关键词： 转化生长因子-β3   前软骨干细胞   分化   软骨形成  

摘要： 目的研究转化生长因子-β3(TGF-β3)诱导大鼠前软骨干细胞(PSCs)向软骨方向分化的可行性以及剂量效应关系。方法在体外将分离纯化的大鼠PSCs置于含有不同剂量TGF-β3的诱导培养液中培养,依据其浓度分为5个实验组和1个对照组(不含TGF-β3),观察细胞生长情况,分别进行Ⅱ型胶原的免疫组织化学检测及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果细胞生长良好。免疫组织化学检测对照组Ⅱ型胶原表达阴性,而含TGF-β3的诱导培养液诱导的各组细胞Ⅱ型胶原表达均阳性,其中10μg/L组阳性率最高。RT-PCR半定量检测也显示10μg/L组Ⅱ型胶原mRNA表达量最多,与其它组比较,差异均有显著意义(P<0.05)。结论TGF-β3在体外能有效诱导PSCs向软骨细胞定向分化。TGF-β3对PSCs促分化作用存在剂量依赖性。

关键词： 关节炎   实验性   转化生长因子β   Foxp3  

摘要： 目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在实验性关节炎中的作用及其机制。方法①将大鼠随机分为模型组和对照组,根据文献建立模型,在建模成功后的不同时间点取脾脏关节滑膜。②采取反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测大鼠脾脏Foxp3 mRNA的表达,采取免疫组织化学半定量法检测脾脏和滑膜转化生长因子(TGF)-β1的表达。结果①Foxp3 mRNA在实验性关节炎大鼠脾脏中的动态表达过程在关节炎急性期表达最高,慢性期逐渐下降,均高于对照组(P<0.01)。②TGF-β1在实验性关节炎大鼠脾脏中的动态表达过程为逐渐增高,到关节炎急性期时,表达降低,慢性期升高,均高于对照组(P<0.01)。③实验性关节炎大鼠脾脏Foxp3 mRNA的表达与TGF-β1的表达呈线性负相关(r=0.8124)。④实验性关节炎大鼠关节滑膜TGF-β1的动态表达过程为逐渐增高,到慢性期下降,均高于对照组(P<0.01)。⑤TGF-β1在实验性关节炎大鼠滑膜中的表达与关节的严重程度有相关关系(与关节炎病理评分的r=0.9474)。结论①在实验性关节炎大鼠中,CD4+CD25+调节性T细胞的增减与炎症反应的强弱呈正相关,可能因其功能存在缺陷,不能有效抑制机体的自身免疫反应。②抑制性因子TGF-β1产生相对不足并且分泌延迟可能是造成实验性关节炎大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞功能缺陷的原因之一。③在实验性关节炎大鼠中Foxp3表达基因是否存在缺陷,有待进一步研究证实。

关键词： 病理性瘢痕   转化生长因子β3   成纤维细胞   增殖   凋亡  

摘要： 目的探讨TGF-β3对病理性瘢痕成纤维细胞增殖-凋亡的作用。方法收集病理性瘢痕标本58例、正常瘢痕标本42例和正常皮肤30例。采用免疫组织化学法检测TGF-β3、PCNA,以及TUNEL检测标本中成纤维细胞凋亡水平。结果TGF-β3在病理性瘢痕组织中的表达低于正常瘢痕组织(P<0.05),而正常皮肤组织中TGF-β3呈阴性表达。而PCNA在病理性瘢痕成纤维细胞中表达水平与正常瘢痕及正常皮肤相比明显增高(P<0.05),正常瘢痕中成纤维细胞PCNA表达情况亦高于正常皮肤(P<0.05);另一方面,病理性瘢痕中成纤维细胞凋亡水平较正常瘢痕降低(P<0.05),而正常皮肤与正常瘢痕间无显著性差异(P>0.05);病理性瘢痕组织中成纤维细胞增殖指数增殖指数与TGF-β3呈负相关关系(P<0.05)。结论TGF-β3可能是通过调节瘢痕组织中成纤维细胞的增殖和/或凋亡水平,来实现对瘢痕形成的调节。TGF-β3表达水平的失控可能是病理性瘢痕形成的重要诱因之一。

关键词： 组织工程心脏瓣膜   P3/4HB   转化生长因子β1   缓释  

摘要： 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)壳聚糖缓释微球对体外3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯(P3/4HB)无纺支架培养肌成纤维细胞的作用。方法:静电纺丝法制备P3/4HB无纺支架,接种大鼠肌成纤维细胞。在实验组培养基中分别加入TGF-β1缓释微球和TGFβ-1,体外培养1周后行扫描电镜观察,检测羟脯氨酸和DNA含量;并用ELISA法动态检测TGFβ-1缓释微球缓释效果。结果:TGF-β1可从缓释微球中缓慢释放,1周内微球释放率为40.6%。与对照组比较,实验组细胞生长紧密,羟脯氨酸及DNA含量增高。结论:TGFβ-1壳聚糖缓释微球可在体外稳定释放,并具有生物学活性;其运用于P3/4HB无纺支架,可促进细胞增殖和胶原合成,为研究为制备携带壳聚糖TGFβ-1缓释微球的组织工程复合支架打下了良好的基础。

关键词： 骨髓间充质干细胞   诱导因子   藻酸盐   软骨分化  

摘要： 背景:近年来利用藻酸盐微球包被骨髓间充质干细胞进行软骨细胞定向诱导逐渐开展。目的:采用体外藻酸钠微球三维立体培养骨髓间充质干细胞,观察转化生长因子β3在诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化过程中胰岛素样生长因子I的作用。设计、时间及地点:细胞组织工程体外实验,于2007-03/10在武汉大学口腔医学院口腔生物医学工程教育部重点实验室完成。材料:SPF级1月龄雄性Wistar大鼠7只用于制备骨髓间充质干细胞。藻酸钠盐、胰岛素样生长因子I,转化生长因子β3均为Sigma公司产品。方法:第5代骨髓间充质干细胞以3×109L-1密度重悬于1.2%藻酸钠盐溶液中,用22号针头将该溶液缓慢滴加在100mmol/L氯化钙溶液中使其聚合形成凝胶,10min后洗涤微球2次,即为包被骨髓间充质干细胞的藻酸盐微球。联合组加入含100μg/L胰岛素样生长因子I、10μg/L转化生长因子β3的软骨诱导培养基,诱导3周。同时设立胰岛素样生长因子I组、转化生长因子β3组、空白对照组。主要观察指标:甲苯胺蓝染色检测细胞外基质的形成,RT-PCR法及免疫组织化学法检测Ⅱ型胶原和Aggrecan的表达,Western blot检测Sox9蛋白表达及其与PCR产物的相关性。结果:包被于藻酸盐微球的骨髓间充质干细胞经胰岛素样生长因子I、转化生长因子β3联合诱导3周,细胞周围有大量均质蓝染物质。联合组II型胶原和Aggrecan mRNA及蛋白表达水平最高,转化生长因子β3组表达居中,胰岛素样生长因子I组表达较弱,空白对照组几乎无表达(F=10.52,P<0.01)。各组Sox9蛋白表达水平与上述指标类似(F=7.95,P<0.05),Sox9与II型胶原、aggrecan的相关系数分别为0.95和0.91。结论:体外定向诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的过程中,胰岛素样生长因子I可能通过促进Sox-9的表达来起到与转化生长因子β3的协同效应。

关键词： 转化生长因子β1   转化生长因子β3   基质金属蛋白酶-2   基质金属蛋白酶-9   金属蛋白酶组织抑制剂-1  

摘要： 目的 观察重组转化生长因子β1(tgfβ1)和β3(tgfb3)基因对大鼠肝星状细胞株(hsc-t6)的基质金属蛋白酶-2(mmp-2)、基质金属蛋白酶-9(mmp-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(timp-1)表达的影响.方法 (1)构建质粒pcdna3.1(+)-tgfb,和pedna3.1(+)-tgfβ3;(2)瞬时转染:将pcdna3.1(+)-tgfβ1和pedna3.1(+)-tgfβ3分别及共同转染hsc-t6细胞,荧光定量pcr法和免疫印迹法检测转染后24、48和72 h时mmp-2、mmp-9、timp-1 mrna和蛋白的表达;(3)稳定转染:pcdna3.1(+)-tgfβ1转染hsc-t6细胞,经筛选建立高表达tgfβ1的hsc-t6细胞克隆,pcdna3.1(+)-tigfβ3转染细胞克隆,48 h后检测mmp-2、mmp-9和t1mp-1的表达.结果 (1)tgfβ1转染细胞后,mmp-2和timp-1明显增高(p＜0.05),mmp-9无变化;tgfβ3转染细胞后,mmp-2和mmp-9无变化,timp-1 mrna也无变化,但timp-1蛋白明显增高(p＜0.05);共转染组的mmp-2较空白组和对照组明显增加(p＜0.05),mmp-9无改变,timp-1较tgfβ1转染组明显下降(p＜0.05).(2)tgfβ3转染克隆细胞后,mmp-2无明显变化,mmp-9明显增加(p＜0.05),timp-1明显下降(p＜0.05).结论 重组tgfβ3基因可能通过促进mmp-2或mmp-9的活性和抑制timp-l的活性而发挥抗肝纤维化作用. abstract： objective to investigate the effects of transforming growth factorβ1(tgfβ1)and β3 (tgfβ3)gene transfer on mmp-2,mmp-9 and timp-1 expression in hepatic stellate cells(hsc-t6).methods tgfβ1 and tgfβ3 expression plagmids were *** recombinant expression plasmid pcdna3.1(+)-=tgfβ1 and pcdna3.1(+).tgfβ3 were transfected or cotransfected into *** 24,48 and 72 h after transfection,the expression of mmp-2,mmp-9 and timp-1 mrna were detected by real-time quantitative pcr,and the expression of mmp-2,mmp-9 and timp-1 protein were detected by western *** recombinant expression plasmid pcdna3.1(+).tgfβ1 was transfected into hsc-t6,and positive clones were selected by *** positive clones were transfected by the recombinant expression plasmid pcdna3.1(+).tgfβ1,and the expression of mmp-2,mmp-9 and timp-1 were detected at 48 h after *** after transfection with pedna3.1-tgfβ1,mmp-2 and timp-1 increaged remarkably in hsc-t6 cells(p＜0.05),but mmp-9 remained at the sanle level;after transfection with pcdna3.1-tgfβ3,expression levels of mmp-2,mmp-9 and timp-1 mrna were not changed,but timp-1 protein increased remarkably(p＜0.05);in cotransfection group,the expression of mmp-2 was higher than that in the blank and the control groups(p＜0.05),but mmp-9

关键词： Animals   Cell Differentiation/drug effects   Cell Line   Cells, Cultured   Forkhead Transcription Factors/genetics   Forkhead Transcription Factors/metabolism   Gene Expression Regulation/drug effects   Humans   Interleukin-17/biosynthesis   Interleukin-17/genetics   Interleukin-17/metabolism   Mice   Mice, Inbred C57BL   Receptors, Interleukin/genetics   Receptors, Interleukin/metabolism   Receptors, Retinoic Acid/antagonists & inhibitors   Receptors, Retinoic Acid/genetics   Receptors, Retinoic Acid/metabolism   Receptors, Thyroid Hormone/antagonists & inhibitors   Receptors, Thyroid Hormone/genetics   Receptors, Thyroid Hormone/metabolism   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/cytology   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/cytology   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/drug effects   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/drug effects   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/metabolism   T-Lymphocytes, Helper-Inducer/metabolism   Transforming Growth Factor beta/pharmacology  

摘要： T helper cells that produce IL- 17 (T(H)17 cells) promote autoimmunity in mice and have been implicated in the pathogenesis of human inflammatory diseases. At mucosal surfaces, T(H)17 cells are thought to protect the host from infection, whereas regulatory T ( T-reg) cells control immune responses and inflammation triggered by the resident microflora(1-5). Differentiation of both cell types requires transforming growth factor-beta (TGF-beta), but depends on distinct transcription factors: ROR gamma t ( encoded by Rorc(gamma t)) for T(H)17 cells and Foxp3 for T-reg cells(6-8). How TGF-beta regulates the differentiation of T cells with opposing activities has been perplexing. Here we demonstrate that, together with pro- inflammatory cytokines, TGF-beta orchestrates T(H)17 cell differentiation in a concentration-dependent manner. At low concentrations, TGF-b synergizes with interleukin ( IL)- 6 and IL- 21 ( refs 9 - 11) to promote IL- 23 receptor (Il23r) expression, favouring T(H)17 cell differentiation. High concentrations of TGF-beta repress IL23r expression and favour Foxp3(+) T-reg cells. ROR gamma t and Foxp3 are co- expressed in naive CD4(+) T cells exposed to TGF-beta and in a subset of T cells in the small intestinal lamina propria of the mouse. In vitro, TGF-beta-induced Foxp3 inhibits ROR gamma t function, at least in part through their interaction. Accordingly, lamina propria T cells that co-express both transcription factors produce less IL- 17 ( also known as IL-17a) than those that express ROR gamma t alone. IL- 6, IL- 21 and IL- 23 relieve Foxp3- mediated inhibition of ROR gamma t, thereby promoting TH17 cell differentiation. Therefore, the decision of antigen- stimulated cells to differentiate into either T(H)17 or T-reg cells depends on the cytokine- regulated balance of ROR gamma t and Foxp3.

关键词： 转化生长因子β1   Smad蛋白质类   结直肠肿瘤   腺瘤  

摘要： 背景:结直肠腺瘤-腺癌序列是目前公认的结直肠癌发生学说,但关于结直肠腺瘤,特别是高危型结直肠腺瘤中转化生长因子(TGF)-β1通路蛋白表达的临床研究较少。目的:探讨TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7在结直肠癌发生中的作用。方法:选取2000年8月～2006年12月六安市人民医院结直肠息肉标本110例(包括腺瘤性和非腺瘤性息肉)、结直肠癌40例和正常结直肠组织20例,以免疫组化染色检测TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7在各组中的表达,并分析高危型腺瘤中TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7表达与临床病理特征的关系。结果:TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7在息肉组、结直肠癌组和对照组中的表达有显著差异(P<0.05),其表达与高危型腺瘤患者的临床病理特征均不相关。高危型腺瘤和Dukes A期结直肠癌中TGF-β1、Smad3、Smad7的表达有显著差异(P<0.05),而Smad4表达无显著差异。结论:TGF-β1通路可能参与了结直肠癌的发生过程,TGF-β1、Smad3和Smad7可能在结直肠腺瘤的癌变早期起作用。

关键词： 转化生长因子β   肝硬化   胶原合成  

摘要： 目的 观察重组转化生长因子艮（TGF-β3）基因对大鼠肝纤维化细胞模型胶原合成及沉积的影响。方法 （1）构建质粒pcDNA3．1（＋）-TGF-B]和pcDNA3．1（＋）·TGF-β1。（2）将pcDNA3．1（＋）-TGF-β1，转染大鼠肝星状细胞（HSC）-T6，经G418筛选建立稳定高表达TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆。（3）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆，荧光实时定量PCR法检测TGF-β3 mRNA的表达；荧光实时定量PCR法及Western印迹法分别检测TGF-β1、I型胶原、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA和蛋白表达情况。结果 （1）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3和pcDNA3．1（＋）-TGF-β1质粒均可转染HSC-T6细胞，以转染48h时转染效率最高，达28．2％。（2）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染HSC-T6细胞阳性克隆后，与单纯阳性克隆组相比，TGF-β1，mRNA表达无明显改变，而蛋白表达明显低（0．48±0．07 vs 0．66±0．14，P=0．023）；I型胶原mRNA及蛋白的表达明显低（mRNA：7．2±1．0 vs 13．7±0．4，P=0．010，蛋白：0．45±0．21 vs 0．82±0．13，P=0．041），MMP-2 mRNA及蛋白较低，但差异无统计学意义（均P〉0．05），MMP-9mRNA及蛋白表达明显多（均P〈0．05），TIMP-1mRNA及蛋白表达明显低（均P〈0．05）。结论 （1）重组TGF-β3真核表达载体构建正确，在转染阳性克隆细胞48h后获得高效表达；（2）稳定高表达TGF-β1，的HSC-T6细胞阳性克隆可作为肝纤维化细胞模型；（3）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染阳性克隆能减少胶原合成，并通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达对胶原沉积起抑制作用。

关键词： 肝纤维化   转化生长因子β   肝星状细胞   Ⅰ   型胶原  

摘要： 转化生长因子β1（TGFβ1）是激活肝星状细胞（HSC）并促进其胶原合成的最重要因子。TGFD3被认为具有抗组织纤维化的功能。Carrington等研究提示：TGFβ1与TGFβ3的比值是纤维化发生程度的关键因素。