关键词： 子宫肌瘤   转化生长因子-β_(3)   25-羟维生素D   糖类抗原125   血管内皮生长因子  

摘要： 目的探究子宫肌瘤患者血清转化生长因子-β_(3)(TGF-β_(3))、25-羟维生素D[25-(OH)D]、糖类抗原125(CA125)、血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化,为临床对该疾病的诊断与治疗提供参考。方法回顾性分析2023年8月至2024年8月南京市红十字医院收治的30例子宫肌瘤患者和同期接受体检的30例健康女性的临床资料,将其分为子宫肌瘤组和健康组。其中,子宫肌瘤组患者均接受子宫肌瘤切除术。分别检测并比较健康组与子宫肌瘤组患者血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、TGF-β_(3)、VEGF、25-(OH)D、CA125水平,以及手术前后子宫肌瘤组患者血清TGF-β_(3)、CA125、25-(OH)D、VEGF水平。结果子宫肌瘤组患者的血清E2、P、LH、FSH水平及术前1 d血清TGF-β_(3)、CA125、VEGF水平均高于健康组,术前1 d血清25-(OH)D水平低于健康组;相较于术前1 d,术后7 d子宫肌瘤组患者血清TGF-β_(3)、CA125、VEGF水平均降低,血清25-(OH)D水平升高(均P<0.05)。结论子宫肌瘤患者血清TGF-β_(3)、CA125、VEGF水平升高,血清25-(OH)D水平降低,上述指标与子宫肌瘤的发生、发展有着密切关系,检测其水平可为临床诊断子宫肌瘤及其术后疗效评估提供一定参考。

关键词： BCAT1   成纤维细胞   肌成纤维细胞   纤维化  

摘要： 目的探索成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中支链氨基酸氨基转移酶1(branched-chain amino acid transaminase-1,BCAT1)对纤维化相关基因表达及表型的调控作用。方法NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞系分别转染腺病毒为载体的BCAT1敲低和过表达病毒后,给予转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1)诱导NIH-3T3细胞转化为肌成纤维细胞。利用实时定量PCR、Western blot、免疫荧光实验等检测TGFβ1诱导的纤维化相关基因表达变化。同时通过细胞划痕实验、Transwell、胶收缩实验等检测NIH-3T3细胞向肌成纤维细胞转化的迁移、收缩等表型变化。结果TGFβ1刺激诱导NIH-3T3细胞转化为肌成纤维细胞时BCAT1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(均P<0.01)。使用短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)敲低NIH-3T3细胞的BCAT1表达显著抑制TGFβ1诱导的纤维化相关基因Acta2和Postn的mRNA表达(均P<0.01)及与纤维化过程相关的细胞迁移、收缩等肌成纤维细胞表型(均P<0.01)。反之,过表达BCAT1显著促进TGFβ1诱导的纤维化相关基因表达和肌成纤维细胞表型(均P<0.01)。结论BCAT1是调节成纤维细胞纤维化相关基因表达及其向肌成纤维细胞表型转变的关键分子,可能成为治疗和调控器官纤维化的潜在靶点。

关键词： 黄精多糖   成软骨细胞分化   软骨细胞   骨髓间充质干细胞   转化生长因子β3  

摘要： 目的:探索黄精多糖促进骨髓间充质干细胞成软骨细胞(BMSCs)分化的作用。方法:运用全骨髓培养法从SD大鼠股骨中提取BMSCs,经纯化并鉴定后取第三代BMSCs用于后续试验。CCK-8法检测黄精多糖促进BMSCs增殖的最佳浓度,设置空白对照组、阳性对照(TGF-β310μg/L)组、转化生长因子β3(TGF-β3)10μg/L+黄精多糖10 mg/L组、黄精多糖10 mg/L组,分别对BMSCs诱导7 d。采用形态学观察、甲苯胺蓝染色、免疫荧光染色、Western blot法检测Ⅱ型胶原蛋白(COLLAGENⅡ)及SOX9蛋白表达量,评估成软骨细胞分化效果,并检测SMAD通路相关蛋白表达。结果:与空白对照组比较,黄精多糖10 mg/L组、TGF-β310μg/L+黄精多糖10 mg/L组、TGF-β310μg/L组的荧光强度明显升高(P<0.05),SOX9、SMAD2磷酸化蛋白以及Ⅱ型胶原蛋白表达增加(P<0.05);与黄精多糖10 mg/L组比较,TGF-β310μg/L+黄精多糖10 mg/L组的荧光强度升高(P<0.05),Ⅱ型胶原蛋白、SOX9、磷酸化SMAD2蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:黄精多糖能够促BMSCs增殖,并促进BMSCs成软骨细胞分化,与TGF-β3联用时效果更佳,其可能通过上调SMAD2蛋白的磷酸化,促进SMAD通路的激活,从而促进BMSCs成软骨细胞分化。

关键词： 气虚证产妇   补中益气颗粒   泌乳功能   子宫复旧   盆底功能   转化生长因子β3   松弛素  

摘要： 目的：分析补中益气颗粒对气虚证产妇产后修复的促进作用，并分析对产妇转化生长因子β3（Transforming growth factorβ3，TGF-β3）、松弛素（Relaxin，RLX）表达的影响。方法：选取2021年4月-2022年9月期间于我院分娩的气虚证产妇112例，分为对照组、研究组各56例。对照组产妇产后静脉注射缩宫素，同时使用康复治疗仪、穴位按摩辅助恢复，连续5d；研究组产妇加用补中益气颗粒，3g/次，2～3次/d，连续干预5d。比较两组产后恢复情况（产后子宫入盆时间、血性恶露消失时间、每日宫底下降高度）、泌乳功能、母乳喂养率、乳房舒适度、子宫复旧情况、盆底功能、证候积分、激素水平、TGF-β3、RLX水平等指标差异。结果：研究组子宫入盆时间[5.32±0.57（d） vs 6.83±1.10（d）]、血性恶露消失时间[4.64±1.23（d） vs 7.44±2.04（d）]显著短于对照组，每日宫底下降高度[4.01±1.20（cm） vs 2.33±0.95（cm）]显著高于对照组（t=9.121、8.796、8.214，P＜0.05）。研究组泌乳始动时间[16.52±7.83（h） vs 22.57±4.48（h）]显著短于对照组，泌乳量[产后24h：46.59±4.76（mL） vs 35.52±3.74（mL），产后72h：133.51±11.05（mL） vs 116.48±10.49（mL）]显著高于对照组（t=5.019、13.680、8.369，P＜0.05）。研究组乳房舒适度[乳房无胀痛：44.64（%） vs 12.50（%）、乳房硬度Ⅰ度：51.79（%） vs 19.64（%）]显著优于对照组（Z=18.980、18.440，P＜0.05）。研究组子宫三径之和[237.42±11.55（mm） vs 271.59±10.12（mm）]、阻力指数[0.59±0.04 vs 0.77±0.08]、搏动指数[1.86±0.15 vs 2.12±0.17]显著低于对照组（t=16.650、15.060、8.582，P＜0.05）；研究组收缩期峰值流速[41.20±5.51（cm/s） vs 34.51±3.09（cm/s）]显著高于对照组（t=7.925，P＜0.05）。研究组盆底肌收缩压力[97.58±12.26(cmH2O) vs 69.82±8.46(cmH2O)]、收缩持续时间[19.41±1.48（s） vs 7.22±1.30（s）]、Ⅰ类肌纤维疲劳度[5.51±0.94（%） vs 6.85±1.00（%）]、Ⅱ类肌纤维疲劳度[5.59±0.87（%） vs6.82±1.05（%）]显著低于对照组（t=13.950、46.310、7.306、6.750，P＜0.05）。研究组证候积分[主要症状：5.24±1.49（分） vs 7.82±1.63（分）、次要症状：2.13±0.25（分） vs 3.14±0.53（分）]显著低于对照组（t=8.743、12.900，P＜0.05）。研究组PRL[388.51±26.25（ng/mL） vs 345.65±24.29（ng/mL）]显著高于对照组，E2[515.64±68.47（U/L） vs 691.82±85.00（U/L）]显著低于对照组（t=8.968、2.739、12.080，P＜0.05）。研究组TGF-β3[27.46±4.52（mg/L） vs 35.48±4.65（mg/L）]、RLX[53.22±3.17（μg/L） vs 61.42±5.45（μg/L）]显著低于对照组（t=9.255、9.733，P＜0.05）。结论：补中益气颗粒可促进气虚证产妇子宫复旧，抑制TGF-β3、RLX分泌，提高泌乳功能、盆底肌力，降低肌纤疲劳度，促进子宫复旧，短时内促进产妇产后修复。

关键词： 转化生长因子-β1/Sma和Mad相关蛋白家族成员3   非酒精性脂肪性肝病   肝细胞   脂代谢  

摘要： 目的探讨转化生长因子-β1/Sma和Mad相关蛋白家族成员3(TGF-β1/Smad3)信号通路相关因子在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的发生作用及表达。方法取健康雄性SD大鼠12只按照随机数字表法随机均分为两组,构建NAFLD模型作为模型组;对照组正常饲料喂养。取模型大鼠采用改良原位灌注两步法进行原代干细胞分离,建立NAFLD组;取正常大鼠细胞培养作为正常组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TGF-β1和Smad3的表达,检测甘油三酯(TG)和胆固醇含量。进一步对NAFLD肝细胞进行细胞转染,分为Blank组(细胞未做任何处理正常培养)、oe-TGF-β1组(细胞转染oe-TGF-β1)、oe-NC组(细胞转染oe-TGF-β1阴性对照)、si-TGF-β1组(细胞转染si-TGF-β1)和si-NC组(细胞转染si-TGF-β1阴性对照)。应用qRT-PCR和蛋白质免疫印迹试验检测TGF-β1和Smad3的mRNA和蛋白表达改变。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组均数的两两比较应用LSD-t检验。结果分离肝细胞培养后,NAFLD组肝细胞内TG和胆固醇含量、TGF-β1和Smad3的mRNA和蛋白表达水平均高于正常组[(1.51±0.07)mmol/L比(3.45±0.24)mmol/L、(1.19±0.01)mmol/L比(2.30±0.12)mmol/L、1.00±0.05比1.68±0.07、1.00±0.06比1.92±0.10、1.42±0.06比2.77±0.19、1.39±0.07比1.87±0.08,t=19.01、22.58、13.69、13.66、16.60、11.06,P<0.05]。si-TGF-β1组TG和胆固醇含量、TGF-β1和Smad3的mRNA和蛋白表达水平均低于si-NC组[(3.09±0.18)mmol/L比(2.57±0.14)mmol/L、(2.26±0.15)mmol/L比(1.83±0.09)mmol/L、1.02±0.05比0.56±0.03、1.00±0.06比0.77±0.05、2.57±0.15比2.07±0.12、2.19±0.12比1.84±0.09,t=3.95、4.26、13.66、5.10、4.51、4.04,P<0.05]。结论抑制TGF-β1可能影响TGF-β1/Smad3活性,改善脂代谢异常,进而可能对NAFLD具有保护作用。

关键词： 长链非编码核糖核酸母性表达3   TGF-β-Smad2/3信号通路   胰岛β细胞   自噬   焦亡  

摘要： 目的探讨长链非编码核糖核酸母性表达3(MEG3)通过TGF-β-Smad2/3信号通路对高糖(HG)诱导的胰岛β细胞损伤的影响。方法大鼠胰岛素瘤(INS-1)细胞分为正常对照(Con)组、HG组、阴性对照(si-NC)组、HG+si-NC组、靶向MEG3的si RNA(si-MEG3)组、HG+si-MEG3组、HG+si-MEG3+TGF-β-Smad2/3信号通路抑制剂(HG+si-MEG3+LY2109761)组。CCK-8检测细胞活力,q RT-PCR检测MEG3和焦亡相关标记物m RNA表达,透射电子显微镜观察自噬液泡,Western blot法和免疫荧光检测细胞自噬相关蛋白和焦亡相关蛋白表达。Western blot法检测TGF-β-Smad2/3蛋白表达。结果葡萄糖以剂量依赖方式下调MEG3 mRNA表达。与si-NC组比较,HG+si-NC组磷酸化的SMAD家族成员2(p-Smad2)、TGF-β1、Beclin1、LC3-II/LC3-I、NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)、Gasdermin N(GSDMD-N)、IL-1β、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、裂解的半胱天冬酶1(c-Caspase1)蛋白表达升高(P<0.05),细胞活力降低(P<0.05)。与HG+si-NC组比较,HG+si-MEG3组TGF-β1、NLRP3、GSDMD-N、IL-1β、ASC、c-Caspase1蛋白表达升高(P<0.05),p-Smad2、细胞活力、Beclin1、LC3-II/LC3-I降低(P<0.05)。与HG+si-MEG3组比较,HG+si-MEG3+LY2109761组NLRP3、GSDMD-N、IL-1β、ASC、c-Caspase1蛋白表达升高(P<0.05),细胞活力、p-Smad2、TGF-β1、Beclin1、LC3-II/LC3-I蛋白表达降低(P<0.05)。结论MEG3通过TGF-β-Smad2/3信号通路调节胰岛β细胞自噬和焦亡。

关键词： 积雪草苷   心肌成纤维细胞   转化生长因子-β1   纤维化   吞噬体   PIK3C3   DYNC2H1   TUB  

摘要： 目的 探究积雪草苷抑制转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的心肌成纤维细胞活化的作用机制。方法 采用TGF-β1诱导建立心肌成纤维细胞活化模型，给予积雪草苷处理后，采用CCK-8法检测积雪草苷对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞活力的影响；采用免疫荧光检测积雪草苷对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞活化的影响；采用划痕实验检测积雪草苷对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞迁移能力的影响。通过GEO数据库筛选纤维化相关转录组数据，对差异表达基因进行基因本体（gene ontology,GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析，采用分子对接和分子动力学模拟检测积雪草苷与核心靶点的结合能力。通过q RT-PCR检测积雪草苷对核心靶点m RNA表达的影响，采用ELISA试剂盒检测积雪草苷对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞上清液中软骨寡聚蛋白（cartilage oligomeric protein,COMP）和甘露糖结合凝集素2(mannose-binding lectin 2,MBL2)水平的影响。结果 积雪草苷显著抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞活化（P<0.05、0.01），并提高细胞迁移能力（P<0.01）。GEO数据库筛选出542个差异表达基因，主要影响MHCⅡ类蛋白复合物结合、浓缩染色体、超分子纤维组织等生物功能和吞噬体、细胞黏附分子、哮喘等信号通路。分子对接结果显示，积雪草苷与吞噬体通路中的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基3(phosphatidylinositol 3-kinase catalytic subunit 3,PIK3C3)、动力蛋白细胞质2重链1(dynein cytoplasmic 2 heavy chain 1,DYNC2H1)、微管蛋白（tubulin,TUB）结合密切。分子动力学模拟结果显示，积雪草苷可以促进PIK3C3的结构稳定。q RTPCR结果显示，积雪草苷显著下调PIK3C3、DYNC2H1、TUB的m RNA表达（P<0.01）。ELISA结果显示，积雪草苷显著降低COMP和MBL2的释放（P<0.01）。结论 积雪草苷可以通过抑制PIK3C3、DYNC2H1、TUB的表达，抑制吞噬体的形成，进而减少COMP、MBL2等促纤维化因子的释放，降低心肌成纤维细胞活化，减轻TGF-β1诱导的细胞损伤。

关键词： 慢性肾脏病   温肾健脾活血泄浊方   大鼠肾组织   肾功能   肾脏纤维化   转化生长因子-β1-Smad2/3  

摘要： 目的探讨金洪元教授温肾健脾活血泄浊方对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)实验大鼠的肾脏组织内转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1-Smad2/3信号通路的作用。方法将56只大鼠随机分为空白组13只,其余43只大鼠灌服腺嘌呤溶液制备CKD大鼠模型,经造模鉴定后,取10只空白组大鼠作为空白对照组,40只造模成功大鼠随机分为模型组、中药低、中、高剂量组,每组10只。中药低、中、高剂量组分别给予的灌服浓度为9.18 g/(kg·d)、18.36 g/(kg·d)、36.72 g/(kg·d),空白对照组及模型组大鼠均灌服等体积生理盐水,连续灌服4周。经干预后,观察大鼠一般情况;运用酶联免疫吸附法检测大鼠尿液24小时尿蛋白定量、肌酐、TGF-β1及血清TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量水平;苏木精—伊红染色、马松(Masson)染色观察大鼠肾脏病理改变;蛋白质免疫印迹法检测大鼠肾组织内TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、Smad7的蛋白表达水平。结果各组大鼠经温肾健脾活血泄浊方干预后,与模型组相比,中药低、中、高剂量组大鼠尿液中TGF-β1、肌酐、24小时尿蛋白定量水平显著下降(P<0.05);血清中TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量显著降低,且中药低、中、高剂量组大鼠血清TGF-β1、胱抑素-C及肌酐定量水平均随着中药剂量增加而降低,具有负相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,中药低、中、高剂量组大鼠肾组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白定量显著降低,且随着中药剂量增加而降低,但差异无统计学意义;Smad7随中药剂量增加而升高,且差异有统计学意义(P<0.05),具有正相关性。苏木精—伊红染色结果示:中药各剂量组大鼠肾小管病变程度较模型组显著降低,纤维化面积较模型组明显减少;中药低、中、高剂量组较模型组大鼠肾组织结构紊乱程度降低,肾间质炎性细胞浸润减少,纤维组织减少;中药中、高剂量组较中药低剂量组大鼠肾组织炎性细胞浸润稍显减少,肾组织结构稍显整齐。马松染色结果示:中药低、中、高剂量组较模型组大鼠肾脏间质纤维组织增生程度均降低,纤维化比例减少,但组间肾脏间质纤维组织增生程度差异不明显。结论温肾健脾活血泄浊方可有效逆转CKD大鼠肾组织损伤,并且可能是通过TGF-β1-Smad2/3通路下调TGF-β1的水平来发挥作用,进而改善CKD大鼠肾组织纤维化。

关键词： Ⅱ型肺泡上皮样细胞   右美托咪定   白细胞介素-17   转化生长因子-β1/Smad蛋白3信号通路   脂多糖   增殖   炎症   间质转化  

摘要： 目的探讨右美托咪定介导白细胞介素(IL)-17对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮A549细胞(以下简称“A549细胞”)炎症、增殖、迁移、上皮间质转化及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad蛋白3(Smad3)信号通路的调控作用。方法体外培养A549细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10.00μg/ml LPS)和实验组(10.00μg/ml LPS+1.25、2.50、5.00、10.00μg/ml右美托咪定),分别采用CCK-8试剂盒和反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定细胞活力和IL-17 mRNA表达水平以筛选右美托咪定最适实验浓度;随后将细胞分为对照组、LPS组、IL-17组、右美托咪定组和IL-17+右美托咪定组,干预24 h。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-17、IL-8和IL-6的表达水平;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)试剂盒用来检测细胞增殖率;划痕实验用来检测细胞迁移率;蛋白免疫印迹(WB)法测定肺泡上皮间质转化(EMT)相关蛋白、TGF-β1/Smad3通路相关蛋白及IL-17蛋白表达水平。结果右美托咪定逆转了LPS对A549细胞活力的抑制作用和IL-17 mRNA表达水平的促进作用,且10.00μg/ml浓度的右美托咪定组的效果最好,因此选择10.00μg/ml右美托咪定用于后续实验。LPS组细胞中IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维粘连蛋白(FN)、Smad3的磷酸化(p-Smad3)/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);LPS组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17+右美托咪定组IL-17、IL-8、IL-6表达水平、细胞迁移率、N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN、p-Smad3/Smad3、TGF-β1和IL-17蛋白表达水平低于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-17+右美托咪定组细胞增殖率、E-钙黏蛋白和Smad7蛋白表达水平高于LPS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论右美托咪定通过抑制IL-17的分泌恢复LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,促进LPS诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞增殖并抑制其迁移和EMT进程,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad3通路的信号转导有关。

关键词： 妊娠期高血压   转化生长因子-β1   Smad3   Smad4  

摘要： 目的探讨妊娠期高血压(hypertension during pregnancy,HDP)患者血清转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Smad3、Smad4的浓度与临床意义。方法选取河北中石油中心医院妇产科2021年1月至2022年8月诊治的96例HDP患者作为研究组,同时选取96名在本院产检且一般资料与HDP患者相匹配的正常孕妇作为对照组。采用Logistic回归分析影响孕妇发生HDP的相关因素;采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析TGF-β1和Smad3、Smad4对HDP的诊断效能。结果两组患者年龄、孕周、孕次、三酰甘油(triacylglycerol,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组患者血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度及有原发性高血压(高血压)家族史的患者所占比例均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。有高血压家族史、TGF-β1、Smad3、Smad4浓度升高均为孕妇发生HDP的危险因素(P<0.05)。血清TGF-β1、Smad3、Smad4诊断HDP的曲线下面积(AUC)分别为0.652、0.720、0.730,而三者联合诊断的曲线下面积为0.916,三者联合优于血清TGF-β1、Smad3、Smad4各自单独诊断(Z三者联合-TGF-β1=6.864、Z三者联合-Smad3=5.955、Z三者联合-Smad4=5.907,P均<0.001),其敏感度和特异度分别为82.29%、78.50%。结论血清TGF-β1、Smad3、Smad4浓度与HDP的发生密切相关,三者联合检测对HDP具有较高的诊断价值。