关键词： 木豆叶   骨髓间充质干细胞   股骨头坏死   治疗  

摘要： 股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head，ONFH)是临床常见的疑难病之一。该病主要发生在20～50岁的青壮年，平均年龄38岁，最终导致髋关节功能障碍，严重影响患者生活质量，造成沉重的社会经济负担。目前股骨头坏死的治疗方法很多，但由于缺乏大样本量可对比的成功病例的长期随访文献，以及各文献使用的评价标准、统计学方法和股骨头坏死分类等存在差异，因此到目前为止尚没有一种适应证合理、疗效最好的治疗方法。通络生骨胶囊是袁浩教授结合多年的临床实践筛选出来的治疗股骨头坏死的有效药物，木豆叶为其主要成分。自1982年以来单独或配合手术应用，已经治愈大批股骨头坏死患者，前期的大量实验研究表明该药具有确切的疗效。为进一步探索提高治疗股骨头坏死疗效的方法，采用动物实验模型观察木豆叶联合骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的作用以及木豆叶联合骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的可能机理。临床研究观察通络生骨胶囊配合外展承重运动塑形及牵引疗法治疗股骨头坏死的疗效，分析不同因素对治疗效果的影响，为进一步临床应用提供理论依据。 动物实验研究采用健康SD大鼠32只，雄性，体重200±20g。随机分为4组：A组(模型空白组)；B组(木豆叶组)；C组(单纯骨髓间充质干细胞组)；D组(木豆叶联合骨髓间充质干细胞组)。每组8只，采用液氮冷冻法造模。C、D组注射骨髓间充质干细胞至股骨头内。造模后B、D组给予木豆叶，木豆叶按40mg／kg／d配制给药。治疗30天后麻醉处死大鼠，进行如下检测：采血，分离血清，测量血清钙磷含量；取完整股骨头脱钙处理后行组织病理结构观察、VEGF免疫组化染色并进行图像分析。 临床研究共收集2000年1月至2007年2月间广州中医药大学第一附属医院髋关节重点专科门诊股骨头坏死患者62例(85髋)进行临床观察，其中男32例(48髋)，女30例(37髋)，平均年龄48.9岁(20～73岁)。随访1～7年，平均2.4年。均给予通络生骨胶囊，每次4粒，每日3次；同时行外展承重，运动塑形及牵引疗法，每次30分钟，每天6次。服药同时辅助功能锻炼。治疗后对患者髋关节功能及X线表现进行疗效评定，并分析不同因素对治疗效果的影响。 动物实验结果：***染色观察模型空白组骨小梁稀疏，变细，有断裂现象，结构紊乱，有碎片出现。骨小梁中骨细胞固缩、边聚或消失，空骨陷窝明显增多，髓腔内脂肪细胞体积增大，有的融合成泡状，骨小梁周沿可见梭形成骨细胞排列，但数量很少。木豆叶组和木豆叶联合BMSC组均见骨小梁排列整齐，规则，致密饱满，无碎裂。骨小梁上骨细胞核清晰可见，位于中央，少见空骨陷窝存在。髓腔内造血细胞丰富，无明显大的脂肪滴。骨小梁周沿梭形成骨细胞数量增多，排列致密。 2．血清磷含量木豆叶组、单纯BMSC组和木豆叶联合BMSC组较模型空白组增高，其中单纯BMSC组与模型空白组比较有显著性差异(p＜0.05)，木豆叶组和木豆叶联合BMSC组与模型空白组比较均有高度显著性差异(p＜0.01)，木豆叶组、单纯BMSC组与木豆叶联合BMSC组比较有显著性差异(p＜0.05)；血清钙含量木豆叶联合BMSC组增高，与模型空白组比较有显著性差异(p＜0.05)，其余各组比较无明显差异；免疫组化染色可见软骨细胞及血管内皮细胞着色，图像分析结果显示木豆叶组、单纯BMSC组和木豆叶联合BMSC组的阳性表达强度较模型空白组增强，与模型空白组比较均有高度显著性差异(p＜0.01)。 临床疗效评价结果：优40.0％(34髋)，良50.6％(43髋)，可8.2％(7髋)，差1.2％(1髋)，总优良率90.6％；分期优良率：Ⅰ期100％(1髋)，Ⅱ期100％(20髋)，Ⅲ期92％(50髋)，Ⅳ期71.4％(14髋)。影像学疗效评价结果：优87.0％(74髋)，良11.8％(10髋)，可1.2％(1髋)，差0％(0髋)，总优良率98.8％(84髋)。分期优良率：Ⅰ期100％(1髋)，Ⅱ期100％(20髋)，Ⅲ期98％(50髋)，Ⅳ期100％(14髋)。 木豆叶联合骨髓间充质细胞可以提高血清中钙磷的含量水平，提高VEGF在软骨细胞及血管内皮细胞的阳性表达，提示其治疗股骨头坏死可能是通过增强细胞因子VEGF的表达，促进坏死局部血管增生，加速坏死的修复。通络生骨胶囊配合外展承重运动塑形及牵引疗法可以明显改善股骨头坏死患者髋关节功能，促进股骨头坏死的修复，防止或延缓股骨头坏死的塌陷，为其进一步临床应用提供了一定的理论依据。

关键词： 骨髓   干细胞移植   大脑中动脉梗塞   细胞分化   神经营养因子   行为学研究   脑电图  

摘要： 研究背景和目的 脑血管疾病(cerebral vascular diseases，CVD)为临床常见病之一，是中国人口总体死亡的第三位原因，也是所有血管性疾病致死的首位原因。我国每年死于脑血管病的总人数近300万之多，同时每年还有约200万例新发脑卒中病例。患病后的幸存者有3／4不同程度地丧失劳动能力，给社会和家庭带来极大的精神痛苦和经济负担。其中缺血性脑血管病(ischemic cerebralvascular disease，ICD)占70％左右，在欧美国家比例则达85％之高。治疗ICD目前除了发病急性期6小时内的溶栓治疗，尚没有更为有效的治疗措施，近年来国内外学者在干细胞治疗缺血性脑卒中的基础和临床研究方面取得的研究成果为广大缺血性脑卒中患者带来了希望的曙光。 干细胞是具有自我更新、高度增殖和多系分化的细胞群体，能够产生高度分化的功能子细胞。是替代、修复或加强受损、衰老组织及器官的理想种子细胞。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)在神经系统疾病的临床前期研究中颇受重视。其易于获得、体外培养能快速扩增、可自体移植、能免疫耐受并能够转染和长期表达外源性基因。 干细胞移植能否在对卒中大脑发挥有效的治疗作用?细胞移植后的存活时间有多长?干细胞治疗ICD的确切机制是什么?移植细胞和宿主细胞之间是否建立了某种信息传递方式?目前研究结论尚未达成一致。国内外学者对BMSCs的体外研究做了大量工作并取得较多共识。然而，在临床前期细胞移植后的体内实验研究方面仍然面临着众多困惑，细胞治疗的安全性和有效性方面存在诸多亟待解决的难点。因此，本课题的目的是研究BMSCs脑内移植治疗缺血性脑卒中的效果，探讨BMSCs治疗缺血性脑卒中的可能机制及细胞体内的追踪技术，为干细胞治疗缺血性脑卒中的临床应用提供实验依据。 研究内容和方法 拟建立大鼠大脑中动脉梗阻(middle cerebral atery occlusion，MCAO)脑缺血模型，采用脑立体定向BMSCs移植的方法进行动态研究。课题研究共分为三部分。第一部分：通过培养近交系Wistar大鼠的BMSCs，进行细胞脑内移植，利用进口电生理仪器监测脑卒中大鼠细胞治疗前后脑电生理的变化并进行统计学分析；第二部分：利用免疫荧光技术、ELISA技术、real-time定量RT-PCR技术以及动物行为学评价体系研究人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells，hBMSCs)移植到脑卒中大鼠脑内后细胞的存活时间、迁移、分化、脑内神经营养因子分泌水平的变化以及多角度行为学的变化规律等。第三部分：利用超顺磁性氧化铁离子Feridex标记BMSCs，将Feridex标记的BMSCs移植到卒中脑内后进行高场强磁共振的体内活体追踪，以研究细胞的存活、迁移及对脑梗死体积的影响；从电生理、形态学、功能学及影像学等方面探索BMSCs治疗缺血性脑卒中的机制和依据。 研究结果 1．脑内移植BMSCs后治疗组和对照组相比可以促进脑电快波的恢复，减少脑梗死后的慢波比例，并且相同监测时间点的脑电图平均波幅有显著提高，细胞的移植促进了实验大鼠的神经兴奋性。 2．在细胞移植后的第1、2周细胞大量存活并向病灶迁移，第3周细胞存活数量明显减少，第4周存活细胞极少；hBMSC在大鼠脑内没有明确表达MAP2、GFAP和GalC等神经细胞的特异蛋白。 3．神经营养因子的测定结果显示，治疗组和对照组四种神经营养因子的表达水平在细胞移植后的不同时间点均有不同程度的显著差异，但在第4周均没有统计学的差异。 4．行为学方面BMSCs移植治疗10天后治疗组大鼠的运功功能、感觉功能以及学习记忆能力均有不同程度的改善。 5．磁共振追踪显示移植后第14天BMSCs有向缺血灶边缘迁移、弥散的趋势，但是细胞移植不能影响大鼠脑梗死体积的变化。 结论 BMSCs脑内移植可以显著改善脑缺血大鼠神经功能的恢复，提高大鼠脑电生理的神经兴奋性；移植细胞在大鼠脑内可以向病灶周围迁移，但是细胞存活有一定时限性；BMSC在大鼠脑内没有明确分化为神经细胞，但是可以在细胞移植后的一段时间内促进卒中脑内的神经营养因子分泌水平增高，从而发挥神经保护的作用；超顺磁性氧化铁标记干细胞移植后进行磁共振活体追踪有利于了解干细胞移植后的存活和迁移，是分子影像学的发展方向。

关键词： 骨髓间充质干细胞   脊髓损伤   静脉移植   干细胞治疗   实验研究   大鼠   细胞移植   功能恢复  

摘要： 细胞移植已成为目前脊髓损伤（SCI）修复研究的热点之一，本试验观察静脉移植骨髓间充质干细胞对脊髓损伤后功能恢复的影响并探讨其机理。

关键词： 骨折   骨不连   骨髓间充质干细胞   体外冲击波  

摘要： 目的在体外成功分离培养骨髓间充质干细胞(hMSCs)的基础上,观察体外冲击波(ESW)联合自体MSCs移植治疗骨折延迟愈合及骨不连的疗效。方法对17例(观察组)骨不连患者进行体外冲击波联合自体干细胞移植,并与同期只接受体外冲击波治疗的31例(对照组)患者进行疗效观察,每4周复查患肢X线片,9个月后比较愈合率和平均愈合时间。结果2组骨不连患者接受治疗后均观察到新生骨痂的形成,其中对尺桡骨骨折不连接的治疗效果最为明显,胫骨骨不连疗效较差;观察组临床治愈率(88.2%)高于对照组(80.6%);干细胞移植后平均骨折愈合时间较对照组缩短了5.8周,差异有显著性(P<0.01)。结论自体干细胞移植可促进成骨,结合冲击波的微动力学刺激,可以加速骨痂的形成,有利于骨折的愈合,值得临床推广。

关键词： 骨髓间充质干细胞   脑梗死  

摘要： 目前,溶栓和神经保护治疗的进展将脑梗死的治疗推进到一个新时代。但是大部分患者在治疗后仍遗留有瘫痪、失语等严重残疾。近年来应用间充质干细胞(MSC)治疗脑梗死越来越被人们所关注。本文就间充质干细胞在治疗脑梗死方面的研究现状作如下综述。[第一段]

关键词： 激光血管重建术   骨髓间充质干细胞   下肢缺血  

摘要： 目的:观察激光血管重建术(TMR)联合骨髓间充质干细胞治疗缺血下肢后血管密度变化以及侧支循环建立的情况。方法:健康新西兰兔12只,随机分为TMR组、TMR联合骨髓间充质干细胞组、间充质干细胞组,缺血组为对照组。结扎并切除股动脉及其属只,缺血30分钟后行激光打孔,骨髓间充质干细胞注入孔隙内或直接注射到肌肉内。结果:TMR联合骨髓间充质干细胞治疗后4周,缺血区血管密度显著高于TMR组。结论:TMR联合骨髓间充质干细胞治疗缺血下肢后的血管密度和侧支循环显著增加。

关键词： 骨髓间充质干细胞   脑缺血  

摘要： 骨髓间充质干细胞在脑缺血治疗方法的研究近年来备受关注,文章对用其研究现状及存在的问题进行了综述。

关键词： 内科学   骨髓间充质干细胞   2'脱氧5-氮杂胞苷   细胞移植   心肌梗死   心功能衰竭   慢性实验  

摘要： 目的采用2’脱氧5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞移植于心肌梗死后心功能衰竭大鼠心肌中,评价其存活、分化及对心功能的保护作用,并研究其慢性演变。方法体外培养的Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,用0.3μmol/L的2’脱氧5-氮杂胞苷体外两次诱导第二代骨髓间充质干细胞,并用溴氮胞苷标记后植入心肌梗死10天心功能衰竭大鼠的心肌疤痕中,同时以注射无血清培养基的实验动物为对照。移植前及移植后1、2、3个月通过心脏射血分数等指标评价其对心功能的保护作用,同时通过双重免疫组织化学及电镜观察对移植细胞的存活和分化进行3个月的慢性动态观察。结果移植后1个月,骨髓间充质干细胞移植组大鼠射血分数(83.3%±8.1%,n=13)高于无血清培养基移植组(47.2%±11.8%,n=12)(P<0.01);并且细胞移植组移植后较移植前心功能(64.3%±10.4%)也有改善(P<0.01)。细胞移植组移植后第2个月(射血分数为83.1%±14.4%,n=7)、第3个月(射血分数为86.3%±3.7%,n=6)心功能改善情况继续保持,与无血清培养基移植组第2个月(射血分数为51.6%±11.2%,n=6)、第3个月(射血分数为49.1%±7.7%,n=6)差异均有显著性(P<0.01)。移植的骨髓间充质干细胞在心肌及疤痕中存活,双重免疫组织化学证实其溴氮胞苷及肌钙蛋白T均阳性。电镜观察提示移植后1个月其在疤痕中具心肌样细胞部分特点,但分化细胞核大浆少,未形成明显肌小节及Z带;移植后3个月,可见明显Z带样结构。结论经2’脱氧5-氮杂胞苷诱导的骨髓间充质干细胞可改善心肌梗死后心功能衰竭大鼠的心功能,并能长期保持(观察3个月);其能在心肌梗死后心功能衰竭大鼠心肌及疤痕中存活,并能逐渐向心肌细胞分化。

关键词： 骨   软骨缺损   间充质干细胞   细胞分化   基因疗法  

摘要： 骨髓间充质干细胞主要存在于骨髓中并保持干细胞的多项分化潜能,因其在一定条件下在体内外可分化为骨、软骨,加之细胞本身的特性,已经被应用于治疗如创伤、风湿性疾病引起的骨、软骨的破坏。骨髓间充质干细胞还有着外源基因易导入的特点,其通过特定外源基因修饰而达到更好的治疗效果,在未来临床中将有着广泛的应用价值。

关键词： 血管内皮生长因子   骨髓   间充质干   细胞治疗   缺血性心肌病   基因治疗   冠心病治疗   血管再生   心肌细胞   基因导入   基础研究   坏死心肌   分子搭桥   治疗性   外源性   干细胞   应用   思路   焦点   蛋白  

摘要： 　　近年来冠心病治疗的基础研究有较大的进展,焦点集中于干细胞及基因治疗.基因治疗是指将外源性治疗基因导入心肌细胞并获得表达,从而达到修复坏死心肌的目的.基因治疗为冠心病治疗提供了一种崭新的思路,形式为生长因子(蛋白或基因)的应用,被称为治疗性血管再生(therapeutic angiogenesis)或分子搭桥.……