关键词： 壳聚糖   转化生长因子β3   微球  

摘要： 目的探讨制备负载转化生长因子β3微球的壳聚糖三维支架的可行性。方法利用冻干法制备壳聚糖三维支架,扫描电镜观察并测定其水结合率及孔隙率。利用乳化交联法制备负载转化生长因子β3的壳聚糖微球,检测负载微球的体外缓释情况及吸水膨胀率。制作负载转化生长因子β3微球的壳聚糖三维支架,扫描电镜观察支架形态特征。结果壳聚糖三维支架孔隙较为一致,孔隙直径(180.4±35.3)μm,孔隙率(83.2±0.6)%,与水的结合能力为(123±5)%。电镜观察微球表面光滑,分散性好,粒径(28.5±5.1)μm。对壳聚糖微球体外缓慢释放TGF-β3连续监测7 d,总释放率为(46.2±0.3)%。负载TGF1-β3微球的壳聚糖三维支架观察见微球在支架中分布均匀。结论负载TGF-β3微球的壳聚糖三维支架的制备技术成熟,理化性质稳定,微球缓释TGF-β3效果理想,可作为理想的组织工程材料。

关键词： 转化生长因子-β3   肝纤维化   细胞外基质   慢性肝损伤   可逆性病变   纤维组织   病理转归   结节形成  

摘要： 肝纤维化是各种慢性肝损伤常见和共同的病理转归．是细胞外基质（***）各成分合成与降解的失衡而致纤维组织在肝内过量沉积的结果，属可逆性病变。若进一步发展则致不可逆的肝小叶结构改建、假小叶和结节形成（肝硬化阶段）。

关键词： 转化生长因子   转录因子,FOXP3   肝癌   调节性T细胞   凋亡  

摘要： 目的研究CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞被转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导表达转录因子FOXP3的差异性。方法给予CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞抗T细胞受体（TCR）刺激的同时，加入TGF-β1培养4d后，通过胞内细胞因子染色，分析二者被诱导表达FOXP3的情况。同时通过CFSE标记实验检测被TGF-β1诱导表达FOXP3的淋巴细胞的增殖情况；通过annexinV流式染色检测TGF-β1对于T淋巴细胞凋亡的影响。结果相对于CD8^＋T淋巴细胞，TGF-β11主要诱导CD4^＋T淋巴细胞阳性表达FOXP3[外周血单个核细胞（PBMC）：29．66±3．624比7．430±0．643；癌旁组织浸润淋巴细胞（NIL）：31．74±2．612比8．637±1．146]。被TGF-β1诱导表达FOXP3的淋巴细胞增殖活跃（94．39±1．179），受到活化刺激后依旧能够有效分泌干扰素-γ（IFN-γ）效应细胞因子（39．58±1．611）。TGF-β1能够有效降低CD8^＋T淋巴细胞活化后的细胞凋亡率（25．39±2．158比9．320±0．3219）。结论与肝癌患者FOXP3表达阳性的淋巴细胞〉95％（97．15±0.3807，n=10）集中在CD4^＋T淋巴细胞的结果一致，TGF-β1优先选择性诱导CD4^＋T细胞表达FOXP3。与天然Treg（调节性T细胞）低增殖活性和低细胞因子分泌活性不同，被TGF-β1阳性诱导表达FOXP3的T细胞依旧具有活跃的细胞增殖和分泌IFN-γ（效应细胞因子的功能。CD8^＋T淋巴细胞相对于CD4^＋T淋巴细胞，更易发生活化后细胞凋亡，而TGF-β1能够有效降低这种细胞凋亡率。

关键词： 骨形态发生蛋白质类   转化生长因子β3   羟基磷灰石类   骨整合   骨缺损  

摘要： 目的构建假体周围骨缺损模型,将慢病毒介导的骨形态发生蛋白2(BMP-2)和转化生长因子β3(TGF-β3)双基因转染兔骨髓基质干细胞(MSCs)与胶原/羟基磷灰石复合,后植入假体周围,观察其对假体-骨界面骨整合的影响。方法成年健康清洁新西兰白兔24只,雌雄不限,体重2.5～3.5kg,于两侧股骨髁间造成纵向骨缺损,植入光滑钛合金假体后保持骨假体周围2mm骨缺损,共48侧,实验组(左侧)及对照组(右侧)各24侧,采用压缩植骨技术,重建股骨髁假体周围骨缺损,分别植入组织工程骨(双基因组)、单纯胶原/羟基磷灰石(细胞组),打压紧密并完全覆盖植入体。于术后4、8、12周时麻醉法分别处死8只兔子,行大体观察、X线观察、组织形态计量学及生物力学测定评估组织工程化骨修复骨缺损的能力及对假体-骨界面骨整合的作用。结果术后4周,对照组、实验组X线表现无显著差别,假体周围主要为纤维结缔组织,假体骨结合强度分别为0.3388±0.7206,0.6845±0.7186,差异有统计学意义(P<0.01),假体骨接触率均为0;术后8周,实验组X线表现见假体周围有新骨形成,对照组、实验组假体骨结合强度分别为0.6468±0.7852,1.1824±0.0800,假体骨接触率分别为(5.93±0.60)%,(23.35±3.76)%,二者差异均有统计学意义(P<0.01);术后12周实验组X线表现见假体周围为骨组织,组织学所见植入体周围为连续性骨接触,对照组、实验组假体骨结合强度分别为1.4419±0.1021,2.7622±0.1802,假体骨接触率分别为(15.27±2.34)%,(39.76±1.85)%,假体结合强度与假体骨接触率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。对照组、实验组假体骨结合强度及假体骨界面骨接触率随着时间的延长而增大,术后8周与4周比较,术后12周与8周比较,数值均增高,有显著性差异(P<0.01)。结论组织工程化骨修复假体周围骨缺损,可促进假体周围新骨形成,提高假体-骨界面骨整合,改善假体稳定性。

关键词： 盆底脏器   脱垂   转化生长因子β   层粘连蛋白  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β3(TGF-β3)及层粘连蛋白mRNA在主骶韧带及阴道前壁的表达与女性盆底脏器脱垂(POP)的关系。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应技术(RT-PCR),对实验组及对照组主骶韧带及阴道前壁组织中2种因子mRNA的表达情况做半定量分析。实验组取确诊为POP-QⅠ～Ⅲ期患者30例;对照组取同期住院手术非卵巢功能性肿瘤和宫颈病变患者15例。结果研究组中TGF-β3的mRNA表达高于对照组;层粘连蛋白mRNA的表达研究组低于对照组。结论女性盆底脏器脱垂的发生可能与TGF-β3表达升高及层粘连蛋白的降低有关。

关键词： 胆骨化醇   转化生长因子-β1   肾间质纤维化   单侧输尿管梗阻   Smad  

摘要： 目的研究幼年大鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型中,转化生长因子(TGF)-β/Smads信号通路中TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA表达趋势及相关性,探讨活性维生素D3对肾脏保护作用的可能机制。方法 3～4周龄幼年SD雄性大鼠54只,随机均分为3组,假手术组、UUO模型组、UUO模型干预组,模型组和干预组行左侧输尿管结扎术,干预组给予0.1μg·kg-1·d-1活性维生素D3灌胃,灌胃满3、7、14d后杀鼠取左肾,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA表达水平。结果模型组TGF-β1、Smad3的mRNA表达均明显高于假手术组(P<0.01),Smad7的表达低于假手术组(P<0.01);活性维生素D3干预组TGF-β1、Smad3的mRNA表达明显低于模型组(P<0.01),但仍强于假手术组(P<0.01);Smad7的表达则明显强于模型组(P<0.01),低于假手术组(P<0.01);TGF-β1、Smad3mRNA的表达水平与Smad7mRNA的表达呈负相关。结论在幼鼠肾小管间质损伤过程中,TGF-β/Smads信号通路参与了其发生发展,其中TGF-β1、Smad3起促进作用,Smad7起抑制作用。活性维生素D3可能通过下调Smad3的表达,上调Smad7的表达,减少TGF-β1的产生而起保护作用。

关键词： 胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1   肝星状细胞   转化生长因子β1   Smad3  

摘要： 目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)对肝星状细胞转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路的影响及意义。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,分别设立空白对照组(加入等量磷酸盐缓冲液)和IGFBPrP1处理组(加入终浓度为30μg/L的IGFBPrP1),作用24 h后收集细胞培养上清液,提取全细胞蛋白,另外收集细胞爬片。培养上清液中TGF-β1的表达采用Western印迹法及ELISA法检测,HSC-T6细胞TGF-β1的表达采用免疫细胞化学法检测;培养上清液中Smad3、p-Smad2/3和纤维连接蛋白(Fn)的表达采用Western印迹法检测。空白对照组与IGFBPrP1处理组TGF-β1、Smad3、p-Smad2/3、Fn蛋白表达量、p-Smad2/3与Smad3蛋白相对表达量比值比较采用独立样本t检验。结果 Western印迹法及ELISA检测结果均显示IGFBPrP1处理组培养上清液TGF-β1蛋白表达量均明显高于空白对照组[0.34±0.06与0.19±0.03相比,(188.34±32.24)ng/L与(136.16±19.52)ng/L相比],免疫细胞化学法也显示HSC-T6细胞TGF-β1蛋白表达量明显高于空白对照组(11.89±0.32与7.71±0.63相比),且差异均有统计学意义(t=3.859,P=0.018;t=3.391,P<0.05;t=14.490,P<0.05);IGFBPrP1处理组与空白对照组HSC-T6细胞中Smad3相对表达量差异无统计学意义(0.65±0.05与0.64±0.05相比,t=0.084,P=0.937),p-Smad2/3蛋白相对表达量、p-Smad2/3与Smad3蛋白相对表达量的比值均明显高于空白对照组,且差异均有统计学意义(0.70±0.05与0.46±0.03相比,t=8.050,P=0.001;1.10±0.12与0.72±0.05相比,t=5.181,P=0.007);IGFBPrP1处理组培养上清液中Fn蛋白相对表达量明显高于空白对照组,且差异有统计学意义(0.52±0.04与0.35±0.02相比,t=5.976,P=0.004)。结论 IGFBPrP1可促进体外培养的HSC-T6产生TGF-β1。IGFBPrP1可使体外培养的HSC-T6中Smad3的磷酸化增加。IGFBPrP1可使体外培养的HSC-T6细胞外基质的重要成分Fn的分泌增加。

关键词： 表没食子儿茶素-3-没食子酸   上皮一间质转化   转化生长因子   B1   恶性黑素瘤  

摘要： 目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）能否通过转化生长因子-B1（TGF-61）／信号传导与转录激活因子-3（STAT3）信号通路对恶性黑素瘤上皮-间质转化（EMT）产生影响。方法采用倒置相差显微镜观察不同浓度的EGCG（5、25、50mg／L）对TGF．p1（5ug/L）刺激的B16黑素瘤细胞作用24h后细胞形态、迁移能力和侵袭力变化。Westernblot法检测细胞磷酸化STAT3（p-STAT3）及E-钙黏蛋白（E—cadhefin）的表达。建立B16肿瘤动物模型，逆转录-聚合酶链反应（***）检测各组瘤组织E-cadheinmRNA表达。结果（1）TGF—Bl（5ug／L）刺激B16细胞后细胞间连接不紧密，形态为长梭形，不同浓度EGCG（5、25、50mg／L）作用于TGF-61（5ug／L）刺激B16细胞24h后细胞连接较为紧密，且随浓度增加改变更加明显，细胞划痕间距逐渐增大，Transwell小室检测穿膜数依次为97．00±9．97、60．30±4．00、38．75±7．18，侵袭力与EGCG浓度呈负相关（r=-0．92，P〈0．05）。（2）不同浓度EGCG刺激组p-STAT3的表达逐渐降低，E—cadhefin表达逐渐升高，且呈浓度依赖性，p-STAT3与***表达亦呈负相关（r=-0．805，P〈0．05）。（3）EGCG干预后肿瘤组织中***水平明显增加，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论EGCG具有明显抑制B16细胞EMT作用，其机制与抑制TGF-B1／STAT3信号通路相关。

关键词： 肝硬化   转化生长因子D   肝星状细胞   重组Wnt3a  

摘要： 目的研究Wnt3a对肝星状细胞（HSC）的增殖、活化以及转化生长因子（TGF）p／Smad表达的影响。方法重组Wnt3a刺激HSC后，用EDU法测定其对HSC增殖的影响；用Westemblot法检测HSC表达a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）、TGFD1、Smad3和Smad7的蛋白水平并比较四者之间的关系，多组间数据的比较用单因素方差分析，双变量相关分析研究数据间相关性。结果200ng／mlWnt3a刺激HSC24h后，其增殖率达到最大（63．00％±2．3嘶），显著高于未处理组、50ng／ml、100ng／ml及150ng／ml组（P值均〈0．05），而和250、300ng／ml组的差异无统计学意义（P值均〉0．05）；随着Wnt3a浓度的增加和刺激时间的延长，HSC表达a-SMA，TGFp1和Smad3的蛋白水平也随之升高，均在300ng／ml刺激48h后达到最大值（与3一磷酸甘油醛脱氢酶的灰度比值分别为1．0860±0．0101、1．0346土0．0118、1．0306士0．0122），而Smad7的蛋白水平却随之降低，在300ng／mlWnt3a刺激48h后达到最小（与GAPDH的灰度比值为0．7736±0．0139），差异均具有统计学意义俨值均〈0．05），并且a-SMA的蛋白表达与TGFD1、Smad3的蛋白表达呈正相关（r=0．968，JD〈0．05；r=0．997，P〈0．01），而和Smad7的蛋白表达呈负相关（r=0．960，P〈0．05）。结论重组Wnt3a能促进HSC的增殖、活化，并上调TGFp／Smad的表达，可能对肝纤维化的形成具有促进作用。

关键词： 转化生长因子-β   肝纤维化形成   磷脂酰肌醇3激酶   蛋白激酶B   Smad   细胞外基质   信号   细胞因子  

摘要： 肝纤维化是慢性肝病发展过程中肝组织内细胞外基质（ECM）过度增生与异常沉积所致肝脏结构和肝功能异常改变的一种病理过程，其发生发展是一个连续的阶段性过程并涉及到多种细胞和细胞因子的功能改变。在肝纤维化形成中，转化生长因子-β（TGF-β）是公认的关键细胞因子，对细胞的增殖、凋亡、衰老、分化、迁移发挥着复杂多变的多向性功能。