关键词： 肝星状细胞   蛋白表达   重组转化生长因子-β3基因   重组转化生长因子-β1基因  

摘要： 目的:构建TGF-β3和TGF-β1基因,观察其对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达的影响。　　方法:1.基因的合成:构建TGF-β3表达质粒(pcDNA3.1(+)-TGF-β3)和TGF-β1表达质粒(pcDNA3.1(+)-TGF-β1)。2.瞬时转染的表达:通过脂质体介导的方法,将pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1分别及共同转染 HSC-T6细胞,荧光定量PCR法和Western blot法检测转染后24h、48h、72h、MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表达。3.稳定转染的表达:pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染HSC-T6细胞,经G418筛选建立高表达TGF-β1的HSC-T6细胞克隆,pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染细胞克隆,荧光定量PCR法和Western blot法检测转染后48h MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表达。　　结果:***3.1(+)-TGF-β1转染细胞后MMP-2和TIMP-1 mRNA及蛋白的表达较空白组及对照组明显增高(P<0.05);MMP-9mRNA及蛋白的表达与空白组及对照组相比无明显差异(P>0.05)。pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染细胞后MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白的表达和TIMP-1 mRNA的表达与空白组及对照组相比无明显差异(P>0.05),但TIMP-1蛋白表达较空白组及对照组明显增高(P<0.05)。共转染组MMP-2 mRNA及蛋白表达较空白组和对照组明显增加(P<0.05);MMP-9 mRNA及蛋白的表达无明显改变(P>0.05);TIMP-1mRNA及蛋白的表达较 TGF-β1转染组明显下降(P<0.05)。***3.1(+)-TGF-β3转染克隆细胞后,MMP-2mRNA及蛋白表达与克隆组相比无明显差异(P>0.05);MMP-9mRNA及蛋白表达较克隆组明显增加(P<0.05);TIMP-1mRNA及蛋白表达较克隆组明显下降(P<0.05)。　　结论:TGF-β1单独转染HSC-T6细胞后,MMP-2和TIMP-1表达增加;TGF-β3单独转染细胞后,MMPS无明显变化,TIMP-1蛋白表达增加;TGF-β3与TGF-β1共转染细胞可增加MMP-2和抑制TIMP-1表达;TGF-β3转染克隆组细胞可增加MMP-9和抑制TIMP-1的表达。提示重组的TGF-β3基因可能通过促进MMP-2或MMP-9的活性和抑制TIMP-1的活性而发挥抗肝纤维化作用。

关键词： 电磁场   前软骨干细胞   细胞增殖   细胞凋亡   转化生长因子-β3   分化   软骨形成  

摘要： 目的研究不同磁感应强度的脉冲工频电磁场辐射对大鼠前软骨干细胞(PSCs)增殖的影响;探讨转化生长因子-β3(TGF-β3)体外诱导大鼠前软骨干细胞向成软骨方向分化的可行性以及剂量效应关系。 方法体外分离纯化培养大鼠前软骨干细胞,取第3代前软骨干细胞,置于不同磁场感应强度的工频(50Hz)脉冲电磁场中辐射处理(每日2次,每次持续45min),根据不同的电磁场感应强度(0.1 mT、0.5 mT、1.0 mT和1.5 mT)分为4组,同时设一对照组(不加电磁场干预),采用MTT法、流式细胞术测定细胞增殖和细胞凋亡情况,Western Blot法分析Bcl-2蛋白表达情况;将分离纯化的大鼠前软骨干细胞置于含有不同剂量TGF-β3的诱导培养液中培养,并依据培养液中TGF-β3的浓度分为5个实验组和1个对照组(不含TGF-β3),观察细胞生长情况,分别进行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ⅱ型胶原mRNA表达。 结果不同磁场强度的工频脉冲电磁场辐射均明显促进前软骨干细胞增殖,但不同磁场强度的电磁场促增殖的效应也不同,其中1.0 mT组的促增殖效果最为显著,实验48h内细胞增殖水平无明显变化,工频脉冲电磁场干预96h后细胞的增殖水平提高显著(P<0.05),各实验组细胞凋亡率均明显降低(P<0.05),Bcl-2凋亡蛋白的表达增强;细胞在诱导培养液中生长良好,免疫组织化学检测对照组Ⅱ型胶原表达阴性,而含TGF-β3的诱导培养液诱导的各组细胞Ⅱ型胶原表达均阳性,其中10μg/L组阳性率最高,RT-PCR的半定量检测也显示10μg/L组Ⅱ型胶原mRNA的表达量最大,与其它各组相比较,差异均有显著意义(P <0.05)。 结论工频电磁场能促进大鼠前软骨干细胞增殖,并可能通过上调Bcl-2蛋白的表达从而抑制细胞凋亡,均与磁感应强度及作用时间相关,1.0 mT为促进前软骨干细胞增殖的最佳磁感应强度;TGF-β3在体外能有效诱导PSCs向软骨细胞定向分化,其对PSCs的促分化作用存在剂量依赖性。

关键词： 高度近视   单核苷酸多态性   转化生长因子   关联分析  

摘要： 目的:研究中国汉族人群转化生长因子β1和β3与高度近视关联的位点,揭示与高度近视相关的发病环节。 材料和方法:本研究采取病例-对照关联分析,随机选取300名高度近视（要求近视度数≤-8.00D）,及300名无相关的对照样本（要求双眼屈光不正在+/-0.75D之间）,提取全血DNA样本。在HAPMAP数据库中选取TGFβ1和TGFβ3的基因型数据,输入Haploview4.0,设置标准,选取标签SNP,在TGFβ1的数据中加入第一外显子第十编码子上的多态性位点同时进行检测。软件分析后选定标签SNP进行基因型的检测。在基因型检测方法选择上,以经典的PCR-RFLP作为基础方法,选择位于内切酶酶切位点的SNP进行RFLP以区分不同基因型。对于TGFβ1 rs1800469,rs1982073,rs4803455和rs12983047,我们选择限制性片段长度多态性（RFLP）测定病例-对照样本中多态性位点的基因型;以引物延伸联合变性高效液相色谱分析法测定rs10417924和rs11466345病例-对照样本中位点的基因型;选择等位基因特异性实时荧光定量聚合酶链反应测定rs2241716和rs12981053的基因型。对于TGFβ3 rs3917158,rs4252328,rs2268626,rs2284791,rs3917192,rs3917205,选择限制性片段长度多态性（RFLP）测定病例-对照样本中多态性位点的基因型;对于rs3917201,rs3917210则采用等位基因特异性实时荧光定量聚合酶链反应测定基因型。根据样本所得各SNP基因型,计算其基因型与等位基因的频率;采用卡方检验比较病例-对照组之间基因型与等位基因频率分布的差异,采用HAPLOVIEW4.0进行标签SNP的连锁不平衡分析及单体型分型与比较。 结果:第一部分:对于TGFβ1选取的八个标签SNP,rs10417924由于对照组样本不符合Hardy-Weinberg平衡,样本不具群体代表性而被排除统计。其余的七个SNP中,rs12981053,rs11466345和rs2241716结果显示病例-对照组之间基因型频率与等位基因频率的无显著性差异,提示这三个位点与高度近视无明显关联:而rs1800469,rs1982073,rs2241716,rs4803455这四个多态位点均显示出病例-对照组之间基因型频率与等位基因频率的显著性差异,提示这四个SNP与高度近视具有显著关联。进一步进行这七个SNP的连锁不平衡分析与单体型分析与比较,结果提示,rs4803455,rs2241716,rs1800469,rs1982073之间具有强LD。单体型TCGG,CTAT病例-对照之间有显著性差异。Wald检验结果显示rs4803455可能是实际起作用的多态性位点。 第二部分:对于TGFβ3,选定八个标签SNP进行基因型的检测。结果显示,rs3917210由于基因型结果变异大,可重复性差,且对照组样本不符合Hardy-Weinberg平衡,样本不具群体代表性而被排除统计。其余的7个标签SNP均符合Hardy-Weinberg平衡,样本具群体代表性。在对单个位点的关联分析发现,七个标签SNP中,除rs3917201外,其余六个位点的病例-对照组之间基因型频率与等位基因频率均无显著性差异;提示这六个多态位点与高度近视无明显关联;而rs3917201病例-对照组之间基因型频率与等位基因频率均有显著性差异（p＜0.05）,提示与高度近视可能存在关联,但多重矫正分析排除了该位点的显著性。 结论:采用候选基因策略,检验了高度近视候选基因TGFβ1和TGFβ3与高度近视的关联性。预先通过HAPMAP数据库选取了两个候选基因内的标签多态位点SNPs,然后收集了高度近视组与正常对照组,并在其中进行基于病例-对照的关联分析。关联分析提示TGFβ3可能与高度近视无关联;而TGFβ1的四个位点的阳性结果提示这个基因极有可能与高度近视有关联,需要进一步加大近视眼家系样本量及遗传标记位点的密度来加以确证。

关键词： 肾母细胞瘤   PCNA   TGF-β3   免疫组织化学  

摘要： 目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和转化生长因子β3(TGF-β3)在肾母细胞瘤组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学分别检测PCNA和TGF-β3在9例正常肾组织和21例肾母细胞瘤组织中的表达,比较两者在肾母细胞瘤组织中的表达差异。结果PCNA在肾母细胞瘤和正常组织中的阳性表达率分别为95.23%(20/21)和33.33%(3/9),而TGF-β3在肾母细胞瘤和正常组织中的阳性表达率分别为19.04%(4/21)和66.67%(6/9);PCNA和TGF-β3在肾母细胞瘤中的阳性表达与正常组织相比均具有显著性差异(P<0.05)。结论PCNA和TGF-β3可能在肾母细胞瘤的发生中起作用,并可能与肾母细胞瘤组织细胞的转化及增殖相关。

关键词： 转化生长因子-β3   肝纤维化   胰腺纤维化  

摘要： 组织纤维化的基本特征是细胞外基质降解减少、过度沉积,导致组织结构的改建.TGF-β3通过抑制胶原的沉积,促进其降解而具有抗纤维化作用,并被证实在创伤愈合过程中可减轻伤后疤痕的形成.本文着重介绍了TGF-β3在肝脏及胰腺纤维化中的表达及其作用,以进一步了解其对纤维化疾病的影响.

关键词： Animals   Benzamides/pharmacology   Benzamides/pharmacology   Cell Proliferation   Cells, Cultured   Dioxoles/pharmacology   Humans   Myoblasts/physiology   p38 Mitogen-Activated Protein Kinases/physiology   Phosphorylation   Proteoglycans/antagonists & inhibitors   Proteoglycans/metabolism   Rats   Receptors, Transforming Growth Factor beta/antagonists & inhibitors   Receptors, Transforming Growth Factor beta/metabolism   Signal Transduction   Smad3 Protein/physiology   Transforming Growth Factor beta1/pharmacology   Transforming Growth Factor beta1/physiology  

摘要： Transforming growth factor beta (TGF beta) has an important role as a negative regulator of cellular proliferation. The type III transforming growth factor beta receptor (T beta RIII) has an emerging role as both a TGF beta superfamily co-receptor and in mediating signaling through its cytoplasmic domain. In L6 myoblasts, T beta RIII expression enhanced TGF beta 1-mediated growth inhibition, with this effect mediated, in part, by the T beta RIII cytoplasmic domain. The effects of T beta RIII were not due to altered ligand presentation or to differences in Smad2 phosphorylation. Instead, T beta RIII specifically increased Smad3 phosphorylation, both basal and TGF beta-stimulated Smad3 nuclear localization and Smad3-dependent activation of reporter genes independent of its cytoplasmic domain. Conversely, SB431542, a type I transforming growth factor beta receptor (T beta RI) inhibitor, as well as dominant-negative Smad3 specifically and significantly abrogated the effects of T beta RIII on TGF beta 1-mediated inhibition of proliferation. T beta RIII also specifically increased p38 phosphorylation, and SB203580, a p38 kinase inhibitor, specifically and significantly abrogated the effects of T beta RIII/TGF beta 1-mediated inhibition of proliferation in L6 myoblasts and in primary human epithelial cells. Importantly, treatment with the T beta RI and p38 inhibitors together had additive effects on abrogating T beta RIII/TGF beta 1-mediated inhibition of proliferation. In a reciprocal manner, short hairpin RNA-mediated knockdown of endogenous T beta RIII in various human epithelial cells attenuated TGF beta 1-mediated inhibition of proliferation. Taken together, these data demonstrate that T beta RIII contributes to and enhances TGF beta-mediated growth inhibition through both T beta RI/Smad3-dependent and p38 mitogen-activated protein kinase pathways.

关键词： .transforming growth factor   Foxp expression   CD Treg cells   attenuates   anti-inflammatory   airway inflammation   HO expression   induction of HO   hemin   Up-Regulation of Foxp  

摘要： Cumulative evidence suggests the up-regulation of interleukin (M)40 and T-regulatory (Treg) cells is implicated in anti-inflammatory effect of heme oxygenase-1 (HO-1). Thus, we postulated that induction of HO-1 could augment IL-10 and transforming growth factor (TGF)-beta production and foxp3(+)CD4(+)CD25(+) Treg cell function, thereby leading to attenuation of airway inflammation. In this study, CD4(+)CD25(+) Treg cells isolated from mouse spleen were either transfected with a HO-1 expression vector (pcDNA3HO-1) or treated with a HO-1 inducer (hemin). Up-regulation of HO-1 enhanced foxp3 expression and IL-10 secretion in the Treg cells in vitro. Next, BALB/c, C57/B6.129, and IL-10-deficient B6.129P2-Il10(tm1Cgn/J) mice were challenged by ovalbumin to induce airway inflammation. Consistent with in vitro findings, hemin treatment resulted in induction of HO-1 and foxp3 and production of IL-10 and membrane-bound TGF-beta 1 in vivo. This was further correlated with decrease of ovalbumin-specific immunoglobulin E level and eosinophil infiltration in bronchial alveolar lavage fluid from the asthmatic mice. Furthermore, hemin significantly enhanced the biological activity of CD4(+)CD25(+) Treg cells. This protective effect was specifically blocked by Sn-protoporphyrin, a HO-1 enzymatic inhibitor. Finally, hemin failed to up-regulate the function of CD4(+)CD25(+) Treg cells from IL-10-deficient mice. Our study indicates that HO-1 exerts its protective effect on asthma through a mechanism mediated by foxp3(+)CD4(+)CD25(+) Treg cells, IL-10, and membrane-bound TGF-beta 1.

关键词： Smuff   2   P13K抑制剂   肾小管   上皮细胞  

摘要： 目的探讨体外条件下转化生长因子β1(TGF-β1)对人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)表达Smad泛素化调节因子2(Smurf2)的诱导情况,以及PI3K抑制剂LY294002对其的影响。方法应用RT-PCR法检测Smurf2 mRNA的表达,应用Western印迹法检测Smurf2蛋白的表达。结果HK-2细胞有基础量的Smurf2 mRNA和蛋白的表达,TGF-β1呈时间和剂量依赖性增加HK-2细胞Smurf2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。PI3K抑制剂LY294002呈剂量依赖性抑制TGF-β1(100pM)所诱导的HK-2细胞Smurf2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。结论在体外,TGF-β1可能通过PI3K/AKT通路诱导HK-2细胞Smurf2 mRNA和蛋白的表达。PI3K抑制剂LY294002可抑制Smurf2 mRNA和蛋白的表达。

关键词： 肺移植   细支气管炎,闭塞性   移植,异位   信号传导  

摘要： 目的探讨肺移植术后闭塞性细支气管炎的发生机理及转化生长因子(TGF)β1/Smad3信号传导途径在此病理过程中的意义。方法闭塞性细支气管炎动物模型采用 Smad3野生型和基因敲除小鼠进行的同种异体气管异位移植,免疫组织化学检测肌纤维母细胞分化的标志物——α平滑肌肌动蛋白(αSMA)的存在及差异。采用原代培养 Smad3野生型和敲除型气管纤维母细胞,经 TGF-β1处理,通过免疫荧光、Western 印迹和 DNA 凝胶电泳迁移率检测手段,检测 Smad3蛋白的激活。并用免疫荧光染色检测细胞骨架聚合能力和αSMA 分子的不同表达;Western 印迹和 RT-PCR法检测αSMA 在转录和蛋白水平的差异。结果在发生闭塞性细支气管炎的受累气道中,发现有肌纤维母细胞的存在,且其在 Smad3野生型中的数量明显多于敲除型(t=2.125,P=0.040)。对纤维母细胞进行的离体研究发现,TGF-β1诱导 Smad3激活,表现为蛋白磷酸化、细胞核转位和 DNA 结合增加。在 Smad3野生型的纤维母细胞,TGF-β1引起细胞骨架聚合能力增强、αSMA 在转录和蛋白水平的表达增强,即向肌纤维母细胞的分化增加;而在缺乏 Smad3的纤维母细胞中,TGF-β1诱导的肌纤维母细胞分化明显减少(t=2.080,P=0.027;t=1.982,P=0.032)。结论 TGF-β1主要通过激活Smad3依赖性信号传导途径,来促使纤维母细胞向肌纤维母细胞的转化和αSMA 蛋白的增加,最终导致闭塞性细支气管炎的发展。

关键词： 转化生长因子β   原位杂交   牙胚   发育  

摘要： 目的:探讨转化生长因子β3(TGFβ3)mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法:制备小鼠磨牙各发育阶段标本,用原位杂交分析TGFβ3mRNA在牙胚中的表达与分布。结果:TGFβ3mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间-空间特异性模式表达。TGFβ3mRNA在蕾状期和帽状期的上皮强表达,在牙胚发育晚期的成牙本质细胞和成釉细胞的表达随细胞分化程度而增强。结论:TGFβ3mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮-间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。