关键词： 急性肺损伤   肺泡巨噬细胞   转化生长因子-βⅠ型受体  

摘要： 背景：急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是临床常见的危重急症,是由多种肺外致病危险因子导致的以血管通透性增加为主要临床表现的肺的炎症综合征,其发病机制非常复杂,死亡率高。其病理表现为肺泡腔内炎性细胞的浸润,肺泡毛细血管内皮损伤,通透性增加,肺水肿,最终导致肺泡壁完整性的破坏。早期肺损伤组织重建和晚期肺纤维化形成之间存在着密切关联。由于病因较多、发病机制不十分清楚,目前尚无有效的治疗方法。内毒素是导致ALI的重要因素之一。探索LPS导致的ALI发病的分子机制及新的干预靶点以减轻或防止ALI的发生和发展,具有重要的临床意义。 研究显示,转化生长因子-β(Transforming growth factor P, TGF-β)在包括肺部在内的多器官中的组织损伤均起关键性作用。活化的TGF-β在Ⅲ型受体的调节作用下,首先与2个Ⅱ型受体结合,再募集2个Ⅰ型受体形成复合体,磷酸化Ⅰ型受体的GS功能域,使其活化,随之活化的Ⅰ型受体再磷酸化相应的下游信号分子Smads蛋白发挥生物学效应。但具体哪几个TGF-βⅠ型受体亚型参与ALI的发生和发展过程尚不清楚。因此我们研究TGF-βⅠ型受体亚型ALK-1、2、3、5在正常肺组织和ALI发生和发展中的分布和变化规律,筛选出在ALI中高表达的受体亚型,以求达到减轻或防止ALI的作用。 目的：明确TGF-βⅠ型受体亚型ALK-1、2、3、5在正常肺组织和LPS所致的ALI中的分布和变化规律；探讨上述TGF-βⅠ型受体亚型在ALI中的表达,综合的分析TGF-βⅠ型受体亚型在ALI发生和发展中的分布和变化规律,为防治ALI提供新的理论依据。 方法：制作大鼠急性肺损伤的动物模型,通过实时荧光定量PCR(Real Time-PCR)技术来检测TGF-βⅠ型受体亚型在正常肺组织和ALI发生和发展中的分布和变化规律,结合肺组织的病理改变,筛选出有意义的TGF-βⅠ型受体亚型。 结果： ***染色的病理切片观察 HE染色可见各造模组均有程度不等的肺泡炎,肺泡腔内有不同程度的炎性细胞浸润。其中8h组炎症细胞浸润最明显,24h及48h组除炎细胞浸润外还可见肺泡腔内有淡红色液体渗出。72h组见肺水肿现象较前减轻,但仍有炎性细胞浸润。7天组见炎细胞数量减少,水肿液逐渐吸收。 *** Time-PCR结果显示： 与正常组相比,模型组ALI大鼠肺泡灌洗液中TGF-βⅠ型受体ALK-1 mRNA的表达于损伤后48h开始上升并随炎症时间的延长逐渐增高,于72h达高峰,后逐渐回落；而ALK-3 mRNA随着肺损伤时间延长呈逐渐上升趋势,于24h达到最高峰,后逐渐下降,至72h又再次升高,后逐渐下降。TGF-βⅠ型受体亚型ALK-5 mRNA表达于注射LPS后8h升高,随着损伤时间延长逐渐回落,于24h达到最低水平,后又逐渐升高,于7天达最高峰。ALK-2 mRNA在损伤后始终处于低表达状态,没有明显升高。运用重复测量资料的方差分析,各TGF-βⅠ型受体亚型随时间点的变化比较均为P＜0.05,有统计学意义。 结论： ALK-1、ALK-3、ALK-5在ALI发生发展过程中呈高表达,可能参与了ALI的发生发展。

关键词： 转化生长因子-β3   肝星状细胞   肝纤维化  

摘要： 目的:肝纤维化是由于过多的细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）在肝内沉积所致。转化生长因子（transforming growth factor,TGF）-β1能抑制肝细胞再生,促进肝星状细胞（Hepatic stellate cell,HSC）活化,使ECM合成增加,降解减少,在肝纤维化的发生、发展中具有重要的作用。临床研究发现在皮肤瘢痕的愈合过程中TGF-β3具有拮抗TGF-β1的作用,但TGF-β3与肝纤维化的关系尚未见报导,本研究旨在观察TGF-β3对大鼠HSC胶原合成和分泌的影响,探讨TGF-β3的抗肝纤维化作用。 方法:构建质粒pcDNA3. 1 （ + ）-TGF-β3和pcDNA3. 1 （ + ）-TGF-β1。稳定转染:通过脂质体介导的方法,将pcDNA3. 1 （ + ）-TGF-β1转染HSC-T6,经G418筛选建立稳定高表达pcDNA3. 1 （ + ）–TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆。再将pcDNA3. 1 （ + ）–TGF-β3转染HSC-T6克隆细胞,用Western blot法和酶联免疫吸附法（ ELISA）分别检测细胞内外TGF-β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase,MMP）-2、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂（Tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP）-1的蛋白表达量。 结果:pcDNA3. 1 （ + ）-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆后,与单纯阳性克隆组相比, TGF-β1、Ⅰ型胶原、TIMP-1细胞内蛋白表达及培养上清中的分泌水平均明显降低（ P < 0. 05） ,MMP-2的表达也降低,但两者间差异无统计学意义（ P > 0. 05） ,而MMP-9的表达明显增高（P < 0. 05）。 结论:重组质粒pcDNA3. 1 （ + ）-TGF-β3能减少肝星状细胞内外Ⅰ型胶原的合成及分泌,通过调节MMP-9及TIMP-1的表达,可抑制ECM的合成,促进其降解。

关键词： 血清白蛋白   转化生长因子β1   信号传导   肾小管上皮细胞   细胞培养  

摘要： 目的研究白蛋白对人肾小管上皮细胞（HK-2）分泌转化生长因子β1（TGF—β1）的影响，以及PI3K／Akt信号通路在这一过程中的作用。方法体外培养HK-2细胞，分为对照组、白蛋白（BSA）组和白蛋白加抑制剂（BSA＋Ly294002）组。分别于培养12、24、48h后，用MTT法检测HK-2细胞的增殖；RT-PCR检测HK-2细胞TGF-β1 mRNA的表达；Western印迹测定HK-2细胞TGF-β1和磷酸化的P13K（p—P13K）、Akt（p—Akt）蛋白分泌。结果白蛋白可明显诱导HK-2细胞增殖（P〈0．05），诱导后12hBSA组与对照组比较，TGF—β1 mRNA表达明显上调（0．472±0．025比0．233±0．021，P〈0．05）；TGF-β1蛋白明显上调（296±20．1比100±13．2，P〈0．05）；p-Pi3K、p-Akt蛋白表达显著增加（P〈0．05）。加Ly29400212h时HK-2增殖受抑制；48h时TGF—β1mRNA、蛋白和p-P13K、p-Akt蛋白的表达也受到抑制（均为P〈0．05）。结论白蛋白通过活化PI3-K／Akt信号转导通路诱导。肾小管上皮细胞产生TGF-β1。

关键词： 唇腭裂   转化生长因子β3   病例对照   关联  

摘要： 目的探讨中国部分地区人群非综合征型唇裂伴或不伴腭裂(nsCL/P)与转化生长因子β3基因CA重复序列多态性之间的关系。方法采用PCR-单链构象多态性方法,对170个nsCL/P核心家庭成员DNA标本进行TGFβ3 CA重复序列多态性的检测。利用传递不平衡检验(TDT)、基于单体型的单体型相对危险度检验(HHRR)和运用家系为基础的相关性检验(FBAT)检验分析该突变与nsCL/P发生之间的关系。结果TDT(OR=1.38,95%CI0.93～2.06)和HHRR(OR=1.31,95%CI0.93～1.84)检验发现,TGFβ3 CA重复序列多态性与nsCL/P发生之间的关联不具有统计学意义(P>0.05),但是FBAT检验发现在显性和隐性模型中,TGFβ3基因多态性与nsCL/P发病危险之间的关联具有统计学意义(P<0.05)。结论TGFβ3 CA重复序列多态性可能是中国部分地区人群发生nsCL/P的危险因素,但还有待于扩大样本量进一步加以验证。

关键词： 转化生长因子   绒毛膜肿瘤JEG-3细胞   基质金属蛋白酶-9基因   基质金属蛋白酶抑制剂-1基因  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)不同浓度和作用时间对绒癌JEG-3细胞基质金属蛋白酶-9基因(MMP-9 mRNA)及基质金属蛋白酶抑制剂-1基因(TIMP-1 mRNA)表达的影响。方法先分别用TGF-β10、100、200 ng/ml作用于绒癌JEG-3细胞,48 h收获细胞;再以TGF-β1100 ng/ml分别与JEG-3细胞作用0、12、24、48、72h;最后用RT-PCR技术检测TGF-β1不同浓度和作用时间收获JEG-3细胞的MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达。结果随TGF-β1浓度升高和作用时间延长,各收获细胞的MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达均明显升高,且MMP-9 mRNA与TIMP-1 mRNA比值均>1(P<0.01或<0.05)。结论在一定浓度和作用时间内,外源性TGF-β1可促进绒癌JEG-3细胞MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达。

关键词： 肝炎,乙型,慢性   T淋巴细胞,调节性   转化生长因子β  

摘要： 目的调查慢性乙型肝炎患者转化生长因子β1（TGF β1）与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T淋巴细胞异常的关系。方法将实验对象分为慢性乙型肝炎（CHB）患者、无症状HBV携带者（AsC）、乙型肝炎恢复者、正常人对照4组。通过流式细胞术分析外周CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T淋巴细胞的表型和频率以及实时荧光定量PCR分析Foxp3表达水平；并通过酶联免疫吸附法检测血清中TGF β1水平。根据数据不同采用方差分析或秩和检验进行统计学分析。结果CHB或AsC组外周CD4^＋T淋巴细胞中CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋T淋巴细胞频率以及CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞中Foxp3 mRNA表达水平显著高于正常人对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。CHB患者和AsC血清中TGF β1水平显著高于正常人和乙型肝炎恢复者，并与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋T淋巴细胞频率存在显著正相关（r=0．78，P〈0．01）。结论CHB和AsC患者TGF β1与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T淋巴细胞增高有密切关系。

关键词： 脂多糖类   骨化三醇   受体   骨化三醇   腹膜透析   腹膜炎   肿瘤坏死因子α   转化生长因子β1  

摘要： 目的研究脂多糖（LPS）对大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）维生素D受体（VDR）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响，从而为1，25（OH）2D，在腹膜透析相关腹膜炎中的应用提供理论依据。方法胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组：（1）正常对照组；（2）脂多糖组：不同浓度的脂多糖（1、10、100mg／L）分别作用6h；10mg／L脂多糖分别作用2、6、12h；（3）1，25（OH）2D3作用组：10mg／L脂多糖预孵育2h后，加1，25（OH）2D3（10^-8mol／L、10^-7mol／L、10^-6mol／L）再作用6h。RT-PCR法检测VDRmRNA的表达；Western印迹法检测VDR蛋白表达；ELISA法检测上清液TNF—α、TGF-β1的表达。结果与对照组相比，LPS组RPMCVDRmRNA和蛋白表达均显著下调（均P〈0．05）。与LPS组相比，1，25（OH）2D3组VDRmRNA和蛋白表达均显著上调（均P〈0．01）。LPS组上清液中TNF-α、TGF—β1浓度均显著高于对照组（均P〈0．01）；1，25（OH）2D3组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著低于LPS组（均P〈0．01）。结论LPS能下调RPMCVDRmRNA和蛋白的表达，上调TNF-α、TGF—β1表达。1，25（OH）2D3可逆转LPS的作用，上调RPMCVDR mRNA和蛋白的表达，并下调TNF—α、TGF—β1表达。VDR对腹膜透析相关腹膜炎具有一定的保护作用，并具有抑制腹膜纤维化的作用。

关键词： 气管切开   吻合口   转化生长因子β1  

摘要： 背景：选择合适的吻合材料可提高气管、支气管重建的成功率，减少吻合口瘢痕狭窄。国内目前常用的缝合材料为丝线、涤纶线和人工合成吸收缝线，3种材料中哪种更加有助于预防和减轻术后瘢痕肉芽增生与管腔狭窄尚缺乏相关实验证据。目的：以常用的丝线、涤纶线和人工合成吸收缝线作为缝合材料，创新性开展了3种材料对兔气管切开后吻合口组织病理变化及转化生长因子β1表达影响的观察比较。设计、时间及地点：随机对照动物实验，病理组织学观察，于2005-09/2006-10在南华大学动物实验部完成。材料：人工合成可吸收缝线购自巴西强生专业产品有限公司。缝合丝线、涤纶线分别购自杭州富阳医用缝合针线厂及杭州华威医疗用品有限公司。方法：体质量1.6~2.0 kg健康成年新西兰大白兔36只，雌雄不限，随机抽签法分为丝线组、涤纶线组和人工合成吸收缝线组，每组12只，分别选用丝线、涤纶线、人工合成吸收缝线进行气管切开后端端吻合。主要观察指标：术后1，2，4周观察吻合口组织病理学变化及转化生长因子β1表达。结果：36只兔全部进入结果分析。术后1，2周3组吻合口愈合状态无明显差别，均有大量炎症细胞浸润，以中性粒细胞为主，集中在缝线周围，并出现灶性出血，缝线形成异物肉芽肿。术后4周，丝线组、涤纶线组均有缝线残留形成异物肉芽肿形成，并有明显纤维组织增生，人工合成吸收缝线组缝合线已基本吸收。与术后1，2周比较，术后4周，丝线组、涤纶线组转化生长因子β1表达降低，但差异无显著性意义；人工合成吸收缝线组降低明显（P 〈 0.05）。结论：3种缝合材料中人工合成吸收缝线组织相容性好，可有效减少手术刺激引起炎症反应的量和程度，更加有助于预防和减轻术后瘢痕肉芽增生和管腔狭窄。

关键词： 哮喘   转化生长因子β1   Smad2/3   中性粒细胞   信号转导  

摘要： 目的观察转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)及Smad2/3在支气管哮喘(简称哮喘)大鼠血中性粒细胞(polymorphonuclear leucocyte,PMN)中的表达及布地奈德对其的影响,探讨PMN通过TGF-β1/Smad信号通路参与哮喘气道炎症的可能作用机制。方法采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组(A组)、正常对照组(C组)和布地奈德治疗组(B组),对血PMN进行分离纯化,免疫细胞化学法检测血PMN中TGF-β1和Smad2/3的表达水平。结果与C组(0.131±0.015OD值)相比,PMN TGF-β1的表达水平在A组(0.228±0.016OD值)和B组(0.164±0.017OD值)差异均具有统计学意义(P值均<0.01);B组与A组相比,TGF-β1的表达水平差异也具有统计学意义(P<0.01)。与C组(0.081±0.011OD值)相比,PMNSmad2的表达水平在A组(0.142±0.021OD值)和B组(0.110±0.010OD值)差异均具有统计学意义(P值均<0.01);B组与A组相比,PMN Smad2/3的表达水平也具有显著统计学意义(P<0.01)。两者的表达呈显著正相关(r=0.776,P<0.01)。结论PMN能合成TGF-β1和Smad2/3,且哮喘时其合成水平增加,其合成功能可以被布地奈德所抑制。PMN可能通过TGF-β/Smad信号转导途径参与哮喘的气道炎症过程。

关键词： 转化生长因子-β3   肝纤维化   肝星状细胞  

摘要： 目的探讨重组转化生长因子-β3(TGF-β3)基因对大鼠肝星状细胞(HSC)内、外蛋白合成及分泌的影响。方法构建质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1。稳定转染:通过脂质体介导的方法,将pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染HSC-T6,经G418筛选建立稳定高表达pcDNA3.1(+)-TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆。再将pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染HSC-T6克隆细胞,用W estern b lot法和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测细胞内外TGF-β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1的蛋白表达量。结果pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆后,与单纯阳性克隆组相比,TGF-β1、Ⅰ型胶原、TIMP-1细胞内蛋白表达及培养上清中的分泌水平均明显降低(P<0.05),MMP-2的表达也降低,但两者间差异无统计学意义(P>0.05),而MMP-9的表达明显增高(P<0.05)。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3能减少细胞内外Ⅰ型胶原的合成及分泌;通过调节MMP-9及TIMP-1的表达,可抑制细胞外基质的合成,促进其降解。