关键词： 转化生长因子   分批发酵   中国仓鼠   装液量   合成培养基   发酵罐   伤口愈合   测序验证   最大效应   补料  

摘要： 转化生长因子b3（TGFb3）作用于细胞的增殖和分化,对多种疾病具有治疗潜力,还可减小成人伤口愈合后的伤疤。本研究建立了过表达重组人源TGFb3（rh TGFb3）的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞株。在7.5 L发酵罐（装液量5 L）中,用合成培养基进行补料分批发酵培养（15 d）,所构建的细胞株其rhTGFb3蛋白质表达量高于133 mg/L。经过两步色谱分离,

关键词： 转化生长因子-β1   调节性T细胞   消化系肿瘤   抑制性细胞因子   机体免疫反应   机体免疫系统   免疫抑制作用   消化系统癌症  

摘要： CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Tregs）是一群具有负调节机体免疫反应作用的淋巴细胞，可通过直接接触和（或）分泌抑制性细胞因子下调机体免疫系统对抗原的反应性，起着维持自身避免耐受和避免免疫过度损伤机体的作用，也参与肿瘤细胞逃避免疫监视，又头蛋白分子3（fork-headboxprotein3，Foxp3）作为Tregs最为特异的细胞内标志物，可以控制Tregs的发育和功能；转化生长因子-β1（TGF-β1）作为一种多效性细胞因子，不仅具有很强的免疫抑制作用，也对Tregs的分化具有调节作用。近年来随着对Tregs研究的深入，发现Tregs对胃癌、食管癌、胰腺癌及肠癌等消化系统癌症的转移及预后都有消极作用。

关键词： 牙髓干细胞   TGF-β3   肝素   成骨向分化  

摘要： 目的:应用酶解组织块儿法分离,培养兔牙髓干细胞的基础上探讨肝素对转化生长因子（transforming growth factor）-β3在体外诱导兔牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）成骨向分化的能力。方法:新西兰幼兔4只,采用酶解组织块法分离培养兔DPSCs,传代培养至第3代兔DPSCs,分别以含0,5u/mL,10u/m L,20u/mL肝素的培养基培养兔DPSCs,绘制生长曲线,筛选最适浓度的肝素后成骨诱导实验分为空白对照组、TGF-β3组,肝素组和TGF-β3+肝素组,空白对照组正常培养,TGF-β3组在细胞培养基中加入20μg/L TGF-β3,肝素组在培养基中加入5u/mL肝素,TGF-β3+肝素组在细胞培养基中同时加入20μg/L TGF-β3和5 u/mL肝素。各组采用碱性磷酸酶（alkailine phosphate,ALP）试剂盒检测兔DPSCs成骨向诱导后第7、14天细胞内ALP活性,细胞爬片采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物RUNT相关转录因子2（runt related transcription factor 2,RUNX-2）和骨钙素（osteocalcin,OC）表达情况,采用茜素红染色观察矿化结节形成情况,对肝素组行免疫荧光定量PCR检测RUNX-2,BSP等成骨相关基因mRNA的相对表达量。结果:通过酶解组织块儿法获取的兔牙髓干细胞在诱导体系中生长良好。连续9天的培养后,肝素对兔DPSCs增殖表现为从10u/m L开始有明显的抑制作用,而5u/mL肝素组跟空白对照组没有差异,说明5u/m L肝素对兔DPSCs增殖没有抑制作用,即该浓度肝素对DPSCs没有损害性。TGF-β3+肝素组第7,14天ALP活性[（27.20±1.01）,（29.06±1.39）u/mg·pro]明显高于TGF-β3组[（12.69±1.03）,（9.44±1.05）u/mg·pro]和对照组[（5.96±3.68）、（6.10±3.66）u/mg·pro]（P<0.01）,TGF-β3组明显高于对照组（P<0.001）;TGF-β3组,肝素组和TGF-β3+肝素组成骨诱导第7天RUNX-2开始出现阳性表达,第14天TGF-β3组,TGF-β3+肝素组OC有阳性表达,对照组和肝素组为阴性;第21天茜素红染色对照组和肝素组为阴性,TGF-β3组为阳性,TGF-β3+肝素组为强阳性,PCR结果显示较对照组肝素组有RUNX-2 mRNA表达量上升,而BSP mRNA表达量没有上升。结论肝素有促进TGF-β3体外诱导兔DPSCs成骨向分化的能力。

关键词： 半滑舌鳎   转化生长因子β(TGF-β)   TGF-β1   TGF-β3   表达分析  

摘要： 转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)是一类具有多种功能的蛋白超家族,在细胞免疫、细胞增殖分化和组织损伤的修复中起着关键性作用。本研究从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)肝脏中克隆获得了TGF-β1和TGF-β3基因。推导的TGF-β1和TGF-β3氨基酸序列均含有多个N糖基化位点和一个TGF-β家族标签。系统进化树分析显示,半滑舌鳎TGF-β1和TGF-β3分别与鱼类的TGF-β1和TGF-β3亲缘关系最为密切。q RT-PCR结果表明,半滑舌鳎TGF-β1和TGF-β3基因在健康鱼的多个组织中均有表达,二者在皮肤中表达量最高,在肌肉中表达量最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后,TGF-β1在肝脏、脾脏和肾脏中呈现先上升后下降的表达趋势,在感染48 h后的肝脏中表达量达到最大值,是对照组的3.17倍;TGF-β3在脾脏、肾脏和鳃中也呈现先上升后下降的表达趋势,在感染24 h后的鳃中表达量达到最大值,是对照组的4.71倍。以上结果提示,TGF-β1和TGF-β3可能在半滑舌鳎抵御细菌感染的免疫中发挥了重要作用,本研究为证明二者参与机体免疫调节提供了有力证据,为半滑舌鳎分子免疫研究提供了理论依据。

关键词： TGF-β3   牙髓干细胞   增殖   骨分化  

摘要： 目的:探讨TGF-β3对体外培养的兔牙髓干细胞增殖和分化的影响。方法:采用酶解组织块法将兔DPSCs分离培养,获得DPSCs,光镜下行形态学观察;将体外培养的第3代DPSCs分为5组,分别为对照组、20 ng/m L TGF-β3组、40 ng/mL TGF-β3组、80 ng/m L TGF-β3组和100 ng/m L TGF-β3组,分别加入0、20、40、80、100 ng/m L TGF-β3;采用MTT法检测5组DPSCs A490值,采用免疫细胞化学法检测成骨细胞标记物OC、COL-I、BSP表达情况,采用茜素红染色检测出现矿化结节情况,并进行比较。结果:兔DPSCs呈集落状生长,在体外有一定克隆形成能力;对照组、20、40、80、100 ng/m L TGF-β3组兔DPSCs A490值分别为0.34±0.55、0.34±0.19、0.33±0.47、0.33±0.30、0.34±0.47,各组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05);80、100 ng/m L TGF-β3组诱导后第3天出现COL-I阳性表达,第7天开始消失,第5～7天出现BSP阳性表达,第7～14天出现OC阳性表达,第7天出现矿化结节;40 ng/m L TGF-β3组第5～7天均有COL-I阳性表达,第7天出现BSP阳性表达,第14天出现OC阳性表达,第14天出现矿化结节;20 ng/m L组第7天出现COL-I阳性表达,第14天消失,第14天出现BSP阳性表达,第21天出现OC阳性表达,第21天出现矿化结节;对照组COL-I、BSP和OC均为阴性,未出现矿化结节。结论:TGF-β3对体外培养的兔DPSCs增殖无影响,但对兔DPSCs向成骨细胞分化能力有一定促进作用,并在一定范围内呈浓度依赖关系。

关键词： 吲哚胺2,3-双加氧酶   转化生长因子-β   早孕母胎界面   蛋白表达   调控作用  

摘要： 目的：探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase IDO)和转化生长因子-β(Transforming Growth Factor Beta-1 TGF-β)在人早孕母胎界面的表达及其相关性，分析TGF-β蛋白对IDO蛋白表达的调控作用。　　方法:收集贵州医科大学附属医院门诊手术室孕7～11周正常妊娠组和自然流产组妇女行负压吸宫术后的绒毛组织及蜕膜组织，提取人外周血单核细胞作为阴性对照组。用蛋白质印迹法(Western Blot)检测TGF-β与IDO蛋白在人早期妊娠绒毛和蜕膜组织中的表达情况,明确TGF-β蛋白与IDO蛋白表达水平的相关性。　　结果：IDO蛋白和TGF-β蛋白可同时高表达于人早孕绒毛组织及蜕膜组织中;IDO和TGF-β蛋白在自然流产组绒毛及蜕膜组织的表达均均较正常妊娠组表达减弱，差异有统计学意义（P＜0.05）;TGF-β蛋白与IDO蛋白在正常妊娠组的绒毛及蜕膜组织中的表达均呈正相关关系（r1=0.59，P1＜0.05;r2=0.74，P2＜0.05)，差异有统计学意义。在自然流产组的绒毛及蜕膜组织中TGF-β蛋白与IDO蛋白表达亦呈正相关关系（r3=0.94，P3<0.05;r4=0.36，P4<0.05)，差异有统计学意义。　　结论：在生理妊娠状态下，TGF-β蛋白和IDO蛋白可同时高表达于人早孕母-胎界面，自然流产组妇女组织中TGF-β蛋白与IDO蛋白表达均较正常妊娠妇女组织中的表达明显减弱，且TGF-β蛋白和IDO蛋白表达呈正相关,提示：TGF-β蛋白与IDO蛋白共同参与调节人早孕母-胎界面免疫耐受，是维持正常妊娠的重要因素;IDO蛋白表达水平随TGF-β蛋白表达增加而增加,推测人早孕母胎界面TGF-β蛋白可能通过正性调节IDO蛋白的表达，参与调节正常妊娠免疫耐受过程。

关键词： 益精方   腺嘌呤   转化生长因子β3   不育   男性  

摘要： 目的 观察益精方对腺嘌呤法不育症大鼠睾丸组织中TGF-β 3 mRNA及蛋白表达水平的影响.方法选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,体质量（180·20）g,随机分为空白组、模型组、复方玄驹组和益精方组,每组12只.除空白组外,其余各组均以腺嘌呤1 mL/ （100g·d）的剂量连续灌胃12d;从第13天开始,空白组及模型组用等量生理盐水灌胃,复方玄驹组以复方玄驹胶囊水溶液灌胃,益精方组以益精方汤剂灌胃,每天一次,连续20d.实验结束后处死大鼠,摘取睾丸,采用免疫组化技术测定大鼠睾丸组织中TGF-β 3的表达;采用RT-PCR技术测定TGF-3 3 mRNA的表达.结果 与空白组比较,模型组中TGF-β 3及TGF-β 3 mRNA的表达均升高,差异均具有统计学意义（P＜0.01）.与模型组比较,复方玄驹组和益精方组中TGF-β 3及TGF-β 3 mRNA的表达均有所下降,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 益精方对腺嘌呤法诱导的大鼠睾丸组织中TGF-β 3及TGF-β3mRNA的高表达具有明显的抑制作用.

关键词： 肝硬化   转化生长因子β1   信号转导子和转录激活子3  

摘要： 目的探讨转化生长因子（TGF）-β1、信号转导子和转录激活子3（STAT3）信号通路在二乙基亚硝胺（DENA）诱导肝纤维化大鼠模型中的动态变化及STAT3抑制剂AG490对其的影响。方法建立DENA大鼠肝纤维化模型和AG490干预模型，分别于第0、4、8周收集肝组织，观察肝脏病理纤维化和炎症程度，STAT3T、TGF-β1蛋白质和基因表达变化，肝纤维化因子α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-cadherin（E—Cad）、MMP2和TIMPl表达。两组数据间比较采用独立样本t检验，3组以上数据组间比较采用单因素方差分析。结果DENA大鼠的肝组织炎症及纤维化程度随着时问而逐渐加重，STAT3和TGF-DlmRNA在重度肝纤维化（AF）组表达显著高于轻度肝纤维化（EF）组（P值分别为0．034，0．012），且两者呈现一致的增高表达趋势。TGF-β1、p-Smad2、α-SMA、E-Cad、STAT3和p-STAT3蛋白质表达水平在AF组显著高于对照组（P值分别为0．048、0．003、0．002、0．028、0．009和O．039）；而E—Cad蛋白水平在AF组显著低于EF组（P=0．026）。免疫荧光检测结果显示在重度肝纤维化肝组织的汇管区中可见STAT3和TGFp1共表达现象。AG490治疗后的DENA大鼠，免疫组织化学检查可见肝组织内的STAT3和TGFD1蛋白均被显著抑制。在AF大鼠中，STAT3、TGF-D1、MMP2和TIMPl蛋白质表达在AG490治疗后均显著被抑制（P值分别为0．006、0．018、0．010和0．005）。AG490治疗后AF大鼠与未治疗AF组比，炎症和肝纤维化程度均明显减轻（P值分别为0．042和0．021）。结论STAT3信号转导可能调控TGF-β1而影响肝纤维化形成，尤其在进展期肝纤维化阶段。AG490可抑制TGF β1-STAT3信号通路而产生逆转肝纤维化作用。

关键词： 转化生长因子β3   半月板,胫骨   膝关节   组织构建   软骨组织工程   半月板  

摘要： 背景:由于半月板仅红区有血供,其营养主要来自关节内的滑液。半月板损伤后,由于半月板自身愈合能力差,半月板无血供区域几乎无法愈合。目的:分析转化生长因子β3在大鼠半月板发育过程中表达情况及特点。方法:选取鼠龄1,7,14,21,28,35 d的Wistar大鼠半月板,用免疫组织化学和RT-PCR方法分别检测随不同鼠龄半月板内转化生长因子β3的表达部位及表达量变化。结果与结论:免疫组织化学发现大鼠由出生到成鼠过程中,转化生长因子β3表达从关节囊开始逐渐扩展至红区、红白区、白区;RT-PCR结果显示不同鼠龄的半月板中转化生长因子β3均可见表达,发育过程中转化生长因子β3表达逐渐增加,生长至成鼠(成鼠标准100 g/只)后表达趋于稳定。

关键词： 补体应答基因32   上皮-间充质转化   转化生长因子β   转录调控  

摘要： 目的:前期工作发现补体应答基因32(RGC-32)是转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中Smad信号下游的关键调控分子。本研究拟进一步明确TGF-β诱导肾小管EMT过程中RGC-32的转录调控机制。方法:体外培养NRK-52E细胞,利用荧光素酶报告基因实验检测RGC-32启动子活性以确定Smad结合元件(SBE)是否为TGF-β诱导的RGC-32转录调控位点;通过凝胶迁移率实验(EMSA)明确与之结合的转录调控分子。结果:(1)转染野生型SBE片段的NRK-52E细胞荧光素酶活性明显增高,而转染突变的SBE片段的细胞无此表现,表明SBE是调控TGF-β诱导的RGC-32转录启动的关键位点。(2)合成32P标记的包含SBE的寡核苷酸探针行EMSA可见TGF-β诱导的核蛋白与探针复合物生成,且加入包含SBE序列的竞争片段可以抑制此核蛋白-探针复合物的形成,表明有蛋白与SBE结合并调控RGC-32的转录。(3)当加入不同的Smad抗体行超迁移实验发现Smad2和Smad3抗体可以和复合物相互作用,表明Smad2和Smad3可能是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分。(4)将Smad2和Smad3分别与p-1500RGCluc共同转染NRK-52E细胞,Smad3可以显著增加RGC-32启动子活性,表明Smad3是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分,而不是Smad2。结论:在TGF-β诱导肾小管EMT过程中,Smad3通过与RGC-32启动子区SBE结合,从而调控肾小管EMT过程。