活性两两比较差异均无统计学意义(t=-0.596、0.847、0.842,P>0.05)。KF细胞中Smad3和TGF-β_(1)蛋白相对表达量显著高于NF细胞(t=5.758、9.027,P<0.05)。miR-133a-3p组细胞中Smad3和TGF-β_(1)蛋白相对表达量显著高于miR-NC组(t=-4.913、-8.314,P<0.05)。miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β_(1)组细胞中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA mRNA相对表达量和细胞增殖活力显著高于miR-133a-3p组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组,细胞凋亡率显著低于miR-133a-3p转染组和miR-133a-3p+pcD

关键词： miR-142-3p   转化生长因子-β受体1   子痫前期   侵袭   转移  

摘要： 目的探讨微小RNA(miR)-142-3p靶向转化生长因子-β受体1(TGF-βR1)对滋养细胞侵袭、迁移的影响,阐明miR-142-3p与TGF-βR1基因的靶向关系及其作用机制。方法以HTR-8/SVneo为研究对象,分为NC组(未进行任何处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-142-3p组(转染miR-142-3p mimics)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞中miR-142-3p、TGF-βR1 mRNA表达水平;Western blot检测细胞TGF-βR1、磷酸化Smad同源物2(p-Smad2)和磷酸化Smad同源物3(p-Smad3)表达水平。生物信息预测miR-142-3p与TGF-βR1的靶向作用关系,并使用荧光素酶报告实验验证。结果与NC组、miR-NC组比较,miR-142-3p组细胞p-Smad2、p-Smad3蛋白、mRNA水平明显升高(P<0.01)。与NC组、miR-NC组比较,48h和72h时,miR-142-3p组细胞增殖能力明显降低(P<0.01)。与NC组、miR-NC组比较,miR-142-3p组细胞侵袭及迁移能力明显降低(P<0.01)。与si-NC组比较,48h和72h时,si-TGF-βR1组细胞增殖能力明显升高(P<0.01)。与si-NC组比较,si-TGF-βR1组细胞侵袭及迁移能力明显升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果提示TGF-βR1为miR-142-3p的靶基因。结论过表达miR-142-3p可能通过抑制TGF-βR1/Smad通路抑制滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移。

关键词： 人牙髓干细胞   转化生长因子-β_(3)成骨向分化   Smad蛋白  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β_(3)(transforming growth factor-β_(3),TGF-β_(3))体外诱导人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成骨向分化的效果及可能机制。方法采用免疫荧光技术观察原代hDPSCs基质细胞抗原STRO-1的免疫荧光染色情况,应用流式细胞仪检测原代hDPSCs细胞CD90、CD73、CD105表达情况,鉴别是否为hDPSCs。应用倒置显微镜观察培养第1~7天hDPSCs形态变化。原代hDPSCs传代培养至第3代对数生长期,随机分为空白组、实验组、对照组,空白组继续在常规培养基中培养,实验组在常规培养基中加入80μg/L TGF-β_(3)后培养,对照组在常规培养基中加入10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐、100 nmol/L地塞米松、50 mg/L抗坏血酸后培养。培养第7天,采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞TGF-βⅠ型受体(TGF-βreceptor typeⅠ,TGF-βRⅠ)、Smad2、Smad3、Smad4 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测3组细胞骨钙素(osteocalcin,OCN)、Runx-2、TGF-βRⅠ、Smad2/Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Smad4蛋白相对表达量;培养第14、21天,采用茜素红染色观察3组钙化结节情况。结果原代hDPSCs基质细胞抗原STRO-1免疫荧光染色呈阳性,hDPSCs细胞表面CD90、CD73、CD105阳性表达率分别为93.4%、98.2%、89.1%;鉴定原代细胞为hDPSCs。第3代hDPSCs培养第1~3天,细胞多呈不规则多角形、梭形或三角形;培养第4~7天,细胞逐渐呈长条状梭形。培养第7天,实验组细胞TGF-βRⅠ、Smad2、Smad3、Smad4 mRNA相对表达量(1.69±0.25、1.84±0.15、1.73±0.29、1.79±0.25)均高于空白组(1.02±0.30、1.02±0.30、1.00±0.25、1.01±0.26)(P<0.05),Smad2、Smad4 mRNA相对表达量均高于对照组(1.41±0.11、1.33±0.12)(P<0.05),TGF-βRⅠ、Smad3 mRNA相对表达量与对照组(1.50±0.12、1.43±0.24)比较差异均无统计学意义(P>0.05);对照组细胞TGF-βRⅠmRNA相对表达量高于空白组(P<0.05),Smad2、Smad3、Smad4 mRNA相对表达量与空白组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。实验组细胞Runx-2、OCN、TGF-βRⅠ、Smad2/Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Smad4蛋白相对表达量均高于空白组(P<0.05),Runx-2、OCN、Smad4蛋白相对表达量均高于对照组(P<0.05),TGF-βRⅠ、Smad2/Smad3、p-Smad2、p-Smad3与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);对照组细胞Runx-2、TGF-βRⅠ、Smad2/Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Smad4蛋白相对表达量均高于空白组(P<0.05),OCN蛋白相对表达量与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养第14天,实验组、对照组出现多个大小不等的红色沉积物;培养第21天,实验组、对照组红色沉积物增多,成骨向分化程度增高,实验组矿化结节数量多于空白组、对照组。结论TGF-β_(3)可在体外有效促进hDPSCs的成骨向分化,其机制可能是通过提高SMAD2、SMAD4基因表达促进成骨蛋白OCN、Runx-2表达。