关键词： 转化生长因子β3   牙髓干细胞   牙种植体   骨结合  

摘要： 目的建立兔下颌骨前牙区种植修复动物实验模型，探讨转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-β3联合体外培养的兔牙髓干细胞（dental pulp stem cells，DPSC）在兔种植体周围骨结合中的作用。 方法将实验新西兰兔按随机数字表随机分为实验组、对照组和空白组，每组6只，在实验组的种植体与骨间隙内充填TGF-β3、DPSC、人工骨粉的混合物，在对照组的种植体与骨间隙内充填DPSC、人工骨粉的混合物，在空白组的种植体与骨间隙内充填磷酸盐缓冲液和人工骨粉的混合物。术后2周处死各组动物，观察游离下颌骨并对种植体周围骨组织进行HE染色和免疫组化染色，实时荧光定量PCR检测成骨相关基因的表达水平。 结果种植体植入后均无脱落、松动。HE染色结果显示空白组可见种植体周围骨小梁稀疏，未见明显新骨形成，少量血管；对照组可见种植体周围骨小梁较稀疏、纤细，成骨细胞呈线状排列在骨小梁周围，少量新骨形成；实验组可见种植体周围骨小梁较多，其粗大且致密，成骨细胞呈密集成团排列、功能活跃被基质包裹，新骨形成较多，可观察到典型的骨陷窝、骨细胞并伴有大量新生血管。免疫组织化学结果显示实验组、对照组、空白组骨涎蛋白的平均阳性面积所占比例分别为（24.6±5.3）%、（11.3±2.8）%及（7.6±3.8）%。实验组骨涎蛋白呈强阳性表达，明显高于其他两组（P=0.000，P=0.000）。实时荧光定量PCR结果显示实验组RUNX相关转录因子2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶基因的表达水平均高于空白组和对照组，且差异均有统计学意义（P=0.023）。 结论TGF-β3具有促进DPSC向成骨细胞转化的潜能，能增加成骨细胞的数量并促进种植体周围骨结合，为解决临床种植骨愈合时间过长等问题提供新思路。

关键词： 骨骼肌   筋膜细胞   间充质干细胞   软骨细胞   骨形态发生蛋白4   转化生长因子β3   细胞分化   种子细胞   成肌细胞   国家自然科学基金   肌,骨骼   筋膜   软骨细胞   组织工程  

摘要： 背景:骨骼肌中的肌源性细胞在骨形态发生蛋白4与转化生长因子β3的作用下具有成软骨分化的能力,但由于骨骼肌组成复杂,其中包括肌纤维组织、筋膜组织、血管组织、神经组织等,所以其中具备向软骨分化能力的细胞组织来源尚未确定。目的:观察骨骼肌中筋膜源性细胞分化成软骨细胞的能力,以明确骨骼肌来源的细胞中具有成软骨分化能力的种子细胞。方法:分离大鼠的臀大肌筋膜组织,剪成细小组织块后于含骨形态发生蛋白4和转化生长因子β3的软骨形成培养基中培养,在第14天收集样本,使用阿尔新蓝、苏木精-伊红染色和番红O染色来鉴定筋膜源性细胞的成软骨细胞分化能力;使用结蛋白、CD34、波形蛋白、v-WF和α平滑肌肌动蛋白相应抗体的免疫染色来研究筋膜源性细胞上各种不同细胞标志物在的表达情况;筋膜源性细胞与L6大鼠成肌细胞不同比例混合(1∶0,4∶1,1∶1,1∶4,0∶1),用免疫染色方法分析筋膜源性细胞和L6细胞分化成软骨细胞的能力。结果与结论:(1)当在软骨形成培养基中培养第14天时,在阿尔新蓝和番红O免疫染色为阳性结果,表明筋膜组织块中的细胞具有分化成软骨细胞的能力;(2)分离的筋膜源性细胞的结蛋白,CD34、v-WF抗原和α平滑肌肌动蛋白的表达是阴性的,但超过90%的细胞表达波形蛋白;(3)纯筋膜源性细胞成软骨分化能力最强,随着L6大鼠成肌细胞比例增高,其成软骨分化能力逐渐下降;(4)结果提示,从骨骼肌中筋膜源性细胞表面标记物分析、免疫染色及筋膜源性细胞与L6大鼠成肌细胞混合培养对比后,表明筋膜源性细胞具有分化成软骨细胞的能力,是骨骼肌来源的细胞中具有成软骨能力的种子细胞。

关键词： 骨软骨前体细胞   转化生长因子β3   软骨组织工程   成软骨分化   骨关节炎   组织构建   骨关节炎   软骨细胞   组织工程  

摘要： 背景:关节软骨中存在着前软骨干细胞,可能成为软骨组织工程潜在的种子细胞,转化生长因子β3对前软骨干细胞的增殖及成软骨分化具有正向调节作用。目的:分析转化生长因子β3对骨软骨前体细胞成软骨的分化作用。方法:分离筛选出晚期骨关节炎患者软骨组织CD146^+软骨细胞并鉴定。培养CD146^+软骨细胞团块分为4组:为普通培养基组,转化生长因子β3-诱导组,转化生长因子β3+诱导组(含2.5μg/L重组人转化生长因子β3)和转化生长因子β3++诱导组(含10μg/L重组人转化生长因子β3)。培养4周后行组织块Ⅱ型胶原、Aggrecan免疫组织化学及相关基因实时荧光定量PCR检测。结果与结论:(1)成软骨诱导培养时,转化生长因子β3++诱导组所形成软骨块>转化生长因子β3+诱导组>转化生长因子β3-诱导组;(2)免疫组织化学结果显示,转化生长因子β3++诱导组Ⅱ型胶原和Aggrecan的表达明显高于转化生长因子β3+诱导组(P<0.05),转化生长因子β3+诱导组表达明显高于转化生长因子β3-诱导组(P<0.05);(3)实时荧光定量PCR检测显示,转化生长因子β3++诱导组Ⅱ型胶原和Aggrecan m RNA的表达明显强于转化生长因子β3+诱导组(P<0.05),转化生长因子β3+诱导组2指标表达明显强于转化生长因子β3-诱导组(P<0.05);转化生长因子β3++诱导组和转化生长因子β3+诱导组性别决定区Y框蛋白-9的表达均明显强于转化生长因子β3-诱导组(P<0.05);(4)结果表明,晚期骨关节炎患者残余关节软骨中存在着具有干细胞特性的骨软骨前体细胞;转化生长因子β3具有较强促骨软骨前体细胞成软骨分化的能力,其有可能成为软骨组织工程中理想的细胞因子。

关键词： 多柔比星   心肌纤维化   转化生长因子(TGF)-β1   Smad3  

摘要： 目的研究参附注射液对多柔比星致心肌病大鼠心肌组织转化生长因子(TGF)-β1和Smad3表达的影响。方法90只大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(卡托普利100 mg·kg^(-1)·d^(-1))和低、高剂量(1、4 ml·kg^(-1)·d^(-1))参附组,每组18只。正常对照组仅给予等体积生理盐水,余各组于实验开始后每周腹腔注射多柔比星(4 mg/kg),累计剂量达24 mg/kg。参附组于多柔比星注射6 w后,按低、高剂量组分别腹腔注射参附注射液1、4 ml·kg^(-1)·d^(-1),共2 w;卡托普利组于实验开始前1 w灌胃。实验结束后评价大鼠心功能;光镜观察心肌形态学变化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠心肌组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达;Western印迹法测定TGF-β1/Smad3蛋白表达。结果与模型组相比,参附组和阳性对照组心功能明显好转,心肌病理学形态有了很大改善,Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达明显减少(P<0.01);TGF-β1蛋白、Smad3蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论参附注射液能够抑制心肌病大鼠心肌纤维化,改善心功能,其机制可能与调节TGF-β1/Smad3信号通路各因子水平的表达有关。

关键词： 半乳糖凝集素3   上皮间质转化   转化生长因子-β   肺癌  

摘要： 目的探讨半乳糖凝集素3表达对转化生长因子-β(TGF-β)诱导A549细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法在A549细胞系中过表达半乳糖凝集素3,TGF-β(20 nmol/L)诱导肺癌A549细胞EMT。蛋白质印迹法检测半乳糖凝集素3、钙黏附蛋白E和波形蛋白等相关蛋白的表达。免疫荧光检测钙黏附蛋白E等蛋白的表达以及细胞形态的变化,细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖,划痕愈合实验检测细胞迁移性的变化,细胞侵袭性实验检测细胞侵袭性的变化。结果在过表达半乳糖凝集素3的A549细胞系中,EMT的相关蛋白如钙黏附蛋白E、波形蛋白表达水平无变化,细胞增殖、侵袭、迁移能力无变化;在TGF-β诱导肺癌A549细胞EMT的模型中,半乳糖凝集素3过表达组EMT相关蛋白钙黏附蛋白E表达下调、波形蛋白表达上调。细胞增殖能力无变化,细胞侵袭、迁移能力增强。结论半乳糖凝集素3可以促进TGF-β诱导的A549细胞上皮间质转化。

关键词： 骨髓间充质干细胞   软骨分化   转化生长因子-β3   胰岛素样生长因子-1  

摘要： 目的重组慢病毒介导转化生长因子（TGF）-β3/胰岛素样生长因子-1（HIGF-1）联合基因转染兔骨髓间充质干细胞，诱导其软骨细胞分化，比较与TGF-β3单基因转染诱导其软骨细胞分化的效率。方法全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞，流式细胞术检测细胞表面抗原，培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照（N组）、TGF-β3单基因（T组）、TGF-β3/HIGF-1联合基因（TB组），培养14 d后，荧光显微镜下观察各组细胞形态，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot分别检测性别决定区Y框蛋白9（SOX9）、蛋白多糖、Ⅱ型胶原在基因水平与蛋白水平的表达量。结果流式细胞术检测造血干细胞标志物（CD34，2.07%）、白细胞表面抗原[人类白细胞抗原DR基因（HLA-DR），1.73%]均为阴性，透明质酸受体（CD44，82.79%）为阳性，荧光显微镜观察诱导后细胞形态多为多角形、方形或者类圆盘状；RT-PCR结果显示：T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原基因表达量为0.645±0.024、0.587±0.018、0.616 ±0.019，显著高于C组（0.192±0.012、0.241±0.021、0.273±0.015），N组（0.211±0.014、0.224±0.016、0.232±0.022）（P＝0.000）；TB组基因表达量为0.832±0.013、0.746±0.024、0.951±0.026，显著高于T组（P＝0.000）。T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白表达量为1.36±0.20、0.39±0.05、0.68±0.09，显著高于C组（0.58±0.11、0.12±0.08、0.23±0.15），N组（0.62±0.14、0.13±0.06、0.25±0.02，P＝0.000）；TB组蛋白表达量为1.83±0.13、1.35±0.24、1.51±0.26，显著高于T组（P＝0.000）。结论TGF-β3/HIGF-1联合基因转染骨髓间充质干细胞能诱导其成软骨细胞分化，且联合基因转染效率高于TGF-β3单基因转染。

关键词： 特发性肺纤维化   辐射损伤   实验性   转化生长因子β3   上皮间质转化  

摘要： 目的 检测分析放射性肺纤维化过程中上皮间质转化（EMT）情况，探索转化生长因子β3（TGF-β3）是否通过EMT途径抑制放射性肺纤维化的发生。方法 将180只C57BL/6雌性小鼠按体重完全随机分为对照组、单纯照射组（简称照射组）和照射＋TGF-β3组（简称TGF-β3组），照射组和TGF-β3组经20 Gy 60Co γ射线单次胸部照射后，分别腹腔注射0.5 mL 0.9%的生理盐水和TGF-β3（1 μg/kg），每周1次，于照射后1、3和6个月活杀，用苏木素-伊红（HE）染色、Masson三色染色后观察肺组织病理学改变，用免疫组化法检测肺组织EMT相关的上皮标志物紧密连接蛋白（ZO-1）和间质标志物N-钙粘蛋白（N-cadherin）的表达，用Mann-Whitney U秩和检验和Fisher确切概率法对结果进行统计分析。结果 HE和Masson染色结果显示，照射能够引起小鼠肺泡壁增厚、肺泡间隔明显增宽、肺泡结构严重破坏、胶原纤维大量沉积等典型纤维化病理改变；照射后3和6个月，与照射组比较，TGF-β3组小鼠肺纤维化病变明显减轻，差异有统计学意义（Z=-2.562、-2.807，均P〈0.05），胶原沉积显著减少，差异有统计学意义（Z=2.442、2.529，均P〈0.05）。免疫组化结果显示，与对照组比较，照射后1、3和6个月，小鼠肺组织ZO-1的表达量明显减少，差异有统计学意义（Z=4.492、5.831、6.064，均P〈0.05），N-cadherin的表达量显著增高，差异有统计学意义（Z=-3.269、-5.520、-6.063，均P〈0.05）；与照射组比较，TGF-β3组ZO-1表达量显著增高，差异有统计学意义（Z=-2.881、-4.220、-5.695，均P〈0.05），而N-cadherin表达量显著减少，差异有统计学意义（Z=4.546、3.560、4.919，均P〈0.05）。结论 TGF-β3可通过抑制EMT拮抗放射性肺纤维化。

关键词： 肝星状细胞   钙离子载体A23187   增殖   周期   caspase-3  

摘要： 目的研究钙离子载体A23187对转化生长因子β_1(TGF-β_1)刺激的肝星状细胞增殖、周期及凋亡蛋白caspase-3表达的影响。方法将液氮保存下的肝星状细胞株,于37℃、50mL/L CO_2孵箱中进行复苏传代培养,同步化后将细胞分为5组:空白组、TGF-β_1(5ng/mL)组、TGF-β_1+低、中、高剂量钙离子载体A23187组,即5ng/mL TGF-β_1刺激24h,再分别加入1、2、4μmol/L不同剂量钙离子载体A23187作用24h后,用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白免疫印记测定凋亡蛋白caspase-3表达。结果不同浓度钙离子载体A23187均能显著抑制细胞增殖(P<0.05),且随着剂量的增加,细胞的相对增殖率(RGR)降低,低、中、高剂量组分别为85.93%、61.71%、48.43%,组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);不同处理组G1期细胞比例、S+G2期细胞比例差异均有统计学意义(P<0.05),钙离子载体A23187剂量越大,G1期细胞比例越高,S+G2期细胞比例越低(P<0.05)。随着钙离子A23187浓度的增加,细胞内caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论钙离子载体A23187可能通过阻滞大鼠肝星状细胞由G1期进入S期和G2期,抑制细胞增殖,同时上调凋亡蛋白caspase-3的表达。

关键词： 转化生长因子B3   藻酸盐/投药和剂量   问质干细胞移植   脂肪组织   软骨   关节/   病理学   软骨疾病/治疗   凝胶类  

摘要： 目的以负载转化生长因子β3(TGF-β3)的藻酸钙凝胶(CAG)复合脂肪间充质干细胞(ADSCs)构建的组织工程软骨,探讨其修复兔关节软骨缺损的效果。方法取新西兰白兔皮下脂肪,分离培养得到ADSCs。暴露股骨踝关节面,并做全层关节软骨缺损模型。将ADSCs种植到负载TGF-β3的CAG支架材料上,构建组织工程软骨,移植到兔关节软骨缺损处。实验分为对照组(向关节腔内注射无菌等渗盐水)、CAG组(注射CAG)、ADSCs+CAG组(注射负载ADSCs的CAG)、TGF-β3+CAG组(注射负载TGF-β3的CAG)、TGF-β3+ADSCs+CAG组(注射负载TGF-β3、ADSCs的CAG),每组10只。于术后12周,分别采用大体观察、HE染色、番红-O及Ⅱ型胶原免疫组化染色等方法观察关节软骨缺损的修复情况,并用国际关节软骨修复协会(ICRS)制订的评分法进行组织学评分。结果 TGF-β3+ADSCs+CAG组的缺损软骨修复效果明显优于其他组,其新生组织与周围正常组织紧密结合,并且细胞外基质的分泌情况与正常组织相似。对照组、CAG组、ADSCs+CAG组、TGF+β3+CAG组和TGF-β3+ADSCs+CAG组的ICRS评分分别为(7.06±0.18)分、(7.15±0.23)分、(7.45±0.25)分、(7.47±0.24)分和(15.78±0.24)分,TGF-β3+ADSCs+CAG组明显优于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论负载TGF-β3、ADSCs的CAG修复兔关节软骨缺损具有较好的效果,而且是一种结构性的修复。

关键词： 腰椎间盘退变   转化生长因子β3   基质金属蛋白酶组织抑制剂1   B细胞淋巴瘤/白血病基因2  

摘要： 目的:探讨转化生长因子β3(TGF-β3)、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)、B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及其意义。方法:选取美国堪萨斯州威奇托市Via Christi Health医院骨科因L2-L5腰椎间盘突出症接受手术治疗的患者140例作为病例组,根据Videman分级评分标准分为轻度退变组47例、中度退变组45例及重度退变组48例,选择同时期因L2-L5腰椎骨折以及脊柱侧凸畸形接受手术治疗的患者17例作为对照组,共计157例。采用免疫组织化学法检测髓核组织TGF-β3、TIMP1、Bcl-2表达水平,并分析TGF-β3、TIMP1、Bcl-2表达水平与腰椎退行性变严重程度的相关性,其数据结果应用统计学软件SPSS22.0处理。结果:与对照组相比较,病例组Videman评分较高,且轻度退变组<中度退变组<重度退变组(P<0.05);病例组髓核组织TGF-β3、TIMP1、Bcl-2表达平均光密度值及阳性率较低,且轻度退变组>中度退变组>重度退变组(P<0.05)。退变髓核组织中TGF-β3光密度值与Videman评分呈负相关关系(r=-0.929,P<0.05),TIMP1光密度值与Videman评分呈负相关关系(r=-0.961,P<0.05),Bcl-2光密度值与Videman评分呈负相关关系(r=-0.947,P<0.05)。结论:TGF-β3、TIMP1、Bcl-2在正常和退变腰椎间盘髓核组织中均有表达,且表达水平与退变程度负相关,可能有助于延缓腰椎间盘退变。