关键词： 细胞系   受体   芳基烃   转化生长因子α   聚合酶链反应  

摘要： 目的研究2，3，7，8-四氯二苯并二噁英（TCDD）染毒对表皮细胞芳香烃受体（AhR）和转化生长因子（TGF-α）表达的影响。方法利用半定量逆转录PCR技术（RT-PCR）对24hTCDD染毒组进行AhR和TGF-α基因表达的测定，并分析两者之间的相互关系。结果以β-aetin为内参照，测定细胞中AhR和TGF-α mRNA表达的相对含量。结果显示随着TCDD浓度的增高，细胞中AhR mRNA的相对表达量呈现下降的趋势，r=-0．548，各染毒组与对照组相比差异有统计学意义（F=4．124，P=0．021），两两比较7×10^-10mol／L组（0．0620±0．0085）和7×10^-9mol／L组（0．0518±0．0194）与对照组（0．1138±0．0227）之间的差别有统计学意义（t=-3．48，P〈0．05；t=-4．17，P〈0．01），且其相对表达量分别为对照组的55％和45％。TGF-α mRNA的相对表达量随浓度的增加则呈现上升的趋势，相关系数r=0．695（P〈0．01），各组之间差异有统计学意义（F=15．789，P=0．000），在7×10^-10mol／L组（0．1474±0．0390）和7×10^-9mol／L组（0．2133±0．0364）相对表达量与对照组（0．0561±0．0100）的差别具有统计学意义（t=4．49，P〈0．01；t=7．74，P〈0．01），且其相对表达量是对照组的2．6倍和3．8倍。同时对AhR与TGF-α mRNA相对表达水平进行相关分析，两者呈负相关，r=-0．561（P〈0．05）。结论TCDD对细胞增殖过程中可影响基因表达，AhR表现为下调，TGF-α表现为上调，且两基因表达量之间存在负相关关系。

关键词： 转化生长因子β3   肝星状细胞   Ⅰ型胶原  

摘要： 目的观察转化生长因子D3基因（TGFβ3）对大鼠肝星状细胞株（HSC—T6）Ⅰ型胶原合成的影响。方法TGFβ3表达质粒[pcDNA3．1（＋）-TGFβ31和TGFβ1表达质粒[pcDNA3．1（＋）-TGFD11的构建。通过脂质体介导方法，将pcDNA3．1（＋）-TGFβ1、pcDNA3．1（＋）-TGFβ3分别及共同转染体外培养的HSC—T6细胞，荧光定量PCR法及Westernblot法分别检测转染后TGFβ1、TGFD3、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质的表达。将pcDNA3．1（＋）-TGFD1转染HSC—T6细胞，经G418筛选建立高表达TGFD1的HSC～T6细胞克隆，pcDNA3．1（＋）-TGFD3转染克隆细胞，荧光定量PCR法检测转染后TGFβ3、TGFβ1及Ⅰ型胶原mRNA的表达，Westernblot法检测TGFβ1、Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果构建的pcDNA3．1（＋）TGFD3、pcDNA3．1（＋）-TGFD1质粒可转染HSC—T6细胞，转染率28．2％。pcDNA3．1（＋）TGF侈3转染细胞后，Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达较空白组及对照组增加，以72h增高最为明显（P〈0．05）；共转染组Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质的表达较pcDNA3．1（＋）-TGFβ1转染组明显降低（P〈0．05）。TGF侈3转染克隆细胞后，TGFD1mRNA表达较克隆组无明显改变（P〉0．05），而蛋白质表达明显下降（P〈0．05），Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质表达均较克隆组明显降低（P〈0．05）。结论TGFD3基因转染正常培养的HSC—T6细胞，增加Ⅰ型胶原的表达；转染高表达TGFβ1的克隆组HSC—T6细胞，Ⅰ型胶原表达明显降低，提示TGFβ3对肝纤维化的发生有抑制作用。

关键词： .placental   overexpressed   pregnancies   explants   villous   Intrauterine   Growth Restriction   IUGR   endoglin   Preeclampsia   weeks of gestation   preeclamptic  

摘要： Endoglin, a co-receptor for transforming growth factor (TGF)-beta(1) and -beta(3) is expressed in the human placenta and plays an important role in the pathogenesis of preeclampsia. Because preeclampsia is associated with hypoxia, and because TGF-beta 3 is overexpressed in preeclamptic pregnancies, we examined the effect of oxygen and TGF-beta 3 on placental endoglin expression and investigated its expression in pathological models of placental hypoxia such as intrauterine growth restriction (IUGR) pregnancies. Endoglin expression was high at 4 to 9 weeks of gestation, when oxygen tension is low, and decreased after 10 weeks, when oxygen tension increases. Exposure of villous explants to low oxygen (3% O-2) resulted in elevated expression of both membrane and soluble endoglin compared to standard conditions (20% O-2). Moreover, addition of TGF-beta(3) to villous explants under low oxygen conditions increased the expression of endoglin compared to nontreated explants whereas addition of TGF-beta(3)-neutralizing antibodies inhibited the low oxygen stimulatory effect on endoglin expression. Endoglin and soluble endoglin expression were significantly increased in placentas of IUGR singletons compared to controls and in the IUGR twin placentas relative to both the control co-twin and the normal twins. These data demonstrate that oxygen regulates the placental expression of endoglin via TGF-beta 3. Reduced placental perfusion leading to placental hypoxia might contribute to the increased expression of endoglin in IUGR pregnancies.

关键词： 肝星状细胞   蛋白表达   重组转化生长因子-β3基因   重组转化生长因子-β1基因  

摘要： 目的:构建TGF-β3和TGF-β1基因,观察其对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达的影响。　　方法:1.基因的合成:构建TGF-β3表达质粒(pcDNA3.1(+)-TGF-β3)和TGF-β1表达质粒(pcDNA3.1(+)-TGF-β1)。2.瞬时转染的表达:通过脂质体介导的方法,将pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1分别及共同转染 HSC-T6细胞,荧光定量PCR法和Western blot法检测转染后24h、48h、72h、MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表达。3.稳定转染的表达:pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染HSC-T6细胞,经G418筛选建立高表达TGF-β1的HSC-T6细胞克隆,pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染细胞克隆,荧光定量PCR法和Western blot法检测转染后48h MMP-2、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表达。　　结果:***3.1(+)-TGF-β1转染细胞后MMP-2和TIMP-1 mRNA及蛋白的表达较空白组及对照组明显增高(P<0.05);MMP-9mRNA及蛋白的表达与空白组及对照组相比无明显差异(P>0.05)。pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染细胞后MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白的表达和TIMP-1 mRNA的表达与空白组及对照组相比无明显差异(P>0.05),但TIMP-1蛋白表达较空白组及对照组明显增高(P<0.05)。共转染组MMP-2 mRNA及蛋白表达较空白组和对照组明显增加(P<0.05);MMP-9 mRNA及蛋白的表达无明显改变(P>0.05);TIMP-1mRNA及蛋白的表达较 TGF-β1转染组明显下降(P<0.05)。***3.1(+)-TGF-β3转染克隆细胞后,MMP-2mRNA及蛋白表达与克隆组相比无明显差异(P>0.05);MMP-9mRNA及蛋白表达较克隆组明显增加(P<0.05);TIMP-1mRNA及蛋白表达较克隆组明显下降(P<0.05)。　　结论:TGF-β1单独转染HSC-T6细胞后,MMP-2和TIMP-1表达增加;TGF-β3单独转染细胞后,MMPS无明显变化,TIMP-1蛋白表达增加;TGF-β3与TGF-β1共转染细胞可增加MMP-2和抑制TIMP-1表达;TGF-β3转染克隆组细胞可增加MMP-9和抑制TIMP-1的表达。提示重组的TGF-β3基因可能通过促进MMP-2或MMP-9的活性和抑制TIMP-1的活性而发挥抗肝纤维化作用。

关键词： 电磁场   前软骨干细胞   细胞增殖   细胞凋亡   转化生长因子-β3   分化   软骨形成  

摘要： 目的研究不同磁感应强度的脉冲工频电磁场辐射对大鼠前软骨干细胞(PSCs)增殖的影响;探讨转化生长因子-β3(TGF-β3)体外诱导大鼠前软骨干细胞向成软骨方向分化的可行性以及剂量效应关系。 方法体外分离纯化培养大鼠前软骨干细胞,取第3代前软骨干细胞,置于不同磁场感应强度的工频(50Hz)脉冲电磁场中辐射处理(每日2次,每次持续45min),根据不同的电磁场感应强度(0.1 mT、0.5 mT、1.0 mT和1.5 mT)分为4组,同时设一对照组(不加电磁场干预),采用MTT法、流式细胞术测定细胞增殖和细胞凋亡情况,Western Blot法分析Bcl-2蛋白表达情况;将分离纯化的大鼠前软骨干细胞置于含有不同剂量TGF-β3的诱导培养液中培养,并依据培养液中TGF-β3的浓度分为5个实验组和1个对照组(不含TGF-β3),观察细胞生长情况,分别进行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ⅱ型胶原mRNA表达。 结果不同磁场强度的工频脉冲电磁场辐射均明显促进前软骨干细胞增殖,但不同磁场强度的电磁场促增殖的效应也不同,其中1.0 mT组的促增殖效果最为显著,实验48h内细胞增殖水平无明显变化,工频脉冲电磁场干预96h后细胞的增殖水平提高显著(P<0.05),各实验组细胞凋亡率均明显降低(P<0.05),Bcl-2凋亡蛋白的表达增强;细胞在诱导培养液中生长良好,免疫组织化学检测对照组Ⅱ型胶原表达阴性,而含TGF-β3的诱导培养液诱导的各组细胞Ⅱ型胶原表达均阳性,其中10μg/L组阳性率最高,RT-PCR的半定量检测也显示10μg/L组Ⅱ型胶原mRNA的表达量最大,与其它各组相比较,差异均有显著意义(P <0.05)。 结论工频电磁场能促进大鼠前软骨干细胞增殖,并可能通过上调Bcl-2蛋白的表达从而抑制细胞凋亡,均与磁感应强度及作用时间相关,1.0 mT为促进前软骨干细胞增殖的最佳磁感应强度;TGF-β3在体外能有效诱导PSCs向软骨细胞定向分化,其对PSCs的促分化作用存在剂量依赖性。

关键词： 高度近视   单核苷酸多态性   转化生长因子   关联分析  

摘要： 目的:研究中国汉族人群转化生长因子β1和β3与高度近视关联的位点,揭示与高度近视相关的发病环节。 材料和方法:本研究采取病例-对照关联分析,随机选取300名高度近视（要求近视度数≤-8.00D）,及300名无相关的对照样本（要求双眼屈光不正在+/-0.75D之间）,提取全血DNA样本。在HAPMAP数据库中选取TGFβ1和TGFβ3的基因型数据,输入Haploview4.0,设置标准,选取标签SNP,在TGFβ1的数据中加入第一外显子第十编码子上的多态性位点同时进行检测。软件分析后选定标签SNP进行基因型的检测。在基因型检测方法选择上,以经典的PCR-RFLP作为基础方法,选择位于内切酶酶切位点的SNP进行RFLP以区分不同基因型。对于TGFβ1 rs1800469,rs1982073,rs4803455和rs12983047,我们选择限制性片段长度多态性（RFLP）测定病例-对照样本中多态性位点的基因型;以引物延伸联合变性高效液相色谱分析法测定rs10417924和rs11466345病例-对照样本中位点的基因型;选择等位基因特异性实时荧光定量聚合酶链反应测定rs2241716和rs12981053的基因型。对于TGFβ3 rs3917158,rs4252328,rs2268626,rs2284791,rs3917192,rs3917205,选择限制性片段长度多态性（RFLP）测定病例-对照样本中多态性位点的基因型;对于rs3917201,rs3917210则采用等位基因特异性实时荧光定量聚合酶链反应测定基因型。根据样本所得各SNP基因型,计算其基因型与等位基因的频率;采用卡方检验比较病例-对照组之间基因型与等位基因频率分布的差异,采用HAPLOVIEW4.0进行标签SNP的连锁不平衡分析及单体型分型与比较。 结果:第一部分:对于TGFβ1选取的八个标签SNP,rs10417924由于对照组样本不符合Hardy-Weinberg平衡,样本不具群体代表性而被排除统计。其余的七个SNP中,rs12981053,rs11466345和rs2241716结果显示病例-对照组之间基因型频率与等位基因频率的无显著性差异,提示这三个位点与高度近视无明显关联:而rs1800469,rs1982073,rs2241716,rs4803455这四个多态位点均显示出病例-对照组之间基因型频率与等位基因频率的显著性差异,提示这四个SNP与高度近视具有显著关联。进一步进行这七个SNP的连锁不平衡分析与单体型分析与比较,结果提示,rs4803455,rs2241716,rs1800469,rs1982073之间具有强LD。单体型TCGG,CTAT病例-对照之间有显著性差异。Wald检验结果显示rs4803455可能是实际起作用的多态性位点。 第二部分:对于TGFβ3,选定八个标签SNP进行基因型的检测。结果显示,rs3917210由于基因型结果变异大,可重复性差,且对照组样本不符合Hardy-Weinberg平衡,样本不具群体代表性而被排除统计。其余的7个标签SNP均符合Hardy-Weinberg平衡,样本具群体代表性。在对单个位点的关联分析发现,七个标签SNP中,除rs3917201外,其余六个位点的病例-对照组之间基因型频率与等位基因频率均无显著性差异;提示这六个多态位点与高度近视无明显关联;而rs3917201病例-对照组之间基因型频率与等位基因频率均有显著性差异（p＜0.05）,提示与高度近视可能存在关联,但多重矫正分析排除了该位点的显著性。 结论:采用候选基因策略,检验了高度近视候选基因TGFβ1和TGFβ3与高度近视的关联性。预先通过HAPMAP数据库选取了两个候选基因内的标签多态位点SNPs,然后收集了高度近视组与正常对照组,并在其中进行基于病例-对照的关联分析。关联分析提示TGFβ3可能与高度近视无关联;而TGFβ1的四个位点的阳性结果提示这个基因极有可能与高度近视有关联,需要进一步加大近视眼家系样本量及遗传标记位点的密度来加以确证。

关键词： 肾母细胞瘤   PCNA   TGF-β3   免疫组织化学  

摘要： 目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和转化生长因子β3(TGF-β3)在肾母细胞瘤组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学分别检测PCNA和TGF-β3在9例正常肾组织和21例肾母细胞瘤组织中的表达,比较两者在肾母细胞瘤组织中的表达差异。结果PCNA在肾母细胞瘤和正常组织中的阳性表达率分别为95.23%(20/21)和33.33%(3/9),而TGF-β3在肾母细胞瘤和正常组织中的阳性表达率分别为19.04%(4/21)和66.67%(6/9);PCNA和TGF-β3在肾母细胞瘤中的阳性表达与正常组织相比均具有显著性差异(P<0.05)。结论PCNA和TGF-β3可能在肾母细胞瘤的发生中起作用,并可能与肾母细胞瘤组织细胞的转化及增殖相关。

关键词： 转化生长因子-β3   肝纤维化   胰腺纤维化  

摘要： 组织纤维化的基本特征是细胞外基质降解减少、过度沉积,导致组织结构的改建.TGF-β3通过抑制胶原的沉积,促进其降解而具有抗纤维化作用,并被证实在创伤愈合过程中可减轻伤后疤痕的形成.本文着重介绍了TGF-β3在肝脏及胰腺纤维化中的表达及其作用,以进一步了解其对纤维化疾病的影响.

关键词： Animals   Benzamides/pharmacology   Benzamides/pharmacology   Cell Proliferation   Cells, Cultured   Dioxoles/pharmacology   Humans   Myoblasts/physiology   p38 Mitogen-Activated Protein Kinases/physiology   Phosphorylation   Proteoglycans/antagonists & inhibitors   Proteoglycans/metabolism   Rats   Receptors, Transforming Growth Factor beta/antagonists & inhibitors   Receptors, Transforming Growth Factor beta/metabolism   Signal Transduction   Smad3 Protein/physiology   Transforming Growth Factor beta1/pharmacology   Transforming Growth Factor beta1/physiology  

摘要： Transforming growth factor beta (TGF beta) has an important role as a negative regulator of cellular proliferation. The type III transforming growth factor beta receptor (T beta RIII) has an emerging role as both a TGF beta superfamily co-receptor and in mediating signaling through its cytoplasmic domain. In L6 myoblasts, T beta RIII expression enhanced TGF beta 1-mediated growth inhibition, with this effect mediated, in part, by the T beta RIII cytoplasmic domain. The effects of T beta RIII were not due to altered ligand presentation or to differences in Smad2 phosphorylation. Instead, T beta RIII specifically increased Smad3 phosphorylation, both basal and TGF beta-stimulated Smad3 nuclear localization and Smad3-dependent activation of reporter genes independent of its cytoplasmic domain. Conversely, SB431542, a type I transforming growth factor beta receptor (T beta RI) inhibitor, as well as dominant-negative Smad3 specifically and significantly abrogated the effects of T beta RIII on TGF beta 1-mediated inhibition of proliferation. T beta RIII also specifically increased p38 phosphorylation, and SB203580, a p38 kinase inhibitor, specifically and significantly abrogated the effects of T beta RIII/TGF beta 1-mediated inhibition of proliferation in L6 myoblasts and in primary human epithelial cells. Importantly, treatment with the T beta RI and p38 inhibitors together had additive effects on abrogating T beta RIII/TGF beta 1-mediated inhibition of proliferation. In a reciprocal manner, short hairpin RNA-mediated knockdown of endogenous T beta RIII in various human epithelial cells attenuated TGF beta 1-mediated inhibition of proliferation. Taken together, these data demonstrate that T beta RIII contributes to and enhances TGF beta-mediated growth inhibition through both T beta RI/Smad3-dependent and p38 mitogen-activated protein kinase pathways.

关键词： .transforming growth factor   Foxp expression   CD Treg cells   attenuates   anti-inflammatory   airway inflammation   HO expression   induction of HO   hemin   Up-Regulation of Foxp  

摘要： Cumulative evidence suggests the up-regulation of interleukin (M)40 and T-regulatory (Treg) cells is implicated in anti-inflammatory effect of heme oxygenase-1 (HO-1). Thus, we postulated that induction of HO-1 could augment IL-10 and transforming growth factor (TGF)-beta production and foxp3(+)CD4(+)CD25(+) Treg cell function, thereby leading to attenuation of airway inflammation. In this study, CD4(+)CD25(+) Treg cells isolated from mouse spleen were either transfected with a HO-1 expression vector (pcDNA3HO-1) or treated with a HO-1 inducer (hemin). Up-regulation of HO-1 enhanced foxp3 expression and IL-10 secretion in the Treg cells in vitro. Next, BALB/c, C57/B6.129, and IL-10-deficient B6.129P2-Il10(tm1Cgn/J) mice were challenged by ovalbumin to induce airway inflammation. Consistent with in vitro findings, hemin treatment resulted in induction of HO-1 and foxp3 and production of IL-10 and membrane-bound TGF-beta 1 in vivo. This was further correlated with decrease of ovalbumin-specific immunoglobulin E level and eosinophil infiltration in bronchial alveolar lavage fluid from the asthmatic mice. Furthermore, hemin significantly enhanced the biological activity of CD4(+)CD25(+) Treg cells. This protective effect was specifically blocked by Sn-protoporphyrin, a HO-1 enzymatic inhibitor. Finally, hemin failed to up-regulate the function of CD4(+)CD25(+) Treg cells from IL-10-deficient mice. Our study indicates that HO-1 exerts its protective effect on asthma through a mechanism mediated by foxp3(+)CD4(+)CD25(+) Treg cells, IL-10, and membrane-bound TGF-beta 1.