关键词： 骨髓间充质干细胞   脊髓损伤   诱导分化   神经元   神经干细胞   脑源性神经营养因子   神经生长因子   凋亡   细胞移植  

摘要： 目的:该实验研究骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,MSCs)对脊髓损伤的治疗作用.在体外诱导MSCs向神经细胞分化,探讨MSCs神经诱导的可能性和特征,检测MSCs是否表达和分泌有神经保护、营养作用的因子如BDNF和NGF,研究MSCs分泌的因子在体外对脊髓神经元和神经干细胞的保护作用,研究MSCs移植对脊髓损伤的治疗作用,探讨MSCs移植治疗脊髓损伤的机理.结论MSCs在体外有诱导分化成神经元的能力,MSCs表达和分泌神经营养因子BDNF和NGF,MSCs分泌的因子在体外可以减少脊髓神经元和神经干细胞凋亡.MSCs移植后能在脊髓中存活,减少脊髓神经细胞凋亡,促进损伤修复,改善脊髓损伤后的运动功能,但是没有分化成为神经细胞,说明MSCs的作用主要是通过分泌神经营养因子取得的.MSCs移植对脊髓损伤有治疗作用,为脊髓损伤的治疗提供了新的手段.

关键词： 骨髓间充质干细胞   细胞治疗   骨髓造血微环境   基因表达   调节机制   急性髓性白血病   治疗  

摘要： 骨髓间充质干细胞是骨髓造血微环境的重要组分,其首要作用在于支持造血,此外它还具有干细胞的特性,即自我更新和多向分化的潜能。因此,这种细胞将有可能用于联合造血干细胞移植以提高造血干细胞移植成功率和作为组织工程学的种子用于修复受损或有遗传缺陷的组织和器官,如骨发育不全和心肌梗死后的心肌等。然而,其分离方法很粗糙,还没有一个令人满意的分离和鉴定的方法,这是制约其用于细胞和基因治疗的重要因素。另外,弄清在分化过程中基因表达的调节机制,有利于体外控制这种干细胞的定向分化。最后,间充质干细胞回巢到骨髓或其他组织是成功进行细胞治疗的关键所在。

关键词： 骨髓间充质干细胞   树突状细胞   再生障碍性贫血   免疫机制   发病机理  

摘要： 研究背景：再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA，简称再障）发病机理较为复杂，近年研究认为与造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）内在增殖或分化缺陷，造血微循环系统异常及机体免疫功能紊乱有关，三种机制在不同个体单独或联合作用，导致造血功能衰竭。目前认为，AA是一种以造血系统为靶目标的自身免疫性疾病，其中T细胞的功能异常发挥着关键作用。骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）是来源于骨髓基质的一类具有自我更新能力和具有免疫调节作用的干细胞，许多临床研究报告指出，MSC可以治疗一些自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、硬皮病，移植物抗宿主病（GVHD）等。目前研究发现MSC调节免疫反应的可能机制为：MSC具有独特的免疫表型，不表达MHCII分子和FasL，不表达或极低表达MHCI分子，不表达共刺激分子B7-1，B7-2，CD40，CD40L，因此它具低免疫原性，很难被免疫系统识别。体外实验表明，MSC能抑制T细胞在混合淋巴细胞培养或有丝分裂刺激下的增殖。而在细胞免疫应答时，环境中的可溶性外来抗原不能直接触发T细胞的免疫应答，是由抗原提呈细胞(antigen presenting cell，APC)以特定的方式呈递给T细胞，而T细胞的激活和产生细胞因子与不同类型的APC相关。树突状细胞（dendritic cells，DCs）是目前已知体内功能最强的专职性APC，能够在体内外直接刺激初始型T细胞（naive T cells）增殖。MSC对AA患者T细胞增殖的影响国内仅见少量报道，而MSC是否通过调节DCs来影响AA患者T细胞的增殖，国内未见报道，其机制值得深入研究。　　 研究目的：（1）研究MSC是否对AA患者的T细胞具有抑制增殖作用;（2）探讨MSC是否通过调节DCs的分化成熟来影响AA患者T细胞的增殖。　　 研究内容：（1）将正常人骨髓的MSC与AA患者的T细胞共培养，流式细胞仪检测共培养前后的T细胞表面抗原和T细胞亚群的变化，以及免疫相关的细胞因子IL-2，IL-4，IL-10，IFN-γ在培养前后表达的变化（ELISA法），研究MSC对AA患者的T细胞活化和增殖的影响。(2)从正常人外周血单个核细胞诱导DCs，将未成熟DCs在脂多糖（LPS）刺激下与正常人骨髓的MSC共培养，检测有或无MSC共培养前后，流式细胞仪检测DCs表面抗原和共刺激分子CD80和成熟标记物抗原CD83的表达，研究MSC对DCs发育的影响。(3)将正常人外周血单个核细胞诱导DCs，在LPS的刺激下获成熟DCs后与正常人骨髓的MSC与共培养，DCs表面抗原和共刺激分子CD80和成熟标记物抗原CD83的表达（流式细胞仪），研究MSC对成熟DCs的影响。　　 研究方法：(l)体外分离培养正常人的MSC，观察细胞形态，同时用流式细胞仪检测其分子表面抗原CDl05，CD29，CD34，CD44，HLA-DR。(2)提取20例再障患者（未经抗胸腺球蛋白等免疫治疗）的外周血单个核细胞，用T淋巴细胞尼龙毛柱分离法提取T淋巴细胞。用流式细胞仪进行T细胞表面抗原和T细胞亚群的检测鉴定。（3）取健康人外周血，分离单个核细胞，在重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和重组人白介素-4（IL-4）的培养条件下制备DCs。在LPS诱导下获得成熟树突细胞，用流式细胞仪进行DCs成熟前后的表型鉴定。（4）用正常人骨髓MSC与再障患者来源的T细胞共培养，流式细胞仪检测T细胞亚群的变化，以及与免疫相关的细胞因子IL-2，IL-4、IFN-γ、IL-10的蛋白水平在共培养前后的表达 (ELISA法)。(5) 从正常人外周血单个核细胞诱导DCs，将未成熟DCs在LPS刺激下与正常人骨髓的MSC共培养，流式细胞仪检测有或无MSC共培养前后，DCs表面抗原CD1a、共刺激分子CD80和成熟标记物抗原CD83的表达。（6）将正常人外周血单个核细胞诱导DCs，在LPS的刺激下获成熟DCs后与正常人骨髓的MSC与共培养，在显微镜下观察细胞形态的变化，流式细胞仪检测DCs表面抗原CD1a和共刺激分子CD80和成熟标记物抗原CD83的表达。　　 研究结果：（1）正常骨髓间充质干细胞与AA外周血T淋巴细胞共培养后，流式细胞仪检测T细胞的CD8+细胞比例由（38.65士1.89）％下降为（29.69士1.62）％，CD4+细胞比例由（24.89士1.35）％上升至（34.89士1.89）％，差异具有统计学意义（P<0.05）;ELISA检测IL-2蛋白水平由(38.89士4.36) ng/L下降为（6.8士2.12）ng/L;IFN-γ由（38.46士1.64）ng/L下降为（6.62士1.78