关键词： 内科学   骨髓间充质干细胞   2'脱氧5-氮杂胞苷   细胞移植   心肌梗死   心功能衰竭   慢性实验  

摘要： 目的采用2’脱氧5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞移植于心肌梗死后心功能衰竭大鼠心肌中,评价其存活、分化及对心功能的保护作用,并研究其慢性演变。方法体外培养的Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,用0.3μmol/L的2’脱氧5-氮杂胞苷体外两次诱导第二代骨髓间充质干细胞,并用溴氮胞苷标记后植入心肌梗死10天心功能衰竭大鼠的心肌疤痕中,同时以注射无血清培养基的实验动物为对照。移植前及移植后1、2、3个月通过心脏射血分数等指标评价其对心功能的保护作用,同时通过双重免疫组织化学及电镜观察对移植细胞的存活和分化进行3个月的慢性动态观察。结果移植后1个月,骨髓间充质干细胞移植组大鼠射血分数(83.3%±8.1%,n=13)高于无血清培养基移植组(47.2%±11.8%,n=12)(P<0.01);并且细胞移植组移植后较移植前心功能(64.3%±10.4%)也有改善(P<0.01)。细胞移植组移植后第2个月(射血分数为83.1%±14.4%,n=7)、第3个月(射血分数为86.3%±3.7%,n=6)心功能改善情况继续保持,与无血清培养基移植组第2个月(射血分数为51.6%±11.2%,n=6)、第3个月(射血分数为49.1%±7.7%,n=6)差异均有显著性(P<0.01)。移植的骨髓间充质干细胞在心肌及疤痕中存活,双重免疫组织化学证实其溴氮胞苷及肌钙蛋白T均阳性。电镜观察提示移植后1个月其在疤痕中具心肌样细胞部分特点,但分化细胞核大浆少,未形成明显肌小节及Z带;移植后3个月,可见明显Z带样结构。结论经2’脱氧5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞可改善心肌梗死后心功能衰竭大鼠的心功能,并能长期保持(观察3个月);其能在心肌梗死后心功能衰竭大鼠心肌及疤痕中存活,并能逐渐向心肌细胞分化。

关键词： 骨髓间充质干细胞   心肌梗死   移植   肿瘤  

摘要： 骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSC)具有向多种细胞分化的潜能,参与梗塞部位心肌的修复、成骨和成软骨细胞分化及骨折后的骨功能和结构重建。输入MSC可以预防和治疗移植物抗宿主反应,提高肿瘤患者对化疗毒性的耐受性,增强肿瘤免疫功能。骨髓MSC还可促进造血功能恢复和损伤组织重建。

关键词： 骨   软骨缺损   间充质干细胞   细胞分化   基因疗法  

摘要： 骨髓间充质干细胞主要存在于骨髓中并保持干细胞的多项分化潜能,因其在一定条件下在体内外可分化为骨、软骨,加之细胞本身的特性,已经被应用于治疗如创伤、风湿性疾病引起的骨、软骨的破坏。骨髓间充质干细胞还有着外源基因易导入的特点,其通过特定外源基因修饰而达到更好的治疗效果,在未来临床中将有着广泛的应用价值。

关键词： 血管内皮生长因子   骨髓   间充质干   细胞治疗   缺血性心肌病   基因治疗   冠心病治疗   血管再生   心肌细胞   基因导入   基础研究   坏死心肌   分子搭桥   治疗性   外源性   干细胞   应用   思路   焦点   蛋白  

摘要： 　　近年来冠心病治疗的基础研究有较大的进展,焦点集中于干细胞及基因治疗.基因治疗是指将外源性治疗基因导入心肌细胞并获得表达,从而达到修复坏死心肌的目的.基因治疗为冠心病治疗提供了一种崭新的思路,形式为生长因子(蛋白或基因)的应用,被称为治疗性血管再生(therapeutic angiogenesis)或分子搭桥.……

关键词： 骨髓间充质干细胞   肝细胞样细胞   肝硬化   移植   大鼠  

摘要： 目的了解肝硬化大鼠在输注骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)后肝功能生化指标、AFP的变化情况,为临床应用提供实验依据。方法将健康雌性Wistar大鼠随机分为正常组、对照组和实验组;对照组和实验组腹腔注15%的四氯化碳石蜡油溶液建立肝硬化模型。实验组经尾静脉输入用BrdU(Bromodeoxyuridine)标记的健康雄性Wistar大鼠BM-MSCs,于1/2h、1wk、2wk、3wk、4wk处死对照组和实验组大鼠,用PCR检测雄性性别决定基因SRY、免疫组化检测BrdU以了解BM-MSCs的整合情况;用全自动生化分析仪检测血清肝功能指标、放免法检测AFP。结果PCR和BrdU免疫组化初步分析对照组在不同时期均无雄性BM-MSCs,实验组在1/2h处死的5例中均阴性,在第1wk处死的5只中有2例阳性,在第2wk处死组5只中有3只阳性,在第3、4wk处死组5只中均阳性。ALT、AST随着时间推移有所改善,在第4wk时与对照组有显著性差异(28.0±3.74,84.6±36.38vs56.0±26.66,161.2±55.43,P<0.005),ALB仅在第3kw时对照组和实验组有显著性差异(30.3±2.18vs34.4±2.49,P<0.005),但与正常组无显著性差异;GLO在不同时间点均无显著性差异;AFP虽无显著性差异,但有上升的趋势。结论BM-MSCs可以植入肝脏汇管区、肝细胞索,植入细胞最早见于移植后约7d;植入的BM-MSCs能够部分替代肝细胞的功能。

关键词： 骨髓间充质干细胞   移植   脊髓损伤   脑外伤   多发性硬化   Parkinson's病  

摘要： 目的 观察骨髓间充质干细胞（MSCs）移植治疗脊髓损伤（SCI）、脑外伤（TBI）、Parkinson’s病（PD）和多发性硬化（MS）的临床疗效和不良反应。方法 脊髓伤病6例，TBI3例，MS1例，PD1例，经骨髓穿刺采集白体骨髓222～350ml，分离提取MSCs后经静脉途径和／或蛛网膜下腔内一次性或分次注射。干细胞治疗前、后对患者神经功能变化及不良反应分别进行评价。结果 自体MSCs治疗脊髓伤病6例，5例有不同程度的感觉、运动和自主神经功能改善。治疗TBI3例，2例运动功能明显改善，1例持续植物状态患者PVS评分由5分提高到8分。治疗PD和MS各1例，PD患者震颤减轻，肌张力明显降低；MS患者运动功能明显改善。症状和体征改善最早出现在治疗后2d，多数患者在治疗后2周有明显改善。MSCs移植常见的不良反应包括发热（7／11例）、头痛（2／11例）、腹胀（1／11例）；1例于蛛网膜下腔内注射时出现双下肢麻木、脑膜刺激征。结论 MSCs移植治疗脊髓损伤、TBI、PD和MS等近期疗效明显，不良反应较少，但其远期疗效还需要进一步随访和观察。

关键词： 骨髓间充质干细胞   脑缺血再灌注   碱性成纤维生长因子   大鼠  

摘要： 目的:研究骨髓间充质干细胞(MSC)对大鼠脑缺血再灌注损伤的治疗机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为对照组和MSC治疗组。应用GFP阳性MSC,再灌注1d后经尾静脉注射MSC(1×106),对照组则注射PBS。采用线栓法建立脑缺血再灌注模型。术后每天由双盲于试验组的研究人员应用爬杆计分法评定大鼠神经功能。缺血2h再灌注8d取脑组织,用免疫组织化学方法检测脑组织中bFGF的表达。结果:MSC治疗组大鼠的神经功能缺损评分明显低于手术组和对照组(P<0.05)。MSC治疗组缺血侧缺血周边区脑组织中观察到GFP阳性与bFGF免疫组化染色阳性细胞。结论:经尾静脉给予的MSC可促进脑缺血再灌注大鼠的运动功能恢复;bFGF表达升高,可能是MSC脑保护作用机制之一。

关键词： 骨髓间充质干细胞   干扰素γ   胶质瘤  

摘要： 胶质瘤是常见的原发性脑肿瘤,占颅内原发肿瘤的一半以上,易复发,难治愈。胶质瘤具有迁移特性,迁移的微小病灶通过常规手术和放化疗难以根除。 骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是骨髓中除造血干细胞以外的另一类干细胞,是一群具有多向分化潜能的细胞。BMSCs的多向分化潜能,尤其是它向神经细胞分化的能力,可修补受损脑组织;此外,BMSCs还具有向胶质瘤迁移能力,给本研究提供了一个理想的基因治疗胶质瘤的载体。 胶质瘤患者的免疫功能低下与IFNγ有关,不仅患者外周血淋巴细胞IFNγ分泌不足,而且胶质瘤细胞中IFNγ基因也呈劣势表达;此外,胶质瘤细胞分泌的免疫抑制因子也通过下调T淋巴细胞表达IFNγ,从而抑制T淋巴细胞功能。 本实验将分子生物学技术与形态学手段相结合,利用转基因技术在国内、国外首次将mIFNγ基因通过携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒载体导入大鼠的BMSCs,在体内、体外观察转染mIFNγ基因的BMSCs治疗胶质瘤的情况。结果证明,BMSCs可向胶质瘤细胞迁移,并可分化成MAP-2或GFAP阳性细胞;转染mIFNγ基因的BMSCs在体内外均可抑制大鼠胶质瘤细胞生长,延长大鼠生存期。

关键词： 贫血   再生障碍性   间充质干细胞   T细胞  

摘要： 目的探讨在体外骨髓间充质干细胞(MSC)治疗再生障碍性贫血(AA)的机制。方法2003-02～2005-04安徽医科大学第一附属医院血液内科从人骨髓分离培养MSC,用尼龙棉柱分离T淋巴细胞。分别以不同数量MSC加入到植物血凝素(PHA)刺激的AA患者T淋巴细胞增殖体系中,用MTT还原法测定MSC对AA患者T细胞增殖的影响,通过流式细胞术计算CD3+T细胞CD25(IL-2R)的表达率。结果当MSC为2×104/孔(A组)和1×104/孔(B组)时,与单独培养的AA患者T淋巴细胞(对照组)相比,MSC对AA患者T淋巴细胞增殖及CD25的表达呈明显抑制作用,差异有统计学意义(P<0·01)。当MSC为1×103/孔(C组)时,无统计学意义。结论MSC抑制AA患者T细胞的活化与增殖,且这种抑制作用具有数量依赖性。

关键词： 间充质干细胞   细胞培养   基因治疗   白介素4   胶质瘤   动物模型  

摘要： 目的 (1)探讨成体骨髓间充质干细胞的体外培养方法并研究培养细胞的生物学行为特征,建立体外分离培养MSCs程序方法,为进一步实验和临床应用提供基础; (2)利用绿色荧光蛋白基因作为示踪剂,观察MSCs对大鼠脑胶质瘤的趋向性,以明确MSCs能否作为肿瘤基因治疗的载体; (3)探讨颅内移植IL-4基因修饰的MSCs对大鼠脑胶质瘤的治疗效果。方法 (1)采用梯度离心法分离大鼠骨髓基质细胞,24h后换液,保留贴壁细胞,体外培养扩增,光镜下观察细胞形态特点,传代培养后免疫细胞化学技术鉴定细胞表面CD44,CDl05和CD45的表达,分别在特定条件下进行成骨、脂肪和神经细胞的诱导分化,分别鉴定诱导后细胞碱性磷酸酶、油红0和神经元特异性烯醇化酶的表达; (2)脂质体介导EGFP基因转染MSCs,G418筛选,荧光显微镜下观察基因转染的情况,同时立体定向方法建立大鼠C6脑胶质瘤模型,分别行HE染色和免疫组织化学鉴定肿瘤组织GFAP的表达,并将EGFP标记的MSCs原位种植到大鼠脑胶质瘤模型中,2周后取出脑和肿瘤组织,制成切片,在荧光显微镜下观察绿色荧光的分布情况; (3)脂质体介导mIL-4基因转染MSCs,G418筛选,转染后采用ELISA检测培养细胞上清中mIL-4的分泌,RT-PCR检测mIL-4 mRNA的表达水平,将稳定转染mIL-4并经BrdU标记的MSCs颅内原位种植于荷C6脑胶质瘤大鼠,分别以PBS和未转染基因的MSCs作为对照组。观察治疗后动物生存状况、磁共振扫描观察肿瘤大小、H-E染色观察肿瘤组织学变化,免疫组化鉴定CD4、CD8、mIL-4及BrdU的表达。 结果 (1)刚接种的骨髓基质细胞呈圆形,悬浮生长,24h后可见散在贴壁细胞,此后逐渐增多并变为长或宽扁的梭形,免疫化学显示多数细胞为CD44,CD105阳性染色,而CD45为阴性,细胞在体外可以定向诱导分化为成骨、脂肪和神经元样细胞; (2)EGFP基因在体外可以稳定转染MSCs,阳性细胞在荧光显微镜下显示为绿色荧光,HE染色和免疫组化证实大鼠颅内肿瘤为胶质源性肿瘤,表现为GFAP阳性,EGFP标记的MSCs原位移植后弥散分布于肿瘤组织以及肿瘤与脑组织交界处; (3)MSCs转染后可稳定表达mIL-4,***06细胞培养24h可分泌mIL-465.78±2.28np/ml,RT-PCR在转基因组可检测到mIL-4 mRNA表达,而对照组未检测到,BrdU标记的MSCs移植后弥散分布于肿瘤内部及边缘,MSCs-mIL-4治疗组生存期明显延长,肿瘤体积(mm3)明显小于各对照组(55.08±5.14vs.227.72±10.23,279.54±18.84,P<0.01),肿瘤局部可出现坏死改变,并有CD4+和CD8+细胞浸润,免疫组化在治疗组可检测到mIL-4蛋白的表达。结论 (1)MSCs在体外易于培养和扩增,并可以向多种组织分化; (2)外源性基因可在体外转染MSCs; (3)MSCs对大鼠脑胶质瘤具有趋向性; (4)mmIL-4基因修饰的MSCs对大鼠脑胶质瘤有良好的靶向性和治疗效应; (5)MSCs作为治疗载体是脑胶质瘤治疗的有力工具。