关键词： BCAT1   成纤维细胞   肌成纤维细胞   纤维化  

摘要： 目的探索成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中支链氨基酸氨基转移酶1(branched-chain amino acid transaminase-1,BCAT1)对纤维化相关基因表达及表型的调控作用。方法NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞系分别转染腺病毒为载体的BCAT1敲低和过表达病毒后,给予转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1)诱导NIH-3T3细胞转化为肌成纤维细胞。利用实时定量PCR、Western blot、免疫荧光实验等检测TGFβ1诱导的纤维化相关基因表达变化。同时通过细胞划痕实验、Transwell、胶收缩实验等检测NIH-3T3细胞向肌成纤维细胞转化的迁移、收缩等表型变化。结果TGFβ1刺激诱导NIH-3T3细胞转化为肌成纤维细胞时BCAT1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(均P<0.01)。使用短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)敲低NIH-3T3细胞的BCAT1表达显著抑制TGFβ1诱导的纤维化相关基因Acta2和Postn的mRNA表达(均P<0.01)及与纤维化过程相关的细胞迁移、收缩等肌成纤维细胞表型(均P<0.01)。反之,过表达BCAT1显著促进TGFβ1诱导的纤维化相关基因表达和肌成纤维细胞表型(均P<0.01)。结论BCAT1是调节成纤维细胞纤维化相关基因表达及其向肌成纤维细胞表型转变的关键分子,可能成为治疗和调控器官纤维化的潜在靶点。

关键词： 转化生长因子-β1/Sma和Mad相关蛋白家族成员3   非酒精性脂肪性肝病   肝细胞   脂代谢  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β1/Sma和Mad相关蛋白家族成员3(TGF-β1/Smad3)信号通路相关因子在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的发生作用及表达。方法取健康雄性SD大鼠12只按照随机数字表法随机均分为两组,构建NAFLD模型作为模型组;对照组正常饲料喂养。取模型大鼠采用改良原位灌注两步法进行原代干细胞分离,建立NAFLD组;取正常大鼠细胞培养作为正常组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TGF-β1和Smad3的表达,检测甘油三酯(TG)和胆固醇含量。进一步对NAFLD肝细胞进行细胞转染,分为Blank组(细胞未做任何处理正常培养)、oe-TGF-β1组(细胞转染oe-TGF-β1)、oe-NC组(细胞转染oe-TGF-β1阴性对照)、si-TGF-β1组(细胞转染si-TGF-β1)和si-NC组(细胞转染si-TGF-β1阴性对照)。应用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹试验检测TGF-β1和Smad3的mRNA和蛋白表达改变。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组均数的两两比较应用LSD-t检验。结果分离肝细胞培养后,NAFLD组肝细胞内TG和胆固醇含量、TGF-β1和Smad3的mRNA和蛋白表达水平均高于正常组[(1.51±0.07)mmol/L比(3.45±0.24)mmol/L、(1.19±0.01)mmol/L比(2.30±0.12)mmol/L、1.00±0.05比1.68±0.07、1.00±0.06比1.92±0.10、1.42±0.06比2.77±0.19、1.39±0.07比1.87±0.08,t=19.01、22.58、13.69、13.66、16.60、11.06,P<0.05]。si-TGF-β1组TG和胆固醇含量、TGF-β1和Smad3的mRNA和蛋白表达水平均低于si-NC组[(3.09±0.18)mmol/L比(2.57±0.14)mmol/L、(2.26±0.15)mmol/L比(1.83±0.09)mmol/L、1.02±0.05比0.56±0.03、1.00±0.06比0.77±0.05、2.57±0.15比2.07±0.12、2.19±0.12比1.84±0.09,t=3.95、4.26、13.66、5.10、4.51、4.04,P<0.05]。结论抑制TGF-β1可能影响TGF-β1/Smad3活性,改善脂代谢异常,进而可能对NAFLD具有保护作用。

关键词： 长链非编码核糖核酸母性表达3   TGF-β-Smad2/3信号通路   胰岛β细胞   自噬   焦亡  

摘要： 目的探讨长链非编码核糖核酸母性表达3(MEG3)通过TGF-β-Smad2/3信号通路对高糖(HG)诱导的胰岛β细胞损伤的影响。方法大鼠胰岛素瘤(INS-1)细胞分为正常对照(Con)组、HG组、阴性对照(si-NC)组、HG+si-NC组、靶向MEG3的si RNA(si-MEG3)组、HG+si-MEG3组、HG+si-MEG3+TGF-β-Smad2/3信号通路抑制剂(HG+si-MEG3+LY2109761)组。CCK-8检测细胞活力,q RT-PCR检测MEG3和焦亡相关标记物m RNA表达,透射电子显微镜观察自噬液泡,Western blot法和免疫荧光检测细胞自噬相关蛋白和焦亡相关蛋白表达。Western blot法检测TGF-β-Smad2/3蛋白表达。结果葡萄糖以剂量依赖方式下调MEG3 mRNA表达。与si-NC组比较,HG+si-NC组磷酸化的SMAD家族成员2(p-Smad2)、TGF-β1、Beclin1、LC3-II/LC3-I、NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)、Gasdermin N(GSDMD-N)、IL-1β、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解的半胱天冬酶1(c-Caspase1)蛋白表达升高(P<0.05),细胞活力降低(P<0.05)。与HG+si-NC组比较,HG+si-MEG3组TGF-β1、NLRP3、GSDMD-N、IL-1β、ASC、c-Caspase1蛋白表达升高(P<0.05),p-Smad2、细胞活力、Beclin1、LC3-II/LC3-I降低(P<0.05)。与HG+si-MEG3组比较,HG+si-MEG3+LY2109761组NLRP3、GSDMD-N、IL-1β、ASC、c-Caspase1蛋白表达升高(P<0.05),细胞活力、p-Smad2、TGF-β1、Beclin1、LC3-II/LC3-I蛋白表达降低(P<0.05)。结论MEG3通过TGF-β-Smad2/3信号通路调节胰岛β细胞自噬和焦亡。

关键词： 黄精多糖   成软骨细胞分化   软骨细胞   骨髓间充质干细胞   转化生长因子β3  

摘要： 目的:探索黄精多糖促进骨髓间充质干细胞成软骨细胞(BMSCs)分化的作用。方法:运用全骨髓培养法从SD大鼠股骨中提取BMSCs,经纯化并鉴定后取第三代BMSCs用于后续试验。CCK-8法检测黄精多糖促进BMSCs增殖的最佳浓度，设置空白对照组、阳性对照(TGF-β3 10μg/L)组、转化生长因子β3(TGF-β3) 10μg/L+黄精多糖10 mg/L组、黄精多糖10 mg/L组，分别对BMSCs诱导7 d。采用形态学观察、甲苯胺蓝染色、免疫荧光染色、Western blot法检测Ⅱ型胶原蛋白(COLLAGENⅡ)及SOX9蛋白表达量，评估成软骨细胞分化效果，并检测SMAD通路相关蛋白表达。结果:与空白对照组比较，黄精多糖10 mg/L组、TGF-β3 10μg/L+黄精多糖10 mg/L组、TGF-β3 10μg/L组的荧光强度明显升高(P<0.05),SOX9、 SMAD2磷酸化蛋白以及Ⅱ型胶原蛋白表达增加(P<0.05);与黄精多糖10 mg/L组比较，TGF-β3 10μg/L+黄精多糖10 mg/L组的荧光强度升高(P<0.05),Ⅱ型胶原蛋白、SOX9、磷酸化SMAD2蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:黄精多糖能够促BMSCs增殖，并促进BMSCs成软骨细胞分化，与TGF-β3联用时效果更佳，其可能通过上调SMAD2蛋白的磷酸化，促进SMAD通路的激活，从而促进BMSCs成软骨细胞分化。

关键词： 慢性肾脏病   温肾健脾活血泄浊方   大鼠肾组织   肾功能   肾脏纤维化   转化生长因子-β1-Smad2/3  

摘要： 目的探讨金洪元教授温肾健脾活血泄浊方对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)实验大鼠的肾脏组织内转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1-Smad2/3信号通路的作用。方法将56只大鼠随机分为空白组13只,其余43只大鼠灌服腺嘌呤溶液制备CKD大鼠模型,经造模鉴定后,取10只空白组大鼠作为空白对照组,40只造模成功大鼠随机分为模型组、中药低、中、高剂量组,每组10只。中药低、中、高剂量组分别给予的灌服浓度为9.18 g/(kg·d)、18.36 g/(kg·d)、36.72 g/(kg·d),空白对照组及模型组大鼠均灌服等体积生理盐水,连续灌服4周。经干预后,观察大鼠一般情况;运用酶联免疫吸附法检测大鼠尿液24小时尿蛋白定量、肌酐、TGF-β1及血清TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量水平;苏木精—伊红染色、马松(Masson)染色观察大鼠肾脏病理改变;蛋白质免疫印迹法检测大鼠肾组织内TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Smad7的蛋白表达水平。结果各组大鼠经温肾健脾活血泄浊方干预后,与模型组相比,中药低、中、高剂量组大鼠尿液中TGF-β1、肌酐、24小时尿蛋白定量水平显著下降(P<0.05);血清中TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量显著降低,且中药低、中、高剂量组大鼠血清TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量水平均随着中药剂量增加而降低,具有负相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,中药低、中、高剂量组大鼠肾组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白定量显著降低,且随着中药剂量增加而降低,但差异无统计学意义;Smad7随中药剂量增加而升高,且差异有统计学意义(P<0.05),具有正相关性。苏木精—伊红染色结果示:中药各剂量组大鼠肾小管病变程度较模型组显著降低,纤维化面积较模型组明显减少;中药低、中、高剂量组较模型组大鼠肾组织结构紊乱程度降低,肾间质炎性细胞浸润减少,纤维组织减少;中药中、高剂量组较中药低剂量组大鼠肾组织炎性细胞浸润稍显减少,肾组织结构稍显整齐。马松染色结果示:中药低、中、高剂量组较模型组大鼠肾脏间质纤维组织增生程度均降低,纤维化比例减少,但组间肾脏间质纤维组织增生程度差异不明显。结论温肾健脾活血泄浊方可有效逆转CKD大鼠肾组织损伤,并且可能是通过TGF-β1-Smad2/3通路下调TGF-β1的水平来发挥作用,进而改善CKD大鼠肾组织纤维化。

关键词： Ⅱ型肺泡上皮样细胞   右美托咪定   白细胞介素-17   转化生长因子-β1/Smad蛋白3信号通路   脂多糖   增殖   炎症   间质转化  

摘要： 目的探讨右美托咪定介导白细胞介素(IL)-17对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞(以下简称“A549细胞”)炎症、增殖、迁移、上皮间质转化及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白3(Smad3)信号通路的调控作用。方法体外培养A549细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10.00μg/ml LPS)和实验组(10.00μg/ml LPS+1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml右美托咪定),分别采用CCK-8试剂盒和反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定细胞活力和IL-17 mRNA表达水平以筛选右美托咪定最适实验浓度;随后将细胞分为对照组、LPS组、IL-17组、右美托咪定组和IL-17+右美托咪定组,干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-17、IL-8和IL-6的表达水平;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)试剂盒用来检测细胞增殖率;划痕实验用来检测细胞迁移率;蛋白免疫印迹(WB)法测定肺泡上皮间质转化(EMT)相关蛋白、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白及IL-17蛋白表达水平。结果右美托咪定逆转了LPS对A549细胞活力的抑制作用和IL-17 mRNA表达水平的促进作用,且10.00μg/ml浓度的右美托咪定组的效果最好,因此选择10.00μg/ml右美托咪定用于后续实验。LPS组细胞中IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维粘连蛋白(FN)、Smad3的磷酸化(p-Smad3)/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+右美托咪定组IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN、p-Smad3/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17+右美托咪定组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定通过抑制IL-17的分泌恢复LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,促进LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并抑制其迁移和EMT进程,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3通路的信号转导有关。

关键词： 妊娠期高血压   转化生长因子-β1   Smad3   Smad4  

摘要： 目的探讨妊娠期高血压(hypertension during pregnancy,HDP)患者血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad3、Smad4的浓度与临床意义。方法选取河北中石油中心医院妇产科2021年1月至2022年8月诊治的96例HDP患者作为研究组,同时选取96名在本院产检且一般资料与HDP患者相匹配的正常孕妇作为对照组。采用Logistic回归分析影响孕妇发生HDP的相关因素;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析TGF-β1和Smad3、Smad4对HDP的诊断效能。结果两组患者年龄、孕周、孕次、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组患者血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度及有原发性高血压(高血压)家族史的患者所占比例均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。有高血压家族史、TGF-β1、Smad3、Smad4浓度升高均为孕妇发生HDP的危险因素(P<0.05)。血清TGF-β1、Smad3、Smad4诊断HDP的曲线下面积(AUC)分别为0.652、0.720、0.730,而三者联合诊断的曲线下面积为0.916,三者联合优于血清TGF-β1、Smad3、Smad4各自单独诊断(Z三者联合-TGF-β1=6.864、Z三者联合-Smad3=5.955、Z三者联合-Smad4=5.907,P均<0.001),其敏感度和特异度分别为82.29%、78.50%。结论血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度与HDP的发生密切相关,三者联合检测对HDP具有较高的诊断价值。

关键词： 转化生长因子β3   石墨烯   分子对接   吸附行为  

摘要： 石墨烯在进入人体后,因其本身有较大的比表面积和丰富的功能基团而吸附各种各样的生物大分子,但其具体的结合位点和自由能变化却不得而知,因此从微观角度研究石墨烯及其衍生物与生物大分子的吸附行为是至关重要的。本研究基于经典蛋白质-石墨烯材料的界面作用,研究转化生长因子β3与石墨烯C_(62)H_(20)表面的吸附行为。并在该理论基础上,采用基于密度泛函理论(DFT)的第一性原理及分子对接计算方法,得出石墨烯与转化生长因子β3的最佳结合位置在Cys7~Tyr21、Tyr39~Gly46残基附近。两者之间的最低结合能为-12.52 kcal/mol,结合亲和力为662.9 pmol/L。本研究的结论可为实验上探究转化生长因子β3与石墨烯C_(62)H_(20)的相互作用模式提供详细的微观细节和理论支撑。

关键词： 整合素avβ3   转化生长因子β1   胎盘   子痫前期   免疫组织化学  

摘要： 目的 探讨子痫前期患者胎盘组织中整合素αvβ3、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达变化情况及意义。方法 以2020年12月至2021年12月在苏州明基医院住院分娩的子痫前期轻度患者20例、子痫前期重度患者20例、正常妊娠产妇20例为研究对象,用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法来检测胎盘组织中整合素αvβ3和TGF-β1表达情况,并用计算机图像分析系统对正常、子痫前期轻度组、子痫前期重度组进行定量分析。结果(1)TGF-β1在3组间表达情况显示,子痫前期组高于对照组,且重度组高于轻度组,差异有统计学意义(χ2=6.468,P<0.05)。(2)整合素αvβ3在子痫前期组表达低于对照组,且重度组低于轻度组,差异有统计学意义(χ2=6.145,P<0.05)。在子痫前期组胎盘绒毛合体滋养细胞中两种因子不存在相关性(r=-0.223,P>0.05)。结论 与正常妊娠组比较,子痫前期患者胎盘组织整合素αvβ3的表达随病情的加重而逐渐减少;TGF-β1的表达随病情的加重而逐渐增加;二者在子痫前期组不存在相关性。

关键词： 慢性心力衰竭   心阳亏虚   参附汤   茯苓四逆汤   转化生长因子β1   Smad同源物3  

摘要： 目的探讨参附汤联合茯苓四逆汤治疗心阳亏虚型慢性心力衰竭患者的疗效及对其转化生长因子β1(transforming growth factor-β,TGF-β1)、Smad同源物3(Smad homolog 3,Smad3)表达的影响。方法选取2020年1月—2023年1月期间北京市怀柔区中医医院收治的90例心阳亏虚型慢性心力衰竭患者,按随机数字表法分为对照组和研究组,每组各45例。对照组予常规西医治疗,研究组在对照组的基础上加用参附汤合茯苓四逆汤治疗。4周为1个疗程,两组患者均治疗4个疗程。观察比较两组患者治疗前后心功能[左室舒张末期内径(Left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、左室收缩末期内径(Left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEEF)、每搏输血量(Blood transfusion volume per stroke,SV)]、心衰因子[心型脂肪酸结合蛋白(Heart-type Fatty Acid Binding Protein,H-FABP)、脑钠肽(Natriuretic peptide,BNP)]、心肌纤维化指标[Ⅰ型前胶原氨基端前肽(Type I procollagen amino terminal peptide,PICP)、Ⅲ型前胶原氨基端末肽(TypeⅢprocollagen amino terminal peptide,PⅢNP)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin IcTnI)]、TGF-β1、Smad3表达量变化,评价活动耐力、心衰评分、明尼苏达评分、中医证候积分,并统计临床疗效及主要心血管不良事件(MACE)发生情况。结果治疗后两组患者心功能LVEDD、LVESD指标均较治疗前降低,LVEF、SV指标较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组心功能LVEDD、LVESD指标明显低于对照组,LVEF、SV指标明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者心衰因子H-FABP、cTnI、BNP水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组心衰因子H-FABP、cTnI、BNP水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者心肌纤维化PICP、PⅢNP水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组心肌纤维化PICP、PⅢNP水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者TGF-β1、Smad3表达量均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组TGF-β1、Smad3表达量均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者活动耐力较治疗前升高,心衰、明尼苏达评分较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组活动耐力评分明显高于对照组,心衰、明尼苏达评分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者中医证候积分较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且研究组中医证候积分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后研究组临床总有效率95.56%(43/45)明显高于对照组80.00%(36/45),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,研究组MACE发生率4.44%(2/45)明显低于对照组17.78%(8/45),差异有统计学意义(P<0.05)。结论参附汤合茯苓四逆汤可显著改善心阳亏虚型慢性心力衰竭患者临床症状及体征,降低TGF-β1、Smad3表达,抑制心肌纤维化,促进心脏功能恢复,效果理想。