关键词： TGF-β1   绒毛膜癌   JEG-3细胞   c-myc   TβRⅠ,TβRⅡ  

摘要： 绒毛膜癌(choriocarcinoma CC)简称绒癌，是一种继发于正常或异常妊娠之后的滋养细胞肿瘤(gestational trophoblastic tumor,GTT)。绒癌分为妊娠性绒癌（gestational choriocarcinoma，GC）和非妊娠性绒癌（non-gestational choriocarcinoma，NGC）两种。转化生长因子β1(transforming growth factor beta1, TGF-β1)是一种多功能多肽类细胞因子，因其能够调节细胞增殖、分化和凋亡，促进细胞外基质(ECM)形成，参与胚胎发育调节等，成为目前研究最多的参与滋养细胞侵入调节的细胞因子。其I型受体（TβR-I）和Ⅱ型受体（TβRⅡ）是跨膜的丝氨酸/苏氨酸激酶，TGF-β1与TβR-I/TβRⅡ结合后，使得下游Smads蛋白磷酸化，继而启动细胞内信号转导，调节细胞核内靶基因的转录而发挥其生物学效应。其中，TGF-β1、TβR或Smads任一环节元件异常，都可以引起TGF-β/Smads信号传导紊乱。 丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-actived protein kinase，MAPK）信号转导通路是细胞内的主要信息传递系统，在人类已鉴定出四条MAPK通路，其中，p38MAPK通路在细胞恶变和肿瘤浸润转移过程中发挥重要作用。参与了调节多种肿瘤细胞中侵袭相关基因的表达。有些学者研究了在皮肤光老化的治疗中以及TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的纤维化过程中Smad2/3与p38MAPK的相互作用，揭示了在多种疾病的发生机制中两条信号通路间的串话现象。c-myc基因是一种原癌基因，与细胞周期关系密切，一旦被激活，可通过对细胞的增殖作用，参与肿瘤的发生和发展。c-myc癌基因基因定位于染色体8q24，全长6-7kb，含3个外显子，编码蛋白由49个氨基酸残基组成，分子量达64/67kd。c-myc是细胞内多种信号通络下游的靶基因，c-myc蛋白作为转录因子，在调节细胞增殖、分化和凋亡方面发挥重要作用，它的过度表达可促进肿瘤细胞的生长[7]，因此，我们用MTT法观察了5ng/ml TGF-β1在不同作用时间下对绒癌JEG-3细胞的增殖的影响，寻找一个合适的不引起细胞增殖的时间点，用不同浓度的TGF受体Ⅰ、Ⅱ抑制剂（LY364947）和p38MAPK抑制剂（SB203580）作用JEG-3细胞，并通过qRT-PCR法检测JEG-3细胞中c-myc及TβRⅠ、 TβR Ⅱ mRNA的差异表达，以期进一步揭示绒癌的生物学转化机制。 目的：通过qRT-PCR法检测JEG-3细胞中c-myc及TβRⅠ， TβR ⅡmRNA的表达差异，以期探讨绒癌中TGF-β1介导的Smads与p38MAPK信号转导的相互作用，从而更深一步地揭示绒癌的恶性转化、侵袭和转移的分子机制。 方法：体外常规培养绒毛膜癌JEG-3细胞系，当细胞达到80%融合度后，用0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）消化，制备成单细胞悬液。①将JEG-3细胞按初始浓度为3×104个细胞/mL接种于96孔板，37℃、5%CO2培养箱中培养达60%融合度后，将培养基改为无血清的RPMI1640培养基，继续培养12小时，以确保细胞的同步化。用5ng/mlTGF-β1作用于细胞，分别于1h、2h、6h、12h、24h终止培养。同期设立不加细胞只加培养基的空白组和只有细胞没有TGF-β1作用的对照组。除去培养基，加入20μL5mg/mlMTT与180μL RPMI-1640培养基，于37℃、5%CO2培养箱中继续培养4小时。，除去培养基并向每孔中加入150μl二甲基亚砜溶液。混匀后，在室温温度孵育10分钟后，在酶标仪490nm波长处检测各孔的OD值。每组细胞设立四个平行孔。 将JEG-3细胞按初始浓度为5104个细胞/ml接种于6孔板中，37℃、5%CO2培养箱中培养达60%融合度后，分别加入1μMSB203580，3μM SB203580，1μM LY364947，3μM LY364947作用2h后，各组加入5ng/mlTGF-β1继续培养0.5h。同时设立只加细胞的对照组和不加SB203580和LY364947，只加TGF-β1的TGF-β1组。终止培养后，各组细胞提取总mRNA，用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RealTime Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, qRT-PCR）分别检测c-myc、TβRⅠ、TβRⅡmRNA的表达水平，同时，选取β-actin作为内对照。 结果： (1)采用5ng/ml的TGF-β1刺激JEG-3细胞，观察其对细胞增殖和周期的影响，筛选不引

关键词： 喘息   白细胞介素-17   转化生长因子-β1   1,25-二羟基维生素D3   婴幼儿  

摘要： 研究背景： 婴幼儿喘息是全世界范围内儿童常见的呼吸系统临床症候群。近年流行病学调查结果显示，婴幼儿喘息的发生率逐年增高，是导致就医和住院的主要原因之一，严重影响儿童的生命和生活质量。由于婴幼儿气道发育尚不完善，初次发生喘息后，部分患儿会有反复的喘息发作，反复发作的喘息是哮喘的高危因素，患有反复喘息的婴幼儿，哮喘的发生率是没有喘息症状儿童的5～10倍。随着城市工业化的发展，人类生活方式的改变，支气管哮喘的发病率呈逐年上升趋势，已成为威胁儿童公共卫生健康的最常见的慢性肺部疾病，严重危害患儿的身心健康，同时给家庭和社会造成了沉重的负担。全球约有3亿哮喘患者，而儿童期为哮喘发生的敏感时期。然而，关于婴幼儿喘息性疾病的发病机制并未完全明确，目前还很难找到可靠的客观指标来区分喘息婴幼儿中的哮喘患儿。因此，探讨婴幼儿喘息性疾病的发病机制，分析其与支气管哮喘发病机制之间的关系，探寻早期预测婴幼儿哮喘发生的可靠指标，及早发现有哮喘倾向的喘息患儿，给予早期干预和治疗，防止其进一步发展成为支气管哮喘，从而降低哮喘发病率、正确指导婴幼儿喘息性疾病的诊断和治疗、提高儿童健康水平，这也是当前国内外学者正在试图解决的问题。 目前国内外研究多集中在对儿童哮喘、毛细支气管炎及喘息性支气管炎发病机制的研究，关于一整组婴幼儿喘息性疾病的发病机制尚不明确。此外目前研究多集中在婴幼儿喘息性疾病中血清免疫球蛋白E、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白及白细胞介素-4的水平与儿童哮喘的相关性。越来越多的研究证实IL-17、TGF-β1及1,25-(OH)2D3在儿童哮喘、毛细支气管炎及喘息性支气管炎发病中的作用，而它们在婴幼儿喘息性疾病这一整组疾病中的作用如何，它们与儿童哮喘的相关性如何及可否作为预测儿童哮喘发生的可靠指标，国内外关于这方面的研究报道尚不多见。 研究目的： 本研究通过测定比较急性期喘息组、非喘息组及正常组婴幼儿外周血中IL-17、TGF-β1及1,25-(OH)2D3水平变化，同时比较不同喘息次数、不同体质的喘息婴幼儿外周血中IL-17、TGF-β1及1,25-(OH)2D3水平，探讨IL-17、TGF-β1及1,25-(OH)2D3在婴幼儿喘息性疾病发病过程中的作用，分析其与哮喘发病机制的关系，并探寻早期预测婴幼儿哮喘发生的可靠指标，为以后防治婴幼儿喘息性疾病及鉴别婴幼儿哮喘发生提供理论依据。 研究方法： 随机选取于2013年11月10日～2014年2月10在我院儿科住院的61例急性发作期喘息婴幼儿(喘息组)，排除支气管异物、心源性哮喘、先天性喉喘鸣、嗜酸粒细胞性肺炎、胃食管反流等疾病引起的喘息，40例下呼吸道感染但不伴喘息发作的婴幼儿(非喘息组)及35例健康体检婴幼儿(正常对照组)，所有入组儿童均为足月出生，年龄、性别均无统计学差异(P>0.05)，入组前四周内均未服用激素及免疫抑制剂类药物，并征得所有入组患儿监护人的知情同意。收集所有入组患儿外周静脉血标本，均离心后取血清标本于-20℃冰箱冷冻保存。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-17、TGF-β1及1,25-(OH)2D3的表达水平。并使用SPSS22.0统计软件对所得实验数据进行统计分析。 研究结果： （1）急性期喘息组婴幼儿血清IL-17水平较非喘息组及正常对照组均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；急性期喘息组婴幼儿血清TGF-β1、1，25-(OH)2D3水平较非喘息组及正常对照组均明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；急性期非喘息组血清IL-17水平较正常对照组升高，差异有统计学意义(P<0.05)；急性期非喘息组血清TGF-β1、1,25-(OH)2D3水平较正常对照组降低，差异有统计学意义(P<0.05)； （2）婴幼儿反复喘息组血清IL-17水平较首次喘息组升高，差异有统计学意义(P<0.05)；婴幼儿反复喘息组血清TGF-β1、1,25-(OH)2D3水平较首次喘息组降低，差异有统计学意义(P<0.05); （3）婴幼儿有高危因素喘息组血清IL-17水平较无高危因素喘息组升高，差异有统计学意义(P<0.05)；婴幼儿有高危因素喘息组血清TGF-β1、1,25-(OH)2D3水平较无高危因素喘息组降低，差异有统计学意义(P<0.05); （4）反复喘息有高危因素组(喘息I组)血清IL-17水平较反复喘息无高危因素组(喘息II组)明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；反复喘息有高危因素组(喘息I组)血清TGF-β1、1,25-(OH)2D3水平较反复喘息无高危因素组(喘息II组)明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。研究结论： （1）急性期喘息组婴幼儿血清中IL-17水平明显升

关键词： 间质干细胞   转化生长因子β3   骨形态发生蛋白质类   软骨分化  

摘要： 目的重组慢病毒介导TGF-β3/BMP-2联合基因转染兔骨髓间充质干细胞诱导其软骨细胞分化,并比较其与TGF-β3单基因转染诱导软骨细胞分化的效率. 方法全骨髓贴壁法分离、培养兔骨髓间充质干细胞,CCK-8法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面抗原,培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照(N组)、TGF-β3单基因(T组)、TGF-β3/BMP-2联合基因(TB组),转染后培养14天,荧光显微镜下观察各组细胞形态,RT-PCR、Westem blot分别检测SOX-9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原在基因水平与蛋白水平的表达量,甲苯胺蓝染色与Ⅱ型胶原免疫细胞化学检测细胞外基质表达。 结果流式细胞术检测造血干细胞标志物(CD34,2.07%)、白细胞表面抗原(HLA-DR,1.73％)均为阴性,透明质酸受体(CD44,82.79%)为阳性,荧光显微镜观察诱导后细胞形态多为多角形、方形或者类圆盘状,*** blot结果均示T组、TB组SOX-9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原表达量均比C组、N组高(P<0.05),且TB组表达量高于T组(P<0.01)。 结论TGF-β3/BMP-2联合基因转染骨髓间充质干细胞能诱导其成软骨细胞分化,且联合基因转染效率高于TGF-β3单基因转染。

关键词： 生存素   转化生长因子β3   基质金属蛋白酶组织抑制因子-1   椎间盘退变   细胞凋亡  

摘要： 目的：构建人生存素(Survivin)、转化生长因子β3(TGFβ3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)三基因过表达慢病毒载体,通过一次转染,实现Survivin、 TGFβ3、 TIMP-1三基因在人退变椎间盘髓核细胞的稳定转染,通过抑制细胞凋亡、增加细胞外基质的合成及抑制其降解,实现逆转或延缓椎间盘退变的目的。 方法：构建Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体,联合转染人退变髓核细胞,应用Real-Time PCR技术检测转染后三基因的过表达情况,并检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的mRNA表达量,应用Western blot检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的蛋白含量,应用caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3蛋白活性,应用Annexin V-PI双染色法检测髓核细胞凋亡率。 结果：人退变髓核细胞稳定转染后,Real-Time PCR结果显示Survivin TGF β3、TIMP-1三基因在基因水平均获得稳定过表达,且其表达能维持细胞传至P3代或更长时间。目的病毒转染组(A组)较空病毒转染组(B组)、空白对照组(C组),蛋白多糖和Ⅱ型胶原：mRNA表达量均无明显差异,Western blot示蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白含量三组无明显差异,Caspase-3蛋白吸光度及髓核细胞凋亡率三组亦无明显差异。 结论：Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体能够稳定转染人退变椎间盘髓核细胞,并且能长时间维持其表达,发挥生物学效应,三基因对在体外培养的髓核细胞的细胞外基质的合成并无明显的作用,对细胞凋亡亦无明显抑制作用。在体外,通过Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体转染人退变髓核细胞并不能有效增加蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量,亦不能有效抑制髓核细胞凋亡。而在体内环境中,三基因联合转染的作用,仍需进一步研究。

关键词： 脉冲染料激光   Nd:YAG激光   人成纤维细胞   四甲基偶氮唑蓝比色实验   转化生长因子β1   转化生长因子β3  

摘要： 目的：控讨脉冲染料激光和Nd:YAG激光临床治疗浅表血管性皮肤病时,出现瘢痕愈合的能量范围；探讨两种激光治疗病理性瘢痕时,抑制瘢痕组织增殖的能量范围。 方法：培养HT1080；用不同能量的PDL及Nd:YAG激光分别照射HT1080,继续培养24小时；采用四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT法)检测HT1080的增殖活性；采用ELISA法检测TGF-β1及TGF-β3的表达水平；培养小鼠；用不同能量的PDL及Nd:YAG激光分别照射小鼠皮肤；照射前、照射后24小时后及照射7天后分别病理取材,对比照射前后病理改变。 结果： 1、PDL与Nd:YAG激光分别照射HT1080,继续培养24小时,与对照组比较,细胞增殖活性,在不同能量实验组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 2、PDL与Nd:YAG激光分别照射HT1080,继续培养24小时后,与对照组比较,不同能量实验组TGF-p.浓度均有增加,差异有统计学意义(P<0.05),其中PDL组不同能量之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)；Nd：YAG组不同能量之间比较,差异无统计学意义(P>0.05) 3、PDL与Nd:YAG激光分别照射HT1080,培养24小时后,与对照组比较,TGF-β3浓度不同能量实验组均有增加,差异有统计学意义(P<0.05)；PDL的TGF-β3浓度,不同实验组之间比较,部分差异有统计学意义(P<0.05):Nd:YAG激光TGF-β3浓度,不同实验组之间比较,部分差异有统计学意义(P<0.05),其随能量增高,呈上升趋势。 4、病理切片：与对照组(正常小鼠皮肤)相比,用PDL激光以能量密度为7、15J/cm2照射小鼠后24小时,其病理表现为小鼠表皮无烧伤坏死组织,真皮层可见嗜中性粒细胞分布；39J/cm2照射后其表皮有烧伤坏死组织,真皮层较多嗜中性粒细胞分和；Nd:YAG激光以能量密度为15J/cm2照射小鼠后24小时,其病理表现为表皮无烧伤坏死组织,真皮层仅见少量淋巴细胞分布；55J/cm2照射后其表皮有烧伤坏死组织,真皮层较多嗜中性粒细胞分布；175J/cm2照射后可见有穿透真皮层烧伤坏死组织,真皮层大量嗜中性粒细胞分布。PDL激光照射小鼠后7天,其病理表现为随能量增高,真皮的纤维母细胞增生表现明显；Nd:YAG激光照射小鼠后7天,其病理表现为低能量时,随能量增高,真皮的纤维母细胞增生表现明显,但达至175J/cm2时,纤维母细胞增生表现减轻。PDL以能量密度为39J/cm2照射后,与Nd:YAG激光以能量密度为55J/cm2、175J/cm2照射后病理比较,表皮与附属器之间距离较宽,表明PDL促纤维化作用明显。 结论： 1、在实验能量范围内,不同能量PDL与Nd:YAG激光分别照射HT1080后,其MTT值无统计学意义,表明两种激光照射,对人成纤维细胞的增殖活性没有影响。表明在一定能量范围内,PDL与Nd:YAG激光均不会有造成瘢痕增加的风险。 2、在实验能量范围内,不同能量PDL照射后,均可促进TGF-β1和TGF-β3的分泌,考虑应用PDL治疗皮肤病时,人成纤维细胞促进和抑制纤维化作用均存在,结合动物实验表明,PDL相对安全,正常能量范围内使用,不表现促进瘢痕增殖,也不表现抑制瘢痕组织增殖。因此,使用PDL治疗浅表血管性皮肤病时,在注意皮肤色素因素下,可适当使用较大能量。在治疗病理性瘢痕时,不适于血管组织少的陈旧性瘢痕。 3、在实验能量范围内,不同能量Nd:YAG激光照射后,均可促进TGF-β1和TGF-p3的分泌。不同实验组之间,TGF-β1浓度无统计学意义(P>0.05), TGF-β3浓度差异有统计学意义(P<0.05),随能量增高,呈上升趋势。结合动物实验表明,Nd:YAG激光治疗皮肤病时,在较低能量范围内,不表现促进瘢痕增殖,也不表现抑制瘢痕组织增殖。随着能量逐渐增高,逐步表现抑制瘢痕组织增殖。因此,使用Nd:YAG激光治疗浅表血管性皮肽病时,能量不应过高；在治疗病理性瘢痕时,适用于各种类型瘢痕,而且能量越高,效果越好。

关键词： 干细胞   干细胞因子及调控因子   转化生长因子β3   脂肪间充质干细胞   纤维软骨   组织工程   干细胞图片文章  

摘要： 背景:颞下关节盘软骨缺损修复在口腔临床上仍然是较大的挑战,具有多向分化潜能的脂肪间充质干细胞为成纤维软骨类组织修复带来了希望。目前使用转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞分化的研究很少。目的:观察转化生长因子β3对脂肪间充质干细胞生长形貌及向成纤维软骨分化的影响。方法:采用转化生长因子β3诱导SD大鼠脂肪间充质干细胞,观察成纤维软骨细胞分化的细胞形态,组织学和免疫荧光染色等方法检测脂肪间充质干细胞产生的细胞外基质Ⅰ,Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达情况,评价脂肪间充质干细胞作为纤维软骨组织工程种子细胞的可行性。结果与结论:倒置荧光显微镜观察结果显示脂经转化生长因子β3生长因子诱导之后,细胞有明显的聚集生长现象,形态呈多角形、多边形,细胞外基质分泌增多。阿利新蓝染色结果表明,经转化生长因子β3诱导脂肪间充质干细胞显示明显的深蓝色,表明脂肪间充质干细胞合成了大量的糖胺聚糖。免疫染色结果表明,在转化生长因子β3诱导下,脂肪间充质干细胞合成Ⅰ,Ⅱ型胶原细胞外基质。提示转化生长因子β3可诱导脂肪间充质干细胞向成纤维软骨样细胞分化,也意味着脂肪间充质干细胞具有作为工程化纤维软骨种子细胞的潜能。

关键词： T淋巴细胞   调节性   白细胞介素10   转化生长因子β1   激素抵抗性哮喘  

摘要： 目的 研究激素抵抗性哮喘（SRA）患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋调节性T细胞（Treg）及白细胞介素10（IL-10）、转化生长因子β1（TGF-β1）水平变化及其临床意义.方法 选取哮喘患者79例,分为SRA组（31例）和激素敏感性哮喘（SSA）组（48例）.同时选取健康体检者45例作为对照组,采用流式细胞术检测CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg的表达水平,酶联免疫吸附法检测血清IL-10和TGF-β1水平.结果 SRA组和SSA组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg在CD4＋T细胞中的比例和绝对值分别为0.0225±0.0063、（1.09±0.23）×10^7/L和0.0345±0.0094、（1.35±0.14）×10^7/L,均较对照组[0.0537±0.0128、（2.06±0.27）×10^7/L]明显下降,且SRA组的下降程度更加明显,差异均有统计学意义（P＜0.05）.SRA组和SSA组血清TGF-β1水平均较对照组明显下降[（138.12±23.26）、（176.25±40.37） ng/L比（281.22±47.15） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.SRA组血清IL-10水平较对照组明显下降[（516.43±86.33） ng/L比（763.02±90.19） ng/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.而SSA组血清IL-10水平与对照组比较差异无统计学意义（P＞ 0.05）.SRA组血清IL-10和TGF-β1水平均较SSA组明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.SRA组和SSA组血清IL-10和TGF-β1水平与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg水平呈明显正相关（P＜0.01）.结论 CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg、IL-10和TGF-β1之间的相互作用在SRA的发生、发展中发挥了重要作用,而通过增加外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋ Treg数量,稳定其功能,增加IL-10和TGF-β1表达,可能是治疗SRA的重要途径.

关键词： 糖耐康   转化生长因子-β1   人肾小管上皮细胞   Smad   2基因   Smad   3基因   Smad   7基因  

摘要： 目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad 2、3、7 mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+20%糖耐康药物血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测Smad 2、3、7 mRNA的表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,Smad 2、3 mRNA的表达显著上升,而Smad 7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),经糖耐康药物血清干预后,Smad 2、3 mRNA的表达逐步下降,而Smad 7 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad 2、3、7mRNA表达有关。

关键词： 川芎嗪   肝纤维化   转化生长因子B1   Smad   2   3   肝星状细胞   大鼠  

摘要： 目的研究川芎嗪对大鼠肝纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法 Wistar雄性大鼠50只,随机分为5组:空白组、模型组、川芎嗪组(200 mg/kg组、400 mg/kg组、800 mg/kg组)。用CCl4诱发大鼠肝纤维化,川芎嗪不同剂量组作用大鼠8周后处死并分离肝星状细胞。应用免疫细胞化学法及Western印迹法检测肝星状细胞中TGF-β1、Smad 2/3的表达及分布。结果 TGF-β1、Smad 2/3均主要表达于肝星状细胞中。免疫细胞化学结果示TGF-β1主要在胞核表达,Smad 2/3蛋白则在胞核及胞浆均有表达。CCl4注射诱导后,大鼠肝组织中TGF-β1、Smad 2/3蛋白的表达较空白对照组明显增强(P<0.05)。随着川芎嗪浓度(200、400、800 mg/kg)的升高,TGF-β1、Smad 2/3蛋白在肝组织的表达强度呈逐级递减的趋势,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪可能通过抑制TGF-β1/Smads信号转导通路,从而发挥其抗肝纤维化的作用。

关键词： 大鼠   脂多糖   间充质干细胞   核因子κB白细胞介素10   转化生长因子β3   吲哚胺2,3-二氧化酶  

摘要： 目的观察LPS模拟的炎性刺激对体外培养大鼠BM-MSC细胞的NF-κB活化与抗炎性因子IL-10、TGF-β3及IDO mRNA表达的影响。方法以体外培养P2代大鼠BM-MSC为受试细胞,按空白对照、PDTC(100μmol/L)、PDTC(100μmol/L)﹢LPS(5μg/mL)、LPS(1μg/mL)、LPS(5μg/mL)、LPS(10μg/mL)分组处理4 h。提取细胞总RNA,RT-PCR两步法测定NF-κB亚基p65与抗炎性因子IL-10、TGF-β3及IDO的mRNA表达。结果与对照组及PDTC﹢LPS组相比,LPS处理组NF-κB p65亚基、抗炎因子IL-10和TGF-β3 mRNA表达升高(P<0.05),而LPS处理组中IDO的mRNA表达降低(P<0.05);抗炎因子IL-10、TGF-β3表达变化与NF-κB p65亚基表达变化间呈正相关,相关系数分别为0.844(P<0.05)、0.837(P<0.05);而IDO与NF-κB p65亚基在表达变化上呈高度负相关,相关系数为-0.942(P<0.05)。结论 (1)LPS作用于MSC,可通过活化NF-κB而诱导抗炎性细胞因子IL-10、TGF-β3的mRNA表达;(2)正常培养的MSC组成性表达IDO,LPS模拟的炎性刺激对IDO表达具有抑制作用。提示在炎性和非炎性微环境下,MSC发挥负性免疫调节的机制有所不同。