关键词： 转化生长因子β1   肺纤维化   细胞凋亡  

摘要： 目的 研究转化生长因子-β1/smad3信号通路对小鼠肺纤维化中细胞凋亡的调控作用及机制. 方法 54只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、肺纤维化模型组、肺纤维化＋TGF-β1/smad3抑制剂干预组,每组18只.肺纤维化模型组、干预组经气管内注入博莱霉素3.5 mg/kg诱导肺纤维化模型,干预组于造模后的第3、4、5天经腹腔注射TGF-β1/smad3抑制剂SB431542（按4.2 mg/kg,用10％乙醇溶解）,正常对照组给予等剂量生理盐水.造模后第7、14、28天各组随机处死6只小鼠,留取右肺上叶组织石蜡包埋切片行苏木素-伊红（HE）染色和马松三色（Masson）染色;右肺中下叶组织碱水解法测羟脯氨酸（HYP）含量;DNA断裂的原位末端标记（TUNEL）法观察细胞凋亡情况;左肺组织经蛋白印记法（Western blot）测定肺组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase3）和磷酸化smad3 （p-smad3）的表达. 结果 正常对照组肺泡结构正常,而肺纤维化模型组第7天时肺泡呈炎性改变,第28天时发展为明显肺纤维化;随时间推移肺纤维化模型组羟脯氨酸含量、细胞凋亡指数呈上升趋势,各时间点的变化均明显高于正常对照组（P＜0.05）;肺纤维化模型组caspase3、p-smad3的含量较正常对照组各时间点均增加（均P＜0.05）;干预组肺泡炎、肺纤维化程度、羟脯氨酸含量、细胞凋亡指数及caspase3、p-smad3的表达较肺纤维化模型组相对应的时间点均减轻（均P＜0.05）. 结论 细胞通过TGF-β1/Smad3信号通路使细胞凋亡上调而促进了肺纤维化的发生,SB431542可以通过抑制该信号通路从而减轻肺纤维化.

关键词： 人乳牙牙髓干细胞   转化生长因子β3   肝素   成牙本质样细胞  

摘要： 目的:探讨转化生长因子β3(TGF-β3)诱导人乳牙牙髓干细胞(SHED)向成牙本质样细胞分化的能力。方法:采用酶消化法将人乳牙牙髓分离培养,获得SHED;对体外培养的第3代SHED分别单独加入25 ng/mL的重组TGF-β3,或与肝素联合进行培养;通过Q-PCR和Western-blotting方法,分别观察SHED表达成牙本质细胞特异性标志物-牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因及其基因表达产物-牙本质涎蛋白(DSP)的情况;通过碱性磷酸酶(AKP)试剂盒检测SHED的AKP活性的改变;细胞爬片行免疫化学染色和茜素红染色。结果:SHED在诱导体系中生长状态良好。25 ng/mL TGF-β3联合10 U/mL肝素作用组的AKP活性明显增强,与TGF-β3单独作用组、肝素单独作用组以及对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01);TGF-β3联合肝素作用组的茜素红染色呈强阳性,Q-PCR和Western-blotting结果均显示,该组的DSPP表达在mRNA水平和蛋白质水平上均明显升高。结论:在TGF-β3与肝素联合作用的诱导下,可促进SHED分化为成牙本质样细胞。

关键词： 宫腔粘连   转化生长因子-β1   Smad2   3   纤维化  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)及Smad2/3在宫腔粘连患者子宫内膜组织中的表达及意义。方法根据粘连程度将59例宫腔粘连患者分成轻度粘连组、中度粘连组、重度粘连组3组。采用免疫组化半定量法检测3组及对照组(非宫腔粘连患者)子宫内膜组织中TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达量。结果随着宫腔粘连程度加重,患者子宫内膜组织中TGF-β1及Smad2/3的蛋白表达量均逐渐升高;中度、重度粘连组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论子宫内膜组织中TGF-β1及Smad2/3的过度表达可能参与宫腔粘连的发生发展。

关键词： 银屑病   转化生长因子β1   受体   Smad2   3蛋白  

摘要： 目的:观察银屑病患者皮损与正常人皮肤中T细胞转化生长因子(TGF)-β_1、TGF-β_1受体(TGF-β_1R I、TGF—β_1RⅡ)及其信号转导蛋白Smad2、3的表达,分析TGF—β_1信号转导通路在银屑病发病机制中的作用。方法:采用Real-time PCR(RTPCR)法检测20例银屑病患者皮损及10例正常人皮肤中TGF—β_1、TGF—β_1受体(I、Ⅱ)、Smad(2、3)mRNA的表达,用western blot杂交法检测TGF—β_1、Smad2、3的表达。结果:银屑病患者皮损中TGF—β_1、TGF—β_1R I、TGF—β_1RⅡ及其信号转导蛋白smad2、3的mRNA表达明显低于正常对照组(P<0.01),TGF—β_1和Smad2、3的蛋白表达明显低于正常对照组(P<0.01)。结论:T细胞TGF-β1信号转导通路的低表达可能有助于银屑病患者表皮过度增殖状态的发生和发展。

关键词： 电磁脉冲   组织凋亡   转化生长因子β3  

摘要： 目的 观察电磁脉冲对小鼠睾丸组织凋亡和小鼠睾丸组织中转化生长因子（TGF）-β3表达的影响.方法 32只雄性BALB/c小鼠随机分为辐照组（接受场强200 kV/m,脉冲次数分别为100、200和400次的电磁脉冲全身辐照）和对照组（不做任何处理）,每组8只.用TUNEL法观察电磁脉冲对小鼠睾丸组织结构及凋亡的影响;RT-PCR、免疫荧光组织化学和Western blot测定电磁脉冲对小鼠睾丸组织中TGF-β3 mRNA和蛋白表达水平的影响.结果 100次和200次脉冲辐照后小鼠睾丸组织未见明显的病理变化,400次脉冲辐照后小鼠睾丸组织出现变性、脱落并引起小鼠睾丸组织凋亡率明显增加（P＜0.05）;Western blot结果显示,一定强度的电磁脉冲可引起小鼠睾丸组织TGF-β3表达增高,400次脉冲组表达明显增高（P＜0.05）;RT-PCR结果表明,400次脉冲辐照可引起小鼠睾丸组织TGF-β3 mRNA明显增加（P＜0.05）.结论 电磁脉冲辐照引起小鼠睾丸组织凋亡增加和TGF-β3表达增高,可能是电磁脉冲致小鼠血睾屏障通透性增加的机制之一.

关键词： 转化生长因子83   椎间盘退变   软骨终板   凋亡  

摘要： 目的:通过研究转化生长因子β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)对椎间盘退变大鼠的软骨终板凋亡的影响,探讨TGF-β3在椎间盘退变性疾病中的作用,探索治疗椎间盘退变性疾病的新思路。方法:取87只新生SD大鼠,采用双后肢直立法建立大鼠椎间盘退变模型。饲养18个月后,处死5只SD大鼠,行HE染色,光镜下见椎间盘髓核和纤维环退变,证实造模成功。随机选取存活大鼠中的60只随机分成对照组、0.9%氯化钠液组及TGF-β3组,每组20只。对照组不作任何处理;0.9%氯化钠液组及TGF-β3组分别于腰3、4节段间软骨终板处注射0.9%氯化钠液和TGF-β3,每周1次,共3次。3周后处死所有大鼠,取腰3、4节段椎间盘制成切片,行Tunel染色,计算软骨终板细胞凋亡指数,并进行统计学分析。结果:双后肢直立法成功建立大鼠椎间盘退变模型;0.9%氯化钠液组的凋亡指数较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β3组的软骨终板细胞凋亡指数低于0.9%氯化钠组(P<0.05)而高于对照组(P<0.05)。结论:TGF-β3可以抑制椎间盘退变大鼠的软骨终板细胞的凋亡,具有治疗椎间盘退变性疾病的潜在价值。

关键词： 转化生长因子   瘢痕   形成   预防  

摘要： 重组人转化生长因子(TGF)β3是一种健康皮肤形成和胚胎无瘢痕愈合反应的重要的细胞因子。在生长较活跃的增生性瘢痕成纤维细胞中,TGFβ2表达增加,TGFβ3表达较低;而在胚胎期皮肤无瘢痕愈合时,TGFβ3的表达水平较高。TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3与同一个细胞表面受体复合体结合,TGFβ3则通过与TGFβ1和TGFβ2竞争受体,下调二者的表达,从而抑制瘢痕的形成。在伤口愈合后期,TGFβ3通过减少炎症细胞聚集和结缔组织沉积减少瘢痕拮抗TGFβ1和TGFβ2的作用,既能保证伤口的愈合,又不致瘢痕过度。临床前安全性和毒理学研究显示,TGFβ家族60%沉积于肝脏、20%沉积于肾脏,大于10%沉积于血液系统,小于10%沉积于肺、脾、肾上腺、胃、小肠、心脏、骨骼肌和大脑皮质。安全药理学研究显示,老鼠和犬体内持续3个月维持3μg每千克体质量的重组人TGFβ3不会对其中枢神经系统、呼吸系统和心血管系统产生不利影响。在成年鼠皮肤创缘皮内注射重组人TGFβ3,可明显减少创缘瘢痕和改善其皮肤结构。

关键词： 干细胞   骨髓干细胞   左归丸   右归丸   肾藏精   含药血清   骨髓间充质干细胞   成骨诱导   Ⅰ型胶原蛋白   信号转导   转化生长因子β1   信号转导蛋白   Smad2   3   国家自然科学基金  

摘要： 背景:滋补肾阴左归丸、温补肾阳右归丸均可协同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,但其机制尚有待探讨。目的:观察左、右归丸含药血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中转化生长因子β1及其信号转导蛋白Smad2/3表达的影响。方法:运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞;分别以空白血清对照组,左归丸、右归丸、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠),以及诱导剂组为对照共5组对骨髓间充质干细胞进行干预。采用Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白表达,用免疫组化法检测转化生长因子和Smad2/3在细胞内的表达。结果与结论:左归丸、右归丸含药血清诱导骨髓间充质干细胞成骨后Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β1、Smad2/3蛋白表达高于空白组、诱导剂组,差异有显著性意义(P<0.05),且左归丸优于右归丸(P<0.05)。提示左、右归丸含药血清能通过转化生长因子β1调节Smad2/3信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化,且左归丸组效果更好,表明中医"滋肾阴"法更能有效的促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

关键词： 胃癌   转化生长因子   肿瘤  

摘要： 目的观察胃癌患者转化生长因子(TGF)β1、β2和β3的表达水平与存活率之间的关系。方法 110例胃癌患者术后胃癌样本,根据TNM分类标准,其中7例Ⅰ期,33例Ⅱ期,52例Ⅲ期,18例Ⅳ期。在石蜡切片标本中,使用抗生物素蛋白-生物素方法利用抗体检测TGFβ蛋白水平。分析免疫组化的结果与临床病理学指标与肿瘤的恶性程度及预后的关系。结果所有患者的肿瘤标本均表达了TGFβ2和TGFβ3,71%(78/110)表达TGFβ1,而正常胃黏膜上皮细胞均表达TGFβ2和TGFβ3,但不表达TGFβ1。恶性程度低(Ⅰ~Ⅲ期)的胃癌患者标本的TGFβ1的表达水平较高(P=0.009),而晚期肿瘤患者标本的TGFβ2的表达水平提高(P=0.008),其与患者预后有明显相关(P<0.05)。其中TGFβ1表达水平升高与无病存活率的提高有关(P<0.05),通过Cox分析发现肿瘤细胞内的TGFβ1表达是一种独立的预测因素。结论胃癌与TGFβ1、β2和β3表达水平的差异有关。由于肿瘤组织中有TGFβ1的表达,因此TGFβ1表达可能是一种肿瘤发病机制。TGFβ1表达与无病存活率和总体存活率的提高有关,因此它可以作为一种独立预后因素。在晚期肿瘤中,TGFβ2参与肿瘤的进展,并且会导致预后效果不佳。

关键词： 整合素连接激酶   增生性瘢痕   成纤维细胞   转化生长因子-β1  

摘要： 目的 观察整合素连接激酶（ILK）在转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad3信号通路中的作用,探讨ILK对瘢痕成纤维细胞分化影响的作用机制.方法 体外分离培养瘢痕成纤维细胞后,实验分为4组：对照组、ILK小分子干扰RNA（siRNA）组、TGF-β1组、ILK siRNA＋TGF-β1组.采用荧光标记的免疫细胞化学法检测各组成纤维细胞中ILK的表达变化,应用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测各组成纤维细胞中ILK mRNA、Smad3 mRNA及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA） mRNA的表达.结果 免疫荧光图像显示,经siRNA沉默后,成纤维细胞的ILK表达水平下调;经TGF-β1（5μg/L）刺激后,ILK表达水平明显上调.FQ-PCR检测结果显示：经ILK siRNA转染后,成纤维细胞的ILK mRNA（0.522±0.113）、Smad3 mRNA （0.222±0.089）及α-SMA mRNA（0.118±0.080）表达水平同时下降;应用TGF-β1刺激后,成纤维细胞的ILK mRNA （2.233±0.511）、Smad3 mRNA（2.891±0.475）及α-SMA mRNA（2.581 ±0.826）表达水平重新上升,与对照组及ILK siRNA组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 在瘢痕成纤维细胞中,Smad3及α-SMA的mRNA水平可以被ILK上调,而TGF-β1又可以诱导ILK的表达,ILK可能参与Smad蛋白的调控,对TGF-β1/Smad3信号通路诱导的促成纤维细胞分化作用产生影响.