关键词： 转化生长因子β3   黑色素   黑色素细胞   羊驼  

摘要： 为了研究转化生长因子β3(Transforming growth factor beta3,TGF-β3)对体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞表型的影响。本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中添加不同浓度TGF-β3(6.25、12.5、25、50ng·mL-1),通过实时监测和检测细胞增殖、毛色相关基因小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia—associtated transcription factor,MITF)、酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)和酪氨酸酶相关蛋白2(Tyrosinase related protein 2,TYRP2)表达以及黑色素产量的变化。结果表明:(1)在羊驼皮肤黑色素细胞中添加50ng·mL-1浓度的TGF-β3后,在前30h内对细胞增殖有抑制效果,30h后对细胞增殖有明显的长时程维持细胞数量作用,但对TGF-β3添加的剂量没有依赖性;(2)添加TGF-β3后,黑色素细胞内MITF、TYR和TYRP2的表达量均被下调,而且黑色素细胞产生黑色素的量也被下调,主要以添加50ng·mL-1时下调最为显著。结果揭示,TGF-β3通过对羊驼黑色素细胞内MITF、TYR和TYRP2的表达的影响,并调控黑色素的产生,对黑色素细胞的生物学功能具有重要的影响。

关键词： microRNA-10a   human lung cancer   chemotherapy resistance  

摘要： Lung cancer is one of the primary causes of mortality worldwide and drug resistance is the key contributing factor which results in the failure of lung cancer chemotherapy. Previous studies have shown that microRNA (miR)-10a was involved in the reversal of cisplatin (DDP) resistance in numerous types of tumors;however, the underlying mechanism of action of this remains to be fully elucidated. In the present study, miR-10a silencing in human DDP-resistant lung cancer A549/DDP cells was demonstrated to improve DDP sensitivity, apoptosis, intracellular rhodamine-123 content as well as the expression and activity of caspase-3/8. In addition, miR-10a suppressed the cellular expression of P-glycoprotein, multi-drug resistance protein (MDR) 1, MDR-associated protein 1, RhoE, B cell lymphoma-2 and survivin in A549/DDP cells. Furthermore, miR-10a silencing inhibited the secretion of transforming growth factor (TGF)-beta, phosphorylation of Sma- and Mad-related protein (Smad)2, signal transducer and activator of transcription (STAT)3 and STAT5, the transcriptional activity of hypoxia-inducible factor and eukaryotic translation initiation factor 4E in human lung cancer A549/DDP cell line. These results therefore indicated that miR-10a may be a potential target for improving the effectiveness of lung cancer chemotherapy via regulation of the TGF-beta/Smad2/STAT3/STAT5 pathway.

关键词： 生存素   转化生长因子β3   基质金属蛋白酶抑制剂1   慢病毒属   椎间盘   退变  

摘要： 目的应用Gateway技术构建生存素(Survivin)、人转化生长因子β3(TGFβ3)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)慢病毒多表达质粒,并检测其表达活性。方法应用Gateway技术,以自剪切多肽2A串联Survivin、TGFβ3、TIMP1的3段外源基因,并克隆到慢病毒多表达质粒上,通过RT-PCR和Western-blot技术分别检测质粒转染293T细胞后目的基因mRNA和蛋白质表达水平。结果 RT-PCR和Western-blot检测结果显示,慢病毒多表达质粒成功表达了3种目的基因,且其mRNA和蛋白质表达水平较空载体对照组、PBS对照组明显升高,差异有显著性(F=17.87~69.11,q=6.94~15.47,P<0.05)。结论成功构建了慢病毒多表达质粒pLenti6.3-Survivin-P2A-TGFβ3-T2A-TIMP1,为下一步病毒的制备以及体内实验提供了基础。

关键词： 结肠癌   Runt相关转录因子3   转化生长因子β1   相关性  

摘要： 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)与人类Runt相关转录因子3(Runx3)在结肠癌中的表达及其两者表达的相关性。方法收集2011年1月至2013年12月安岳县人民医院收治的结肠癌患者34例、结肠腺瘤性息肉患者34例标本以及正常体检的34例结肠黏膜标本,通过免疫组织化学SP法检测Runx3、TGF-β1的表达,分析Runx3与TGF-β1在结肠癌中的相关性。结果 Runx3在结肠癌组织中表达阳性率最低(17.7%,6/34),与结肠黏膜和结肠息肉组织比较差异均有统计学意义(P<0.01)。TGF-β1在结肠癌组织中的阳性表达率为88.3%(30/34),显著高于结肠息肉和结肠黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。结肠癌中TGF-β1与Runx3表达呈负相关(rs=-0.46,P<0.05)。结论 Runx3及TGF-β1在不同结肠组织中表达差异明显,在结肠癌组织中表达有相关性,检测Runx3和TGF-β1可能为结肠癌早期诊断提供一定依据。

关键词： gangliotetraosylceramide   beta 1,3-galactosyltransferase-4   epithelial-mesenchymal transition   Smads   transcription factor  

摘要： The process of epithelial-mesenchymal transition (EMT) is essential for the proliferation and metastasis of tumor cells. Our previous study demonstrated that the expression of gangliotetraosylceramide (Gg4) and the transcription of UDP-Gal: beta 1,3-galactosyltransferase-4 (beta 3GalT4), a gene which controls the expression of Gg4, are reduced during transforming growth factor (TGF)-beta-induced EMT in normal murine mammary gland (NMuMG) cells. The present study revealed that the transcription level of beta 3GalT4 in patients with breast cancer was decreased compared with healthy control subjects. However, the molecular basis underlying these effects remains to be elucidated. Analysis of the beta 3Ga1T4 promoter sequence revealed a putative Smad-binding element (SBE) of Smad4, which is a transcriptional factor in TGF beta responses and forms a complex with Smad3. To clarify the association between the Smad3/4 complex and the beta 3Ga1T4 gene during EMT in NMuMG cells, an electrophoretic mobility shift assay and a chromatin immunoprecipitation assay were performed. The Smad3/4 complex was found to bind directly to the SBE of the beta 3Ga1T4 promoter. Overexpression of Smad3 and Smad4 through stable transfection had no notable effect on cell phenotype, but did alter the expression of various EMT protein markers. Treatment with TGF beta reduced the expression of Gg4 and the mRNA levels of the beta 3Ga1T4 gene in Smad3- and Smad4-overexpressing cells compared with vector-transfected cells. Expression of the epithelial markers E-cadherin and beta-catenin decreased in parallel with the reduction in Gg4. These findings suggested that the activated Smad3/4 complex downregulated the expression of Gg4 and the)beta 3GalT4 gene through translocation into the nucleus and binding to the [beta GalT4 promoter.

关键词： 1,25羟维生素D3   转化生长因子β1   糖尿病肾病   人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因  

摘要： 目的 探索活性维生素D3对不同转化生长因子β1（TGF-β1）表达水平的糖尿病肾病大鼠模型的保护作用及可能机制.方法 建立SD大鼠糖尿病肾病模型（n=24）,分别注射3种不同慢病毒,同时给予骨化三醇（0.03μg·kg-1·d-1）干预及花生油对照.37 d后采集标本,以实时荧光定量PCR方法检测大鼠肾脏TGF-β1、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN）、胶原蛋白1（collagen-1,COL-1）和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF） mRNA含量,通过电镜观察大鼠肾脏超微结构的变化.结果 （1）活性维生素D3干预可使TGF-β1过表达、TGF-β1干扰和空载体组大鼠肾脏TGF-β1、COL-1、CTGF mRNA表达均明显下调（均P＜0.05）,使PTEN mRNA表达上调（P＜0.05）.（2）电镜结果显示,TGF-β1表达水平越高,肾脏病变越严重.维生素D3干预可改善各组大鼠的肾脏病变.结论 活性维生素D3可通过TGF-β1途径保护肾脏.

关键词： butaprost   雌激素   奶牛输卵管上皮细胞   转化生长因子β3   白血病抑制因子  

摘要： 目的：研究旨在揭示雌激素、前列腺素类化合物、前列腺素受体途径对奶牛输卵管上皮细胞分泌转化生长因子β3(TGF-β3)、白血病抑制因子(LIF)有无协同调控作用。为临床上合理用药治疗奶牛输卵管机能紊乱引起的不孕症并提高奶牛繁殖能力提供理论依据。方法：1)利用胰酶消化法及机械法成功培养奶牛输卵管上皮细胞,第四代细胞为实验用细胞。2)采用荧光定量PCR技术检测(雌激素、butaprost、吲哚美辛)作用不同时间(2h、4h、8h、16h、24h.48h)对奶牛输卵管上皮细胞TGF-β3、LIFmRNA表达的影响。3)分别用不同浓度Butaprost (109-10-5mol/L)和雌激素10-10mol/L作用于奶牛输卵管上皮细胞,然后用荧光定量PCR技术检测TGF-β3、LIFmRNA表达的变化。4)采用Western Blot法检测(雌激素、butaprost、吲哚美辛)对奶牛输卵管上皮细胞中TGF-β3合成分泌的影响。5)采用ELISA法测奶牛输卵管上皮细胞中LIF的合成分泌。结果：首先,体外成功培养了奶牛输卵管上皮细胞。其次,雌激素作用16、24和48h时对奶牛输卵管上皮细胞TGF-β3的表达量与空白组相比均极显著(P<0.01)升高,4h的表达量显著性的降低(P<0.05)：且EP：受体激动剂butaprost和雌激素有协同调控TGF-β3的效应。加入吲哚美辛后能有效的抑制内源性前列腺素对TGF-β3表达的作用。雌激素(无吲哚美辛预处理)作用2h对奶牛输卵管上皮细胞LIF的表达量与空白组相比极显著性升高(P<0.01),且2h时LIFmRNA的表达量达到最大值。吲哚美辛预处理后,LIF mRNA的表达量与无吲哚美辛处理组相比均升高。第三,用不同浓度的butaprost刺激奶牛输卵管上皮细胞后,TGF-β3、LIFmRNA表达量且呈现浓度依赖性。第四,Western Blot检测TGF-β3的表达与TGF-β3mRNA检测结果基本一致。第五,ELISA检测奶牛输卵管上皮细胞中LIF的结果与LIFmRNA检测结果相符。结论：1雌激素能够促进奶牛输卵管上皮细胞中细胞因子TGF-β3, LIF mRNA的表达。2雌激素和EP2受体激动剂Butaprost对奶牛输卵管上皮细胞中细胞因子TGF-β 3 mRNA的表达有协同调控作用,对奶牛输卵管上皮细胞中细胞因子LIF mRNA的表达有拮抗作用。3内源性前列腺素对奶牛输卵管上皮细胞细胞因子TGF-β3 mRNA的表达有促进作用,对LIF mRNA的表达有抑制作用。

关键词： 放射性肺纤维化   转化生长因子β   循环纤维细胞   调节性T细胞   辅助性T细胞  

摘要： 目的意义:放射性肺纤维化是临床胸部肿瘤放疗常见的并发症之一,也可发生于骨髓移植手术前的放疗预处理及其它意外照射,其主要特征为肺脏内纤维结缔组织增多,实质细胞减少,持续进展可致肺脏结构破坏和功能减退,乃至肺功能衰竭,严重威胁人类健康和生命。临床上放射性肺纤维化缺乏特异、有效的治疗措施,患者预后较差。因此研究并阐明放射性肺纤维化发生的规律与特征和分子机制,对于临床上预测放射性肺纤维化的发生和转归,寻找干预、治疗的手段有着极其重要的意义。研究表明,转化生长因子β-1（transforming growth factor-β,TGF-β1）是重要的促纤维化因子之一,在肺纤维化过程中调控成纤维细胞分裂、增殖及细胞外基质的沉积,促进纤维化的发生。然而TGF-β3在组织损伤修复中表现出了不同于TGF-β1的抗纤维化特性,但是目前缺少TGF-β3用于放射性肺纤维化干预措施的依据。本研究以雌性C57BL/6小鼠为实验对象,建立放射性肺纤维化模型,观察TGF-β3对小鼠放射性肺纤维化的影响,寻找TGF-β3在放射性肺纤维化中可能的调控机制,为临床放射性肺纤维化的预防和治疗提供新的线索。材料与方法:雌性C57BL/6小鼠（6-8周,20±2g）麻醉后固定于自制的照射板上,除胸部外其余部分用10cm铅砖防护,采用60Coγ-射线单次胸部照射,照射剂量为20Gy,照射源距3m,剂量率215c Gy/min。在照后4h照射组给予腹腔注射0.5ml生理盐水,TGF-β3组给予0.5ml人重组TGF-β3（1μg/kgbw,生理盐水稀释）,此后每周给药一次。分别于照后1个月、3个月和6个月,观察小鼠的大体情况,检测外周血细胞参数,活杀后进行常规病理检查和Masson三色染色观察,免疫组织化学法检测肺组织中基质金属蛋白酶-9（matrix metallopeptidase-9,MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinases-1,TIMP-1）的表达,检测肺灌洗液（BALF）中细胞分类及细胞因子含量,流式细胞技术检测外周血Treg、肺内循环纤维细胞、Th17与Treg等。采用分离培养人外周血白膜的单个核细胞（PBMC）及Treg细胞建立体外培养体系,分别以不同剂量、不同比例的TGF-β1和TGF-β3混合刺激PBMC,通过流式细胞技术检测PBMC向循环纤维细胞的分化情况。并将Treg细胞与PBMC共培养,检测Treg细胞对PBMC向循环纤维细胞的分化的影响。实验结果：1、60Coγ-射线单次胸部20Gy照射后小鼠体重增加变缓,肺重略微增加,因而肺脏系数也略微增加。2、小鼠照射后外周血白细胞数有一定波动,TGF-β3组血红细胞显著降低（P<0.05）,血小板有增高趋势。3、BALF中有核细胞计数和分类结果显示照射组与TGF-β3组BALF中细胞总数和中性粒细胞数有增高的趋势,但统计学无显著差异。液体悬浮芯片细胞因子检测结果显示照射后小鼠BALF中趋化因子有先增高后降低的趋势。而TGF-β3组促炎因子IL-12分泌增多、抑炎因子IL-4分泌减少。照射组的促炎因子IL-17随着照后时间延长有增加的趋势,其中在照后6个月显著高于对照组（P<0.05）,而TGF-β3组的IL-17变化情况跟照射组正好相反,在照后1个月时显著增加（P<0.05）,随后降低并恢复至正常水平。生长因子中,照射组和TGF-β3组的FGF-basic在照后出现了先增高再降低最后恢复的波动情况。照射组的VEGF在照后有增高的趋势,其中在照后1个月和照后6个月时与对照组相比显著增加（P<0.05）。4、照射能够引起照射组小鼠出现肺泡壁增厚、肺泡间隔明显增宽、成纤维细胞大量增生、肺泡结构严重破坏、胶原纤维大量沉积的典型纤维化病理改变。给予TGF-β3组小鼠病理变化比照射组出现的晚且程度较轻,同时胶原沉积减少,但仍然可见炎性淋巴细胞浸润,蛋白样液体渗出,局部肺泡萎陷,部分肺泡腔融合扩大,局部肺泡间隔增宽,以及部分绿染的胶原纤维。5、免疫组化结果显示照射后小鼠肺内MMP-9、TIMP-1表达与对照组相比均明显增加,其中MMP-9随照后时间的延长增加的更为显著,TGF-β3组MMP-9表达显著高于照射组（P<0.05）。TIMP-1随照后时间延长变化趋势不明显。6、照射组小鼠从照后1个月起肺内循环纤维细胞明显增加（P<0.05）,随照后时间的延长,出现降低,但仍高于对照组（P<0.05）。照后1个月时,TGF-β3组循环纤维细胞数明显低于照射组（P<0.05）,与对照组相比仍有增高（P<0.05）;3m时与照射组水平接近;而6个月时低于照射组,恢复至对照组水平。7、照射组和TGF-β3组外周血Treg细胞比例随着照后时间的延长有降低趋势,但

关键词： 转化生长因子β3   基质金属蛋白酶抑制剂1   慢病毒属   椎间盘退变  

摘要： 目的:探讨慢病毒载体介导的转化生长因子β3(TGFβ3)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)联合感染对体外培养人退变椎间盘髓核细胞的影响,从而最终实现延缓甚至逆转椎间盘退变的目的。方法:单层培养人退变椎间盘髓核细胞,采用绿色荧光蛋白标记慢病毒(GV287-EGFP)评价其对髓核细胞的感染效率。应用构建的TGFβ3-P2A-TIMP1慢病毒载体感染髓核细胞,在倒置纤维镜下观察细胞形态学变化,通过Real-time q PCR技术检测感染后TGFβ3、TIMP1、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的m RNA表达量,通过Western blot技术检测感染后Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量,最终评价应用携带TGFβ3-P2A-TIMP1的慢病毒载体体外感染人退变椎间盘髓核细胞后对其细胞外基质代谢的影响。结果:感染复数(MOI)为60时可获较满意感染效率。Real-time q PCR示目的基因感染组的TGFβ3、TIMP1、Ⅱ型胶原、蛋白多糖m RNA表达量均明显高于空病毒感染组及空白对照组(F=16.350～74.378,q=2.010～10.620,P<0.05),而空病毒感染组和空白对照组间无统计学差异。Western blot示目的基因感染组的Ⅱ型胶原、蛋白多糖蛋白表达量均明显高于空病毒感染组和空白对照组(F=50.495～66.110,q=8.061～16.624,P<0.05),而空病毒感染组和空白对照组间无统计学差异。结论:慢病毒载体介导的TGFβ3和TIMP1双基因联合感染人椎间盘髓核细胞可长时间稳定表达,发挥生物学效应,促进蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成,并最终改善髓核细胞外基质的代谢。

关键词： 转化生长因子β3   DPSCs   Bio-oss骨粉   骨缺损   修复  

摘要： 目的探索TGF-β3与牙髓干细胞(DPSCs)联合Bio-oss骨粉在兔牙槽骨缺损修复中的作用。方法(1)从新西兰幼兔前牙及磨牙牙髓组织中分离DPSCs进行体外培养(2)将24只实验新西兰兔随机分为空白组;对照组1;对照组2;实验组共四组,每组6只。在四组动物下颌无牙区牙槽骨人工制备10*4*4mm骨缺损区,空白组骨缺损区填入0.25g粗颗粒Bio-oss+PBS20μL,对照组1中填入0.25g粗颗粒Bio-oss+250ng/μL TGF-β3 20μL;对照组2填入0.25g粗颗粒Bio-oss+培养好的1×108/L的DPSCs 20μL;实验组填入0.25g粗颗粒Bio-oss+250ng/μLTGF-β3 20μL+培养好的1×108/L的DPSCs20μL。术后第6周分别处死动物,进行HE染色,免疫组织化学法检测骨钙素(OC)、骨涎蛋白(BSP)、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)的表达。结果(1)原代培养的幼兔牙髓细胞少数纺锤形或多角形,多呈成纤维细胞样细胞,光镜下传代培养的细胞形态特点与原代培养无明显差异;(2)HE染色:术后6周,空白组未见明显骨小梁生成;对照1组可见少量毛细血管,可见少量骨小梁;对照2组可见骨缺损区周围有少量成骨细胞和少量毛细血管,可见少量新生骨板;实验组骨缺损区可见大量毛细血管和大量成骨细胞,新生骨板量明显增加;(3)免疫组织化学:实验组BSP表达较空白组(0.192±0.030)、对照1组(0.215±0.026)及对照2组(0.231±0.052)较高(P<0.05);实验组OC表达较空白组(0.243±0.037)、对照1组(0.272±0.058)及对照2组(0.275±0.046)较高(P<0.05);实验组COL-Ⅰ表达较空白组(0.135±0.026)、对照1组(0.151±0.033)及对照2组(0.176±0.028)较高(P<0.05);说明实验组新生骨组织数量、质量、成骨情况优于其他组。结论(1)DPSCs增殖能力强,具有稳定的生物活性,可适应长期大量培养的需要。(2)外源性TGF-β3与牙髓干细胞可有效地促进颌骨缺损的修复,为后期的临床实验提供一定的理论依据。