关键词： 骨髓间充质干细胞   基因转染   转化生长因子β  

摘要： 目的：外伤后病理性瘢痕的形成与创面的愈合过程有着密切的联系。创伤愈合时期引入细胞因子或生长因子及其他影响因素。调节创伤愈合机制，即可能改变细胞外基质结构。达到预防瘢痕形成的目的。实验拟观察TGF-β3c2s2基因转染的骨髓间充质干细胞在创面修复与重塑过程中对转化生长因子β1和转化生长因子β3表达的影响。方法：实验于2005-10／2007-03年在重庆医科大学附属儿童医院外科实验室、动物实验中心完成。①实验材料：四五周龄日本大耳白兔2只，体质量300～400g，雌雄不限；健康成年日本大耳白兔20只。体质量1．7-2．5kg。雌雄不限，均由重庆医科大学动物实验中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：选取四五周龄日本大耳白兔分离培养骨髓闻充质干细胞。选取健康成年日本大耳白兔20只，每只兔耳腹侧制作2个皮肤、软骨全层缺损创面共80个。创面以自身对照为前提随机分为4组。每组20个创面：实验组：加入Ad—TGF-β3c2s2转染的骨髓间充质干细胞：空白对照组：加入消毒的DMEM／F12（不含胎牛血清）：腺病毒组：加入Ad—TGF—β3c2s2腺病毒；骨髓间充质干细胞组：加入骨髓间充质干细胞。③实验评估：观察瘢痕形成情况。苏木精-伊红染色、免疫组织化学技术观察瘢痕组织的组织学形态和检测瘢痕组织中转化生长因子β1和转化生长因子β3表达和变化规律。结果：①实验组在整个过程中无明显高出周围皮肤的瘢痕形成。其他组上皮化后。创面均逐渐形成不同程度的瘢痕。伤后45d瘢痕增生程度达高峰。明显高出皮肤表面；持续至90d左右。②实验组和腺病毒组结构较接近正常皮肤，比正常皮肤胶原排列致密。略厚：空白对照组、骨髓间充质干细胞组伤后45d可见浅层组织结构排列紊乱。胶原纤维粗大呈交错网织状排列。③实验组伤后21，45,90d转化生长因子β1表达明显低于其他组和正常皮肤（P〈0．01）。其表达随时间逐渐下降，转化生长因子β3表达高于其他组和正常皮肤（P〈0．01）。各组转化生长因子β3的表达随时间逐渐下降。结论：TGF-β3c2s2基因转染的骨髓间充质干细胞移植于局部创面。对创面修复过程中转化生长因子β1和转化生长因子β3表达有显著影响。通过这种影响减轻创面修复后增生性瘢痕的形成。

关键词： 焦亚硫酸钠   半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶   转化生长因子β1   肝脏   小鼠  

摘要： 目的研究焦亚硫酸钠对小鼠肝脏中半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法健康雄性昆明小鼠30只随机分为对照组10只和实验组20只,对照组小鼠给予静置自来水饮用;实验组小鼠给予10g.L-1焦亚硫酸钠溶液饮用。分别于第10天和第30天时处死各组小鼠,快速取出肝脏,Zamboni固定液固定,常规冰冻制片,免疫组织化学染色,光镜观察。结果与对照组比较,实验组小鼠肝脏中Caspase-3阳性表达增强(P<0.01),第10天时实验组变化尤为明显;而实验组小鼠肝脏中TGF-β1阳性表达与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论焦亚硫酸钠喂食后可引起小鼠肝脏中Caspase-3表达增高,TGF-β1无明显改变,提示焦亚硫酸钠促使小鼠肝脏中肝细胞凋亡增加。

关键词： 病理学与病理生理学   成纤维细胞   Smad3基因   转化生长因子β1   RNA干扰  

摘要： 目的探讨转化生长因子β1及其信号转导分子Smad3在肌成纤维细胞C2C12殖中的作用。方法以转化生长因子β1作用于C2C12细胞,对其信号转导分子Smad3基因进行RNA干扰,用MTT法检测转化生长因子β1诱导的C2C12细胞增殖。结果0、1、5和10μg/L转化生长因子β1作用C2C12细胞24h后,C2C12细胞增殖随转化生长因子β1浓度增加而增加,且呈剂量依赖性(光密度值分别为0.096±0.015、0.177±0.014、0.240±0.028和0.312±0.012,P<0.01);经200pmol/LsiRNA-Smad3转染24h后,再用5μg/L转化生长因子β1作用,其细胞增殖(光密度值0.063±0.011)比内对照组下降(光密度值0.137±0.016,P<0.01)。结论转化生长因子β1通过Smad3信号转导促进C2C12细胞增殖并呈剂量依赖性,siRNA-Smad3可有效阻断其信号转导而降低C2C12细胞增殖。

关键词： 妊娠期高血压疾病   整合素β3   TGF—β1   免疫组织化学  

摘要： 目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)和整合素β3(Integrinβ3)在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达,并探讨其与妊娠期高血压疾病发病的关系。方法采用免疫组织化学染色(SP法)分别检测Integrinβ3、TGF-β1在12例妊娠期高血压疾病患者及13例正常妊娠者胎盘组织中的表达。结果妊娠期高血压疾病组胎盘Integrinβ3表达明显高于正常妊娠组(P<0.01)。妊娠期高血压疾病组胎盘TGF-β1表达亦明显高于正常妊娠组(P<0.01)。结论与正常妊娠组比较妊娠期期高血压疾病患者胎盘组织integrinβ3、TGF-β1的表达明均显增高。表明integrinβ3、TGF-β1可能参与妊娠期高血压疾病的发生和发展。

关键词： Base Sequence   Cell Line, Tumor   Cell Transformation, Neoplastic   Cell Transformation, Neoplastic   DNA Primers   Hedgehog Proteins/metabolism   Humans   Immunohistochemistry   Immunohistochemistry   Lymphatic Metastasis   Matrix Metalloproteinase 2/metabolism   Matrix Metalloproteinase 9/metabolism   Neoplasm Invasiveness   Neoplasm Metastasis   Phosphorylation   Protein-Serine-Threonine Kinases/metabolism   Receptors, Transforming Growth Factor beta/metabolism   RNA, Small Interfering   RNA, Small Interfering   Signal Transduction   Smad3 Protein/metabolism   Stomach Neoplasms/enzymology   Stomach Neoplasms/metabolism   Stomach Neoplasms/pathology   Transforming Growth Factor beta/physiology  

摘要： It is known that the activation of hedgehog (Hh) signaling is involved in the progression and invasion of various tumors, including gastric carcinoma. In this study, we investigated the impact of transforming growth factor (TGF)-beta signaling on the sonic hedgehog (Shh)-mediated invasion of gastric cancer cells. We found that higher concentrations of N-Shh enhanced cell motility and invasiveness in gastric cancer cells, whereas no increase was observed in cells that were treated with KAAD-cyclopamine (a Shh signaling inhibitor) or anti-Shh blocking antibodies. In addition, the N-Shh-induced migration and invasiveness of gastric cancer cells were reduced by treatment with anti-TGF-beta blocking antibody or TGF-beta 1 small interfering RNA (siRNA) in presence of N-Shh when compared with control groups. Furthermore, TGF-beta 1 secretion, TGF-beta-mediated transcriptional response, expression of activin receptor-like kinase (ALK) 5 protein and phosphorylation of Smad 3 were also enhanced by treatment with N-Shh, but not KAAD-cyclopamine, anti-Shh or TGF-beta 1 blocking antibodies. Blockade of the ALK5 kinase in the presence of N-Shh significantly inhibited phosphorylation of Smad 3, activity of matrix metalloproteinases and Shh-induced cell motility/invasiveness. Importantly, transient expression of ALK5 siRNA or Smad 3 siRNA reduced the ability of N-Shh to stimulate migration and invasion of those cells compared with the cells treated with non-specific control siRNA. In summary, these results indicate that Shh promotes motility and invasiveness of gastric cancer cells through TGF-beta-mediated activation of the ALK5-Smad 3 pathway. Additionally, our findings are the first to suggest a role and mechanism for Shh signaling as it relates to the metastatic potential of gastric cancer, thereby indicating potential therapeutic molecular targets to decrease metastasis.

关键词： 转化生长因子β1   转化生长因子β3   妊娠期高血压疾病   胎盘   滋养细胞   浸润  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β1,β3(TGF-β1,TGF-β3)在妊娠期高血压疾病发生和发展中的作用。方法60例为妊娠期高血压疾病患者(妊娠期高血压患者20例,轻度子痫前期患者20例,重度子痫前期患者20例),采用免疫组织化学方法检测分娩后胎盘滋养细胞及蜕膜细胞TGF-β3和TGF-β1的表达,20例正常妊娠孕妇为对照组。取重度子痫前期患者剖宫产后分娩胎盘绒毛体外培养24h,然后分别收集培养后1,4,12,24h上清液,采用ELISA法检测胎盘滋养细胞TGF-β1和TGF-β3的分泌。结果妊娠期高血压疾病组绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞TGF-β3阳性表达率和表达程度明显高于对照组,TGF-β1阳性表达率和表达程度明显高于对照组,差异均有显著性(P<0.05)。重度子痫前期组分娩后胎盘绒毛体外培养24h后,于1,4,12,24h分别收集上清液中TGF-β1和TGF-β3的分泌均显著高于正常孕妇组,差异有显著性(P<0.05)。结论妊娠期高血压疾病患者胎盘绒毛滋养层细胞的TGF-β3,TGF-β1表达异常在妊娠期高血压疾病的发生发展过程中起重要作用。

关键词： 过氧化氢   转化生长因子β1   Smad3  

摘要： 目的研究过氧化氢对A549细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad3磷酸化的影响。方法用过氧化氢建立体外A549细胞损伤模型,MTT法检测过氧化氢对A549细胞增殖活性的影响,免疫印迹法(Western Blotting)观察过氧化氢作用不同时间后A549细胞TGF-β1和Smad3磷酸化的表达。结果过氧化氢明显抑制A549细胞的增殖,浓度为1.0mmol/L时,其对A549细胞增殖的抑制率为46.34%;A549细胞在过氧化氢(1.0mmol/L)的刺激下,TGF-β1和Smad3磷酸化的表达量逐渐升高,24h时达到高峰,48h下降。结论氧化损伤早期,A549细胞表达TGF-β1和Smad3磷酸化增加,这可能与肺损伤后依赖Smad3的组织修复有关。

关键词： 糖尿病肾病   转化生长因子β1   Smad2/3   Smad4   纤连蛋白  

摘要： 目的观察1型糖尿病大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)及信号转导蛋白Sm ad2/3、Sm ad4蛋白在肾脏的动态表达,探讨它们在糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用及其相互关系。方法实验动物随机分为5组,依病程长短分为①A组(2周组),②B组(4周组),③C组(8周组),④D组(16周组),⑤E组(24周组),每组分别设有正常对照组(N组)和糖尿病组(DM组)。采用尾静脉注射链脲菌素(STZ)法复制糖尿病大鼠模型;免疫组织化学方法检测肾脏TGF-β1、Sm ad2/3、Sm ad4及纤连蛋白(FN)的表达;PAS染色光镜观察肾小球系膜、肾小管基底膜变化及细胞外基质沉积情况等的形态学改变;生化方法测定血糖、血肌酐及24h尿蛋白量。结果正常对照组大鼠肾脏TGF-β1极少表达,Sm ad2/3、Sm ad4有少量表达,而糖尿病大鼠三者的表达均显著高于正常对照组;随糖尿病进展,肾组织纤连蛋白表达及24h尿蛋白都增多;糖尿病16周时肾脏TGF-β1表达分别与Sm ad2/3、Sm ad4及FN、24h蛋白尿均呈正相关关系。结论STZ-1型糖尿病大鼠肾脏TGF-β1和下游信号转导蛋白Sm ad2/3、Sm ad4参与了肾病时肾脏肥大硬化的发生。

关键词： 缺氧诱导因子-1α   转化生长因子-β3   子痫前期滋养细胞  

摘要： 目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和转化生长因子-β3(TGF-β3)在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化方法和图像分析系统分别对20例正常孕妇(对照组)和46例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度16例、重度30例)胎盘组织中的HlF-1α和TGF-β3的表达进行分析。结果:①HIF-1α主要表达于胎盘绒毛滋养细胞和蜕膜细胞,与正常组胎盘组织(65.2±1.77)比较,子痫前期组HIF-1α的平均光密度(78.10±3.84)显著升高(P<0.05),重度子痫前期(81.49±1.81)显著高于轻度子痫前期(74.71±1.53)(P<0.05)。②TGF-β3主要表达于胎盘绒毛滋养细胞和蜕膜细胞,与正常组胎盘组织(63.55±2.10)比较,子痫前期组TGF-β3的平均光密度(75.34±3.73)显著升高,其中重度子痫前期(78.05±3.14)显著高于轻度子痫前期(72.64±1.79)。③子痫前期组HIF-1α和TGF-β3的表达呈正相关性(γ=0.351,P<0.05)。其中轻度子痫前期γ1=0.549,P<0.05。重度子痫前期γ2=0.577,P<0.05。结论:胎盘滋养细胞HIF-1α和TGF-β3表达升高可能与子痫前期的发病有关。

关键词： 桂皮醛   创伤愈合   bFGF   TGF—β1  

摘要： 目的研究桂皮醛刺激小鼠成纤维细胞瘤NIH3T3细胞后碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)蛋白在不同时相点表达的规律,探讨桂皮醛促进成纤维细胞增殖及胶原合成的机制。方法采用MTT法观察不同质量浓度桂皮醛对NIH3T3细胞增殖的影响;利用羟脯氨酸(Hyp)测试法测定细胞上清中胶原水平;利用免疫细胞化学技术检测桂皮醛对NIH3T3细胞bFGF、TGF-β_1蛋白表达的影响。结果桂皮醛作用NIH3T3细胞48 h后,细胞增殖速度和细胞上清中的胶原量均较对照组明显增加。桂皮醛刺激后,bFGF和TGF-β_1蛋白表达增加,其中bFGF蛋白表达高峰在18 h,TGF-β_1蛋白在刺激后12 h达到峰值。结论桂皮醛可以上调内源性生长因子bFGF、TGF-β_1蛋白的表达,这可能是桂皮醛体外促进NIH3T3细胞增殖及胶原合成,以及在创伤愈合、组织修复方面发挥作用的分子生物学机制。