关键词： 组织工程心脏瓣膜   P3/4HB   转化生长因子β1   缓释  

摘要： 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)壳聚糖缓释微球对体外3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯(P3/4HB)无纺支架培养肌成纤维细胞的作用。方法:静电纺丝法制备P3/4HB无纺支架,接种大鼠肌成纤维细胞。在实验组培养基中分别加入TGF-β1缓释微球和TGFβ-1,体外培养1周后行扫描电镜观察,检测羟脯氨酸和DNA含量;并用ELISA法动态检测TGFβ-1缓释微球缓释效果。结果:TGF-β1可从缓释微球中缓慢释放,1周内微球释放率为40.6%。与对照组比较,实验组细胞生长紧密,羟脯氨酸及DNA含量增高。结论:TGFβ-1壳聚糖缓释微球可在体外稳定释放,并具有生物学活性;其运用于P3/4HB无纺支架,可促进细胞增殖和胶原合成,为研究为制备携带壳聚糖TGFβ-1缓释微球的组织工程复合支架打下了良好的基础。

关键词： 骨髓间充质干细胞   诱导因子   藻酸盐   软骨分化  

摘要： 背景:近年来利用藻酸盐微球包被骨髓间充质干细胞进行软骨细胞定向诱导逐渐开展。目的:采用体外藻酸钠微球三维立体培养骨髓间充质干细胞,观察转化生长因子β3在诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化过程中胰岛素样生长因子I的作用。设计、时间及地点:细胞组织工程体外实验,于2007-03/10在武汉大学口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室完成。材料:SPF级1月龄雄性Wistar大鼠7只用于制备骨髓间充质干细胞。藻酸钠盐、胰岛素样生长因子I,转化生长因子β3均为Sigma公司产品。方法:第5代骨髓间充质干细胞以3×109L-1密度重悬于1.2%藻酸钠盐溶液中,用22号针头将该溶液缓慢滴加在100mmol/L氯化钙溶液中使其聚合形成凝胶,10min后洗涤微球2次,即为包被骨髓间充质干细胞的藻酸盐微球。联合组加入含100μg/L胰岛素样生长因子I、10μg/L转化生长因子β3的软骨诱导培养基,诱导3周。同时设立胰岛素样生长因子I组、转化生长因子β3组、空白对照组。主要观察指标:甲苯胺蓝染色检测细胞外基质的形成,RT-PCR法及免疫组织化学法检测Ⅱ型胶原和Aggrecan的表达,Western blot检测Sox9蛋白表达及其与PCR产物的相关性。结果:包被于藻酸盐微球的骨髓间充质干细胞经胰岛素样生长因子I、转化生长因子β3联合诱导3周,细胞周围有大量均质蓝染物质。联合组II型胶原和Aggrecan mRNA及蛋白表达水平最高,转化生长因子β3组表达居中,胰岛素样生长因子I组表达较弱,空白对照组几乎无表达(F=10.52,P<0.01)。各组Sox9蛋白表达水平与上述指标类似(F=7.95,P<0.05),Sox9与II型胶原、aggrecan的相关系数分别为0.95和0.91。结论:体外定向诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的过程中,胰岛素样生长因子I可能通过促进Sox-9的表达来起到与转化生长因子β3的协同效应。

关键词： 转化生长因子β1   转化生长因子β3   基质金属蛋白酶-2   基质金属蛋白酶-9   金属蛋白酶组织抑制剂-1  

摘要： 目的 观察重组转化生长因子β1(tgfβ1)和β3(tgfb3)基因对大鼠肝星状细胞株(hsc-t6)的基质金属蛋白酶-2(mmp-2)、基质金属蛋白酶-9(mmp-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(timp-1)表达的影响.方法 (1)构建质粒pcdna3.1(+)-tgfb,和pedna3.1(+)-tgfβ3;(2)瞬时转染:将pcdna3.1(+)-tgfβ1和pedna3.1(+)-tgfβ3分别及共同转染hsc-t6细胞,荧光定量pcr法和免疫印迹法检测转染后24、48和72 h时mmp-2、mmp-9、timp-1 mrna和蛋白的表达;(3)稳定转染:pcdna3.1(+)-tgfβ1转染hsc-t6细胞,经筛选建立高表达tgfβ1的hsc-t6细胞克隆,pcdna3.1(+)-tigfβ3转染细胞克隆,48 h后检测mmp-2、mmp-9和t1mp-1的表达.结果 (1)tgfβ1转染细胞后,mmp-2和timp-1明显增高(p＜0.05),mmp-9无变化;tgfβ3转染细胞后,mmp-2和mmp-9无变化,timp-1 mrna也无变化,但timp-1蛋白明显增高(p＜0.05);共转染组的mmp-2较空白组和对照组明显增加(p＜0.05),mmp-9无改变,timp-1较tgfβ1转染组明显下降(p＜0.05).(2)tgfβ3转染克隆细胞后,mmp-2无明显变化,mmp-9明显增加(p＜0.05),timp-1明显下降(p＜0.05).结论 重组tgfβ3基因可能通过促进mmp-2或mmp-9的活性和抑制timp-l的活性而发挥抗肝纤维化作用. abstract： objective to investigate the effects of transforming growth factorβ1(tgfβ1)and β3 (tgfβ3)gene transfer on mmp-2,mmp-9 and timp-1 expression in hepatic stellate cells(hsc-t6).methods tgfβ1 and tgfβ3 expression plagmids were *** recombinant expression plasmid pcdna3.1(+)-=tgfβ1 and pcdna3.1(+).tgfβ3 were transfected or cotransfected into *** 24,48 and 72 h after transfection,the expression of mmp-2,mmp-9 and timp-1 mrna were detected by real-time quantitative pcr,and the expression of mmp-2,mmp-9 and timp-1 protein were detected by western *** recombinant expression plasmid pcdna3.1(+).tgfβ1 was transfected into hsc-t6,and positive clones were selected by *** positive clones were transfected by the recombinant expression plasmid pcdna3.1(+).tgfβ1,and the expression of mmp-2,mmp-9 and timp-1 were detected at 48 h after *** after transfection with pedna3.1-tgfβ1,mmp-2 and timp-1 increaged remarkably in hsc-t6 cells(p＜0.05),but mmp-9 remained at the sanle level;after transfection with pcdna3.1-tgfβ3,expression levels of mmp-2,mmp-9 and timp-1 mrna were not changed,but timp-1 protein increased remarkably(p＜0.05);in cotransfection group,the expression of mmp-2 was higher than that in the blank and the control groups(p＜0.05),but mmp-9

关键词： Animals   Cell Differentiation/drug effects   Cell Line   Cells, Cultured   Forkhead Transcription Factors/genetics   Forkhead Transcription Factors/metabolism   Gene Expression Regulation/drug effects   Humans   Interleukin-17/biosynthesis   Interleukin-17/genetics   Interleukin-17/metabolism   Mice   Mice, Inbred C57BL   Receptors, Interleukin/genetics   Receptors, Interleukin/metabolism   Receptors, Retinoic Acid/antagonists & inhibitors   Receptors, Retinoic Acid/genetics   Receptors, Retinoic Acid/metabolism   Receptors, Thyroid Hormone/antagonists & inhibitors   Receptors, Thyroid Hormone/genetics   Receptors, Thyroid Hormone/metabolism   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/cytology   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/cytology   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/drug effects   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/drug effects   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/metabolism   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/metabolism   Transforming Growth Factor beta/pharmacology  

摘要： T helper cells that produce IL- 17 (T(H)17 cells) promote autoimmunity in mice and have been implicated in the pathogenesis of human inflammatory diseases. At mucosal surfaces, T(H)17 cells are thought to protect the host from infection, whereas regulatory T ( T-reg) cells control immune responses and inflammation triggered by the resident microflora(1-5). Differentiation of both cell types requires transforming growth factor-beta (TGF-beta), but depends on distinct transcription factors: ROR gamma t ( encoded by Rorc(gamma t)) for T(H)17 cells and Foxp3 for T-reg cells(6-8). How TGF-beta regulates the differentiation of T cells with opposing activities has been perplexing. Here we demonstrate that, together with pro- inflammatory cytokines, TGF-beta orchestrates T(H)17 cell differentiation in a concentration-dependent manner. At low concentrations, TGF-b synergizes with interleukin ( IL)- 6 and IL- 21 ( refs 9 - 11) to promote IL- 23 receptor (Il23r) expression, favouring T(H)17 cell differentiation. High concentrations of TGF-beta repress IL23r expression and favour Foxp3(+) T-reg cells. ROR gamma t and Foxp3 are co- expressed in naive CD4(+) T cells exposed to TGF-beta and in a subset of T cells in the small intestinal lamina propria of the mouse. In vitro, TGF-beta-induced Foxp3 inhibits ROR gamma t function, at least in part through their interaction. Accordingly, lamina propria T cells that co-express both transcription factors produce less IL- 17 ( also known as IL-17a) than those that express ROR gamma t alone. IL- 6, IL- 21 and IL- 23 relieve Foxp3- mediated inhibition of ROR gamma t, thereby promoting TH17 cell differentiation. Therefore, the decision of antigen- stimulated cells to differentiate into either T(H)17 or T-reg cells depends on the cytokine- regulated balance of ROR gamma t and Foxp3.

关键词： 转化生长因子β1   Smad蛋白质类   结直肠肿瘤   腺瘤  

摘要： 背景:结直肠腺瘤-腺癌序列是目前公认的结直肠癌发生学说,但关于结直肠腺瘤,特别是高危型结直肠腺瘤中转化生长因子(TGF)-β1通路蛋白表达的临床研究较少。目的:探讨TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7在结直肠癌发生中的作用。方法:选取2000年8月～2006年12月六安市人民医院结直肠息肉标本110例(包括腺瘤性和非腺瘤性息肉)、结直肠癌40例和正常结直肠组织20例,以免疫组化染色检测TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7在各组中的表达,并分析高危型腺瘤中TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7表达与临床病理特征的关系。结果:TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7在息肉组、结直肠癌组和对照组中的表达有显著差异(P<0.05),其表达与高危型腺瘤患者的临床病理特征均不相关。高危型腺瘤和Dukes A期结直肠癌中TGF-β1、Smad3、Smad7的表达有显著差异(P<0.05),而Smad4表达无显著差异。结论:TGF-β1通路可能参与了结直肠癌的发生过程,TGF-β1、Smad3和Smad7可能在结直肠腺瘤的癌变早期起作用。

关键词： 转化生长因子β   肝硬化   胶原合成  

摘要： 目的 观察重组转化生长因子艮（TGF-β3）基因对大鼠肝纤维化细胞模型胶原合成及沉积的影响。方法 （1）构建质粒pcDNA3．1（＋）-TGF-B]和pcDNA3．1（＋）·TGF-β1。（2）将pcDNA3．1（＋）-TGF-β1，转染大鼠肝星状细胞（HSC）-T6，经G418筛选建立稳定高表达TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆。（3）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆，荧光实时定量PCR法检测TGF-β3 mRNA的表达；荧光实时定量PCR法及Western印迹法分别检测TGF-β1、I型胶原、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA和蛋白表达情况。结果 （1）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3和pcDNA3．1（＋）-TGF-β1质粒均可转染HSC-T6细胞，以转染48h时转染效率最高，达28．2％。（2）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染HSC-T6细胞阳性克隆后，与单纯阳性克隆组相比，TGF-β1，mRNA表达无明显改变，而蛋白表达明显低（0．48±0．07 vs 0．66±0．14，P=0．023）；I型胶原mRNA及蛋白的表达明显低（mRNA：7．2±1．0 vs 13．7±0．4，P=0．010，蛋白：0．45±0．21 vs 0．82±0．13，P=0．041），MMP-2 mRNA及蛋白较低，但差异无统计学意义（均P〉0．05），MMP-9mRNA及蛋白表达明显多（均P〈0．05），TIMP-1mRNA及蛋白表达明显低（均P〈0．05）。结论 （1）重组TGF-β3真核表达载体构建正确，在转染阳性克隆细胞48h后获得高效表达；（2）稳定高表达TGF-β1，的HSC-T6细胞阳性克隆可作为肝纤维化细胞模型；（3）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染阳性克隆能减少胶原合成，并通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达对胶原沉积起抑制作用。

关键词： 肝纤维化   转化生长因子β   肝星状细胞   Ⅰ   型胶原  

摘要： 转化生长因子β1（TGFβ1）是激活肝星状细胞（HSC）并促进其胶原合成的最重要因子。TGFD3被认为具有抗组织纤维化的功能。Carrington等研究提示：TGFβ1与TGFβ3的比值是纤维化发生程度的关键因素。

关键词： 骨髓间充质干细胞   基因转染   转化生长因子β  

摘要： 目的：外伤后病理性瘢痕的形成与创面的愈合过程有着密切的联系。创伤愈合时期引入细胞因子或生长因子及其他影响因素。调节创伤愈合机制，即可能改变细胞外基质结构。达到预防瘢痕形成的目的。实验拟观察TGF-β3c2s2基因转染的骨髓间充质干细胞在创面修复与重塑过程中对转化生长因子β1和转化生长因子β3表达的影响。方法：实验于2005-10／2007-03年在重庆医科大学附属儿童医院外科实验室、动物实验中心完成。①实验材料：四五周龄日本大耳白兔2只，体质量300～400g，雌雄不限；健康成年日本大耳白兔20只。体质量1．7-2．5kg。雌雄不限，均由重庆医科大学动物实验中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：选取四五周龄日本大耳白兔分离培养骨髓闻充质干细胞。选取健康成年日本大耳白兔20只，每只兔耳腹侧制作2个皮肤、软骨全层缺损创面共80个。创面以自身对照为前提随机分为4组。每组20个创面：实验组：加入Ad—TGF-β3c2s2转染的骨髓间充质干细胞：空白对照组：加入消毒的DMEM／F12（不含胎牛血清）：腺病毒组：加入Ad—TGF—β3c2s2腺病毒；骨髓间充质干细胞组：加入骨髓间充质干细胞。③实验评估：观察瘢痕形成情况。苏木精-伊红染色、免疫组织化学技术观察瘢痕组织的组织学形态和检测瘢痕组织中转化生长因子β1和转化生长因子β3表达和变化规律。结果：①实验组在整个过程中无明显高出周围皮肤的瘢痕形成。其他组上皮化后。创面均逐渐形成不同程度的瘢痕。伤后45d瘢痕增生程度达高峰。明显高出皮肤表面；持续至90d左右。②实验组和腺病毒组结构较接近正常皮肤，比正常皮肤胶原排列致密。略厚：空白对照组、骨髓间充质干细胞组伤后45d可见浅层组织结构排列紊乱。胶原纤维粗大呈交错网织状排列。③实验组伤后21，45,90d转化生长因子β1表达明显低于其他组和正常皮肤（P〈0．01）。其表达随时间逐渐下降，转化生长因子β3表达高于其他组和正常皮肤（P〈0．01）。各组转化生长因子β3的表达随时间逐渐下降。结论：TGF-β3c2s2基因转染的骨髓间充质干细胞移植于局部创面。对创面修复过程中转化生长因子β1和转化生长因子β3表达有显著影响。通过这种影响减轻创面修复后增生性瘢痕的形成。

关键词： 焦亚硫酸钠   半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶   转化生长因子β1   肝脏   小鼠  

摘要： 目的研究焦亚硫酸钠对小鼠肝脏中半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法健康雄性昆明小鼠30只随机分为对照组10只和实验组20只,对照组小鼠给予静置自来水饮用;实验组小鼠给予10g.L-1焦亚硫酸钠溶液饮用。分别于第10天和第30天时处死各组小鼠,快速取出肝脏,Zamboni固定液固定,常规冰冻制片,免疫组织化学染色,光镜观察。结果与对照组比较,实验组小鼠肝脏中Caspase-3阳性表达增强(P<0.01),第10天时实验组变化尤为明显;而实验组小鼠肝脏中TGF-β1阳性表达与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论焦亚硫酸钠喂食后可引起小鼠肝脏中Caspase-3表达增高,TGF-β1无明显改变,提示焦亚硫酸钠促使小鼠肝脏中肝细胞凋亡增加。

关键词： 病理学与病理生理学   成纤维细胞   Smad3基因   转化生长因子β1   RNA干扰  

摘要： 目的探讨转化生长因子β1及其信号转导分子Smad3在肌成纤维细胞C2C12殖中的作用。方法以转化生长因子β1作用于C2C12细胞,对其信号转导分子Smad3基因进行RNA干扰,用MTT法检测转化生长因子β1诱导的C2C12细胞增殖。结果0、1、5和10μg/L转化生长因子β1作用C2C12细胞24h后,C2C12细胞增殖随转化生长因子β1浓度增加而增加,且呈剂量依赖性(光密度值分别为0.096±0.015、0.177±0.014、0.240±0.028和0.312±0.012,P<0.01);经200pmol/LsiRNA-Smad3转染24h后,再用5μg/L转化生长因子β1作用,其细胞增殖(光密度值0.063±0.011)比内对照组下降(光密度值0.137±0.016,P<0.01)。结论转化生长因子β1通过Smad3信号转导促进C2C12细胞增殖并呈剂量依赖性,siRNA-Smad3可有效阻断其信号转导而降低C2C12细胞增殖。