关键词：
肩袖
肌腱病
肩峰下滑囊
疼痛
炎性因子
EGCG
原代细胞
条件培养基
旁分泌
摘要：
第一部分肩峰下滑囊中疼痛、炎性相关因子表达及其临床意义研究背景肩部疼痛是常见的临床主诉之一,其病因有多种,包括外伤、肩袖综合征、肩峰撞击综合征、肩袖肌腱病等,其中肩袖肌腱病导致的肩部疼痛近年来得到了广泛的关注。肌腱病(tendinopathy)是一种慢性肌腱疾病,通常由肌腱过度运动引起的慢性损伤所导致,冈上肌肌腱、肱二头肌肌腱、前臂屈伸肌腱、股四头肌肌腱以及跟腱是最常受累的部位。据统计,30%-50%的运动损伤都与肌腱病相关。肩袖肌腱病在给患者造成痛苦的同时,也会造成劳动力丧失和社会医疗负担增加,但目前临床上对其治疗多以镇痛为主,缺乏有效治疗手段。因此,探索肩袖肌腱病的新型治疗方法,具有一定研究价值。肩袖肌腱病中疼痛症状的发生机制,目前缺乏较为完善的解释。一些研究发现,在正常肌腱组织中,神经递质和神经纤维主要存在于肌腱束膜和外膜中,对肌腱正常生理活动起神经调节作用。但当肌腱处于病理状态以及损伤后修复时,神经纤维会呈浸润性生长,进入肌腱实质,并产生大量神经递质,在引起疼痛的同时诱导组织修复及退变。这些研究表明,肌腱本身可以作为肩袖肌腱病发生时肩部疼痛症状的来源。但在临床实践中,对于患有肩袖肌腱病并发生撕裂的患者,其疼痛程度与肩袖撕裂程度有时不相符,表明此类患者的肩部疼痛不仅来源于肌腱。因此,我们仍有必要对肩袖肌腱病患者疼痛症状的组织来源进行进一步探究。肩峰下滑囊解剖上位于肩峰和喙肩韧带深面,冈上肌腱浅层,是全身最大的滑囊之一。近年来研究者发现,在肩袖撕裂患者中,磁共振检查所见肩峰下滑囊的增厚与对比剂强化十分普遍,而病理研究发现滑囊组织中可见明显水肿与坏死区。从解剖上的毗邻关系,到影像学与病理学的研究结果,这些证据表明,肩峰下滑囊可能与肩袖疾病及其疼痛症状的发生与进展有所关联,但相关研究仍属空白。因此,我们在本部分研究中对肩袖肌腱病患者的肩峰下滑囊展开研究,探索其在肩袖肌腱病过程中发挥的作用。研究目的探索肩袖肌腱病患者中肩峰下滑囊的组织学特征,并对其疼痛、炎性相关因子的表达情况展开研究,为后续对肩袖肌腱病治疗方法的探索提供方向和理论支持。研究方法1.临床标本采集:实验收集24名患者的肩峰下滑囊和/或肩袖组织标本。实验组患者12例,诊断均为肩袖肌腱病伴肩袖撕裂,且存在明显肩区疼痛症状。对照组患者12例,诊断为肩关节不稳,临床无疼痛症状,且不存在其他肩关节疾病。两组患者年龄、性别无显著差异。所采集标本用于组织学研究及基因、蛋白表达水平测定。2.采用HE染色和免疫组织化学染色,观察疼痛组患者肩峰下滑囊的组织学特征及免疫细胞浸润情况。3.采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)和免疫组织化学染色方法,测定疼痛组患者肩峰下滑囊、肩袖肌腱组织及对照组患者肩峰下滑囊内疼痛及炎性相关基因的表达。研究结果1.疼痛组患者的肩峰下滑囊组织表现出明显的组织学变化。H&E染色可见组织内有大量新生血管生成及成纤维细胞增生,新生血管侵及组织浅层,血管内皮高度活化。免疫组化显示滑囊组织内有大量单核/巨噬细胞、肥大细胞浸润,但缺乏B淋巴细胞、浆细胞和T细胞浸润。2.疼痛患者肩峰下滑囊组织内疼痛及炎性相关因子表达增高,疼痛相关基因TAC1、MCP1,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6,基质金属蛋白酶MMP1、MMP13,生长因子VEGF、NGF,警戒素家族蛋白S100A4、-A10、-A11表达显著高于无痛对照组(p<0.05)。3.疼痛患者肩峰下滑囊与自身肩袖组织相比,前者组织内TAC1、MCP1、PANX1、P2X7、TNF-α、IL-6、MMP1、S100A4、S100A10、S100A11 的mRNA表达水平显著高于后者(p<0.05)。组织免疫组化染色和Western Blot结果显示,肩峰下滑囊内substance P、IL-1β、IL-6的蛋白表达水平显著高于肌腱组织。结论1.肩袖肌腱病患者中肩峰下滑囊显著受累,处于炎性反应状态。2.肩袖肌腱病患者肩峰下滑囊中疼痛、炎性相关因子的表达水平显著高于肌腱组织及对照组滑囊,是肩袖肌腱病过程中重要的疼痛和炎性因子来源。第二部分EGCG对肩袖肌腱病治疗作用及其机制的体外实验研究研究背景肌腱是肌腹向骨骼肌止点延伸时形成的白色致密结缔组织,可传导骨骼肌产生的收缩力,引起关节运动。肌腱细胞是肌腱中最主要的细胞类型,是肌腱组织内分化成熟的成纤维细胞,其数量约占肌腱中细胞总量的90-95%。细胞外基质是肌腱的主要成分,是保持正常肌腱结构和功能的关键。细胞外基质的合成代谢主要为结构蛋白的合成过程,主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白及多种糖蛋白和蛋白多糖。分解代谢则主要取决于组织内多种基质蛋白水解酶及其抑制剂的表达水平,如MMPs、ADAM、ADAMTS、TIMPs等。正常肌腱组织
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