关键词： 莪术   三棱   药对   子宫肌瘤   转化生长因子β3   基质金属蛋白酶11   大鼠  

摘要： 目的:研究莪术-三棱药对合煎液对大鼠子宫肌瘤的防治作用及机制。方法:将大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(米非司酮,2.25 mg/kg)和药对合煎液组(莪术-三棱药对合煎液,6.0 g/kg),每组10只。除正常组外,其余各组大鼠分别于每周一、三、五im苯甲酸雌二醇注射液(0.5 mg/kg),持续12周;从第13周开始,造模组大鼠增加im黄体酮注射液(5 mg/kg),并每天ig给药1次,至实验第16周。给药结束后,测定大鼠子宫系数,苏木精-伊红染色观察大鼠子宫病理变化并测定平滑肌厚度,免疫组化染色法测定大鼠子宫组织中转化生长因子β_3(TGF-β_3)和基质金属蛋白酶11(MMP-11)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠子宫系数升高、子宫发生明显病理变化、子宫平滑肌厚度增加、子宫组织中TGF-β_3和MMP-11蛋白表达增强(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,阳性组和药对合煎液组大鼠上述变化均显著改善(P<0.05或P<0.01)。结论:莪术-三棱药对合煎液对大鼠子宫肌瘤有一定的防治作用,其机制可能与下调子宫组织中TGF-β_3、MMP-11蛋白表达有关。

关键词： 肺癌   外源性信号素3A   信号通路   转化生长因子-β1   Akt磷酸化  

摘要： 目的:探讨外源性信号素3A(Sema 3A)信号通路对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺癌A549细胞侵袭、增殖的影响及可能作用机制。方法:将肺癌A549细胞分为3组,即空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1组)、Sema 3A预处理组(Sema 3A+TGF-β1组)。空白对照组细胞正常培养;TGF-β1组加入5μg·L^(-1)TGF-β1;Sema 3A+TGF-β1组首先加入10μmol·L^(-1)Sema 3A,预处理40~50 min后再加入5μg·L^(-1)TGF-β1。检测细胞增殖、侵袭能力和E-cadherin、Akt、P-Akt蛋白表达。结果:Sema 3A+TGF-β1组细胞Sema 3A mRNA相对表达水平显著高于空白对照组和TGF-β1组(均P<0.05)。培养36 h^72 h内,TGF-β1组细胞增殖率显著高于Sema 3A+TGF-β1组和空白对照组(均P<0.05),Sema 3A+TGF-β1组细胞增殖率显著高于空白对照组(均P<0.05)。TGF-β1组穿透滤膜细胞数显著高于Sema 3A+TGF-β1组和空白对照组(均P<0.05),Sema 3A+TGF-β1组穿透滤膜细胞数显著高于空白对照组(P<0.05)。TGF-β1组E-cadherin蛋白表达显著低于Sema 3A+TGF-β1组和空白对照组(均P<0.05),P-Akt蛋白显著高于Sema 3A+TGF-β1组和空白对照组(均P<0.05);Sema 3A+TGF-β1组E-cadherin蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.05),P-Akt显著高于空白对照组(P<0.05)。结论:Sema 3A能够抑制TGF-β1诱导肺癌细胞侵袭、增殖的效应,其机制可能与抑制Akt磷酸化、上调E-cadherin表达有关。

关键词： 中药   慢性肾脏病   转化生长因子β1   氧化应激指标  

摘要： 目的探讨益气清热降浊中药治疗慢性肾脏病3~4期疗效及对转化生长因子β_1(TGF-β_1)、氧化应激指标的影响。方法将140例慢性肾脏病3~4期患者随机分为2组,对照组70例给予氯沙坦钾治疗,观察组70例在此基础上加用益气清热降浊中药治疗,观察2组治疗前后中医证候积分、SF-36量表评分、肾脏功能指标水平及IL-6、TNF-α、TGF-β_1、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平变化情况,统计2组近期疗效。结果 2组治疗后腰膝酸软、倦怠乏力、水肿难消、纳呆腹胀及畏寒喜暖积分均显著低于治疗前(P均<0.05),生理功能、生理职能、身体疼痛、生命活力、社会职能、情感职能及精神健康评分均显著高于治疗前(P均<0.05),且观察组治疗后各项评分改善情况均显著优于对照组(P均<0.05);2组治疗后24 h尿蛋白定量、SCr、BUN、IL-6和TNF-α水平均显著低于治疗前(P均<0.05),且观察组治疗后各项指标水平均显著低于对照组(P均<0.05);对照组治疗后TGF-β_1水平显著高于治疗前(P<0.05),SOD和GSH-Px水平均显著低于治疗前(P均<0.05);观察组治疗后TGFβ_1水平显著低于治疗前及对照组(P均<0.05),治疗组治疗前后SOD和GSH-Px水平比较差异无统计学意义(P均>0.05);观察组近期治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05)。结论益气清热降浊中药治疗慢性肾脏病3~4期可有效缓解临床症状体征,提高日常生活质量,改善肾脏功能,调节炎性细胞因子、TGF-β_1及氧化应激指标水平。

关键词： 2型糖尿病   周围神经病变   转化生长因子β1   25-OH维生素D3  

摘要： 目的探讨2型糖尿病患者转化生长因子β_1(TGF-β_1)及血清25-OH维生素D_3[25-(OH)D_3]表达水平与周围神经病变的相关性。方法选取2015年1月至2016年1月就诊治疗的2型糖尿病患者150例为观察组,选择同期体检健康者40例作为健康对照组;根据多伦多临床评分系统(TCSS)诊断2型糖尿病患者是否为糖尿病周围神经病变(DPN)及DPN的严重程度,分为单纯2型糖尿病组40例,轻度DPN组35例,中度DPN组37例,重度DPN组38例。收集所有研究者空腹静脉血检测血清TGF-β_1及25-(OH)D_3水平。结果 3个DPN组患者的TGF-β_1水平均较单纯2型糖尿病组和健康对照组明显升高,且随着DPN程度的增加,TGF-β_1水平降低,而DPN组患者的25-(OH)D_3均较单纯2型糖尿病组和健康对照组明显降低,且DPN程度与25-(OH)D_3趋向负相关,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 2型糖尿病合并DPN患者TGF-β_1明显升高,而25-(OH)D_3明显降低,且随着DPN程度的增加,TGF-β_1水平却降低,25-(OH)D_3也降低。

关键词： 牙髓干细胞   转化生长因子-β3   骨缺损   成骨细胞   兔  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β_3(transforming growth factor-β_3,TGF-β3)联合体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)对兔骨缺损处成骨细胞TGF-β_3表达的影响。方法 37只新西兰大白兔,取其中1只兔牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,体外培养,光镜下行细胞形态学观察,将DPSCs传代至第3代,冷冻储存待用。余36只新西兰大白兔随机分为PBS组、DPSCs组、TGF-β_3+DPSCs组,每组12只。在兔下颌前牙及磨牙区颊侧随机人工制备约8mm×2mm×3mm骨缺损区域,PBS组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+PBS 20μL,DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+1×108/L DPSCs 20μL,TGF-β3+DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+1×108/L DPSCs20μL+80ng/L TGF-β320μL。术后第4、8周3组分别处死6只兔,在骨缺损处行锥形束CT检查观察牙槽骨长度、宽度和高度丧失情况,采用茜素红染色观察骨缺损处骨愈合情况,采用免疫组织化学法观察种植体骨缺损处成骨细胞TGF-β_3表达水平。结果原代培养的兔DPSCs呈集落生长,多呈梭形,少数呈多角形或纺锤形;术后4周TGF-β_3+DPSCs组茜素红染色较PBS组、DPSCs组出现更多红色钙化结节,术后8周钙化结节进一步增多;术后4、8周,TGF-β_3+DPSCs组牙槽骨长度、宽度和高度丧失均少于DPSCs组和PBS组,DPSCs组少于PBS组(P<0.05);术后4周,TGF-β_3+DPSCs组成骨细胞TGF-β_3表达水平(0.33±0.02)明显高于DPSCs组(0.15±0.01)和PBS组(0.09±0.03)(P<0.05),DPSCs组与PBS组比较差异无统计学意义(P>0.05);术后8周,TGF-β_3+DPSCs组成骨细胞TGF-β_3表达水平(0.46±0.01)明显高于PBS组(0.29±0.02)(P<0.05),与DPSCs组(0.38±0.04)比较差异无统计学意义(P>0.05),DPSCs组与PBS组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DPSCs具有高度增殖的生物学特性,并具有成骨向分化潜能;外源性TGF-β_3联合DPSCs可增强内源性TGF-β_3的表达。

关键词： 肝再生磷酸酶-3   结肠癌   转化生长因子-beta   侵袭  

摘要： 目的探讨转化生长因子-beta(TGF-beta)通路在肝再生磷酸酶-3(PRL-3)促进结肠癌细胞侵袭和转移中的作用机制。方法酶联免疫吸附试验ELISA检测实验组与对照组结肠癌细胞TGF-beta水平表达差异,Transwell侵袭小室法检测Lo Vo细胞侵袭能力变化,Western blot检测相关通路蛋白水平变化。结果 ELISA实验检测结肠癌细胞转染PRL-3后,稳定表达PRL-3的Lo Vo细胞(Lo Vo-P)与对照组(Lo Vo-C)相比,TGF-beta表达明显升高(114±11 pg/m L比56±8 pg/m L,P<0.01)。Transwell侵袭实验提示不同浓度的TGF-beta中和抗体(1、10、100 ng/m L)作用Lo Vo-P后其侵袭能力逐渐降低,对照组穿膜细胞数为142.7±11.3个,实验组分别为96.1±8.2、67.3±9.4、48.6±6.4个(P<0.05)。蛋白印记实验提示PI3K/AKT信号通路参与了其诱导侵袭的过程,使用PI3K抑制剂LY294002(10 mg/m L)后,Lo Vo-P的AKT磷酸化蛋白的表达水平降低2.5倍(P<0.05)。结论 PRL-3能诱导结肠癌Lo Vo细胞分泌TGF-beta,激活PI3K/AKT信号通路进而促进结肠癌Lo Vo细胞侵袭。

关键词： 转化生长因子β3   种植体   骨结合   牙髓干细胞  

摘要： 目的初步探讨转化生长因子β3 （transforming growth factor-β3, TGF-β3）联合体外培养的兔牙髓干细胞（dental pulp stem cells，DPSC）对增强种植体骨结合的影响，为缩短种植周期及增强骨结合提供新的视角。 方法将36只新西兰大白兔按随机数字表法随机分为磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）组、DPSC组及TGF-β3＋DPSC组，每组12只。在兔下颌按随机数字表法随机拔除2颗牙齿，即刻植入种植体，PBS组植入Bio-Oss骨粉0.30 g＋PBS 20 μl; DPSC组植入Bio-Oss骨粉0.30 g＋ 1×108个/L DPSC 20 μl；TGF-β3＋DPSC组植入Bio-Oss骨粉0.30 g＋80 μg/L TGF-β3 20 μl＋1×108个/L DPSC 20 μl。术后4、8周分别处死新西兰大白兔18只，行茜素红染色检测成骨质量，行图像灰度分析检测骨涎蛋白、Ⅰ型胶原蛋白及骨钙蛋白的表达，行骨形态计量学分析检测种植体周围骨板宽度（combined bone lamella width，CBLW）、骨结合率（implant bone contact rate，IBCR）、骨小梁宽度（trabecular width, TW）及骨小梁视野面积百分比（trabecular area, TA）。 结果茜素红染色显示，术后4、8周，TGF-β3＋DPSC组较其他两组出现更多的红色钙化结节；术后8周较术后4周钙化结节进一步增多。图像灰度分析显示：术后4周，TGF-β3＋DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.35±0.04）、（0.36±0.03）及（0.39±0.01）；DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.27±0.02）、（0.24±0.01）及（0.28±0.03）；PBS组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.13±0.03）、（0.15±0.02）及（0.16±0.02）。术后8周，TGF-β3＋DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.51±0.02）、（0.49±0.03）及（0.53±0.02）；DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.35±0.02）、（0.37±0.01）及（0.38±0.01）；PBS组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原相对表达量分别为（0.21±0.03）、（0.19±0.02）及（0.22±0.02）。术后4、8周，TGF-β3＋DPSC组骨涎蛋白、骨钙蛋白及Ⅰ型胶原表达均显著高于DPSC组及PBS组（P〈0.05），DPSC组与PBS组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。术后8周，TGF-β3＋DPSC组CBLW、IBCR、TW、TA均显著高于DPSC组及PBS组（P〈0.05），DPSC组与PBS组间差异无统计学意义（P〉0.05）。 结论DPSC具有成骨向分化潜能；TGF-β3对DPSC成骨向分化具有促进作用；TGF-β3联合DPSC可有效促进种植体的骨结合。

关键词： 转化生长因子β3   DNA甲基转移酶   CpG岛   DNA甲基化  

摘要： 目的研究2，3，7，8-四氯二苯二噁英（2，3，7，8-tetrachlrodibenzo-p—dioxin，TCDD）诱导的胎鼠腭发育过程中转化生长因子β3（transforming growth factor beta3，TGF-β3）、DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases，Dnmts）基因启动子区CpG岛甲基化状态与TGF—β1、Dnmts表达量的相关性。方法将18只C57BL／6J孕鼠完全随机分为TCDD组和对照组，每组各9只。TCDD组于妊娠第10．5天（gestation day，GD10．5）给予28μg／kg的TCDD口服，对照组给予等体重体积的玉米油口服。分别于GD13．5、14．5、15．5处死孕鼠，收集2组胎鼠腭突组织。通过试剂盒进行基因组DNA提取、亚硫酸氢盐转化、甲基化特异性PCR，将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，分析2组各时间点腭组织表达的TGF-β3、Dnmts启动子CpG岛甲基化状态。应用IBMSPSS20．0软件进行统计分析，两样本间均数比较均采用独立样本t检验，所有结果作K-S检验均符合正态分布，方差不齐者采用校正t检验，P〈0．05表示差异有统计学意义。结果2组各时间点TGF—β3启动子区CpG岛均处于低甲基化水平，TCDD组和对照组GD13．5、GD14．5、GD15．5甲基化程度分别为（8．6±0．8）％和（8．7±0．8）％、（11．5±1．4）％和（11．7±1．0）％、（12．0±0．7）％和（12．1±0．5）％，相同时间点TCDD组与对照组间差异无统计学意义（P〉0．05）。Dnmt1启动子区CpG岛均处于高甲基化水平，TCDD组和对照组GD13．5、GD14．5、GD15．5甲基化程度分别为（73．9±1．1）％和（72．6±0．8）％、（70．8±1．7）％和（70．7±1．0）％、（69．4±2．2）％和（69．7±0．5）％，相同时间点TCDD组与对照组间差异亦无统计学意义（P〉0．05）。TCDD组Dnmt3a启动子区CpG岛1的甲基化水平在GD13．5和GD15．5高于对照组，分别为（21．9±1．1）％和（8．1±0．6）％（P〈0．01）、（43．4±0．4）％和（32．9±0．7）％（P〈0．01），在GD14．5低于对照组，分别为（33．2±0．5）％和（42．9±0．3）％（P〈0．01）。对照组Dnmt3a启动子区CpG岛2的甲基化水平在各时间点均高于TCDD组，GD13．5、GD14．5、GD15．5甲基化程度分别为（82．0±0．7）％和（32．3±0．6）％（P〈0．01）、（62．7±1．0）％和（25．5±1．4）％（P〈0．01）、（47．2±0．4）％和（30．3±1．4）％（P〈0．01）。结论TCDD诱导的胎鼠腭发育期间Dnmt3a启动子区接近第1外显子处CpG岛2的低甲基化水平，可能是Dnmt3a基因在GD13．5高表达的原因，并因此诱发胎鼠腭裂的基因组呈高甲基化状态。TGF—β3和Dnmtl启动子区CpG岛甲基化状态与TCDD作用无关。

关键词： 转化生长因子β3   成骨细胞   炎症   IL-6  

摘要： 目的 :探讨转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)对成骨细胞内炎性细胞因子IL-6表达的影响,及其发挥抗炎作用的机制。方法:20μg/m L牙髓卟啉单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide of Porphyromonas endodontalis,P.e-LPS)刺激人成骨肉瘤细胞系MG63,构建成骨细胞炎症模型。取不同浓度(5~20 ng/m L)的人重组蛋白生长因子TGF-β3和TGF-β1,分别与20μg/m L P.e-LPS共同作用于MG63细胞24 h后,利用实时荧光定量PCR检测细胞内IL-6 m RNA的表达,ELISA法检测培养液上清中IL-6的表达水平。以10 ng/m L TGF-β3预处理细胞30 min后,再与20μg/m L P.e-LPS共同作用20 min,Western印迹法检测细胞内ERK1/2蛋白磷酸化的表达。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:实时荧光定量PCR结果显示,单独20μg/m L P.e-LPS作用下,MG63细胞内IL-6的表达显著增高(P<0.01);TGF-β1在低浓度条件下(5~10 ng/m L)对IL-6的表达无显著作用,仅在20 ng/m L时可显著抑制IL-6的表达(P<0.05)。不同浓度的TGF-β3与P.e-LPS共同作用均可显著抑制IL-6的表达(P<0.01)。ELISA结果显示,10~20 ng/m L TGF-β3可在蛋白水平上对IL-6有显著抑制作用(P<0.05)。单独P.e-LPS作用时,可使MG63细胞内ERK1/2蛋白的磷酸化水平升高(P<0.01);而当TGF-β3与P.e-LPS共同作用时,ERK1/2的磷酸化被抑制(P<0.05)。结论:相同浓度条件下,TGF-β3比TGF-β1对成骨细胞炎症的抑制作用更为显著,ERK1/2信号机制参与了TGF-β3的抗炎过程。