关键词： 乳腺癌   小RNA干扰   TGF-β   Smad3   MMP-9  

摘要： 目的观察应用Smad3特异性小分子干扰RNA（siRNA）在乳腺癌MDA-MB-231细胞中对MMP-9表达的影响。方法化学合成Smad3 siRNA，并将其转染到MDA-MB-231细胞后行转化生长因子（TGF）-β（1μg／L）刺激。24h后利用萤光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子（4xSBE）的活性；48h后应用Western blot法测定Smad3、基质金属蛋白酶（MMP）-9蛋白水平表达；24h后应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法观察MMP-9 mRNA水平表达。结果与对照组比较，Smad3 siRNA有意义地抑制Smad3蛋白的表达（0．5±0．1比1．0±0．2）。Smad3 siRNA有意义地抑制TGF—β诱导的4xSBE活性（5．2±0．3比1．0±0．1；P〈0．05）。Smad3蛋白的表达（0．5±0．1比1．0±0．2）与对照组比较TGF-β刺激组明显激活了MMP-9 mRNA和蛋白水平的表达（2．4±0．3比1．0±0．1和1．8±0．4比1．0±0．2），而Smad3 siRNA有意义地抑制了TGF-β激活的MMP-9 mRNA和蛋白水平的高表达（1．3±0．2比2．4±0．3和1．1±0．2比1．8±0．4）。结论构建的Smad3 siRNA能够抑制MDA—MB-231细胞中TGF—β诱导的MMP-9的表达。

关键词： 血管紧张素转移酶   血管紧张素Ⅱ   肌营养不良   转化生长因子-β   3  

摘要： 目的了解转化生长因子-β3(TGF-β3)和血管紧张素转移酶(ACE)是否参与了肌营养不良(MD)的肌肉病变,且是否与肌肉纤维化有关。方法回顾1986—2000年日本东北大学医学部附属病院儿科收治的19例MD患儿资料,应用免疫组织化学和三免疫荧光标记检测,其中9例Duchenne型肌营养不良(DMD)、3例Becker型肌营养不良(BMD)和7例先天性肌营养不良(CMD)患儿肌肉活检标本中TGF-β3及ACE的表达及共同定位。6例对照为疑似MD患者,肌肉组织化学等检查排除肌肉病变。结果免疫组化显示TGF-β3和ACE在MD中的表达明显增加,TGF-β3免疫表达部位与ACE基本相同,正常肌肉只在血管中表达。病变肌肉除血管明显表达外,TGF-β3和ACE免疫染色也一致分布于再生肌纤维的细胞浆和细胞核以及炎症细胞和炎症细胞浸润的坏死纤维中;所有DMD和CMD患儿肌肉中,含有成纤维细胞的肌内膜和肌束膜的结缔组织TGF-β3和ACE多为强阳性;但具有晚期纤维化的CMD和FCMD普遍显示TGF-β3和ACE弱反应;三免疫荧光标记显示DMD和CMD患儿肌肉肌内膜和肌束膜中大多数激活的成纤维细胞表达TGF-β3和ACE,两者在萎缩肌肉内也共同定位。结论病变局部TGF-β3和ACE表达增加,表明肌肉组织中肾素-血管紧张素系统在MD时被激活,可能与TGF-β3共同参与MD的发病,并在肌肉纤维化中起重要作用。

关键词： Smad3   转化生长因子β1   牙本质基质蛋白1   人牙髓干细胞   转录活性  

摘要： 目的:观察Smad3在转化生长因子β1(TGF-β1)调控人牙本质基质蛋白1(DMP1)转录表达中的作用并对DMP1基因启动子上的结合位点进行初步定位。方法:将Smad3瞬时转染至具有矿化活性的人牙髓干细胞(HDPSC)中,观察Smad3蛋白表达和转位情况,并检测在有无TGF-β1的刺激下细胞中pGL3-P-193～+86和pGL3-P-505～+86启动子活性的变化。pGL3-P-505～+86与Smad3共转染至细胞中,10ng/ml TGF-β1刺激2h后,提取细胞核蛋白,EMSA法检测DMP1基因启动子-505～-193bp区存在的Smad3结合位点。结果:HDPSC中瞬时转染Smad3后,其主要表达于细胞胞浆中,随着TGF-β1刺激不同时间后,Smad3在细胞中的表达出现从胞浆到胞核的转位。Smad3可明显加强TGF-β1下调pGL3-P-193～+86和pGL3-P-505～+86启动子活性的作用,在DMP1基因启动子-505～-193bp区至少有一个Smad3结合区域为-209～-201bp区的GTCTAGTCA序列。结论:Smad3是TGF-β1信号通路的下游作用分子,可介导TGF-β1下调DMP1基因转录过程,DMP1基因启动子-209～-201bp区序列为Smad3结合区域。

关键词： 红斑狼疮,系统性   T淋巴细胞   转化生长因子β  

摘要： 目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血调节性T淋巴细胞F0xD3 mRNA和转化生长因子（TGF）-β1的水平与SLE病情活动的关系。方法对SLE患者采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达。对病情活动组患者进行随访．在疾病稳定期再次检测Foxp3 mRNA水平并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测疾病缓解前后血浆TGF-β1的浓度。结果病情活动组Foxp3 mRNA水平明显低于非活动组（P〈0．01）和健康对照组（P〈0．01）。在疾病稳定期Foxp3mRNA水平和血浆TGF—β1浓度较活动期明显升高。结论Foxp3表达及TGF—β1浓度与SLE疾病活动呈负相关，提示调节性T淋巴细胞在SLE发病中有重要作用。

关键词： 黑色素瘤   内皮缩血管肽类   受体   内皮素A   转化生长因子β1  

摘要： 目的探讨内皮素家族（ET）对恶性黑素瘤（MM）A375细胞转化生长因子betal（TGF—β1）表达的差异性调节及对TGF—β信号通路蛋白Smad 3磷酸化水平的影响。方法ELISA、RT—PCR技术测定不同浓度ET-1、ET-3（0、0．1、1、10、100nmol/L）及其与内皮素受体阻断剂BQ123、BQ788联合干预下MM细胞TGF—β1在蛋白质和mRNA水平的表达。Western印迹法检测联合干预下A375细胞Smad 3蛋白磷酸化的表达。结果ET-1对A375细胞（10^5细胞）TGF—β1蛋白表达的影响呈浓度依赖性上调，100nmol／L浓度下达1289．38±89．42ng/L（P〈0．05）；ET-3的作用与此相反，100nmol／L浓度下表达仅为85．09±9．37ng/L（P〈0．05）。BQ123明显阻断ET-1上调TGF—β1的效应（P〈0．05），BQ788对此差异无统计学意义（P〉0．05）；联合干预下，在TGF—β1 mRNA水平也表现出相同的趋势。Western印迹法检测磷酸化Smad3蛋白（P—Smad3）表达显示，ET-1显著上调P—Smad3的表达（P〈0．05），BQ123干预下其表达水平接近对照组（P〉0．05），BQ788不能阻断其对P—Smad3表达的上调（P〉0．05）；ET-3则明显抑制P-Smad3的表达（P〈0．05）。结论ET-1可诱导MMA375细胞TGF-β1的高表达，ET-3有相反的作用。ET受体-A介导ET-1诱导的TGF—β通路信号蛋白Smad3的磷酸化。

关键词： 维生素A缺乏   胎肺   转化生长因子β3  

摘要： 目的比较产前给予维生素A缺乏饲料对大鼠胎肺转化生长因子(TGF)-β3基因和蛋白表达的影响。方法24只孕鼠随机分为维生素A缺乏饲料组(15只)和正常饲料(对照)组(9只)。孕21d取胎鼠肺,RT-PCR法检测TGF-β3mRNA表达水平,免疫组织化学法检测TGF-β3蛋白表达水平。结果维生素A缺乏饲料组TGF-β3基因和蛋白表达水平均低于正常饲料组(P<0.05)。结论产前给予维生素A缺乏饲料能影响大鼠胎肺TGF-β3mRNA及TGF-β3蛋白的表达,从而干扰胎肺功能的发育。

关键词： 转化生长因子β3   肝纤维化   胶原Ⅰ型   重组腺相关病毒  

摘要： 目的通过重组2型腺相关病毒（rAAV2）和基因转导，探讨转化生长因子（TGF）β3对大鼠肝纤维化的影响。方法构建并验证rAAV2-TGFβ3。实验大鼠随机分为正常对照组、模型组、阴性对照组和TGFβ3干预组。40％的四氯化碳复制大鼠肝纤维化模型。在四氯化碳诱导前1周，将rAAV2-TGFβ3注入大鼠尾静脉，造模8周后处死大鼠，取肝脏组织做HE染色观察肝脏组织学改变，Masson染色观察胶原纤维分布，免疫组织化学染色观察Ⅰ型胶原的表达，对胶原纤维的阳性面积比和Ⅰ型胶原的平均吸光度值进行半定量分析。多组数据间比较采用单因素的方差分析，若各组总体方差齐同，采用SNK—q检验，若方差不齐，采用Dunnett’ST3检验。结果HE染色结果显示，rAAV2TGFp3干预后，肝组织纤维间隔增生减少；Masson染色结果显示，大鼠胶原纤维主要分布在血管和汇管区及狄氏间隙，TGFB3干预组大鼠肝内的胶原纤维阳性面积比为7．7％±1．5％，明显低于模型组的13．2％±2．2％和阴性对照组的12．3％±1．5％（q值分别为9．456和8．217，P值均〈0．01）。免疫组织化学染色结果显示，Ⅰ型胶原主要表达在血管和汇管区及狄氏间隙，TGFβ3干预组大鼠肝内的Ⅰ型胶原的表达为0．185±0．033，明显低于模型对照组的0．2524-0．042和阴性对照组的0．230±0．029（q值分别为6．228和4．346，P值均〈0．01）。结论TGFβ3可明显减轻实验大鼠的肝纤维化程度和组织学损伤，降低Ⅰ型胶原的表达。

关键词： 间充质干细胞   TGF-β   转化生长因子-β   细胞分化   藻酸盐   蛋白质   软骨   骨髓  

摘要： Shen等的研究重点指出了BMP-2和TGF—β3在体外诱导骨髓多潜能间充质干细胞（BMMSCs）成软骨分化中的协同作用和其在椎间盘修复中的潜在应用价值。在不含血清的培养基中，以BMP-2和TGF—β3诱导藻酸盐微球包被的人骨髓多潜能间充质干细胞分化，并通过实时聚合酶链反应（real-time PCR）、Western印迹、组织学和免疫组织化学分析的方法分析成软骨基因和蛋白质的表达情况。

关键词： 辛伐他汀   心肌梗死   心室重构   转化生长因子β1   Smad3  

摘要： 目的探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对大鼠心肌梗死后心室重构的作用及其机制。方法建立大鼠心肌梗死模型,24 h后存活大鼠随机分成心肌梗死组(MI,n=9)、辛伐他汀10 mg组(10 ***-1.d-1,Sim1,n=8)、20 mg组(20 ***-1.d-1,Sim2,n=10)和40 mg组(40 ***-1.d-1,Sim4,n=9),设假手术组(Sham,n=10)。4 wk后观察血脂水平、血流动力学指标、心室重量指数和左室非梗死区胶原容积分数,Western blot和RT-PCR检测转化生长因子β1和Smad3在非梗死区的表达。结果①各组血脂水平差异无统计学意义,MI组左室重量指数增加、非梗死区Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数及Ⅰ/Ⅲ比值均增加,左心室功能受损;Sim各组LVWI、非梗死区Ⅰ、Ⅲ型胶原容积分数及Ⅰ/Ⅲ比值下降(但仍高于Sham组),左心室功能明显改善。②MI组转化生长因子β1和Smad3表达明显增加,Sim各组表达则明显降低(但仍高于Sham组)。结论辛伐他汀能有效改善大鼠心肌梗死后心室重构和心功能,机制与其调脂作用无关,可能与其抑制TGF-β1/Smad3信号转导有关。

关键词： 哮喘   转化生长因子β1   Smad2/3   中性粒细胞   信号转导  

摘要： 目的观察转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1，TGF—β1）及Smad 2／3在支气管哮喘（简称哮喘）大鼠血中性粒细胞（polymorphonuclear leucocyte，PMN）中的表达及布地奈德对其的影响，探讨PMN通过TGF-β1／Smad信号通路参与哮喘气道炎症的可能作用机制。方法采用大鼠哮喘模型，随机分成哮喘组（A组）、正常对照组（C组）和布地奈德治疗组（B组），对血PMN进行分离纯化，免疫细胞化学法检测血PMN中TGF-β1。和Smad2／3的表达水平。结果与C组（0．131±0．015 OD值）相比，PMNTGF-β1的表达水平在A组（0．228±0．016 OD值）和B组（0．164土0．017 OD）值）差异均具有统计学意义（P值均〈0．01）；B组与A组相比，TGF-β1的表达水平差异也具有统计学意义（P〈0．01）。与C组（0．081±0．011 OD值）相比，PMN Smad2的表达水平在A组（0．142±0．021 OD值）和B组（0．110±0．010 OD值）差异均具有统计学意义（P值均〈0．01）；B组与A组相比，PMN Smad2／3的表达水平也具有显著统计学意义（P〈0．01）。两者的表达呈显著正相关（r=0．776，P〈0．01）。结论PMN能合成TGF—β1和Smad2／3，且哮喘时其合成水平增加，其合成功能可以被布地奈德所抑制。PMN可能通过TGF-β1／Smad信号转导途径参与哮喘的气道炎症过程。