关键词： 生存素   转化生长因子β3   基质金属蛋白酶组织抑制因子-1   椎间盘退变   细胞凋亡  

摘要： 目的：构建人生存素(Survivin)、转化生长因子β3(TGFβ3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)三基因过表达慢病毒载体,通过一次转染,实现Survivin、 TGFβ3、 TIMP-1三基因在人退变椎间盘髓核细胞的稳定转染,通过抑制细胞凋亡、增加细胞外基质的合成及抑制其降解,实现逆转或延缓椎间盘退变的目的。 方法：构建Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体,联合转染人退变髓核细胞,应用Real-Time PCR技术检测转染后三基因的过表达情况,并检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的mRNA表达量,应用Western blot检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的蛋白含量,应用caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3蛋白活性,应用Annexin V-PI双染色法检测髓核细胞凋亡率。 结果：人退变髓核细胞稳定转染后,Real-Time PCR结果显示Survivin TGF β3、TIMP-1三基因在基因水平均获得稳定过表达,且其表达能维持细胞传至P3代或更长时间。目的病毒转染组(A组)较空病毒转染组(B组)、空白对照组(C组),蛋白多糖和Ⅱ型胶原：mRNA表达量均无明显差异,Western blot示蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白含量三组无明显差异,Caspase-3蛋白吸光度及髓核细胞凋亡率三组亦无明显差异。 结论：Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体能够稳定转染人退变椎间盘髓核细胞,并且能长时间维持其表达,发挥生物学效应,三基因对在体外培养的髓核细胞的细胞外基质的合成并无明显的作用,对细胞凋亡亦无明显抑制作用。在体外,通过Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体转染人退变髓核细胞并不能有效增加蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量,亦不能有效抑制髓核细胞凋亡。而在体内环境中,三基因联合转染的作用,仍需进一步研究。

关键词： 脉冲染料激光   Nd:YAG激光   人成纤维细胞   四甲基偶氮唑蓝比色实验   转化生长因子β1   转化生长因子β3  

摘要： 目的：控讨脉冲染料激光和Nd:YAG激光临床治疗浅表血管性皮肤病时,出现瘢痕愈合的能量范围；探讨两种激光治疗病理性瘢痕时,抑制瘢痕组织增殖的能量范围。 方法：培养HT1080；用不同能量的PDL及Nd:YAG激光分别照射HT1080,继续培养24小时；采用四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT法)检测HT1080的增殖活性；采用ELISA法检测TGF-β1及TGF-β3的表达水平；培养小鼠；用不同能量的PDL及Nd:YAG激光分别照射小鼠皮肤；照射前、照射后24小时后及照射7天后分别病理取材,对比照射前后病理改变。 结果： 1、PDL与Nd:YAG激光分别照射HT1080,继续培养24小时,与对照组比较,细胞增殖活性,在不同能量实验组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 2、PDL与Nd:YAG激光分别照射HT1080,继续培养24小时后,与对照组比较,不同能量实验组TGF-p.浓度均有增加,差异有统计学意义(P<0.05),其中PDL组不同能量之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)；Nd：YAG组不同能量之间比较,差异无统计学意义(P>0.05) 3、PDL与Nd:YAG激光分别照射HT1080,培养24小时后,与对照组比较,TGF-β3浓度不同能量实验组均有增加,差异有统计学意义(P<0.05)；PDL的TGF-β3浓度,不同实验组之间比较,部分差异有统计学意义(P<0.05):Nd:YAG激光TGF-β3浓度,不同实验组之间比较,部分差异有统计学意义(P<0.05),其随能量增高,呈上升趋势。 4、病理切片：与对照组(正常小鼠皮肤)相比,用PDL激光以能量密度为7、15J/cm2照射小鼠后24小时,其病理表现为小鼠表皮无烧伤坏死组织,真皮层可见嗜中性粒细胞分布；39J/cm2照射后其表皮有烧伤坏死组织,真皮层较多嗜中性粒细胞分和；Nd:YAG激光以能量密度为15J/cm2照射小鼠后24小时,其病理表现为表皮无烧伤坏死组织,真皮层仅见少量淋巴细胞分布；55J/cm2照射后其表皮有烧伤坏死组织,真皮层较多嗜中性粒细胞分布；175J/cm2照射后可见有穿透真皮层烧伤坏死组织,真皮层大量嗜中性粒细胞分布。PDL激光照射小鼠后7天,其病理表现为随能量增高,真皮的纤维母细胞增生表现明显；Nd:YAG激光照射小鼠后7天,其病理表现为低能量时,随能量增高,真皮的纤维母细胞增生表现明显,但达至175J/cm2时,纤维母细胞增生表现减轻。PDL以能量密度为39J/cm2照射后,与Nd:YAG激光以能量密度为55J/cm2、175J/cm2照射后病理比较,表皮与附属器之间距离较宽,表明PDL促纤维化作用明显。 结论： 1、在实验能量范围内,不同能量PDL与Nd:YAG激光分别照射HT1080后,其MTT值无统计学意义,表明两种激光照射,对人成纤维细胞的增殖活性没有影响。表明在一定能量范围内,PDL与Nd:YAG激光均不会有造成瘢痕增加的风险。 2、在实验能量范围内,不同能量PDL照射后,均可促进TGF-β1和TGF-β3的分泌,考虑应用PDL治疗皮肤病时,人成纤维细胞促进和抑制纤维化作用均存在,结合动物实验表明,PDL相对安全,正常能量范围内使用,不表现促进瘢痕增殖,也不表现抑制瘢痕组织增殖。因此,使用PDL治疗浅表血管性皮肤病时,在注意皮肤色素因素下,可适当使用较大能量。在治疗病理性瘢痕时,不适于血管组织少的陈旧性瘢痕。 3、在实验能量范围内,不同能量Nd:YAG激光照射后,均可促进TGF-β1和TGF-p3的分泌。不同实验组之间,TGF-β1浓度无统计学意义(P>0.05), TGF-β3浓度差异有统计学意义(P<0.05),随能量增高,呈上升趋势。结合动物实验表明,Nd:YAG激光治疗皮肤病时,在较低能量范围内,不表现促进瘢痕增殖,也不表现抑制瘢痕组织增殖。随着能量逐渐增高,逐步表现抑制瘢痕组织增殖。因此,使用Nd:YAG激光治疗浅表血管性皮肽病时,能量不应过高；在治疗病理性瘢痕时,适用于各种类型瘢痕,而且能量越高,效果越好。

关键词： 干细胞   干细胞因子及调控因子   转化生长因子β3   脂肪间充质干细胞   纤维软骨   组织工程   干细胞图片文章  

摘要： 背景:颞下关节盘软骨缺损修复在口腔临床上仍然是较大的挑战,具有多向分化潜能的脂肪间充质干细胞为成纤维软骨类组织修复带来了希望。目前使用转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞分化的研究很少。目的:观察转化生长因子β3对脂肪间充质干细胞生长形貌及向成纤维软骨分化的影响。方法:采用转化生长因子β3诱导SD大鼠脂肪间充质干细胞,观察成纤维软骨细胞分化的细胞形态,组织学和免疫荧光染色等方法检测脂肪间充质干细胞产生的细胞外基质Ⅰ,Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达情况,评价脂肪间充质干细胞作为纤维软骨组织工程种子细胞的可行性。结果与结论:倒置荧光显微镜观察结果显示脂经转化生长因子β3生长因子诱导之后,细胞有明显的聚集生长现象,形态呈多角形、多边形,细胞外基质分泌增多。阿利新蓝染色结果表明,经转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞显示明显的深蓝色,表明脂肪间充质干细胞合成了大量的糖胺聚糖。免疫染色结果表明,在转化生长因子β3诱导下,脂肪间充质干细胞合成Ⅰ,Ⅱ型胶原细胞外基质。提示转化生长因子β3可诱导脂肪间充质干细胞向成纤维软骨样细胞分化,也意味着脂肪间充质干细胞具有作为工程化纤维软骨种子细胞的潜能。

关键词： T淋巴细胞   调节性   白细胞介素10   转化生长因子β1   激素抵抗性哮喘  

摘要： 目的 研究激素抵抗性哮喘（SRA）患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T细胞（Treg）及白细胞介素10（IL-10）、转化生长因子β1（TGF-β1）水平变化及其临床意义.方法 选取哮喘患者79例,分为SRA组（31例）和激素敏感性哮喘（SSA）组（48例）.同时选取健康体检者45例作为对照组,采用流式细胞术检测CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg的表达水平,酶联免疫吸附法检测血清IL-10和TGF-β1水平.结果 SRA组和SSA组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg在CD4＋T细胞中的比例和绝对值分别为0.0225±0.0063、（1.09±0.23）×10^7/L和0.0345±0.0094、（1.35±0.14）×10^7/L,均较对照组[0.0537±0.0128、（2.06±0.27）×10^7/L]明显下降,且SRA组的下降程度更加明显,差异均有统计学意义（P＜0.05）.SRA组和SSA组血清TGF-β1水平均较对照组明显下降[（138.12±23.26）、（176.25±40.37） ng/L比（281.22±47.15） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.SRA组血清IL-10水平较对照组明显下降[（516.43±86.33） ng/L比（763.02±90.19） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.而SSA组血清IL-10水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞ 0.05）.SRA组血清IL-10和TGF-β1水平均较SSA组明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.SRA组和SSA组血清IL-10和TGF-β1水平与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg水平呈明显正相关（P＜0.01）.结论 CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg、IL-10和TGF-β1之间的相互作用在SRA的发生、发展中发挥了重要作用,而通过增加外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg数量,稳定其功能,增加IL-10和TGF-β1表达,可能是治疗SRA的重要途径.

关键词： 糖耐康   转化生长因子-β1   人肾小管上皮细胞   Smad   2基因   Smad   3基因   Smad   7基因  

摘要： 目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测Smad 2、3、7 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,Smad 2、3 mRNA的表达显著上升,而Smad 7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),经糖耐康药物血清干预后,Smad 2、3 mRNA的表达逐步下降,而Smad 7 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad 2、3、7mRNA表达有关。

关键词： 川芎嗪   肝纤维化   转化生长因子B1   Smad   2   3   肝星状细胞   大鼠  

摘要： 目的研究川芎嗪对大鼠肝纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法 Wistar雄性大鼠50只,随机分为5组:空白组、模型组、川芎嗪组(200 mg/kg组、400 mg/kg组、800 mg/kg组)。用CCl4诱发大鼠肝纤维化,川芎嗪不同剂量组作用大鼠8周后处死并分离肝星状细胞。应用免疫细胞化学法及Western印迹法检测肝星状细胞中TGF-β1、Smad 2/3的表达及分布。结果 TGF-β1、Smad 2/3均主要表达于肝星状细胞中。免疫细胞化学结果示TGF-β1主要在胞核表达,Smad 2/3蛋白则在胞核及胞浆均有表达。CCl4注射诱导后,大鼠肝组织中TGF-β1、Smad 2/3蛋白的表达较空白对照组明显增强(P<0.05)。随着川芎嗪浓度(200、400、800 mg/kg)的升高,TGF-β1、Smad 2/3蛋白在肝组织的表达强度呈逐级递减的趋势,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪可能通过抑制TGF-β1/Smads信号转导通路,从而发挥其抗肝纤维化的作用。

关键词： 大鼠   脂多糖   间充质干细胞   核因子κB白细胞介素10   转化生长因子β3   吲哚胺2,3-二氧化酶  

摘要： 目的观察LPS模拟的炎性刺激对体外培养大鼠BM-MSC细胞的NF-κB活化与抗炎性因子IL-10、TGF-β3及IDO mRNA表达的影响。方法以体外培养P2代大鼠BM-MSC为受试细胞,按空白对照、PDTC(100μmol/L)、PDTC(100μmol/L)﹢LPS(5μg/mL)、LPS(1μg/mL)、LPS(5μg/mL)、LPS(10μg/mL)分组处理4 h。提取细胞总RNA,RT-PCR两步法测定NF-κB亚基p65与抗炎性因子IL-10、TGF-β3及IDO的mRNA表达。结果与对照组及PDTC﹢LPS组相比,LPS处理组NF-κB p65亚基、抗炎因子IL-10和TGF-β3 mRNA表达升高(P<0.05),而LPS处理组中IDO的mRNA表达降低(P<0.05);抗炎因子IL-10、TGF-β3表达变化与NF-κB p65亚基表达变化间呈正相关,相关系数分别为0.844(P<0.05)、0.837(P<0.05);而IDO与NF-κB p65亚基在表达变化上呈高度负相关,相关系数为-0.942(P<0.05)。结论 (1)LPS作用于MSC,可通过活化NF-κB而诱导抗炎性细胞因子IL-10、TGF-β3的mRNA表达;(2)正常培养的MSC组成性表达IDO,LPS模拟的炎性刺激对IDO表达具有抑制作用。提示在炎性和非炎性微环境下,MSC发挥负性免疫调节的机制有所不同。

关键词： 干细胞   骨髓干细胞   转化生长因子β3   骨形态发生蛋白2   重组慢病毒   成骨   骨髓间充质干细胞   转染   省级基金   干细胞图片文章  

摘要： 背景: 骨形态发生蛋白2及转化生长因子β是骨再生中重要的因子,提高其表达可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。目的: 构建携带转化生长因子β3和骨形态发生蛋白2基因的慢病毒载体,观察其在骨髓间充质干细胞中的表达情况。方法: 应用重组慢病毒技术构建同时携带转化生长因子β3、骨形态发生蛋白2和绿色荧光蛋白基因的重组慢病毒表达载体,并用其转染体外培养的第3代兔骨髓间充质干细胞,以转染携带转化生长因子β3或骨形态发生蛋白2单一基因的慢病毒或单独慢病毒的骨髓间充质干细胞作为对照。转染后1周分别提取各组细胞的总RNA和蛋白进行检测。结果与结论: 荧光显微镜下见转染转化生长因子β3和(或)骨形态发生蛋白2基因3d的骨髓间充质干细胞发绿色荧光,转染效率达90%以上。RT-PCR和Westernblot结果显示,转染转化生长因子β3和骨形态发生蛋白2基因的骨髓间充质干细胞转化生长因子β3和骨形态发生蛋白2mRNA和蛋白的表达均高于单一基因转染组及空白对照组。可见应用慢病毒可成功将转化生长因子β3和骨形态发生蛋白2基因转染至骨髓间充质干细胞并实现其高效表达,且两种基因具有协同促表达作用。

关键词： 心力衰竭   超声心动图   糖原合成酶激酶-3β   转化生长因子-β1   大鼠  

摘要： 目的研究糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和转化生长因子-β1(transforminggrowth factor-β1,TGF-β1)在大鼠压力超负荷性心力衰竭发生过程中的变化。方法将25只成年雄性SD大鼠随机分为正常组5只,假手术组10只,模型组10只,假手术组和模型组观察时间点为术后1周、2周、4周、8周。采用腹主动脉部分缩窄术,建立大鼠慢性充血性心力衰竭模型。应用超声心动图动态监测左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDd),舒张末期室间隔厚度(interventricular septal thickness,IVST)和左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness,LVPWT);解剖心脏,计算心质量指数;免疫印迹技术检测GSK-3β和P-GSK-3β的变化,免疫组织化学染色法检测TGF-β1表达变化。结果模型组术后1周LVEDd、IVST和LVPWT分别为(4.87±0.26)mm、(2.04±0.11)mm和(1.93±0.19)mm;此后呈进行性增加趋势,术后8周分别达(6.94±0.12)mm、(2.98±0.21)mm、(3.63±0.18)mm,均高于正常组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.01);假手术组上述指标各观察点之间比较无明显变化(P>0.05)。模型组术后8周心质量指数和左心室质量指数均高于正常组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.01)。正常组、假手术组、模型组心肌GSK-3βWestern blotting灰度值无明显区别;模型组术后8周心肌细胞p-GSK-3βWestern blotting灰度值明显高于正常组和假手术组(P<0.05)。模型组心肌组织TGF-β1免疫组织化学检测的表达量明显高于正常组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。线性回归分析提示p-GSK-3β和TGF-β1表达与左心室质量指数存在线性相关。结论压力超负荷性心力衰竭发生过程中同时出现p-GSK-3β和TGF-β1表达的增高。

关键词： 组织构建   皮肤组织构建   瘢痕   创伤愈合   皮肤   转化生长因子β1   转化生长因子β3   肉芽组织   成纤维细胞   巨噬细胞   细胞因子   国家自然科学基金  

摘要： 背景:转化生长因子β在组织创伤修复中发挥核心和关键作用。目的:观察转化生长因子β1和转化生长因子β3在大鼠皮肤瘢痕性创伤愈合过程中表达量及表达部位的变化。方法:制备大鼠皮肤全层切伤模型,长度1.5-2.0cm,深及筋膜层。于伤后0h,12h,1d,2d,3d,4d,5d,6d,7d处死大鼠,取损伤部位皮肤,采用免疫组织化学染色检测各时间点转化生长因子β1和转化生长因子β3的表达,并进行定量分析。结果与结论:免疫组织化学染色显示,在创伤愈合的早期阶段(伤后1-5d),转化生长因子β1和转化生长因子β3免疫阳性颗粒主要出现在上皮细胞、上皮基底层细胞胞浆、巨噬细胞等免疫细胞胞浆及肉芽组织中;随着创伤修复时间的持续,免疫阳性颗粒主要出现在真皮层的成纤维细胞及细胞外基质中。其中转化生长因子β1的表达在创伤后1-5d最强,而转化生长因子β3在创伤后六七天时开始明显表达。可见在大鼠皮肤瘢痕性创伤愈合过程中,转化生长因子β1的表达先于转化生长因子β3,提示转化生长因子β1与胶原形成及创伤修复关系密切,而转化生长因子β3在愈合后期表达量有升高趋势,其可能与创伤后期的组织改建密切相关。