关键词： 肝硬化,胆汁性   转录因子Foxp3^+   转化生长因子β_1  

摘要： 目的检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者肝组织Foxp3^+和转化生长因子(TGF)β_1表达与肝组织病理的相关性。方法采用免疫组织化学法检测29例PBC患者肝组织中Foxp3^+和TGFβ_1表达。同时选取20例正常肝组织作为正常对照组。结果 PBC患者肝组织Foxp3^+表达量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.000),且Ⅰ期/Ⅱ期PBC患者肝组织表达量与Ⅲ期/Ⅳ期,差异有统计学意义(P=0.002)。PBC患者肝组织TGFβ31表达量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P=0.000),且Ⅰ期/Ⅱ期PBC患者肝组织表达量与Ⅲ期/Ⅳ期差异无统计学意义(P>0.05)。PBC患者肝组织Foxp3^+和TGFβ_1表达量之间存在显著正相关(r=0.765,P=0.000)。结论 PBC患者肝组织中Foxp3^+和TGFβ_1表达与肝组织炎症活动度密切相关。

关键词： cholestasis   hepatitis   transforming growth factor   MAD homolog  

摘要： Transforming growth factor-beta (TGF beta) is activated as a result of liver injury, such as cholestasis. However, its influence on endogenous metabolism is not known. This study demonstrated that TGF beta regulates hepatic phospholipid and bile acid homeostasis through MAD homolog 3 (SMAD3) activation as revealed by lithocholic acid-induced experimental intrahepatic cholestasis. Lithocholic acid (LCA) induced expression of TGFB1 and the receptors TGFBR1 and TGFBR2 in the liver. In addition, immunohistochemistry revealed higher TGF beta expression around the portal vein after LCA exposure and diminished SMAD3 phosphorylation in hepatocytes from Smad3-null mice. Serum metabolomics indicated increased bile acids and decreased lysophosphatidylcholine (LPC) after LCA exposure. Interestingly, in Smad3-null mice, the metabolic alteration was attenuated. LCA-induced lysophosphatidylcholine acyltransferase 4 (LPCAT4) and organic solute transporter beta (OST beta) expression were markedly decreased in Smad3-null mice, whereas TGF beta induced LPCAT4 and OST beta expression in primary mouse hepatocytes. In addition, introduction of SMAD3 enhanced the TGF beta-induced LPCAT4 and OST beta expression in the human hepatocellular carcinoma cell line HepG2. In conclusion, considering that Smad3-null mice showed attenuated serum ALP activity, a diagnostic indicator of cholangiocyte injury, these results strongly support the view that TGF beta-SMAD3 signaling mediates an alteration in phospholipid and bile acid metabolism following hepatic inflammation with the biliary injury. -Matsubara, T., N. Tanaka, M. Sato, D.W. Kang, K.W. Krausz, K.C. Flanders, K. Ikeda, H. Luecke, L.M. Wakefield, and F.J. Gonzalez. TGF-beta-SMAD3 signaling mediates hepatic bile acid and phospholipid metabolism following lithocholic acid-induced liver injury. J. Lipid Res. 2012. 53: 2698-2707.

关键词： cAMP反应元件结合蛋白质   转化生长因子β3   肝星状细胞  

摘要： 目的探讨大鼠肝星状细胞（HSC）中，环磷酸腺苷（cAMP）反应元件结合蛋白-1（CREB-1）对转化生长因子β3（TGFβ3）的mRNA表达及启动子活I生的影响。方法将HSC分为CREB-1表达质粒转染组（C质粒组）、s氓NA—cREB-1转染组（s质粒组）、阴性对照质粒组（N质粒组）、Forskolin处理组（FSK组）、H-89处理组（H-89组）及空白对照组，并根据加或不加入外源性TGFD3重组蛋白将以上各组再分为（TGFD3＋）组和（TGFD3-）组，实时荧光定量PCR法检测TGFβ3mRNA的表达。上述各组共转染PGL3妇sjc-TGFp3P（W质粒）或PGL3-basic-TGFB3P—mCRE（M质粒），以pRL-SV40为空白对照，荧光素酶报告基因分析法检测各组TGFD3启动子活性。双侧t检验进行组间数据比较。结果TGFD3mRNA表达结果显示，与N质粒（TGFp3-）组比较，s质粒（TGFp3-）组mRNA相对表达量降低至0．69fl：0．15（t=3．702，P〈0．05）；与空白对照（TGFD3-）组比较，H-89（TGFD3-）组降低至0．57±0．08（t=9．490，P〈0．05）；N质粒（TGFD3＋）组与N质粒（TGFD3-）组、s质粒（TGFB3＋）组与s质粒（TGFD3-）组、空白对照（TGFB3＋）组与空白对照（TGFβ3-）组、H-89（TGFB3＋）组与H-89（TGFD3-）组分别比较，差异均有统计学意义（t值分别为-7．404、-3．480、-2．831和-7．875，尸值均〈0．05）。荧光素酶报告基因分析结果显示，s＋w质粒组、N＋W质粒组、C＋W质粒组的TGFB3启动子活性分别为0．062±0．013、0．122±0．011、0．165±0．016，C＋W质粒组TGFB3活性较N＋w质粒组组明显升高（t=-3．823，P〈0．05），s＋w质粒组较N＋w质粒组明显降低（t=5．853，P〈0．01）lH-89＋W质粒组、空白对照＋w质粒组、FSK＋W质粒组TGFp3启动子活性分别为0．154士0．010、0．188士0．016、0．276±0．031，FSK＋W质粒组的TGFB3启动子活性较空白对照＋W质粒组明显升高（t=-4．419，P〈0．05），H-89＋W质粒组的TGFD3启动子活性较空白对照＋W质粒组明显降低（t=-3．115，P〈0．05）。结论增加HSC内CREB-1表达或提高CREB-1磷酸化水平可上调TGFp3mRNA表达及其启动子活性ICRE位点是TGFD3启动子的关键位点，封闭该位点后，TGFD3启动子活性明显降低。外源性TGFD3可上调HSC中内源性TGFD3mRNA的表达。

关键词： 树突状细胞   转化生长因子β1   Smad3   肿瘤疫苗  

摘要： 目的研究通过RNA干扰技术阻断外周单核细胞来源的树突细胞(DC)内的Smad3,并在转化生长因子β(1TGF-β1)作用下对DC的成熟和免疫抑制作用的影响。方法设计针对Smad3特异性小干扰RNA(siRNA),利用RNAiMAX转入DC,并用RT-PCR检测转染效果。实验分Control-DC组、TGF-β1-Control-DC组、TGF-β1-Negative siRNA-Smad3 DC组和TGF-β1-siRNA-Smad3 DC组。流式检测各组DC成熟表型的变化,ELISA检测各组DC上清白细胞介素12(IL-12)的水平,CCK-8法检测DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。结果 TGF-β1-siRNA-Smad3 DC组表面成熟标志CD80、CD83、CD86、HLA-DR及IL-12分泌水平明显高于TGF-β1-Control-DC组和TGF-β1-Negative siRNA-Smad3 DC组(P<0.05),且TGF-β1-Negative siRNA-Smad3 DC组刺激同种异体T细胞增殖的能力显著增强。结论通过阻断DC的Smad3表达,可以逆转TGF-β1对DC成熟和免疫功能的抑制。

关键词： 芪蚣抗纤方   活血组   肝纤维化   TGF-β1   Smad2/3  

摘要： 目的:观察芪蚣抗纤方(QF)活血组对免疫损伤性肝纤维化大鼠转化生长因子(TGF-β1)及Smad2/3的影响。方法:猪血清腹腔注射法复制免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,分为正常对照组,模型组、活血低剂量组、活血高剂量组,用双抗夹心法(ELISA法)测定血清TGF-β1含量;免疫组化法检测肝组织TGF-β1,Smad2,Smad3的表达。结果:①血清学指标:模型组血清TGF-β1含量较其他组明显升高(P<0.01)。与模型组比较,活血组血清TGF-β1含量显著下降(P<0.01),并具量效关系。②免疫组化检测:模型组肝组织TGF-β1,Smad2,Smad3表达明显,活血组肝组织中TGF-β1,Smad2,Smad3表达明显低于模型组(P<0.01)。结论:芪蚣抗纤方活血组通过降低TGF-β1,减少Smad2/3的激活,从而抑制肝纤维结缔组织增生,减轻肝损伤及肝纤维化程度。具有抑制肝纤维化的作用。

关键词： 转化生长因子-β3基因   增强型绿色荧光蛋白   腺病毒载体  

摘要： 目的:构建含有转化生长因子-β3(Transforming growth factor-β3,TGF-β3)和增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒载体,使其转染兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),并在细胞内得到表达。方法:将含有TGF-β3基因克隆至含有EGFP的穿梭质粒,通过在感受态菌DH5α内同源重组,构建pAdxsi-EGFP-TGF-β3。PacⅠ酶切线性化pAdxsi-EGFP-TGF-β3转染HEK293细胞,多轮"乒乓感染法"扩增收集pAdxsi-EGFP-TGF-β3病毒液,氯化铯梯度离心纯化,PCR和荧光显微镜观察EGFP的表达并检测重组腺病毒液的滴度。测定重组腺病毒液转染MSCs细胞转染效率,Western blot检测TGF-β3蛋白表达。结果:成功构建携带TGF-β3和EGFP的重组腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3,PCR和绿色荧光证实病毒包装成功,并具有感染力,病毒滴度为2×1010pfu/ml。Western blot检测表明Adxsi-EGFP-TGF-β3感染的兔骨髓MSCs细胞有效表达TGF-β3。结论:含有TGF-β3和EGFP的腺病毒载体pAdxsi-EGFP-TGF-β3构建成功和TGF-β3蛋白在兔骨髓MSCs中有效表达,为进一步研究转染TGF-β3基因的兔骨髓MSCs减轻创面愈合后瘢痕组织增生提供实验基础。

关键词： 磷脂酰肌醇3-激酶   转化生长因子   肺纤维化  

摘要： 目的探讨转化生长因子(TGF-β1)通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)分子影响肺纤维化进程的重要机制。方法应用博来霉素构建KM鼠肺纤维化模型,设置联合TGF-β1+SB-431542组、单纯TGF-β1组、联合TGF-β1+LY294002组、对照亚组、空白组,于建模后3、7、14、28d检测各组羟脯氨酸(HYP)含量;应用免疫组化技术检测各组磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达;应用方差分析法比较各组PI3K表达差别。结果相对空白组,实验各组PI3K明显高表达,主要分布在细胞核外;单纯TGF-β1组,PI3K及羟脯氨酸(HYP)含量明显高于其余联合TGF-β1+LY294002组。结论 PI3K可能参与TGF-β1调节肺纤维化过程的机制,抑制PI3K的表达,可能可以阻碍肺纤维化疾病发展。

关键词： 慢性萎缩性胃炎   转化生长因子-β1   Smad3   结缔组织生长因子   幽门螺杆菌  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、结缔组织生长因子(CTGF)在慢性萎缩性胃炎中的表达及意义,以及Hp感染对慢性萎缩性胃炎的发生及上述因子的影响。方法采用免疫组化法检测128例慢性胃炎胃窦及胃体组织中TGF-β1、Smad3、CTGF的表达情况。幽门螺杆菌经13C呼气试验及快速尿素酶法检测。结果 TGF-β1和CTGF在萎缩性胃窦炎中Hp阳性及阴性患者间表达差异均有统计学意义(P<0.05),在非萎缩与萎缩性胃炎患者间表达差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1、CTGF随着萎缩程度的加重阳性细胞数增多。Smad3在非萎缩与萎缩组间表达有统计学差异(P<0.05)。在胃体部,TGF-β1、Smad3、CTGF主要表达于固有腺细胞中,在萎缩性胃体炎中可见间质中CTGF,TGF-β1及Smad3表达增多。结论 TGF-β1和CTGF可能在萎缩性胃炎的发生、发展中起重要的作用;Hp感染促进及加剧了萎缩性胃炎的发生。

关键词： 组织工程   细胞存活   胶原   胰岛素样生长因子I   转化生长因子β3  

摘要： 目的为肌腱组织工程筛选出一种优化的人肌腱细胞培养基，即使在不添加胎牛血清（fetalbovineserum，FBS）的条件下，通过优化培养基构成维持其存活并分化。方法在α—MEM培养基中，加入最佳组合的生长因子（growthfactors，GF），同时加入不同浓度的FBS（0、1％、5％和10％）和不同浓度的IGF-1（0、10、50ng／ml），TGFβ—3（0、1、10ng／ml），用拉马拉蓝染色法检测人肌腱细胞的生存情况、增殖速度，用天狼星红定量胶原合成。结果在无FBS情况下，含有10ng／mlTGFβ—3和50ng／mlIGF-1两种生长因子的α-MEM培养基中培养14d后，人肌腱细胞依旧存活（6228．68±43．87），高于其他实验组，但低于10％FBS对照组（13576．74±286．75，t=41．29，P〈0．05），胶原合成量[（0．322±0．003）ng]明显大于未添加生长因子组（t=4．13～5．93，P〈0．05）。结论添加50ng／mlIGF-1和10ng／mlTGFβ—3优化的α-MEM培养基可维持人肌腱细胞存活长达14d并促进肌腱细胞分化，而不必添加FBS。

关键词： 转化生长因子β3   腺病毒   转染   髓核细胞   椎间盘退变  

摘要： 背景:通过基因干扰促进某些基因的表达,调控细胞生物学活性刺激有利于椎间盘组织再生的基质合成来达到治疗目的。目的:构建含有转化生长因子β3的腺病毒表达载体,观察其对退变髓核细胞增殖的影响。方法:制作椎间盘突变模型,从而获取原代退变椎间盘髓核细胞,提取总RNA,调取转化生长因子β3cDNA克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,采用pAdEasy系统进行细菌内同源重组得到含目的基因的腺病毒载体,脂质体转染293A细胞进行包装并扩增病毒。结果与结论:成功构建有较强感染能力的含转化生长因子β3基因重组腺病毒表达载体,滴度达1010pfu/L,MTT法检测表明Ad-TGF-β3可改善退变髓核细胞生物学特性,为研究转化生长因子β3的作用机制及将其用于椎间盘退变的基因治疗提供实验和理论依据。