关键词： 三结构域蛋白37   胆管癌   增殖   侵袭   迁移  

摘要： 目的探讨三结构域蛋白37(TRIM37)对胆管癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其作用机制。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析TRIM37在胆管癌组织和癌旁组织的表达情况及其与临床病理特征、预后的相关性。通过实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测胆管癌细胞中TRIM37的表达情况。转染小干扰RNA(siRNA)以沉默TRIM37基因的表达;转染慢病毒以上调TRIM37基因的表达。采用平板克隆实验、细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、Edu-555细胞增殖检测盒实验、Transwell实验、划痕愈合实验等检测TRIM37对胆管癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测通路关键指标的表达量。两组间数据比较采用t检验, 组内两两比较采用LSD-t检验, 多组间数据比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果 RT-qPCR结果显示人胆管癌细胞HuCCT1(2.29±0.03)、RBE(1.67±0.05)、TFK-1(3.10±0.12)、HCCC-9810(2.61±0.06)中TRIM37 mRNA的表达水平高于人肝内胆管上皮细胞(1.02±0.04, t=45.420、18.200、29.820、41.520, P<0.05), 差异有统计学意义。沉默TRIM37的表达后可抑制胆管癌细胞增殖、侵袭及迁移能力。Western blot结果显示, 沉默TRIM37后的实验组TFK-1和HuCCT1细胞中p-Smad2/3、Smad2/3、Snail1、Vimentin的表达量均低于阴性对照组(0.65±0.11比1.00±0.13、0.70±0.11比1.00±0.16、0.60±0.15比1.00±0.16、0.76±0.04比1.00±0.06, 0.66±0.11比1.00±0.06、0.67±0.05比1.00±0.10、0.57±0.64比1.00±0.05、0.67±0.14比1.00±0.03, t=4.372、3.546、3.175、5.823, t=4.902、5.021、5.708、3.847, P<0.05);上调TRIM37的表达后则高于其对照组(1.30±0.16比1.00±0.07、1.89±0.06比1.00±0.04、1.22±0.10比1.00±0.07、1.84±0.06比1.00±0.11, 1.47±0.1比1.00±0.02、1.33±0.01比1.00±0.09、1.39±0.06比1.00±0.09、1.58±0.08比1.00±0.03, t=2.938、3.198、3.034、11.304、7.254、6.696、6.053、11.103, P<0.05), 差异有统计学意义。回复实验中加用TGF-β-Smad2/3通路抑制剂SB431542(10 μmol/L)可逆转胆管癌恶性表型, 上调TRIM37后TGF-β-Smad2/3通路激活增加, 同时加用SB431542(10 μmol/L)此通路被抑制。结论 TRIM37在胆管癌中高表达, 可通过调控TGF-β-Smad2/3促进胆管癌细胞增殖、侵袭及迁移。

关键词： 成骨细胞   miR-361-3P   转化生长因子β1   caspase 3   细胞凋亡  

摘要： 目的研究人成骨细胞内miR-361-3P对转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞凋亡标志分子caspase 3蛋白活性表达的影响,探讨miR-361-3P/TGF-β1通路在人成骨细胞凋亡中的作用机制。方法用miR-361-3p mimic或inhibitor及TGF-β1 siRNA(siTGF-β1)转染人成骨细胞系hFob1.19;RT-qPCR和Western blotting检测caspase 3的变化;CCK-8法检测细胞的增殖和凋亡;荧光素酶基因报告实验检测miR-361-3p和TGF-β1基因的结合情况。结果在hFob1.19细胞内,miR-361-3p mimic显著下调了TGF-β1mRNA表达,同时明显抑制了细胞内的TGF-β1蛋白活性(P<0.05);miR-361-3p mimic作用hFob1.19细胞48 h后,miR-361-3p可明显抑制细胞增殖(P<0.05),导致成骨细胞内caspase 3蛋白活性明显升高(P<0.05),并减少WT-TGF-β1的荧光素酶活性;miR-361-3p inhibitor可增强hFob1.19细胞增殖,抑制细胞内caspase 3蛋白活性,而si-TGF-β1则可明显增强caspase 3活性表达。结论miR-361-3p可能通过抑制TGF-β1负向调控人成骨细胞的增殖并促进其凋亡。

关键词： 致心律失常性右室心肌病   血小板亲核蛋白2   转化生长因子β3  

摘要： 目的分析致心律失常性右室心肌病(arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy,ARVD/C)患者血小板亲核蛋白2(plakophilin-2,PKP2)、转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGFβ3)基因突变与患者心功能以及预后的关系。方法收集2017年1月至2021年1月收治的82例ARVD/C患者的临床资料,检查患者超声心动图,记录右心室半径、Epsilon波情况、左心室是否受累等指标,留取患者外周血。选取同期90例健康者为对照组,提取研究对象基因组DNA,PCR法扩增PKP2、TGFβ3基因的DNA片段,测序法测定研究对象PKP2、TGFβ3基因突变情况。比较对照组与ARVD/C患者、不同心功能分级(心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级)ARVD/C患者、不同预后情况(预后良好、预后不良)等组间PKP2、TGFβ3基因突变的差异,分析PKP2、TGFβ3基因突变与临床病理参数以及预后的关系。结果与对照组相比,ARVD/C组患者PKP2、TGFβ3基因突变率升高(P<0.05)。ARVD/C患者共检测出7个PKP2位点突变(5例包含多个PKP2位点突变),2个TGFβ3位点突变(7例包含这2个位点突变)。与心功能Ⅱ级ARVD/C患者相比,心功能Ⅲ级、Ⅳ级ARVD/C患者PKP2、TGFβ3基因突变率升高(P<0.05);与心功能Ⅲ级ARVD/C患者相比,心功能Ⅳ级ARVD/C患者PKP2、TGFβ3基因突变率升高(P<0.05)。PKP2突变患者晕厥比例、累及左心室比例、有Epsilon波比例高于PKP2未突变者(P<0.05);TGFβ3突变患者晕厥比例、累及左心室比例、有Epsilon波比例高于TGFβ3未突变患者(P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组ARVD/C患者PKP2、TGFβ3基因突变率升高(P<0.05)。结论PKP2、TGFβ3突变与ARVD/C患者的发病、心功能以及预后情况相关,为ARVD/C患者的分层治疗提供了参考依据。

关键词： 胶质母细胞瘤   肿瘤微环境   转化生长因子β   T淋巴细胞   免疫组织化学  

摘要： 目的分析胶质母细胞瘤免疫微环境中相关免疫细胞及免疫抑制因子的表达。方法纳入2020年11月至2021年4月在暨南大学附属第一医院和广东三九脑科医院行手术切除并保存完整的30例胶质瘤标本,均为胶质母细胞瘤,IDH野生型,免疫组化染色检测胶质母细胞瘤免疫微环境中T淋巴细胞(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞)、抑制性免疫细胞[FoxP3^(+)调节性T细胞(Treg)]、免疫抑制因子[转化生长因子-β(TGF-β)]和免疫抑制信号[细胞程序性死亡蛋白配体(PDL1)]分布和表达。结果CD4^(+)T细胞在胶质母细胞瘤中占比极低;15例(50%)CD3^(+)T细胞占比>3%,CD8^(+)T细胞分布与CD3^(+)T细胞相似;仅2例(6.67%)检测到极少FoxP3^(+)Treg细胞。24例(80%)胶质母细胞瘤胞质强阳性表达TGF-β,且其表达与CD3^(+)T细胞分布存在相关性,TGF-β高表达区域未见CD3^(+)T细胞,TGF-β低表达区域CD3^(+)T细胞分布较广;无一例检测到PDL1表达。结论TGF-β蛋白在胶质母细胞瘤中呈高表达,未来针对TGF-β为靶点设计的药物或免疫疗法可能有助于胶质母细胞瘤的临床治疗。

关键词： TGF-β3   间隙连接细胞间通讯   Cx43   软骨细胞   ALK5   p-Smad3  

摘要： 口腔感染性疾病作为牙源性病灶是加重和诱发全身系统性疾病的主要原因。目前,越来越多的研究证实口腔慢性感染也与骨关节炎(Osteoarthritis,OA)高度相关。OA是一种以软骨退化、滑膜炎症、软骨下骨重塑和骨质增生为特征的关节慢性疾病。关节软骨与大多数其他组织不同,其独特的生理特征包括承受机械负荷微环境,通过渗透获得营养,一旦受伤几乎没有愈合能力。虽然软骨细胞只占软骨组织总体积的不到10%,但它们在整个生命过程中都负责软骨的形成、稳态和修复。间隙连接细胞间通通讯(Gap junction intercellular communication,GJIC)是细胞维持软骨细胞正常生理功能的必要条件。间隙连接(Gap junction,GJ)由两个相应的连接子(半通道)组成,它们跨越细胞膜,形成相邻细胞间通信的桥梁。连接蛋白43(Connexin43,Cx43)是软骨细胞中最重要的GJ蛋白,OA软骨细胞中Cx43的过表达和GJIC的增强损害了其再分化能力。此外,高水平的Cx43也与细胞衰老有关。转化生长因子-β3(Transforming growth factor-β3,TGF-β3)被公认为在软骨发育和疾病中发挥独特的调节作用。然而,TGF-β3在软骨细胞GJIC中的作用仍不明确。 目的: 本研究旨在探究TGF-β3对软骨细胞GJ介导的细胞通讯效应及生物学机制,从而为TGF-β3在软骨生理和病理生物学中的重要作用提供新的视角。 方法: 通过RNA测序检测GJ通道相关基因的表达情况。扫描电镜观察细胞形态,并使用划痕实验检测TGF-β3对细胞迁移的影响。通过刮痕加载/染料转移实验(Scrape loading and dye transfer assay,SL/DT)评估TGF-β3对活软骨细胞GJIC活性的影响。其次,Western blot检测Cx43蛋白表达。抑制剂实验被用来探索TGF-β3介导的功能性GJ通道的潜在生物学机制。 结果: ***-β3与软骨细胞GJ蛋白相关基因的表达高度相关,其通过促进细胞迁移和胞质树突状突起的形成从而增强细胞之间的直接接触。这有助于功能性GJ通道的形成。 ***-β3促进Cx43蛋白的表达以及功能性GJ通道的形成。 ***-βⅠ型受体(TGF-beta type I receptor,ALK5)抑制剂及Smad3抑制剂(Selective Smad3 inhibitor,SIS3)均可以抑制GJIC活性。当抑制ALK5受体后,其下游信号蛋白Smad3磷酸化水平受到抑制,由此证明TGF-β3介导的GJIC需要受体ALK5的参与以及下游Smad3信号的激活。 综上,本研究首次揭示了TGF-β3可以促进软骨细胞中Cx43依赖的细胞间通讯,这种效应是通过ALK5/p-Smad3信号轴介导的。

摘要： 肝星状细胞(HSC)是介导肝纤维化发生的关键效应细胞, 而有氧糖酵解是HSC活化的重要代谢特征。转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导有氧糖酵解, 葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)是分布最广泛的葡萄糖转运蛋白并参与糖代谢的调节, 从而影响细胞增殖和生长。然而, TGF-β1和GLUT1在肝纤维化过程中的关系及具体分子机制尚不明确。因此本文研究探讨GLUT1、TGF-β1在肝纤维化过程中的分子机制。

关键词： 滋肾育胎丸   肾阳虚   绝经期患者  

摘要： 目的 探讨滋肾育胎丸对肾阳虚绝经期患者血清血管内皮生长因子(VEGF)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)、转化生长因子-β(TGF-β)的影响。方法 选取武警广东省总队医院妇科2020年1—12月收治的100例肾阳虚绝经期患者作为研究对象,依据随机数字表法分为对照组和试验组,各50例。对照组予以戊酸雌二醇片治疗,试验组在对照组基础上采用滋肾育胎丸治疗,比较两组的治疗效果。结果 试验组治疗后Kupperman指数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组治疗有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,试验组睾酮(T)水平高于对照组,黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组治疗后中医证候积分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组治疗后血清VEGF、NLRP3、TGF-β水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 肾阳虚绝经期患者接受滋肾育胎丸治疗,能有效调节其血清VEGF、NLRP3、TGF-β水平,整体治疗效果较为理想。

关键词： 子宫肿瘤   转化生长因子β   Smad蛋白质类   miRNA-186-3p   细胞增殖   细胞凋亡   肿瘤侵润  

摘要： 目的探讨miRNA-186-3p(miR-186-3p)对子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭的影响及与转化生长因子β(TGF-β)-Smad信号通路的关系。方法将载有miR-186-3p抑制基因、miR-186-3p模拟物的质粒分别转染至子宫颈癌CaSki细胞,分别为miR-186-3p-I组、miR-186-3p-M组;另将转染空载质粒的CaSki细胞作为对照,为miR-186-3p-C组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力;采用蛋白质印迹法检测各组细胞TGF-β-Smad信号通路相关蛋白表达水平;采用Starbase软件预测miR-186-3p靶基因,并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。结果miR-186-3p-M组细胞凋亡率均低于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[(7.5±3.2)%比(13.9±0.7)%、(12.7±0.6)%,均P<0.05]。miR-186-3p-M组迁移细胞数[(218±25)个比(168±13)个、(175±13)个,均P<0.001]和侵袭细胞数均多于miR-186-3p-I组和miR-186-3p-C组[(165±21)个比(130±11)个、(142±12)个,均P<0.001]。miR-186-3p-M组TGF-β、Smad2、Smad3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、磷酸化Smad3(p-Smad3)蛋白相对表达量均最低,与另两组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001)。采用Starbase软件预测miR-186-3p与XIST RNA互补结合;双荧光素酶报告基因实验显示,XIST野生型载体+miR-186-3p模拟物质粒共转染的细胞相对荧光素酶活性低于XIST野生型载体+miR-186-3p空载质粒共转染的细胞(P<0.001)。结论miR-186-3p可能直接与XIST RNA结合而下调TGF-β-Smad信号通路活性,进而增强子宫颈癌CaSki细胞凋亡、迁移、侵袭活性。

关键词： 转化生长因子β3   骨形成蛋白2   牙髓干细胞   增殖   成骨分化  

摘要： 背景:转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞的增殖和成骨向分化能力对比相关研究甚少。目的:探讨相同质量浓度转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞成骨向分化的作用及其初步机制。方法:采用酶解组织块法从新西兰大白兔牙髓组织中分离培养牙髓干细胞;将第3代牙髓干细胞分为空白组、骨形成蛋白2(80μg/L)组和转化生长因子β3(80μg/L)组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活力;培养第7,14天行碱性磷酸酶活性定量检测,Runt相关转录因子2、骨涎蛋白免疫细胞化学染色,RT-qPCR法检测成骨相关基因的表达;培养第14,21天进行茜素红染色观察矿化结节形成能力。结果与结论:①骨形成蛋白2组和转化生长因子β3组的牙髓干细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性均高于空白组(P<0.05);转化生长因子β3组第7天碱性磷酸酶活性高于骨形成蛋白2组(P<0.05);②转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组Runt相关转录因子2、骨涎蛋白表达均高于空白组(P<0.05),其中转化生长因子β3组第7天Runt相关转录因子2蛋白表达高于骨形成蛋白2组(P<0.05);③转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白和Osx基因表达量高于空白组(P<0.05),第7天转化因子β3组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2基因的表达高于骨形成蛋白2组(P<0.05);④转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组矿化结节较空白组明显;⑤结果表明,转化生长因子β3与骨形成蛋白2均能促进牙髓干细胞增殖和成骨向分化;转化生长因子β3对牙髓干细胞成骨早期促进作用优于骨形成蛋白2。