关键词： 胃癌细胞   体外培养   转化生长因子-β1   βig-h3  

摘要： 目的研究胃癌细胞SGC-7901培养上清液及转化生长因子-β1(TGF-β1)是否可促进人类腹膜间皮细胞表达βig-h3蛋白。方法培养胃癌细胞SGC-7901,取第3天培养液上清与DMEM培养液的混合液(1∶4)以及0、1.0、10.0和50.0 ng/ml的TGF-β1分别刺激人类腹膜间皮细胞HMrSV5 0、3、6、12及24 h,ELISA方法检测上清液中βig-h3蛋白浓度,Western blot法检测细胞内βig-h3蛋白浓度。结果对照组有基础量的βig-h3蛋白表达;胃癌细胞SGC-7901培养上清液及TGF-β1均可明显增加HMrSV5细胞上清液及细胞内的βig-h3蛋白浓度(P<0.05),且TGF-β1的刺激作用呈时间及浓度依赖性。结论胃癌细胞SGC-7901培养上清液及TGF-β1可明显刺激HMrSV5细胞表达和分泌βig-h3蛋白。

关键词： 转化生长因子β1   Samd3   胚胎   心脏  

摘要： 目的观察胚胎Wistar大鼠心脏发育过程中转化生长因子(TGF)-β1、Smad3的表达,探讨其在胚胎心脏发育的意义。方法 28只月龄、体质量均相当的Wistar大鼠,随机分为7组,每组4只,分别在妊娠E12、E13、E14、E15、E16、E17、E18时麻醉,行剖宫术取出胎鼠,取其心脏,液氮保存。采用RT-PCR法检测其TGF-β1、Smad3在妊娠E12～E18胚胎心脏中的表达。结果妊娠E12～E18时,TGF-β1和Smad3表达由弱到强再减弱;TGF-β1表达高峰出现在E14,Smad3高峰出现在E17。结论 TGF-β1/Smad3信号通路对大鼠胚胎的心脏发育起一定的调控作用。

关键词： 转化生长因子β   全反式维甲酸   胶原Ⅲ型   信号转导子和转录激活子3   活化STAT3蛋白抑制剂  

摘要： 目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-I)中Ⅲ型胶原(collagenⅢ)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)和活化STAT3蛋白抑制剂(PIAS3)表达的影响。方法:体外培养HFL-I细胞,5μg/L TGF-β1诱导0 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h后,RT-PCR法检测colla-genⅢ、STAT3和PIAS3 mRNA表达,诱导0 d、1 d、3 d和5 d后,Western blotting法检测STAT3和p-STAT3蛋白表达。不同浓度维甲酸干预,24 h后用RT-PCR法检测collagenⅢ、STAT3和PIAS3 mRNA表达,3 d后用Westernblotting法检测STAT3和p-STAT3蛋白表达。结果:TGF-β1诱导后,HFL-I细胞中collagenⅢ和STAT3 mRNA表达明显上调,PIAS3 mRNA表达明显下调,STAT3和p-STAT3蛋白表达明显上调(P<0.05)。各浓度ATRA都下调TGF-β1诱导的HFL-I细胞中collagenⅢ、STAT3 mRNA和STAT3、p-STAT3蛋白的表达,上调PIAS3 mR-NA表达(P<0.05)。结论:ATRA可通过抑制TGF-β1诱导的HFL-I细胞collagenⅢ和STAT3表达、上调PIAS3表达而起到抗肺纤维化作用。

关键词： 乳腺癌   小干扰核糖核酸   乳腺癌扩增基因3   转化生长因子-β  

摘要： 目的观察小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性干扰乳腺癌扩增基因3(amplifiedin breast cancer 3,AIB3)对乳腺癌细胞转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)通路关键分子smad2、smad3及转移相关分子基质金属蛋白-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的影响。方法制备3组靶向AIB3的特异性siRNA分别转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用逆转录-聚合酶联反应检测siRNA干涉效果以及smad2、smad3与MMP-9的表达水平变化。结果与空白对照组相比,3组合成的靶向特异性siR-NA均可有效抑制AIB3基因表达;干涉AIB3可同时显著下调smad2、smad3及MMP-9的表达水平。结论成功设计有效干扰AIB3的siRNA序列,在乳腺癌细胞中应用siRNA干扰AIB3可有效抑制TGF-β通路和转移相关通路关键分子的表达,干扰AIB3基因表达有可能成为临床治疗乳腺癌转移的有效策略。

关键词： 转化生长因子β1   纤维化   细胞外基质  

摘要： 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)与Smad2/3信号传导介导肾小管上皮细胞转分化(EMT)与幼鼠慢性肾间质纤维化的相关性,以及血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的干预作用。方法本研究以80只幼年雌性SD大鼠为实验动物,制备7/8肾切除残肾慢性进展性肾功能衰竭模型。模型成功后随机将动物分为假手术组、7/8肾切除未治疗组和7/8肾切除干预治疗组。以模型制备后第2、4、8、12周为不同时间点。检测各时间点大鼠肾组织常规病理;采用免疫组织化学染色检测残肾组织中TGF-β1、Smad2/3:α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏连蛋白及纤维连接蛋白(FN)在肾组织表达趋势。结果实验第2周时未治疗组肾小管间质大量炎性细胞浸润、肾小管上皮细胞肿胀、肾小管间隙加宽。至第12周未治疗组肾小管广泛扩张、基底膜增厚、皱缩或断裂,间质纤维化明显。而治疗组残肾组织病理变化较未治疗组有明显改善。免疫组织化学半定量分析显示未治疗组TGF-β1阳性细胞或阳性小管染色积分值呈逐渐升高趋势。对照组与未治疗组各时间点相比较差异有统计学意义(P<0.05)。Smad2/3表达趋势与TGF-β1相似。α-SMA蛋白表达趋势同步上调,E-钙黏连蛋白同步下调,未治疗组各时间点FN均呈现逐渐升高趋势(P<0.05)。未治疗组TGF-β1、Smad2/3、α-SMA、FN各指标不同时间点免疫组织化学蛋白染色积分值呈正相关,而与E-钙黏连蛋白表达趋势呈负相关(P<0.01)。干预组不同时间点TGF-β1、Smad2/3、α-SMA和FN蛋白表达趋势明显弱于未治疗组,但强于对照组,而E-钙黏连蛋白表达下调(P<0.01)。结论在幼年期肾损伤过程中,TGF-β1高表达与Smad2/3分子使其高表达,可能通过介导EMT导致肾小管间质区细胞外基质(ECM)异常合成与沉积,最终引起肾小管间质纤维化形成。早期给予ACEI干预可改善这种病理变化。

关键词： 肝硬化   星形细胞   转化生长因子-β3   细胞增殖   大鼠  

摘要： 目的探讨外源性转化生长因子-β3（TGF-β3）对大鼠肝星状细胞（HSC）分泌内源性TGF-β3及细胞增殖的影响。方法取大鼠HSC接种于12孔板，一组用不同浓度（0．08、0．4、2、10和50ng／ml）的外源性TGF-β3干预2h后收集上清液，另一组用10ng／ml外源性TGF-β3干预后在不同时间点（15min、30min、1h、2h、4h、8h、βh）收集上清液，应用ELISA法检测TGF-β3含量。另取HSC接种于96孔板，一组用不同浓度（0．001、0．005、0．02、0．08、0．32、1．25、5、20、100、500ng／ml）的外源性TGF-β3干预24h，另一组用5ng／ml外源性TGF-β3干预24和48h，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况。倒置显微镜下观察空白对照组和外源性TGF-β3干预组HSC的大体形态。结果当外源性TGF-β3浓度达2ng／ml时可明显促进内源性TGF-β3表达，随后内源性TGF-β3的表达量呈外源性TGF-β3浓度依赖性增长（F=210．168，P=0．00），该作用3h时达高峰[（0．845土o．028）ng／ml比（0．026±0．022）ng／ml]。外源性TGF-β3浓度≥0．32ng／ml时对HSC增殖有较弱的促进作用，但无剂量依赖关系（F=0．68，P=0．57）。经TGF-β3干预的HSC镜下形态与空白对照组相比未出现明显变化。结论外源性TGF-β3可促进HSC中内源性TGF-β3的表达，还可促进HSC增殖。外源性TOF-β3干预对HSC细胞大体形态无明显影响。

关键词： 组织转化生长因子-β1   肝脏细胞外基质   肝纤维化过程   Smad3蛋白   动态变化   胶原纤维   大鼠   细胞信号通路  

摘要： 肝纤维化是由于肝脏细胞外基质（ECM）合成和降解失衡，ECM过度沉积而发生的。研究结果显示各种细胞信号通路的激活在肝纤维化的发生过程中起重要作用。其中又以转化生长因子（TGF）-β1介导的信号转导通路影响为甚。

关键词： 转化生长因子β1   人肺上皮细胞   上皮-间质细胞转分化   磷脂酰肌醇3激酶   丝氨   酸/苏氨酸蛋白激酶  

摘要： 目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)通路在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导的人肺上皮细胞A549间充质化过程中的作用。方法:将体外培养的A549细胞随机分成3组:正常对照组、TGF-β1组及抑制剂组,正常对照组不加入TGF-β1,TGF-β1组加入10ng/mLTGF-β1,抑制剂组加入TGF-β1(10ng/mL)和PI3K的抑制剂Ly294002(10nmol/L),72h后通过RT-PCR检测各组A549细胞上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cad)及间充质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化,ELISA方法检测间充质细胞标志物纤连蛋白(Fn)表达的变化,Westernblot检测Akt磷酸化(p-Akt)水平的变化。所有实验至少重复3次。结果:正常体外培养的A549细胞有E-cad表达及微量的α-SMA、Fn、p-Akt表达;TGF-β1组E-cad的表达下调,α-SMA、Fn、p-Akt的表达上调;抑制剂组与TGF-β1组比较E-cad的表达上调,α-SMA、Fn、p-Akt的表达明显抑制。结论:PI3K/Akt途径参与TGF-β1介导的肺上皮-间质细胞转分化过程,PI3K特异性抑制剂Ly294002可有效抑制TGF-β1介导的肺上皮-间质细胞转分化过程。

关键词： 转化生长因子β3   结缔组织生长因子   基质金属蛋白酶抑制剂1   慢病毒   293细胞   基因治疗  

摘要： 背景:前期试验显示单个病毒载体介导的多基因共表达系统能够显著提高椎间盘退变转基因疗效。目的:构建人转化生长因子β3、结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶抑制剂1基因重组慢病毒多表达质粒。方法:应用全基因合成技术,以"自剪切多肽2A"串联目的基因,并克隆到慢病毒表达质粒构建重组慢病毒质粒Lenti-TGF-β3-P2A-CTGF-T2A-TIMP1。转染293细胞后,应用RT-PCR和Western-Blot技术分别检测转染后不同时间点目的基因mRNA和蛋白质表达水平。结果与结论:RT-PCR和Western-blot技术检测结果显示重组质粒成功表达了3种目的基因,并于转染后48h左右达到峰值,"2A"结构下游基因蛋白质表达量约为上游基因的80%。说明成功构建了携带人转化生长因子β3、结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶抑制剂1基因的慢病毒多表达质粒。

关键词： 干扰素γ   上皮-间充质转化   胞外调节激酶1/2   信号转导和转录激活因子3  

摘要： 目的探讨干扰素γ（IFN-γ）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的A549细胞上皮-间充质转化（EMT）过程的作用及对胞外调节激酶1／2（ERK1／2）和信号转导和转录激活因子3（STAT3）的作用。方法①体外培养A549细胞，分为TGF-β1，处理组（5μg／L）、IFN-γ处理组（200μg／L）和TGF-1β（5μg／L）＋IFN-γ（10、100、200μg／L）联合处理组。处理时间48h，免疫荧光及Western blot方法检测各组细胞E-钙黏素（E-eadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（vimentin）和纤维连接蛋白（fibronectin）的蛋白表达。②处理不同时间（5、30和60min），Western blot方法检测各组细胞STAT3、p—STAT3和ERK1／2、p-ERK1／2的蛋白表达。结果①与TGF-t31单独处理组相比，IFN-7（200μg／L）＋TGF-1β联合处理组vimentin和fibronectin的蛋白表达减低（P〈0．05），而α-SMA和E—cadherin蛋白表达无显著变化。②作用后5、30和60min，IFN-γ（200μg／L）＋TGF-1β联合处理组STAT3磷酸化水平显著升高（P〈0．01）。作用后5、60min，IFN-γ（200μg／L）＋TGF-1β联合处理组ERK1／2磷酸化水平升高（P〈0．05）。结论IFN-γ可在体外抑制TGF-1β。诱导的A549细胞发生EMT，其机制可能与上调ERK1／2和STAT3信号通路有关。