关键词： 肝硬化   转化生长因子β1   信号转导子和转录激活子3  

摘要： 目的探讨转化生长因子（TGF）-β1、信号转导子和转录激活子3（STAT3）信号通路在二乙基亚硝胺（DENA）诱导肝纤维化大鼠模型中的动态变化及STAT3抑制剂AG490对其的影响。方法建立DENA大鼠肝纤维化模型和AG490干预模型，分别于第0、4、8周收集肝组织，观察肝脏病理纤维化和炎症程度，STAT3T、TGF-β1蛋白质和基因表达变化，肝纤维化因子α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-cadherin（E—Cad）、MMP2和TIMPl表达。两组数据间比较采用独立样本t检验，3组以上数据组间比较采用单因素方差分析。结果DENA大鼠的肝组织炎症及纤维化程度随着时问而逐渐加重，STAT3和TGF-DlmRNA在重度肝纤维化（AF）组表达显著高于轻度肝纤维化（EF）组（P值分别为0．034，0．012），且两者呈现一致的增高表达趋势。TGF-β1、p-Smad2、α-SMA、E-Cad、STAT3和p-STAT3蛋白质表达水平在AF组显著高于对照组（P值分别为0．048、0．003、0．002、0．028、0．009和O．039）；而E—Cad蛋白水平在AF组显著低于EF组（P=0．026）。免疫荧光检测结果显示在重度肝纤维化肝组织的汇管区中可见STAT3和TGFp1共表达现象。AG490治疗后的DENA大鼠，免疫组织化学检查可见肝组织内的STAT3和TGFD1蛋白均被显著抑制。在AF大鼠中，STAT3、TGF-D1、MMP2和TIMPl蛋白质表达在AG490治疗后均显著被抑制（P值分别为0．006、0．018、0．010和0．005）。AG490治疗后AF大鼠与未治疗AF组比，炎症和肝纤维化程度均明显减轻（P值分别为0．042和0．021）。结论STAT3信号转导可能调控TGF-β1而影响肝纤维化形成，尤其在进展期肝纤维化阶段。AG490可抑制TGF β1-STAT3信号通路而产生逆转肝纤维化作用。

关键词： 转化生长因子β3   半月板,胫骨   膝关节   组织构建   软骨组织工程   半月板  

摘要： 背景:由于半月板仅红区有血供,其营养主要来自关节内的滑液。半月板损伤后,由于半月板自身愈合能力差,半月板无血供区域几乎无法愈合。目的:分析转化生长因子β3在大鼠半月板发育过程中表达情况及特点。方法:选取鼠龄1,7,14,21,28,35 d的Wistar大鼠半月板,用免疫组织化学和RT-PCR方法分别检测随不同鼠龄半月板内转化生长因子β3的表达部位及表达量变化。结果与结论:免疫组织化学发现大鼠由出生到成鼠过程中,转化生长因子β3表达从关节囊开始逐渐扩展至红区、红白区、白区;RT-PCR结果显示不同鼠龄的半月板中转化生长因子β3均可见表达,发育过程中转化生长因子β3表达逐渐增加,生长至成鼠(成鼠标准100 g/只)后表达趋于稳定。

关键词： 补体应答基因32   上皮-间充质转化   转化生长因子β   转录调控  

摘要： 目的:前期工作发现补体应答基因32(RGC-32)是转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中Smad信号下游的关键调控分子。本研究拟进一步明确TGF-β诱导肾小管EMT过程中RGC-32的转录调控机制。方法:体外培养NRK-52E细胞,利用荧光素酶报告基因实验检测RGC-32启动子活性以确定Smad结合元件(SBE)是否为TGF-β诱导的RGC-32转录调控位点;通过凝胶迁移率实验(EMSA)明确与之结合的转录调控分子。结果:(1)转染野生型SBE片段的NRK-52E细胞荧光素酶活性明显增高,而转染突变的SBE片段的细胞无此表现,表明SBE是调控TGF-β诱导的RGC-32转录启动的关键位点。(2)合成32P标记的包含SBE的寡核苷酸探针行EMSA可见TGF-β诱导的核蛋白与探针复合物生成,且加入包含SBE序列的竞争片段可以抑制此核蛋白-探针复合物的形成,表明有蛋白与SBE结合并调控RGC-32的转录。(3)当加入不同的Smad抗体行超迁移实验发现Smad2和Smad3抗体可以和复合物相互作用,表明Smad2和Smad3可能是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分。(4)将Smad2和Smad3分别与p-1500RGCluc共同转染NRK-52E细胞,Smad3可以显著增加RGC-32启动子活性,表明Smad3是TGF-β诱导的转录复合物的组成部分,而不是Smad2。结论:在TGF-β诱导肾小管EMT过程中,Smad3通过与RGC-32启动子区SBE结合,从而调控肾小管EMT过程。

关键词： 吲哚胺2,3-双加氧酶   转化生长因子-β   蜕膜   绒毛  

摘要： 目的探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)和转化生长因子-β(Transforming Growth Factor Beta,TGF-β)在母胎界面的表达及其相关性,分析TGF-β对IDO表达的调节作用。方法Western blot方法检测正常妊娠绒毛及蜕膜组织中TGF-β和IDO蛋白的表达。结果 IDO及TGF-β蛋白同时表达于正常妊娠绒毛和蜕膜组织中;TGF-β与IDO蛋白表达呈正相关(r1=0.59,P1<0.05;r2=0.74,P2<0.05)。结论在生理妊娠状态下,母胎界面中TGF-β通过正性调节IDO的表达,参与妊娠免疫耐受的调节。

关键词： 口腔鳞状细胞癌   转化生长因子-β   叉状头转录因子P3  

摘要： 目的观察在大鼠舌黏膜癌变过程中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和叉状头转录因子P3(forkhead box P3 transcription factor,FOXP3)的mRNA表达变化情况及两者的相关性,初步探讨两者在大鼠舌黏膜癌变中的作用。方法应用前期实验获取的4-亚基硝氧喹啉(4-nitroquinoline-1-oxid,4NQO)诱发大鼠舌黏膜癌变标本,包括正常黏膜组织(对照组)、异常增生组织(异常增生组)和鳞癌组织(鳞癌组)各8例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各标本中TGF-β、FOXP3 mRNA表达水平,并对二者表达的相关性进行分析。结果 TGF-β、FOXP3的mRNA相对表达量在对照组中分别为3.0±1.6、1.8±0.8,异常增生组中分别为5.2±1.6、3.6±1.0,鳞癌组中分别为13.6±3.0、6.1±2.5。与对照组相比,TGF-β、POXP3在异常增生组中表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);在鳞癌组中两者的表达水平进一步增强。随病理分级增加,TGF-β、POXP3的表达呈现递增趋势。并且,在异常增生和鳞癌组中,TGF-β与FOXP3 mRNA表达呈正相关关系(相关系数r=0.686,P<0.001)。结论 TGF-β、POXP3基因表达异常可能与4NQO诱发的大鼠舌黏膜癌变相关。

关键词： 转化生长因子β3   基质金属蛋白酶抑制剂1   慢病毒属   椎间盘退变  

摘要： 目的探讨慢病毒载体介导的转化生长因子β3（TGFβ3）和基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP1）联合感染对人退变椎间盘髓核细胞的影响。方法应用构建的TGFβ3-P2A-TIMP1慢病毒载体感染人髓核细胞,通过实时荧光定量PCR（Real-time qPCR）技术、Western blot技术检测其对人髓核细胞代谢的影响。结果Real-time qPCR检测结果显示,目的基因感染组的TGFβ3、TIMP1、Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA表达量均明显高于其他各组（F=16.350~74.378,q=2.010~10.620,P〈0.05）。Western blot检测结果显示,目的基因感染组Ⅱ型胶原、蛋白多糖的蛋白表达量均明显高于对照组（F=50.495~66.110,q=8.061~16.624,P〈0.05）。结论慢病毒载体介导的TGFβ3和TIMP1双基因联合感染人髓核细胞可促进Ⅱ型胶原和蛋白多糖的合成,改善髓核细胞外基质代谢。

关键词： 哮喘   益气固本胶囊/治疗应用   气道重塑   转化生长因子β1   Smad3   小鼠  

摘要： 目的观察不同剂量益气固本胶囊对哮喘小鼠病理及气道重塑中TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法将60只雄性SPF级BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松干预组、童康片组、益气固本胶囊高剂量组和益气固本胶囊低剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组均以卵清白蛋白致敏和激发复制哮喘模型,于第21天起,在每次激发前1h分别给予模型组和用药各组以纯净水及药物灌胃,正常组不给予任何处置。应用HE染色观察各组小鼠气道及肺组织的病理学改变,免疫组织化学法检测肺组织TGF-β1和P-Smad3蛋白的表达。结果小鼠气道病理切片观察模型组的气管、肺组织病理改变程度高于正常组、地塞米松干预组、童康片组、益气固本胶囊高剂量组、益气固本胶囊低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);地塞米松干预组与益气固本胶囊高剂量组、益气固本胶囊低剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05);与正常组相比,TGF-β1蛋白在模型组、地塞米松干预组、童康片组、益气固本胶囊高剂量组、益气固本胶囊低剂量组表达水平增强,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,地塞米松干预组、童康片组、益气固本胶囊高剂量组、益气固本胶囊低剂量组TGF-β1蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);地塞米松干预组与益气固本胶囊高剂量组、益气固本胶囊低剂量组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);益气固本胶囊高剂量组与益气固本胶囊低剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05);与正常组相比,P-Smad3蛋白在模型组、地塞米松干预组、童康片组、益气固本胶囊高剂量组、益气固本胶囊低剂量组表达水平增强,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,地塞米松干预组、童康片组、益气固本胶囊高剂量组、益气固本胶囊低剂量组P-Smad3蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.01);地塞米松干预组PSmad3蛋白表达比童康片组、益气固本胶囊高剂量组、益气固本胶囊低剂量组更低,差异有统计学意义(P<0.01);童康片组与益气固本胶囊高剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05);益气固本胶囊高剂量组与益气固本胶囊低剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气固本胶囊可抑制哮喘小鼠体内TGF-β1和P-Smad3的过度表达,从而阻断TGF-β1胞内信号转导,可在一定程度上减轻哮喘小鼠气道炎症和抑制气道重塑的发生发展。

关键词： 转化生长因子   基质金属蛋白酶抑制剂   骨髓间充质干细胞   软骨缺损   丝素蛋白/壳聚糖生物支架  

摘要： 目的 探讨单纯转化生长因子-β3（TGF-β3）和TGF-β3与基质金属蛋白酶抑制剂-2联合转染兔骨髓间充质干细胞复合丝素蛋白/壳聚糖（SF-CS）生物支架植入动物体内修复兔膝关节软骨缺损的可行性及效果差异.方法 将新西兰大白兔20只分为4组（支架组、未转染组、reAAV-TGF-β3转染组、联合转染组）,每组5只.按组别重组腺相关病毒转染兔骨髓间充质干细胞与SF-CS生物支架复合,分别植入兔膝关节软骨缺损处.2个月后处死家兔,肉眼观察以及苏木素-伊红（HE）染色评定缺损软骨修复情况.并进行软骨细胞特征性甲苯胺蓝染色鉴定.结果 2个月后除支架组外各实验组兔膝关节软骨缺损处均有软骨样物质形成,且联合转染组诱导的新生软骨更接近缺损处周围正常软骨.Moran观察评分分别为支架组（0.600±0.548）分、未转染组（1.800±0.447）分、reAAV-TGF-β3转染组（3.800±0.837）分、联合转染组（5.400±0.548）分.联合转染组与reAAV-TGF-β3转染组间,reAAV-TGF-β3转染组与未转染组间差异均有统计学意义（P＜0.05）.HE染色结果提示联合转染组软骨修复效果较单纯TGF-β3转染组更好.结论 单纯TGF-β3转染兔骨髓间充质干细胞对兔膝关节软骨缺损有修复作用,TGF-β3与基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）联合转染组修复缺损效果更明显,提示TIMP-2与TGF-β3具有协同效应.

关键词： 面神经损伤   牙髓干细胞   转化生长因子-β3   兔  

摘要： 目的探讨再生室内联合应用牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)和转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)修复兔面神经横断性损伤的可行性,比较各时间段不同药物干预后面神经的恢复情况。方法健康成年新西兰大白兔36只,随机分为DPSCs+TGF-β3组(实验组)、TGF-β3组和PBS组,每组各12只,3组均于兔左面颊部分离面神经上颊支并切断,利用硅胶管作为再生室桥接离断的神经上颊支,建立面神经上颊支横断伤模型。实验组在再生室内加入100ng/μL TGF-β3液和1×108/LDPSCs悬液0.1mL,TGF-β3组加入等量100ng/μL TGF-β3液,PBS组加入等量PBS液,术后4、12周比较3组兔面神经修复再生情况。结果4、12周时实验组神经纤维数[(1 034.58±94.28)、(1 425.92±188.98)根]和纤维直径[(2.05±0.14)、(7.18±0.40)μm]高于TGF-β3组[(935.00±44.60)、(1 053.42±135.26)根,(1.56±0.12)、(6.21±0.47)μm]和PBS组[(555.50±80.20)、(694.36±24.11)根,(1.26±0.08)、(3.64±0.56)μm](P<0.05);12周时3组再生神经纤维总数和纤维直径均高于4周时(P<0.05)。结论 TGF-β3与DPSCs联合应用可有效促进面神经再生,二者联合应用较单用TGF-β3修复效果好;DPSCs可作为种子细胞应用于面神经组织工程。

关键词： 布他前列腺素(butaprost)   雌激素   奶牛输卵管上皮细胞   转化生长因子β3(TGFβ3)  

摘要： 本试验旨在观察前列腺素E2受体激动剂(布他前列腺素(butaprost))与雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中转化生长因子β3(TGFβ3)表达的影响,阐明butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞TGFβ3有无协同调控作用。采用胰酶消化法及机械法分离培养奶牛输卵管上皮细胞,分别将butaprost和雌激素作用于体外培养的奶牛输卵管上皮细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测butaprost和雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中TGFβ3mRNA表达的影响。结果显示,与0h作用组相比,雌激素作用16、24和48h时对奶牛输卵管上皮细胞TGFβ3的表达量均极显著升高(P<0.01),4h的表达量极显著降低(P<0.01);且受体激动剂butaprost和雌激素有协同调控TGFβ3的效应;加入吲哚美辛后能有效抑制内源性前列腺素对TGFβ3表达的作用。结果表明,butaprost和雌激素可调控奶牛输卵管上皮细胞TGFβ3mRNA的表达。