关键词： 干细胞   骨髓干细胞   转化生长因子β3   骨形态发生蛋白2   重组慢病毒   成骨   骨髓间充质干细胞   转染   省级基金   干细胞图片文章  

摘要： 背景: 骨形态发生蛋白2及转化生长因子β是骨再生中重要的因子,提高其表达可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。目的: 构建携带转化生长因子β3和骨形态发生蛋白2基因的慢病毒载体,观察其在骨髓间充质干细胞中的表达情况。方法: 应用重组慢病毒技术构建同时携带转化生长因子β3、骨形态发生蛋白2和绿色荧光蛋白基因的重组慢病毒表达载体,并用其转染体外培养的第3代兔骨髓间充质干细胞,以转染携带转化生长因子β3或骨形态发生蛋白2单一基因的慢病毒或单独慢病毒的骨髓间充质干细胞作为对照。转染后1周分别提取各组细胞的总RNA和蛋白进行检测。结果与结论: 荧光显微镜下见转染转化生长因子β3和(或)骨形态发生蛋白2基因3d的骨髓间充质干细胞发绿色荧光,转染效率达90%以上。RT-PCR和Westernblot结果显示,转染转化生长因子β3和骨形态发生蛋白2基因的骨髓间充质干细胞转化生长因子β3和骨形态发生蛋白2mRNA和蛋白的表达均高于单一基因转染组及空白对照组。可见应用慢病毒可成功将转化生长因子β3和骨形态发生蛋白2基因转染至骨髓间充质干细胞并实现其高效表达,且两种基因具有协同促表达作用。

关键词： 心力衰竭   超声心动图   糖原合成酶激酶-3β   转化生长因子-β1   大鼠  

摘要： 目的研究糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)在大鼠压力超负荷性心力衰竭发生过程中的变化。方法将25只成年雄性SD大鼠随机分为正常组5只,假手术组10只,模型组10只,假手术组和模型组观察时间点为术后1周、2周、4周、8周。采用腹主动脉部分缩窄术,建立大鼠慢性充血性心力衰竭模型。应用超声心动图动态监测左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDd),舒张末期室间隔厚度(interventricular septal thickness,IVST)和左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness,LVPWT);解剖心脏,计算心质量指数;免疫印迹技术检测GSK-3β和P-GSK-3β的变化,免疫组织化学染色法检测TGF-β1表达变化。结果模型组术后1周LVEDd、IVST和LVPWT分别为(4.87±0.26)mm、(2.04±0.11)mm和(1.93±0.19)mm;此后呈进行性增加趋势,术后8周分别达(6.94±0.12)mm、(2.98±0.21)mm、(3.63±0.18)mm,均高于正常组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.01);假手术组上述指标各观察点之间比较无明显变化(P>0.05)。模型组术后8周心质量指数和左心室质量指数均高于正常组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.01)。正常组、假手术组、模型组心肌GSK-3βWestern blotting灰度值无明显区别;模型组术后8周心肌细胞p-GSK-3βWestern blotting灰度值明显高于正常组和假手术组(P<0.05)。模型组心肌组织TGF-β1免疫组织化学检测的表达量明显高于正常组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。线性回归分析提示p-GSK-3β和TGF-β1表达与左心室质量指数存在线性相关。结论压力超负荷性心力衰竭发生过程中同时出现p-GSK-3β和TGF-β1表达的增高。

关键词： 组织构建   皮肤组织构建   瘢痕   创伤愈合   皮肤   转化生长因子β1   转化生长因子β3   肉芽组织   成纤维细胞   巨噬细胞   细胞因子   国家自然科学基金  

摘要： 背景:转化生长因子β在组织创伤修复中发挥核心和关键作用。目的:观察转化生长因子β1和转化生长因子β3在大鼠皮肤瘢痕性创伤愈合过程中表达量及表达部位的变化。方法:制备大鼠皮肤全层切伤模型,长度1.5-2.0cm,深及筋膜层。于伤后0h,12h,1d,2d,3d,4d,5d,6d,7d处死大鼠,取损伤部位皮肤,采用免疫组织化学染色检测各时间点转化生长因子β1和转化生长因子β3的表达,并进行定量分析。结果与结论:免疫组织化学染色显示,在创伤愈合的早期阶段(伤后1-5d),转化生长因子β1和转化生长因子β3免疫阳性颗粒主要出现在上皮细胞、上皮基底层细胞胞浆、巨噬细胞等免疫细胞胞浆及肉芽组织中;随着创伤修复时间的持续,免疫阳性颗粒主要出现在真皮层的成纤维细胞及细胞外基质中。其中转化生长因子β1的表达在创伤后1-5d最强,而转化生长因子β3在创伤后六七天时开始明显表达。可见在大鼠皮肤瘢痕性创伤愈合过程中,转化生长因子β1的表达先于转化生长因子β3,提示转化生长因子β1与胶原形成及创伤修复关系密切,而转化生长因子β3在愈合后期表达量有升高趋势,其可能与创伤后期的组织改建密切相关。

关键词： 壳聚糖   转化生长因子β3   微球  

摘要： 目的探讨制备负载转化生长因子β3微球的壳聚糖三维支架的可行性。方法利用冻干法制备壳聚糖三维支架,扫描电镜观察并测定其水结合率及孔隙率。利用乳化交联法制备负载转化生长因子β3的壳聚糖微球,检测负载微球的体外缓释情况及吸水膨胀率。制作负载转化生长因子β3微球的壳聚糖三维支架,扫描电镜观察支架形态特征。结果壳聚糖三维支架孔隙较为一致,孔隙直径(180.4±35.3)μm,孔隙率(83.2±0.6)%,与水的结合能力为(123±5)%。电镜观察微球表面光滑,分散性好,粒径(28.5±5.1)μm。对壳聚糖微球体外缓慢释放TGF-β3连续监测7 d,总释放率为(46.2±0.3)%。负载TGF1-β3微球的壳聚糖三维支架观察见微球在支架中分布均匀。结论负载TGF-β3微球的壳聚糖三维支架的制备技术成熟,理化性质稳定,微球缓释TGF-β3效果理想,可作为理想的组织工程材料。

关键词： 转化生长因子-β3   肝纤维化   细胞外基质   慢性肝损伤   可逆性病变   纤维组织   病理转归   结节形成  

摘要： 肝纤维化是各种慢性肝损伤常见和共同的病理转归．是细胞外基质（***）各成分合成与降解的失衡而致纤维组织在肝内过量沉积的结果，属可逆性病变。若进一步发展则致不可逆的肝小叶结构改建、假小叶和结节形成（肝硬化阶段）。

关键词： 转化生长因子   转录因子,FOXP3   肝癌   调节性T细胞   凋亡  

摘要： 目的研究CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞被转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导表达转录因子FOXP3的差异性。方法给予CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞抗T细胞受体（TCR）刺激的同时，加入TGF-β1培养4d后，通过胞内细胞因子染色，分析二者被诱导表达FOXP3的情况。同时通过CFSE标记实验检测被TGF-β1诱导表达FOXP3的淋巴细胞的增殖情况；通过annexinV流式染色检测TGF-β1对于T淋巴细胞凋亡的影响。结果相对于CD8^＋T淋巴细胞，TGF-β11主要诱导CD4^＋T淋巴细胞阳性表达FOXP3[外周血单个核细胞（PBMC）：29．66±3．624比7．430±0．643；癌旁组织浸润淋巴细胞（NIL）：31．74±2．612比8．637±1．146]。被TGF-β1诱导表达FOXP3的淋巴细胞增殖活跃（94．39±1．179），受到活化刺激后依旧能够有效分泌干扰素-γ（IFN-γ）效应细胞因子（39．58±1．611）。TGF-β1能够有效降低CD8^＋T淋巴细胞活化后的细胞凋亡率（25．39±2．158比9．320±0．3219）。结论与肝癌患者FOXP3表达阳性的淋巴细胞〉95％（97．15±0.3807，n=10）集中在CD4^＋T淋巴细胞的结果一致，TGF-β1优先选择性诱导CD4^＋T细胞表达FOXP3。与天然Treg（调节性T细胞）低增殖活性和低细胞因子分泌活性不同，被TGF-β1阳性诱导表达FOXP3的T细胞依旧具有活跃的细胞增殖和分泌IFN-γ（效应细胞因子的功能。CD8^＋T淋巴细胞相对于CD4^＋T淋巴细胞，更易发生活化后细胞凋亡，而TGF-β1能够有效降低这种细胞凋亡率。

关键词： 骨形态发生蛋白质类   转化生长因子β3   羟基磷灰石类   骨整合   骨缺损  

摘要： 目的构建假体周围骨缺损模型,将慢病毒介导的骨形态发生蛋白2(BMP-2)和转化生长因子β3(TGF-β3)双基因转染兔骨髓基质干细胞(MSCs)与胶原/羟基磷灰石复合,后植入假体周围,观察其对假体-骨界面骨整合的影响。方法成年健康清洁新西兰白兔24只,雌雄不限,体重2.5～3.5kg,于两侧股骨髁间造成纵向骨缺损,植入光滑钛合金假体后保持骨假体周围2mm骨缺损,共48侧,实验组(左侧)及对照组(右侧)各24侧,采用压缩植骨技术,重建股骨髁假体周围骨缺损,分别植入组织工程骨(双基因组)、单纯胶原/羟基磷灰石(细胞组),打压紧密并完全覆盖植入体。于术后4、8、12周时麻醉法分别处死8只兔子,行大体观察、X线观察、组织形态计量学及生物力学测定评估组织工程化骨修复骨缺损的能力及对假体-骨界面骨整合的作用。结果术后4周,对照组、实验组X线表现无显著差别,假体周围主要为纤维结缔组织,假体骨结合强度分别为0.3388±0.7206,0.6845±0.7186,差异有统计学意义(P<0.01),假体骨接触率均为0;术后8周,实验组X线表现见假体周围有新骨形成,对照组、实验组假体骨结合强度分别为0.6468±0.7852,1.1824±0.0800,假体骨接触率分别为(5.93±0.60)%,(23.35±3.76)%,二者差异均有统计学意义(P<0.01);术后12周实验组X线表现见假体周围为骨组织,组织学所见植入体周围为连续性骨接触,对照组、实验组假体骨结合强度分别为1.4419±0.1021,2.7622±0.1802,假体骨接触率分别为(15.27±2.34)%,(39.76±1.85)%,假体结合强度与假体骨接触率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。对照组、实验组假体骨结合强度及假体骨界面骨接触率随着时间的延长而增大,术后8周与4周比较,术后12周与8周比较,数值均增高,有显著性差异(P<0.01)。结论组织工程化骨修复假体周围骨缺损,可促进假体周围新骨形成,提高假体-骨界面骨整合,改善假体稳定性。

关键词： 盆底脏器   脱垂   转化生长因子β   层粘连蛋白  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β3(TGF-β3)及层粘连蛋白mRNA在主骶韧带及阴道前壁的表达与女性盆底脏器脱垂(POP)的关系。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应技术(RT-PCR),对实验组及对照组主骶韧带及阴道前壁组织中2种因子mRNA的表达情况做半定量分析。实验组取确诊为POP-QⅠ～Ⅲ期患者30例;对照组取同期住院手术非卵巢功能性肿瘤和宫颈病变患者15例。结果研究组中TGF-β3的mRNA表达高于对照组;层粘连蛋白mRNA的表达研究组低于对照组。结论女性盆底脏器脱垂的发生可能与TGF-β3表达升高及层粘连蛋白的降低有关。

关键词： 胆骨化醇   转化生长因子-β1   肾间质纤维化   单侧输尿管梗阻   Smad  

摘要： 目的研究幼年大鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型中,转化生长因子(TGF)-β/Smads信号通路中TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA表达趋势及相关性,探讨活性维生素D3对肾脏保护作用的可能机制。方法 3～4周龄幼年SD雄性大鼠54只,随机均分为3组,假手术组、UUO模型组、UUO模型干预组,模型组和干预组行左侧输尿管结扎术,干预组给予0.1μg·kg-1·d-1活性维生素D3灌胃,灌胃满3、7、14d后杀鼠取左肾,采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA表达水平。结果模型组TGF-β1、Smad3的mRNA表达均明显高于假手术组(P<0.01),Smad7的表达低于假手术组(P<0.01);活性维生素D3干预组TGF-β1、Smad3的mRNA表达明显低于模型组(P<0.01),但仍强于假手术组(P<0.01);Smad7的表达则明显强于模型组(P<0.01),低于假手术组(P<0.01);TGF-β1、Smad3mRNA的表达水平与Smad7mRNA的表达呈负相关。结论在幼鼠肾小管间质损伤过程中,TGF-β/Smads信号通路参与了其发生发展,其中TGF-β1、Smad3起促进作用,Smad7起抑制作用。活性维生素D3可能通过下调Smad3的表达,上调Smad7的表达,减少TGF-β1的产生而起保护作用。

关键词： 胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1   肝星状细胞   转化生长因子β1   Smad3  

摘要： 目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)对肝星状细胞转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号通路的影响及意义。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,分别设立空白对照组(加入等量磷酸盐缓冲液)和IGFBPrP1处理组(加入终浓度为30μg/L的IGFBPrP1),作用24 h后收集细胞培养上清液,提取全细胞蛋白,另外收集细胞爬片。培养上清液中TGF-β1的表达采用Western印迹法及ELISA法检测,HSC-T6细胞TGF-β1的表达采用免疫细胞化学法检测;培养上清液中Smad3、p-Smad2/3和纤维连接蛋白(Fn)的表达采用Western印迹法检测。空白对照组与IGFBPrP1处理组TGF-β1、Smad3、p-Smad2/3、Fn蛋白表达量、p-Smad2/3与Smad3蛋白相对表达量比值比较采用独立样本t检验。结果 Western印迹法及ELISA检测结果均显示IGFBPrP1处理组培养上清液TGF-β1蛋白表达量均明显高于空白对照组[0.34±0.06与0.19±0.03相比,(188.34±32.24)ng/L与(136.16±19.52)ng/L相比],免疫细胞化学法也显示HSC-T6细胞TGF-β1蛋白表达量明显高于空白对照组(11.89±0.32与7.71±0.63相比),且差异均有统计学意义(t=3.859,P=0.018;t=3.391,P<0.05;t=14.490,P<0.05);IGFBPrP1处理组与空白对照组HSC-T6细胞中Smad3相对表达量差异无统计学意义(0.65±0.05与0.64±0.05相比,t=0.084,P=0.937),p-Smad2/3蛋白相对表达量、p-Smad2/3与Smad3蛋白相对表达量的比值均明显高于空白对照组,且差异均有统计学意义(0.70±0.05与0.46±0.03相比,t=8.050,P=0.001;1.10±0.12与0.72±0.05相比,t=5.181,P=0.007);IGFBPrP1处理组培养上清液中Fn蛋白相对表达量明显高于空白对照组,且差异有统计学意义(0.52±0.04与0.35±0.02相比,t=5.976,P=0.004)。结论 IGFBPrP1可促进体外培养的HSC-T6产生TGF-β1。IGFBPrP1可使体外培养的HSC-T6中Smad3的磷酸化增加。IGFBPrP1可使体外培养的HSC-T6细胞外基质的重要成分Fn的分泌增加。