关键词： 肝纤维化   干扰素-α   转化生长因子-β1   肝星状细胞   Smad3   Smad7  

摘要： 目的： 肝纤维化是多种慢性肝病共有的组织学变化，肝星状细胞(HSC)的活化和增殖是肝纤维化形成的关键和中心环节。转化生长因子-β1(TGF-β1)是调控肝纤维化发生、发展的核心物质。Smads蛋白是TGF-β信号转导过程中最重要的胞内效应因子，它能将TGF-β信号由胞膜转入核内。Smad3过度表达及Smad7被抑制是肝组织纤维化的主要原因。IFN-α具有抗肝纤维化的作用。至于IFN-α对TGF-β/Smad信号转导通路中Smad蛋白家族是否有影响尚未见报道。本研究通过检测IFN-α对TGF-β1刺激体外培养的HSC表达Smad3与Smad7的动态变化，探讨IFN-α对TGF-β1刺激体外培养的HSC表达Smads蛋白的影响，阐明其抗肝纤维化机制，为临床肝纤维化的药物治疗提供更多的理论依据。 材料与方法： 一、实验材料 1、大鼠肝脏星状细胞株(r-HSC99) 由北京大学人民医院冷希圣教授惠赠，由中国医科大学附属盛京医院感染科研究室保存。r-HSC99是经长期培养，传代后自发产生的，符合HSC的自然特征，是研究肝纤维化理想的实验模型。 2、主要试剂 TGF-β1;重组人干扰素-α2b;β-actin引物、Smad3引物、Smad7引物、逆转录试剂盒;羊抗大鼠Smad3多克隆抗体;羊抗大鼠Smad7多克隆抗体。兔抗山羊IgG抗体。 二、实验方法 体外培养大鼠肝星状细胞系r-HSC99，分为TGF-β1组、TGF-β1+IFN-α组。分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫印迹(Western blotting)方法，测定各组于培养0、2、4、8、16、24小时，HSC表达Smad3、Smad7的mRNA及蛋白变化。 三、统计学处理 应用SPSS13.0软件进行分析，数据以均数±标准差表示，各组之间是否存在显著性差异分析采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。 实验结果： 1、HSC表达Smad3、Smad7 mRNA的结果 0小时的Smad3 mRNA/β-actine值为0.524±0.022，TGF-β1组2、4、8、16、24小时Smad3 mRNA/β-actine值分别为0.591±0.039、0.761±0.023、0.896±0.033、0.779±0.020、0.648±0.037;IFN-α+ TGF-β1组2、4、8、16、24小时Smad3mRNA/β-actine值分别为0.562±0.038、0.593±0.033、0.705±0.031、0.647±0.020、0.579±0.024。在TGF-β1作用下，随着时间的增加，两组Smad3 mRNA表达均增加，在8小时达到高峰，之后开始下降，与0小时相比，Smad3 mRNA在4、8、16、24小时组差异均有统计学意义(P<0.05);IFN-α+TGF-β1组与TGF-β1组按时间相比，IFN-α+ TGF-β1组Smad3 mRNA表达低于TGF-β1组，在4、8、16小时组差异均有统计学意义(P<0.05)。 0小时的Smad7 mRNA/β-actine值为0.513±0.135，TGF-β1组2、4、8、16、24小时Smad7 mRNA/β-actine值分别为0.604±0.034、0.764±0.022、0.855±0.027、0.775±0.032、0.668±0.033;IFN-α+ TGF-β1组2、4、8、16、24小时Smad7mRNA/β-actine值分别为0.672±0.029、0.949±0.038、1.126±0.026、0.933±0.015、0.631±0.088。随着时间的增加，两组Smad7 mRNA表达均增加，在8小时达到高峰，之后开始下降，与0小时相比，Smad7 mRNA在4、8、16小时组差异均有统计学意义(P<0.05);IFN-α+ TGF-β1组与TGF-β1组按时间相比，IFN-α+ TGF-β1组Smad7 mRNA表达高于TGF-β1组，在4、8、16小时组差异均有统计学意义(P<0.05)。 2、HSC表达Smad3、Smad7蛋白的结果 0小时的Smad3蛋白/β-actine值为0.291±0.031，TGF-β1组2、4、8、16、24小时Smad3蛋白/β-actine值分别为0.321±0.055、0.393±0.034、0.569±0.035、0.556±0.034、0.395±0.022;IFN-α+ TGF-β1组2、4、8、16、24小时Smad3蛋白/β-actine值分别为0

关键词： 子宫内膜异位症   整合素β3   转化生长因子β1  

摘要： 目的探讨整合素β3(integrinβ3)和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)在子宫内膜异位症(endometriosis,EM)中的表达,并探讨其与EM发病的关系及两者的相关性。方法采用免疫组织化学染色(SP法)分别检测Integrinβ3、TGFβ1在EM的在位内膜、异位内膜以及在正常子宫内膜中的表达。结果整合素β3和TGFβ1两因子在EM患者的异位内膜与对照组同期正常子宫内膜的表达均有显著性差异(P<0.05),在EM患者的在位内膜与异位内膜的表达均有显著性差异(P<0.05),两因子在各组分布呈相反趋势但没有统计学意义。结论EM患者从子宫内膜到异位病灶,整合素β3表达有下降趋势而TGFβ1表达有上升趋势,两者均有明显的变化,这可能与EM发生、发展和不孕有关。

关键词： 转化生长因子β3   前软骨干细胞   聚乙烯亚胺  

摘要： 目的为骺板损伤的基因治疗创造条件,构建人转化生长因子的真核表达载体,并转染大鼠前软骨干细胞(PSCs),以获得组织工程的种子细胞。方法通过基因工程的方法重组构建pcDNA3.1(+)-hTGF-β3真核表达载体并鉴定,免疫磁珠法分离纯化大鼠前软骨干细胞后,用纳米级的高分子聚合物线性化的聚乙烯亚胺共转染pcDNA3.1(+)-hTGF-β3与pcDNA3.1-EGFP,观察和检测瞬时转染后的表达情况。结果重组质粒经过酶切电泳和测序鉴定证实构建成功,共转染后在荧光显微镜下可以观察到绿色荧光,RT-PCR和ELISA可以检测到有目的基因的表达。转染后培养液上清中TGF-β3蛋白含量开始上升,在72h达到高峰,以后逐渐下降。结论真核表达载体hTGF-β3的重组质粒构建正确,并成功转染PSCs,为骺板损伤的组织工程学修复提供了新的选择。

关键词： 妊娠期高血压疾病   整合素β3   TGF-β1   免疫组化化学  

摘要： 目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)和整合素β3(Integrinβ3)在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达,并探讨其与妊娠期高血压疾病发病的关系。方法采用免疫组织化学染色(SP法)分别检测Integrinβ3、TGF-β1在12例妊娠期高血压疾病患者及13例正常妊娠者胎盘组织中的表达。结果妊娠期高血压疾病组胎盘Integrinβ3表达明显高于正常妊娠组(P<0.01)。妊娠期高血压疾病组胎盘TGF-β1表达亦明显高于正常妊娠组(P<0.01)。结论与正常妊娠组比较妊娠期期高血压疾病患者胎盘组织integrinβ3、TGF-β1的表达明均显增高。表明integrinβ3、TGF-β1可能参与妊娠期高血压疾病的发生和发展。

关键词： 软骨分化   骨髓基质干细胞   转化生长因子-β3  

摘要： 目的观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号途径中细胞外信号调节的激酶ERK途径在转化生长因子（TGF）-β3诱导的骨髓基质干细胞（MSCs）向软骨分化的过程中的作用。方法在体外培养大鼠的MSCs，在含有TGF-β3的诱导培养基中向软骨方向诱导分化，在诱导分化的不同时间点，分别用Western blot测定ERK1／2的表达和磷酸化。确定ERK1／2在分化过程中的变化，同时测定在分化的过程中MSCs与软骨分化相关基因的表达，之后用ERK1／2的抑制剂U0126，观察ERK1／2信号传导通路阻断后对软骨分化的影响。结果在TGF-β3促使MSCs向软骨方向分化的过程中，ERK1／2参与了细胞的分化和相关软骨基质的合成，ERK1／2抑制剂的使用削弱和减缓了上述过程的发生。结论ERK1／2途径在软骨分化过程中起重要作用。

关键词： 消癥煎膏   直肠给药   子宫肌瘤   转化生长因子-β3  

摘要： 目的研究消癥煎膏对大鼠子宫肌瘤以及子宫肌瘤中TGF-β3的影响。方法造模大鼠60只,随机分成5组,每组12只:实验组消癥煎膏分高、中、低3个剂量组,直肠给药;中桂组,予桂枝茯苓胶囊溶液灌服,每次0.5 m l/kg;模型组。另设空白组12只,每天灌服0.9%生理盐水,0.5 m l/kg/次,以上各组均给药3次/d,共4周。停药后第1天内处死大鼠,立即取标本实验研究。结果治疗组大鼠子宫重量明显减轻,宫颈和宫体处最大直径显著缩小,与模型组比治疗组子宫系数降低明显;实验组3个剂量的TGF-β3水平与模型组比较P<0.05,有显著意义;中桂组与模型组比较,P<0.05;模型组与空白组比较,P<0.01,有非常显著意义。结论消癥煎膏能使子宫肌瘤缩小,明显降低TGF-β3表达,抑制子宫肌瘤细胞增殖,使肌瘤缩小,因此推测其内可能含有TGF-β抗体类物质在起作用。

关键词： 大鼠肾小球系膜细胞   转化生长因子β1   信号转导通路   高糖状态   蛋白表达   活化   细胞转化生长因子β   细胞内信号转导  

摘要： JAK—STAT通路是近年发现的一组信号转导通路．能介导多种细胞因子和生长因子的细胞内信号转导过程。有研究提示JAK2-STAT3通路可能与系膜细胞的增殖、肥大及细胞外基质分泌有关。本研究旨在探讨高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞JAK2-STAT3信号转导通路的活性变化及用AG-490（tyrphostin B42，JAK—STAT通路特异性阻断剂）抑制此通路活化对大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1（TGF—β1）、纤连蛋白（FN）表达的影响，为进一步探讨JAK—STAT信号转导通路与糖尿病肾病发病机制的关系提供新的思路。

关键词： 转化生长因子-β3   前软骨干细胞   分化   软骨形成  

摘要： 目的研究转化生长因子-β3(TGF-β3)诱导大鼠前软骨干细胞(PSCs)向软骨方向分化的可行性以及剂量效应关系。方法在体外将分离纯化的大鼠PSCs置于含有不同剂量TGF-β3的诱导培养液中培养,依据其浓度分为5个实验组和1个对照组(不含TGF-β3),观察细胞生长情况,分别进行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果细胞生长良好。免疫组织化学检测对照组Ⅱ型胶原表达阴性,而含TGF-β3的诱导培养液诱导的各组细胞Ⅱ型胶原表达均阳性,其中10μg/L组阳性率最高。RT-PCR半定量检测也显示10μg/L组Ⅱ型胶原mRNA表达量最多,与其它组比较,差异均有显著意义(P<0.05)。结论TGF-β3在体外能有效诱导PSCs向软骨细胞定向分化。TGF-β3对PSCs促分化作用存在剂量依赖性。

关键词： 关节炎   实验性   转化生长因子β   Foxp3  

摘要： 目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在实验性关节炎中的作用及其机制。方法①将大鼠随机分为模型组和对照组,根据文献建立模型,在建模成功后的不同时间点取脾脏关节滑膜。②采取反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测大鼠脾脏Foxp3 mRNA的表达,采取免疫组织化学半定量法检测脾脏和滑膜转化生长因子(TGF)-β1的表达。结果①Foxp3 mRNA在实验性关节炎大鼠脾脏中的动态表达过程在关节炎急性期表达最高,慢性期逐渐下降,均高于对照组(P<0.01)。②TGF-β1在实验性关节炎大鼠脾脏中的动态表达过程为逐渐增高,到关节炎急性期时,表达降低,慢性期升高,均高于对照组(P<0.01)。③实验性关节炎大鼠脾脏Foxp3 mRNA的表达与TGF-β1的表达呈线性负相关(r=0.8124)。④实验性关节炎大鼠关节滑膜TGF-β1的动态表达过程为逐渐增高,到慢性期下降,均高于对照组(P<0.01)。⑤TGF-β1在实验性关节炎大鼠滑膜中的表达与关节的严重程度有相关关系(与关节炎病理评分的r=0.9474)。结论①在实验性关节炎大鼠中,CD4+CD25+调节性T细胞的增减与炎症反应的强弱呈正相关,可能因其功能存在缺陷,不能有效抑制机体的自身免疫反应。②抑制性因子TGF-β1产生相对不足并且分泌延迟可能是造成实验性关节炎大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞功能缺陷的原因之一。③在实验性关节炎大鼠中Foxp3表达基因是否存在缺陷,有待进一步研究证实。

关键词： 病理性瘢痕   转化生长因子β3   成纤维细胞   增殖   凋亡  

摘要： 目的探讨TGF-β3对病理性瘢痕成纤维细胞增殖-凋亡的作用。方法收集病理性瘢痕标本58例、正常瘢痕标本42例和正常皮肤30例。采用免疫组织化学法检测TGF-β3、PCNA,以及TUNEL检测标本中成纤维细胞凋亡水平。结果TGF-β3在病理性瘢痕组织中的表达低于正常瘢痕组织(P<0.05),而正常皮肤组织中TGF-β3呈阴性表达。而PCNA在病理性瘢痕成纤维细胞中表达水平与正常瘢痕及正常皮肤相比明显增高(P<0.05),正常瘢痕中成纤维细胞PCNA表达情况亦高于正常皮肤(P<0.05);另一方面,病理性瘢痕中成纤维细胞凋亡水平较正常瘢痕降低(P<0.05),而正常皮肤与正常瘢痕间无显著性差异(P>0.05);病理性瘢痕组织中成纤维细胞增殖指数增殖指数与TGF-β3呈负相关关系(P<0.05)。结论TGF-β3可能是通过调节瘢痕组织中成纤维细胞的增殖和/或凋亡水平,来实现对瘢痕形成的调节。TGF-β3表达水平的失控可能是病理性瘢痕形成的重要诱因之一。