关键词： 肌腱病   冈上肌腱   线粒体相关凋亡分子   胶原纤维   凋亡   间充质干细胞   肌腱细胞   线粒体转移   凋亡   增殖   间充质干细胞   肌腱细胞   ATP   线粒体膜电位   氧化应激   间充质干细胞   线粒体转移   肌腱特异性标记物   胶原纤维   组织重塑  

摘要： 第一章肌腱病的肌腱组织细胞凋亡和组织学分析 目的:探讨肌腱病冈上肌腱组织内线粒体功能障碍相关的细胞凋亡和组织病理学改变。 方法:获取退行性肩袖肌腱病患者行关节镜清理术时的冈上肌腱作为实验组和因运动损伤造成急性肩袖撕裂患者的冈上肌腱作为对照组,采用RT-q PCR、Western blot分别检测线粒体相关的凋亡基因转录和翻译水平,以及细胞增殖能力。采用TUNEL染色评估组织内细胞凋亡水平。此外,通过H&E染色分析肌腱病的肌腱组织病理学改变。 结果:与对照组相比,实验组冈上肌腱组织中促凋亡分子caspase 3、Cyt-c和Bax的表达水平升高了3倍左右(P<0.001),而抑凋亡分子Bcl-2的表达水平显著降低(P<0.0001)。TUNEL染色提示在对照组中阳性凋亡细胞数量较少,而在实验组中阳性凋亡细胞数量和凋亡指数显著升高(P<0.001)。与对照组相比,实验组冈上肌腱组织中线粒体的融合与裂变之间的平衡失调,表现在裂变因子(Drp1)蛋白水平表达升高、融合因子(Mfn2)蛋白水平表达下降。线粒体相关凋亡因子AIF和Smac蛋白表达水平也显著高于对照组。与对照组比较,实验组中细胞增殖相关分子Ki67呈低表达水平(P<0.001),而炎症因子IL-1β和TNF-α的表达水平分别约升高了3倍和2倍(P<0.001)。肌腱特异性标志物(Tnmd)在实验组中呈低表达水平。相比于对照组,实验组中的Col 1α1转录水平下降,而Col 3α1转录水平升高。并且H&E染色结果提示实验组中肌腱的纤维束分离、排列紊乱,正常的纤维划分模式消失,胶原被破坏。 结论:肌腱病的冈上肌腱组织中存在着线粒体功能障碍相关的细胞凋亡,并且分别从基因转录和蛋白表达水平证实了线粒体依赖的细胞凋亡在肌腱病中的重要作用。 第二章MSCs向肌腱细胞转移线粒体并减轻肌腱细胞凋亡的机制研究 目的:骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)在肌腱病中具有潜在的治疗价值,本章节通过观察MSCs向过氧化氢(H2O2)诱导损伤的肌腱细胞转移线粒体的现象,探讨线粒体转移机制在MSCs对肌腱细胞增殖和凋亡的影响。 方法:体外分离培养大鼠原代骨髓MSCs和跟腱来源的肌腱细胞。通过流式分析细胞表面抗原和三系分化鉴定MSCs;RT-q PCR和免疫荧光鉴定肌腱细胞。通过CCK-8实验确立H2O2诱导肌腱细胞损伤的浓度(250μM),并以此浓度构建肌腱细胞体外损伤模型。利用Mito Tracker Green和Mito Tracker Red CMXRos分别标记肌腱细胞和MSCs的线粒体,Hoechst 33342标记肌腱细胞胞核,构建MSCs和肌腱细胞(数量比1:1)的共培养体系(MSC干预组),细胞松弛素B(Cytochalasin B,CB,350 n M)用于阻断线粒体转移作为对照(CB干扰组),正常肌腱细胞作为正常对照组,肌腱细胞单纯暴露于H2O2作为阳性对照(H2O2暴露组)。通过荧光显微镜观察两种细胞内荧光标记的线粒体位置变化。Cell Trace Violet标记肌腱细胞,流式细胞学分析肌腱细胞的增殖活力。采用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡情况。RT-q PCR和Western blot评估凋亡相关分子在获得MSCs线粒体的肌腱细胞中的表达水平。 结果:采用全骨髓分离提取方法获得的原代MSCs高表达CD90和CD44,低表达CD34和CD45,细胞成簇样生长,并具有良好的成骨、成软骨和成脂的分化潜能。采用组织胶原酶消化法获得原代肌腱细胞。与脂肪组织相比,肌腱细胞中特异性标志分子TN-C、Scx和Tnmd的转录水平呈高表达;同时,免疫荧光染色证实I型胶原在肌腱细胞中呈高表达,而III型胶原呈低表达。体外共培养48 h后发现MSCs的线粒体可向H2O2诱导损伤的肌腱细胞内转移,而CB减少了两种细胞间的线粒体转移。与H2O2暴露组和CB干扰组相比,肌腱细胞在获得外源性线粒体后Ki67 m RNA转录水平增高,流式分析结果提示Cell Trace Violet标记的肌腱细胞数量明显增多,并且肌腱细胞的凋亡(Annexin V+/PI-)和死亡(Annexin V-/PI+)数量下降。与H2O2暴露组相比,MSC干预组促凋亡相关分子(Cyt-c、Bax、caspase 3和caspase 9)表达水平显著下降,抑凋亡相关分子(Bcl-2)表达水平升高,且Bcl-2/Bax比值增高,线粒体相关的促凋亡分子(AIF和Smac)表达水平降低。当以CB阻断两种细胞间线粒体转移后明显降低了MSCs的治疗效果。 结论:MSCs向损伤的肌腱细胞转移线粒体促进了肌腱细胞增殖并抑制了细胞凋亡,提示线粒体转移机制在MSCs治疗肌腱病的过程中发挥一定作用。 第三章线粒体转

关键词： TSPCs   高糖   错误分化   HMGB1/RAGE/β-catenin信号通路   TSPCs   高糖   错误分化   HMGB1   RAGE/β-catenin信号通路   dTSPCs   错误分化   糖尿病   肌腱病变   HMGB 1/RAGE/β-catenin信号通路  

摘要： 第一部分 高糖对TSPCs分化功能和HMGB1/RAGE/β-catenin信号通路活性的影响 目的:探索体外高糖对肌腱干细胞(tendon stem/progenitorcells,TSPCs)自我更新能力和分化潜能的影响,及高糖下HMGB 1/RAGE//β-catenin信号通路的活性变化。 方法:我们使用8周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠分离和培养髌腱TSPCs,通过克隆形成实验和多向分化潜能对TSPCs进行干性鉴定。在体外用含有正常糖浓度(5.5 mM)、高糖浓度(15 mM和25 mM)的培养基培养TSPCs,通过CCK-8实验、EdU细胞增殖实验、克隆形成实验和群体倍增时间评估高糖对TSPCs自我更新能力的影响,通过成骨诱导分化实验和实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)评估高糖对TSPCs成骨分化潜能和成肌腱分化能力的影响。通过qRT-PCR、western blot、免疫荧光染色和酶联免疫吸附实验(ELISA)分析高糖下TSPCs中HMGB 1/RAGE/β-catenin信号通路的激活情况。 结果:本研究分离培养的TSPCs具有克隆形成能力和成骨、成软骨、成脂肪分化潜能。和正常糖组相比,高糖组TSPCs的增殖活性下降、EdU阳性的TSPCs比例减少、形成的克隆团数量减少、克隆形成效率降低;25 mM组TSPCs群体倍增时间增加。基础培养下,正常糖和高糖组中均未观察到明显的茜素红染色阳性的钙结节形成,和5.5 mM组相比,15 mM组TSPCs中成骨分化相关基因Runx2的mRNA表达增加;成骨诱导分化培养下,和5.5 mM组相比,15 mM和25 mM组TSPCs中茜素红染色阳性的钙结节形成增加,成骨分化相关基因Runx2、OPN和OCN的mRNA表达增加。基础培养下,和5.5 mM组相比,15 mM和25 mM组TSPCs中成肌腱分化相关基因Col 1 A1、Scx和Tnmd的mRNA表达减少。和5.5 mM组相比,15 mM和25 mM高糖干预下TSPCs中HMGB1的mRNA和蛋白表达增加;25 mM高糖干预下TSPCs细胞质中HMGB1的蛋白水平增加、细胞核中HMGB1的蛋白水平降低;免疫荧光染色进一步显示,在正常糖浓度培养的TSPCs中,HMGB1主要定位于细胞核中,而在25 mM高糖培养的TSPCs中,分布在细胞质内的HMGB1增加;ELISA结果显示在24h、48h和72h时,25 mM糖浓度培养上清液中HMGB1浓度高于5.5 mM组。在成骨诱导分化过程中,和5.5 mM组相比,15 mM和25 mM高糖干预下TSPCs中RAGE、β-catenin和TCF-4的蛋白表达增加。 结论:高糖抑制TSPCs自我更新能力,促进TSPCs错误分化,提示其可能在糖尿病肌腱病变中发挥重要作用;高糖促进TSPCs中HMGB1的基因表达和蛋白分泌,高糖干预下TSPCs中HMGB 1/RAGE/β-catenin信号轴被激活,提示该信号通路可能在TSPCs错误分化中发挥着重要作用。 第二部分 HMGB1通过激活RAGE/β-catenin信号通路参与调控高糖诱导的TSPCs错误分化 目的:研究HMGB 1/RAGE/β-catenin信号通路在高糖诱导的TSPCs错误分化中的作用。 方法:我们在体外用不含(0 ng/ml)或含有(50 ng/ml和100 ng/ml)重组HMGB1的培养基培养TSPCs,通过EdU细胞增殖实验和克隆形成实验评估外源性HMGB1对TSPCs自我更新能力的影响;通过成骨诱导分化实验和qRT-PCR评估外源性HMGB1对TSPCs成骨分化潜能和成肌腱分化能力的影响。用重组HMGB1或靶向HMGB1的慢病毒或RAGE抑制剂FPS-ZM1处理TSPCs,利用western blot分析HMGB 1对RAGE/β-catenin信号的激活作用。在高糖(15 mM和25 mM)干预下,用靶向HMGB1的慢病毒或FPS-ZM1或β-catenin抑制剂PNU-74654处理TSPCs,通过成骨诱导分化实验和qRT-PCR进一步研究HMGB 1/RAGE/β-catenin信号通路在高糖诱导的TSPCs错误分化中的作用。 结果:重组HMGB1干预下EdU阳性的TSPCs 比例下降、TSPCs克隆团形成数量减少、克隆形成效率降低。基础培养下,重组HMGB1干预和未干预组中均未观察到明显的茜素红染色阳性的钙结节形成,重组HMGB1干预下TSPCs中成骨分化相关基因Runx2和OCN的mRNA表达增加;成骨诱导分化培养下,和未干预组相比,重组HMGB1干预组中茜素红染色阳性的钙结节形成增加,成骨分化相关基因Runx2、OPN和OCN的mRNA表达增加。基础培养下,和未

关键词： 富血小板血浆   皮质类固醇   肌腱病   Meta分析  

摘要： 目的:探讨富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)注射与皮质类固醇(corticosteroids,CS)注射治疗肩袖肌腱病在肩关节功能恢复、疼痛缓解和关节活动度方面的临床疗效。方法:计算机检索Cochrane Library,EMBASE,PebMed,中国知网(CNKI),万方数据库中PRP注射与CS注射肩袖肌腱病的随机对照试验(randomized controlled trial,RCT)文献,检索时间为建库至2022年4月20日。由2名研究者根据纳入和排除标准,进行文献筛选、数据提取及质量评价,并采用Review Manager 5.4.1软件对提取的数据进行统计学分析。比较注射后短期(3~6周)、中期(8~12周)、长期(≥24周)的视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS),美国肩肘医师协会(American Shoulder and Elbow Surgeons,ASES)评分,西安大略肩袖疾病评分指数(Western Ontario Rotator Cuff Index,WORC),以及肩关节活动度(range of motion,ROM)。结果:共纳入7篇RCT文献,共379例患者,其中PRP组188例,CS组191例。Meta分析结果显示:两组在短期和中期随访内VAS、ASES及WORC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。长期随访ASES评分[MD=7.1,95%CI(2.06,12.14),P=0.006]和VAS[MD=-1.55,95%CI(-2.65,-0.55),P=0.002]比较,差异有统计学意义。两组ROM比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:对于肩袖肌腱病的患者,PRP与CS在疼痛缓解及功能恢复方面的短期和中期随访疗效相似。然而,长期随访发现,PRP较CS在功能恢复和疼痛缓解方面体现出优势。肩关节活动度在整个随访期间无明显差异。

关键词： 手部   肌腱损伤   肌腱粘连   关节僵硬   屈指   伸指   生活质量  

摘要： 背景:目前国内外针对手部肌腱损伤所开展的流行病学调查鲜有报道。在新疆范围内,屈伸指肌腱损伤的患者呈逐年上升趋势,但对其受伤、治疗乃至预后较完整的流行病学调查极为罕见。目的:分析手部肌腱损伤患者的流行趋势及预后分布特征,了解手部肌腱损伤患者的预后功能恢复,有针对性地开展人群干预,提高干预效果,探讨屈伸指肌腱损伤因素与预后的相关性。方法:通过统一编制新疆手部肌腱损伤的流行病调查表,收集新疆医科大学第一附属医院2012年1月至2019年12月手部肌腱损伤患者的临床资料,采集患者的个人信息、损伤原因、受伤时间、受伤季节、损伤肌腱类型、损伤屈伸指肌腱分区、损伤手别、受伤合并症、治疗后手指总主动活动度优良率、术后并发症等信息,回顾性分析上述资料,并分析各资料间的相关性,进行手部肌腱损伤的流行病学特征描述。结果与结论:(1)患者性别、年龄分布差异有显著性意义(P<0.05),21-30岁的患者最多,男性患者多于女性(5.30∶1);(2)损伤原因分布差异有显著性意义(P<0.05),玻璃割伤最高,占24.4%;(3)损伤例数随年份增加而增加(P<0.01),损伤时间的季节分布差异有显著性意义(P<0.01),夏季损伤例数最多(35.7%);(4)屈伸指肌腱与手别分布差异有显著性意义(P<0.05),右手多于左手(1.05∶1);(5)屈伸指肌腱与合并症分布差异有显著性意义(P<0.05),屈肌腱损伤容易造成神经及血管的损伤,伸肌腱损伤容易发生手部的骨折;(6)手部肌腱损伤患者术后肌腱粘连率为8.8%,功能锻炼后肌腱粘连、关节僵硬率显著低于未功能锻炼的患者(P<0.05),功能锻炼的患者术后手指总主动活动度优良率显著高于未功能锻炼的患者(P<0.01);(7)调查结果提示,手部肌腱损伤的住院患者在性别、年龄、损伤原因、受伤时间、损伤肌腱分区、屈伸指肌腱类型、合并症及治疗后肌腱粘连率、关节僵硬率、手指总主动活动度优良率等方面存在一定的分布规律,有待进一步开展手部肌腱损伤及治疗后肌腱粘连的防治策略研究。

关键词： 电针   针刺   斜刺   肌肉   肌腱末端病  

摘要： 目的:介绍“针向病所”理念下的一种膝关节肌腱止点周围病的针刺治疗新方法。方法:应用毫针斜刺电针受累肌肉法治疗国家队运动员膝关节肌腱止点周围病。采用疼痛视觉模拟量表(VAS)评分、激惹点查体变化、伤病运动员运动表现评价表、运动员膝关节肌腱止点周围病疗效评价标准评价疗效。结果:23例膝关节肌腱止点周围病运动员对应肌肉上均触及激惹点,经斜刺电针法治疗未出现针刺后膝关节止点区域疼痛加重及其他针刺不良反应。首次针刺2周后,对应肌肉激惹点压痛程度、触感异常程度、VAS评分均较前降低,运动表现评分较前升高,差异有统计学意义(P<0.001)。疗效评价显示:显效18例,有效5例,无效0例,总有效率为100%。结论:“针向病所”理念下的斜刺电针受累肌肉法是运动员膝关节肌腱止点周围病的有效治疗手段之一,疗效较好。

关键词： 肩关节超声   超声引导   冈上肌腱腱病   高渗葡萄糖   增生治疗  

摘要： 目的探讨超声引导下高渗葡萄糖疗法治疗冈上肌腱腱病的临床价值。方法选取2018年1月至2021年10月期间在南通市第三人民医院及南通大学附属医院就诊,磁共振确诊为冈上肌腱腱病的30例患者,超声引导下在腱病处注射15%的葡萄糖,合并肩周炎者超声引导下在肩周间隙内注射灭菌注射用水,合并继发性冻结肩者行超声引导下灭菌注射用水注射扩张肩关节腔,治疗前后均行肩关节超声检查及肩关节Constant评分评估。结果30例患者治疗后腱病处边界模糊,面积较治疗前下降但差异无统计学意义(P>0.05);14例合并继发性冻结肩患者治疗后肩关节囊厚度减少,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05);能量多普勒显示4例腱病内部出现散在点状血流信号;30例患者治疗前的Constant评分为(60.63±12.41)分,治疗3个月复查提高到(95.20±2.24)分,差异有统计学意义(P<0.05);22例合并肩周炎症患者治疗后炎症症状消失。结论超声引导下高渗葡萄糖增生疗法治疗冈上肌腱病具有较高的临床应用价值。

关键词： 肌肉骨骼系统   颞肌   肌腱病   超声检查  

摘要： 目的 探讨颞肌及颞筋膜的正常超声声像图表现及其临床意义。资料与方法 招募2021年3—5月深圳市龙岗中心医院健康成年志愿者64名进行前瞻性研究,其中男32名,女32名,进行颞区超声扫查。分析声像图内解剖结构,测量颞肌肌腹浅、深层正常厚度,比较自身左、右侧各层颞肌厚度及男、女双侧颞肌总厚度。结果 超声可见颞肌、颞筋膜均分为浅、深两层;颞浅筋膜内有颞浅动静脉及耳颞神经走行;颞中动脉走行于颞深筋膜浅、深层之间;颞深动脉走行于颞肌与颅骨骨膜之间,穿入浅方肌肉;颞肌腱止于下颌骨冠突。男性颞肌浅层厚度左侧(4.16±0.58)mm、右侧(4.16±0.66)mm,男性颞肌深层厚度左侧(9.82±1.67)mm、右侧(9.38±1.56)mm,男性颞肌浅、深层左右侧自身对比,差异均无统计学意义(t=0.00,P>0.05;t=1.78,P>0.05);女性颞肌浅层厚度左侧(3.61±0.63)mm、右侧(3.51±0.56)mm,差异无统计学意义(t=0.84,P>0.05);女性颞肌深层厚度左侧(8.88±0.96)mm、右侧(8.40±1.06)mm,差异有统计学意义(t=2.95,P<0.01);颞肌肌腹平均总厚度(13.98±1.74)mm(男左)、(12.48±1.18)mm(女左)、(13.54±1.86)mm(男右)、(11.91±1.31)mm(女右),男性颞肌总厚度与女性颞肌总厚度同侧对比,差异均有统计学意义(左侧t=4.02,P<0.01;右侧t=4.07,P<0.01)。结论 超声可作为了解颞区解剖结构的重要影像学工具,为超声引导下介入治疗颞区相关疾病提供可视化精确指导。

关键词： 炎症因子   糖尿病足肌腱变性坏死症   筋疽   作用机制   研究进展  

摘要： 从古至今,筋疽的内涵不断发生变化,现多指糖尿病足肌腱变性坏死症,在临床中发病率逐年上升且治疗费用高昂,为临床工作带来很大的阻碍,在筋疽的发病过程中炎症因子扮演着不可或缺的角色,对肌腱组织通过直接或间接作用,影响肌腱组织形态学、生物力学等,因此通过研究炎症因子在糖尿病足肌腱变性坏死症(筋疽)的作用机制研究,可能找到改善筋疽患者病情、提高生活质量、减少截肢的新方法。

关键词： 富集血小板血浆   肌腱干细胞   肌腱病   白细胞   修复  

摘要： 探究富集血小板血浆(PRP)调控肌腱干细胞分化促进肌腱病修复的效果。方法:选取24只新西兰大白兔采用跟腱胶原酶注射建立肌腱病模型,随机分为3组,每组8只,分别给予 Lp-PRP(Lp-PRP组)、Lr-PRP(Lr-PRP组)以及生理盐水(对照组)局部注射治疗,治疗4周后,采集各组跟腱组织,予以MRI扫描、HE染色及组织学评估,对比不同方法对肌腱干细胞功能的影响及对肌腱病的修复作用。结果:MRI扫描结果显示,Lr-PRP组与对照组跟腱组织MRI在T2加权图像上信号强度高于Lp-PRP组,差异有统计学意义(P<0.05);HE、Masson染色结果显示,Lp-PRP细胞密度评分、总评分较Lr-PRP组、对照组低,有统计学意义(P<0.05);Lp-PRP组胶原纤维直径高于Lr-PRP组,P<0.05,胶原纤维密度较Lr-PRP组低,有统计学意义(P<0.05)。结论:Lp-PRP在调控肌腱肝细胞分化方面作用更为显著,对肌腱病修复效果优于Lr-PRP,可为肌腱病治疗提供可靠的参考依据。

关键词： 肌腱病   超声   诊断和治疗  

摘要： 近年来,肌腱病在专业体育运动员和业余体育爱好者人群中发病率逐渐升高。肌腱病会导致受累肌腱疼痛和功能障碍。目前临床对于肌腱病的诊断通常需要依靠影像学方法进行。近年来,超声诊断和辅助治疗技术在肌腱病患者中广泛被应用。本综述简要总结了超声技术作为下肢肌腱病影像学诊断工具和辅助下肢肌腱病治疗的研究进展。超声成像主要通过评价肌腱厚度、回声情况和新生血管情况来获取诊断。超声在诊断肌腱病变方面具有良好的灵敏度和特异度,但对于肌腱病变疾病发展阶段的识别仍存在不足。超声下引导的临床治疗也用于许多肌腱病的治疗,这也是今后进一步研究的重要方向。