关键词： 转化生长因子β3   肝纤维化   胶原Ⅰ型   重组腺相关病毒  

摘要： 目的通过重组2型腺相关病毒（rAAV2）和基因转导，探讨转化生长因子（TGF）β3对大鼠肝纤维化的影响。方法构建并验证rAAV2-TGFβ3。实验大鼠随机分为正常对照组、模型组、阴性对照组和TGFβ3干预组。40％的四氯化碳复制大鼠肝纤维化模型。在四氯化碳诱导前1周，将rAAV2-TGFβ3注入大鼠尾静脉，造模8周后处死大鼠，取肝脏组织做HE染色观察肝脏组织学改变，Masson染色观察胶原纤维分布，免疫组织化学染色观察Ⅰ型胶原的表达，对胶原纤维的阳性面积比和Ⅰ型胶原的平均吸光度值进行半定量分析。多组数据间比较采用单因素的方差分析，若各组总体方差齐同，采用SNK—q检验，若方差不齐，采用Dunnett’ST3检验。结果HE染色结果显示，rAAV2TGFp3干预后，肝组织纤维间隔增生减少；Masson染色结果显示，大鼠胶原纤维主要分布在血管和汇管区及狄氏间隙，TGFB3干预组大鼠肝内的胶原纤维阳性面积比为7．7％±1．5％，明显低于模型组的13．2％±2．2％和阴性对照组的12．3％±1．5％（q值分别为9．456和8．217，P值均〈0．01）。免疫组织化学染色结果显示，Ⅰ型胶原主要表达在血管和汇管区及狄氏间隙，TGFβ3干预组大鼠肝内的Ⅰ型胶原的表达为0．185±0．033，明显低于模型对照组的0．2524-0．042和阴性对照组的0．230±0．029（q值分别为6．228和4．346，P值均〈0．01）。结论TGFβ3可明显减轻实验大鼠的肝纤维化程度和组织学损伤，降低Ⅰ型胶原的表达。

关键词： 间充质干细胞   TGF-β   转化生长因子-β   细胞分化   藻酸盐   蛋白质   软骨   骨髓  

摘要： Shen等的研究重点指出了BMP-2和TGF—β3在体外诱导骨髓多潜能间充质干细胞（BMMSCs）成软骨分化中的协同作用和其在椎间盘修复中的潜在应用价值。在不含血清的培养基中，以BMP-2和TGF—β3诱导藻酸盐微球包被的人骨髓多潜能间充质干细胞分化，并通过实时聚合酶链反应（real-time PCR）、Western印迹、组织学和免疫组织化学分析的方法分析成软骨基因和蛋白质的表达情况。

关键词： 辛伐他汀   心肌梗死   心室重构   转化生长因子β1   Smad3  

摘要： 目的探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对大鼠心肌梗死后心室重构的作用及其机制。方法建立大鼠心肌梗死模型,24 h后存活大鼠随机分成心肌梗死组(MI,n=9)、辛伐他汀10 mg组(10 ***-1.d-1,Sim1,n=8)、20 mg组(20 ***-1.d-1,Sim2,n=10)和40 mg组(40 ***-1.d-1,Sim4,n=9),设假手术组(Sham,n=10)。4 wk后观察血脂水平、血流动力学指标、心室重量指数和左室非梗死区胶原容积分数,Western blot和RT-PCR检测转化生长因子β1和Smad3在非梗死区的表达。结果①各组血脂水平差异无统计学意义,MI组左室重量指数增加、非梗死区Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数及Ⅰ/Ⅲ比值均增加,左心室功能受损;Sim各组LVWI、非梗死区Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数及Ⅰ/Ⅲ比值下降(但仍高于Sham组),左心室功能明显改善。②MI组转化生长因子β1和Smad3表达明显增加,Sim各组表达则明显降低(但仍高于Sham组)。结论辛伐他汀能有效改善大鼠心肌梗死后心室重构和心功能,机制与其调脂作用无关,可能与其抑制TGF-β1/Smad3信号转导有关。

关键词： 哮喘   转化生长因子β1   Smad2/3   中性粒细胞   信号转导  

摘要： 目的观察转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1，TGF—β1）及Smad 2／3在支气管哮喘（简称哮喘）大鼠血中性粒细胞（polymorphonuclear leucocyte，PMN）中的表达及布地奈德对其的影响，探讨PMN通过TGF-β1／Smad信号通路参与哮喘气道炎症的可能作用机制。方法采用大鼠哮喘模型，随机分成哮喘组（A组）、正常对照组（C组）和布地奈德治疗组（B组），对血PMN进行分离纯化，免疫细胞化学法检测血PMN中TGF-β1。和Smad2／3的表达水平。结果与C组（0．131±0．015 OD值）相比，PMNTGF-β1的表达水平在A组（0．228±0．016 OD值）和B组（0．164土0．017 OD）值）差异均具有统计学意义（P值均〈0．01）；B组与A组相比，TGF-β1的表达水平差异也具有统计学意义（P〈0．01）。与C组（0．081±0．011 OD值）相比，PMN Smad2的表达水平在A组（0．142±0．021 OD值）和B组（0．110±0．010 OD值）差异均具有统计学意义（P值均〈0．01）；B组与A组相比，PMN Smad2／3的表达水平也具有显著统计学意义（P〈0．01）。两者的表达呈显著正相关（r=0．776，P〈0．01）。结论PMN能合成TGF—β1和Smad2／3，且哮喘时其合成水平增加，其合成功能可以被布地奈德所抑制。PMN可能通过TGF-β1／Smad信号转导途径参与哮喘的气道炎症过程。

关键词： 肝硬化   转化生长因子β3   基质金属蛋白酶类   重组腺相关病毒  

摘要： 目的通过重组2型腺相关病毒（rAAV2）和基因转导，探讨转化生长因子β3（TGFβ3）对肝纤维化大鼠肝脏组织MMP-9、MMP-2、TIMP-1和Ⅰ型胶原表达的影响。方法将实验大鼠随机分为正常对照组、模型组、阴性对照组和TGFβ3干预组。用40％的四氯化碳（CCl4）复制大鼠肝纤维化模型。在CCl4诱导前1周，将rAAV2-TGFβ3注入大鼠尾静脉。造模8周后处死大鼠，取肝脏组织做HE染色观察肝脏组织学改变；免疫组织化学染色观察MMP-9、MMP-2、TIMP-1和Ⅰ型胶原的表达，并对其阳性面积比进行半定量分析。结果TGFβ3干预组与模型组和阴性对照组比较，肝脏组织炎性浸润明显减轻，纤维间隔增生减少，MMP-9的表达明显增加（q=23．664、27．746，P值均〈0．01），Ⅰ型胶原（q=5．503、5．251，P值均〈0．01）和TIMP-1（q=5．800、8．608，P值均〈0．01）的表达明显下降，但MMP-2表达的差异无统计学意义（q=2．108、0．996，P值均〉0．05）。结论rAAV2-TGFβ3可通过抑制大鼠肝脏组织内TIMP-1和Ⅰ型胶原的表达，促进MMP-9的表达，增加胶原纤维的降解，减轻肝脏组织学损伤和纤维化程度。

关键词： 骨髓间充质干细胞   藻酸盐   软骨分化   软骨组织工程  

摘要： 目的探讨β3转化生长因子（TGF-β3）在诱导骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）向软骨细胞分化中胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的作用以及在软骨组织工程中的应用。方法在体外用TGF—β3或（和）IGF-1诱导藻酸钠微球中的MSCs向软骨细胞定向分化，免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖（aggrecan）的表达，Western印迹法检测Sox9蛋白的表达，激光共聚焦显微镜和扫描电镜观察该软骨细胞在壳聚糖支架上的生长。结果TGF-β3。能诱导藻酸钠微球中的MSCs表达软骨特异性的Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖和Sox9，IGF-1能显著性地增强这种作用（P〈0．05）。Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖和Sox9之间的相关系数分别为0．95和0．91。诱导的软骨细胞能在壳聚糖支架上黏附、迁徙、增殖。结论在TGF-β3诱导MSCs分化成软骨细胞地过程中，IGF-1可能通过促进Sox9的表达起到协同作用。诱导分化后的软骨细胞与壳聚糖复合支架表现出良好的组织相容性。

关键词： 转化生长因子β   干细胞   转染   细胞分化  

摘要： 目的探讨稳定表达重组转化生长因子-β3（hTGF-β3）对前软骨干细胞（precartilaginous stem cells，PSCs）增殖及向成软骨方向定向分化的诱导作用。方法免疫磁珠法分离纯化得到新生大鼠PSCs后，用线性化的聚乙烯亚胺转染pcDNA3．1（＋）-hTGF-β3到体外单层培养的PSCs中，抗生素筛选使其稳定表达。采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）、流式细胞术（FCM）测定转染对PSCs增殖和DNA合成的影响，实时定量RT-PCR、免疫组化及Western blot方法比较转染后目的基因和软骨特异性标志物表达的情况。结果hTGF-β3在分离纯化的PSCs中稳定表达。与未转染组细胞相比，转染后细胞DNA合成增多，增殖速度加快。PCR和免疫组化学结果表明，转染后软骨标志物基因上调明显，分泌软骨多糖基质及Ⅱ型胶原蛋白也明显增加。结论通过hTGF-β3基因强化的PSCs可以稳定表达高效的hTGF-β3蛋白，从而促进PSCs的增殖并向成软骨方向分化，为软骨缺损的高效修复提供了新的思路。

关键词： 成纤维细胞   Smad3   转化生长因子β1   RNA干扰   Ⅰ型胶原  

摘要： 目的观察siRNA-Smad3对TGF-β1诱导的肌成纤维细胞(C2C12)分泌Ⅰ型胶原的影响。方法用不同浓度的TGF-β1(0、1、5和10ng/mL)干预C2C12细胞24h,200pmol/L siRNA-smad3转染C2C12细胞24h,用ELISA和RT-PCR方法测定Ⅰ型胶原蛋白和mRNA表达。结果0、1、5和10ng/mL TGF-β1干预C2C12细胞,Ⅰ型胶原蛋白(ng/mL)检测结果分别为(616±16),(713±19),(783±23),(853±17),Ⅰ型胶原mRNA表达(Ⅰ型胶原/β-actin光密度比值)分别为(0.93±0.08),(1.83±0.17),(2.50±0.29),(2.94±0.14),三组间相互比较P均<0.01。200pmol/L siRNA-Smad3转染C2C12细胞24h后,用5ng/mL TGF-β1分别干预24h后检测Ⅰ型胶原蛋白:实验组、空白对照组、内对照组分别为(413±20)、(473±29)、(571±29)ng/mL;Ⅰ型胶原mRNA表达分别为(0.78±0.17)、(0.86±0.10)、(1.85±0.19)。内对照组表达增强(与实验组比较P<0.05)。结论TGF-β1促进C2C12细胞Ⅰ型胶原合成与mRNA表达呈剂量依赖性;siRNA阻断Smad3表达,抑制了TGF-β1促进Ⅰ型胶原合成与mRNA表达的作用。

关键词： 干扰素-α   转化生长因子-β1   Smad3   Smad7   肝纤维化  

摘要： 目的 肝纤维化是多种慢性肝病共有的组织学变化,肝星状细胞(HSC)的活化和增殖是肝纤维化形成的关键和中心环节。转化生长因子-β(TGF-β)是调控肝纤维化发生、发展的核心物质。Smads蛋白是TGF-β信号转导过程中最重要的胞内效应因子,它能将TGF-β信号由胞膜转入核内。Smad3过度表达及Smad7被抑制是肝组织纤维化的主要原因。IFN-α具有抗肝纤维化的作用。至于IFN-α对TGF-β/Smad信号转导通路中Smad蛋白家族是否有影响尚未见报道。本研究通过检测IFN-α对TGF-β刺激体外培养的HSC表达Smad3与Smad7的动态变化,探讨IFN-α对TGF-β刺激体外培养的HSC表达Smads蛋白的影响,阐明其抗肝纤维化机制,为临床肝纤维化的药物治疗提供更多的理论依据。 材料与方法 一、实验材料 1、大鼠肝脏星状细胞株(r-HSC99) 由北京大学人民医院冷希圣教授惠赠,由中国医科大学附属盛京医院感染科研究室保存。r-HSC99是经长期培养,传代后自发产生的,符合HSC的自然特征,是研究肝纤维化理想的实验模型。 2、主要试剂 TGF-β;重组人干扰素-α2b;β-actin引物、Smad3引物、Smad7引物、逆转录试剂盒;羊抗大鼠Smad3多克隆抗体;羊抗大鼠Smad7多克隆抗体。兔抗山羊IgG抗体。 二、实验方法 体外培养大鼠肝星状细胞系r-HSC99,分为TGF-β组、TGF-β+IFN-α组。分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫印迹(Western blotting)方法,测定各组于培养0、2、4、8、16、24小时,HSC表达Smad3、Smad7的mRNA及蛋白变化。 三、统计学处理 应用SPSS13.0软件进行分析,数据以均数±标准差表示,各组之间是否存在显著性差异分析采用LSD-t检验,以P＜0.05为差异有统计学意义。 实验结果 1、HSC表达Smad3、Smad7 mRNA的结果 0小时的Smad3 mRNA/β-actine值为0.524±0.022,TGF-β组2、4、8、16、24小时Smad3 mRNA/β-actine值分别为0.591±0.039、0.761±0.023、0.896±0.033、0.779±0.020、0.648±0.037;IFN-α+TGF-β组2、4、8、16、24小时Smad3mRNA/β-actine值分别为0.562±0.038、0.593±0.033、0.705±0.031、0.647±0.020、0.579±0.024。在TGF-β作用下,随着时间的增加,两组Smad3 mRNA表达均增加,在8小时达到高峰,之后开始下降,与0小时相比,Smad3 mRNA在4、8、16、24小时组差异均有统计学意义(P＜0.05);IFN-α+TGF-β组与TGF-β组按时间相比,IFN-α+TGF-β组Smad3 mRNA表达低于TGF-β组,在4、8、16小时组差异均有统计学意义(P＜0.05)。 0小时的Smad7 mRNA/β-actine值为0.513±0.135,TGF-β组2、4、8、16、24小时Smad7 mRNA/β-actine值分别为0.604±0.034、0.764±0.022、0.855±0.027、0.775±0.032、0.668±0.033;IFN-α+TGF-β组2、4、8、16、24小时Smad7mRNA/β-actine值分别为0.672±0.029、0.949±0.038、1.126±0.026、0.933±0.015、0.631±0.088。随着时间的增加,两组Smad7 mRNA表达均增加,在8小时达到高峰,之后开始下降,与0小时相比,Smad7 mRNA在4、8、16小时组差异均有统计学意义(P＜0.05);IFN-α+TGF-β组与TGF-β组按时间相比,IFN-α+TGF-β组Smad7 mRNA表达高于TGF-β组,在4、8、16小时组差异均有统计学意义(P＜0.05)。 2、HSC表达Smad3、Smad7蛋白的结果 0小时的Smad3蛋白/β-actine值为0.291±0.031,TGF-β组2、4、8、16、24小时Smad3蛋白/β-actine值分别为0.321±0.055、0.393±0.034、0.569±0.035、0.556±0.034、0.395±0.022;IFN-α+TGF-β组2、4、8、16、24小时Smad3蛋白/β-actine值分别为0.307±0.072、0.390±0.029、0.451±0.027、0.433±0.0220.330±0.026。在TGF-β作用下,随着时间的增加,两组Smad3蛋白表达均增加,在8小时达到高峰,之后开始下降,与0小时相比,Sma

关键词： 肝纤维化   转化生长因子-3   基因转导   组织病理   抗肝纤维化作用  

摘要： 目的:转化生长因子-3(TGF-3)是TGF-β家族的一员，近年来发现它在促进创面愈合和减轻瘢痕形成的过程中发挥重要作用。细胞外基质(ECM)的沉积增多或(和)降解减少是瘢痕组织形成的中心机制。肝纤维化的形成机制与其相似，但是TGF-3的抗肝纤维化作用则未见报道。因此，本实验通过基因转导，将2型重组腺相关病毒携带转化生长因子-3(rAAV2-TGF3)基因，观察其对肝纤维化大鼠肝脏组织病理学和I型胶原、MMP-9、MMP-2和TIMP-1表达的影响。　　 方法:(1)构建并验证rAAV2-TGβ3。(2)实验大鼠随机分为四组：TGF-3干预组、模型组、正常对照组和阴性对照组。用40[％]的四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型。在CCl4诱导前一周，将rAAV2-TGFβ3注入大鼠尾静脉，造模8周后处死大鼠，取肝脏组织做HE染色观察肝脏组织学改变;masson染色和免疫组织化学染色观察胶原纤维的变化和I型胶原、MMP-9、MMP-2和。TIMP-1的表达，并对其阳性面积比进行半定量分析。　　 结果:(1)HE染色：TGF-3干预组与模型组和阴性对照组相比，肝组织炎症浸润明显减轻，纤维间隔增生减少。(2)masson染色：大鼠胶原纤维主要分布在血管和汇管区及狄氏间隙。正常对照组、模型组、阴性对照组和TGF-3干预组的胶原纤维含量分别为(O.017±O.015)、(O.132±O.022)、(O.123±O.015)、(O.077±O.015)。与模型组和阴性对照组比较，TGF-3干预组大鼠肝脏组织内的胶原纤维含量明显下降(P均