关键词： 移植   骨髓间充质干细胞   基因转染   血管内皮生长因子   心肌梗死   猪  

摘要： 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因转染同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)对猪急性心肌梗死(AMI)血管再生和心功能的影响。方法体外分离、纯化、培养猪骨髓MSCs,以PCNA染色标记细胞;制备、抽提、纯化质粒pd-VEGF。用球囊堵闭及拉伤冠状动脉法建立AMI模型1w后,随机将其分为4组(n=4),进行经冠状动脉途径移植MSCs和/或VEGF转染。组Ⅰ:给予转染VEGF腺病毒的MSCs移植;组Ⅱ:单纯MSCs移植;组Ⅲ:VEGF转染;组Ⅳ:DMEM对照组。4w后行免疫组化和超声心动图检查。结果组Ⅰ及组Ⅱ在梗死区及缺血区均可见较大量的PCNA标记的移植细胞。Ⅷ因子染色阳性的新生血管密度:组Ⅰ>组Ⅲ>组Ⅱ>组Ⅳ。4w后LVEF值:组Ⅰ>组Ⅱ>组Ⅲ>组Ⅳ(均P<0.01)。结论VEGF基因转染同种异体骨髓MSCs移植猪心肌梗死区及缺血区促进血管再生及心肌细胞的再生,改善心功能。

关键词： 骨髓细胞   间质干细胞   股骨头坏死   综述文献  

摘要： 目的:股骨头坏死是一种对髋关节具有特殊破坏性的退行性病变。近10年来,随着对成人股骨头坏死研究的不断深入以及骨髓干细胞技术的应用,成人股骨头坏死的治疗效果有了明显提高。文章综述骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的研究进展。资料来源:应用计算机检索Pubmed1985-12/2006-12期间的相关文章,以“stem cell,mesenchymal cell,osteonecrosis of femoral head,femoral head necrosis,therapy”为检索词分别进行组合检索,文章语言种类限定为English。同时计算机检索中文CNKI全文数据库1980-12/2006-12期间的相关文章,以“干细胞,股骨头坏死,治疗”为检索词分别进行组合检索,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:①干细胞的生物学特性。②股骨头坏死的发病原因和机制。③干细胞治疗股骨头坏死的实验或临床研究文献。排除标准:重复研究、Meta分析或综述类文献。资料提炼:共收集76篇相关文献,31篇符合纳入标准,排除的45篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的31篇文献中,分别涉及股骨头坏死的发病原因与发病机制、骨髓间充质干细胞的特性、骨髓间充质干细胞与生长因子、转基因骨髓间充质干细胞、骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的适应证、骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的移植方法等内容。资料综合:股骨头坏死是由多种病因造成的股骨头缺血和骨细胞坏死的病理过程,围绕其发病机制目前主要存在脂肪栓塞学说、骨细胞脂肪变性坏死学说等,都支持在股骨头发生缺血坏死后,骨髓内间充质干细胞的数量和活性均受到抑制的观点。因此,也可以将股骨头坏死认为是一种骨细胞和(或)间充质干细胞的疾病。骨髓间充质细胞来源于中胚层,具有多向分化潜能,而转基因干细胞不仅具有多向分化能力,同时还能表达特定转染基因,分泌目标活性因子,极大提高了干细胞修复骨坏死的效能。骨髓干细胞治疗股骨头坏死的方法包括局部注射移植、超选择性股骨头供血动脉移植、支架复合材料的移植以及相互间的联合应用等。结论:骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死早期患者,可以使其病情缓解甚至出现逆转,具有较好的应用前景,但在临床应用中仍有许多问题亟待解决。

关键词： 骨髓间充质干细胞   细胞转分化   胰岛细胞   糖尿病  

摘要： 糖尿病已成为严重危害人类健康的疾病之一。目前,移植胰岛治疗糖尿病已初见疗效,但由于胰岛来源匮乏和免疫排斥反应而受阻。骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSCs)取材方便,容易进行体外分离、培养和纯化,且具有跨越分化潜能。若将自体BMMSCs诱导分化为胰岛细胞,可望解决细胞来源和免疫排除问题,实现糖尿病的自体细胞治疗。现对体外诱导BMMSCs分化为胰岛细胞治疗糖尿病的研究进展进行综述,并指出了存在问题和今后的研究方向。

关键词： 间充质干细胞   移植   血管内皮细胞生长因子  

摘要： 目的探讨转染血管内皮细胞生长因子（VEGF）基因的大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）同种异体移植促进缺血皮瓣的血管新生，从而提高皮瓣存活率的可能性。方法体外分离、培养、鉴定SD大鼠MSCs，PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染MSCs，免疫荧光方法检测MSCs体外表达VEGF的情况，CM-DiI标记MSCs。SD大鼠随机分3组：A组[PcDNA3．1（-）／VEGF165质粒转染的MSCs移植]、B组（单纯MSCs移植）、C组（DMEM-F12培养基）。每只大鼠背侧皮下按组分别注射细胞悬液和培养基，注射后ELISA法连续检测大鼠血浆VEGF浓度，注射后第4天掀起1个蒂在尾侧的9cm×2cm的随意皮瓣。在术后第14天分别观察皮瓣的存活率、激光多普勒血液监测仪监测血流灌注、CD34免疫组织化学检测皮瓣毛细血管密度、荧光显微镜检测MSCs在皮瓣内的分布和存活状况。结果转染VEGF165基因的MSCs体外和体内检测均高表达VEGF165蛋白。A、B、C三组的皮瓣存活率分别为（83．1±2．6）％、（66．4±6．1）％、（51．5±7．5）％（P〈0．05）；A、B、C三组的毛细血管密度（条／mm^2）分别为：89．2±6．1、57．1±4．7、28．7±2．8（P〈0．05）；血流灌注比值A组高于B、C两组，B组高于C组（P〈0．05）；转染VEGF165基因的MSCs移植SD大鼠皮瓣后，MSCs存活并参与血管新生。结论转染VEGF基因的大鼠MSCs体外培养后异体移植可促进缺血皮瓣的血管新生，提高存活率。

关键词： 骨髓细胞   间质干细胞/细胞学   干细胞   移植,自体   脊髓损伤  

摘要： 目的:观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤患者的近期疗效及其安全性。方法:选择2005-04/2006-02在山东省残疾人康复中心住院的脊髓损伤患者24例,采用随机表法分为治疗组和对照组。患者知情同意并签署知情同意书。治疗组11例,对照组13例,均经CT或MRI确诊并行手术治疗。两组在年龄、病程、损伤程度(ASIA分级)等方面均具有可比性(P>0.05)。治疗组在综合康复治疗的基础上给予自体骨髓间充质干细胞治疗,经髂骨穿刺采集自体骨髓156～180mL,分离提取骨髓间充质干细胞后经静脉途径和/或蛛网膜下腔1次性或分次注射。对照组仅给予综合康复治疗。两组均于入院当天、治疗后7,15,30,60,90d进行运动与感觉、日常生活能力、膀胱功能评定。结果:24例患者均进入结果分析。①治疗组11例患者均有不同程度的感觉、运动和自主神经功能改善,与对照组比较,差异不显著。②治疗组ASIA分级A级8例,有2例在第60天、1例在第90天评估中恢复为B级。C级1例,在第30天评估中恢复为D级,第90天评估中恢复为E级,能独立行走,生活完全自理。D级2例,其中1例在第90天评估中恢复为E级。对照组A级9例,1例在第90天评估中恢复为B级。B级1例,治疗后无变化。C级2例,1例在第90天评估中恢复为D级。③骨髓间充质干细胞移植常见的不良反应包括低热(7/11例)、头痛(2/11例)、腹胀(1/11例),其中1例于蛛网膜下腔注射后出现双下肢麻木和脑膜刺激征,均于两三天内自行消失。结论:骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤近期有一定疗效而且安全,但远期疗效有待于进一步观察。

关键词： 干细胞   移植   心肌梗死   治疗  

摘要： 心肌梗死是近年来导致人类死亡的主要疾病之一,骨髓间充质干细胞移植在一定程度上能改善心功能,且具有取材方便、不涉及伦理道德问题等优点,成为研究的热点。近年来有关骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化、心功能的改善、细胞移植方法等方面的研究取得很大的进展,但同时也发现了不少问题。

关键词： 骨髓间充质干细胞   胰腺细胞   共培养   糖尿病   细胞移植  

摘要： 目的通过移植骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的方法试治疗大鼠糖尿病。方法贴壁生长的MSC与大鼠胰腺的细胞共培养以检测其向胰岛细胞分化的潜能。并将体外培养扩增的MSC移植入糖尿病大鼠体内,观测其能否改善糖尿病病情及其在大鼠体内微环境中的分化情况。结果共培养法可使MSC分化为胰岛样细胞。对大鼠的MSC移植能明显缓解糖尿病病情。结论MSC移植的方法对大鼠糖尿病有一定的治疗作用。

关键词： 骨髓   干细胞移植   脑卒中   大脑中动脉梗塞   磁共振成像  

摘要： 目的探索利用磁共振技术活体追踪干细胞的可行性以及干细胞对卒中大鼠脑梗死体积的影响。方法采集大鼠后肢股骨和胫骨骨髓,采用密度梯度离心法分离并培养骨髓间充质干细胞(BMSCs)。利用超顺磁性氧化铁和多聚左旋赖氨酸的混合物标记BMSCs,普鲁士蓝染色检测标记率。线栓法建立18只大鼠脑缺血2h再灌注动物模型,分为缺血对侧BMSCs移植组(细胞数1.5×105/15μl)、缺血同侧纹状体移植组(细胞数1.5×105/15μl)和对照组(15μlD-Hanks液)3组,每组6只。分别在脑缺血后第1天、细胞移植后第1天及第14天进行磁共振扫描,对各时间点梗死体积的变化进行统计学分析。结果超顺磁性氧化铁对BMSCs的标记率为96%。磁共振追踪显示移植后第14天缺血同侧移植组BMSCs向缺血灶边缘迁移,缺血对侧移植组BMSCs沿胼胝体弥散,但是3组之间的脑梗死体积变化差异无显著性(P>0.05)。结论超顺磁性氧化铁对干细胞标记率高,磁共振活体追踪有利于了解干细胞移植后的存活和迁移。BMSCs脑内移植对于卒中大鼠脑梗死体积的影响无统计学意义。

关键词： 人骨髓间充质干细胞   细胞移植   心肌梗塞   大鼠  

摘要： 目的:在大鼠心肌梗死模型上移植冠心病患者来源的骨髓间充质干细胞,探讨人骨髓间充质干细胞改善心肌梗死后心功能的作用机制。方法:抽取冠心病患者骨髓,用人骨髓间质细胞专用培养液进行体外培养、扩增、标记。结扎大鼠冠状动脉左前降支制作心肌梗死模型,2周后使用超声筛选出合格的动物模型。然后动物随机分为细胞移植组(n=14)和培养液注射组(对照组,n=13)。在移植前后对心脏的收缩、舒张功能和心室重构指标进行超声评价和对比,取材后进行病理学检查和分子生物学检测。结果:移植后进行超声评价,治疗组较对照组射血分数值和缩短分数值显著改善。免疫组化显示移植细胞在宿主体内可以向肌源性细胞分化。逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)显示细胞治疗组梗死区心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原基因表达水平明显高于对照组,而在非梗死区低于对照组。细胞治疗组梗死区间质细胞源因子、血管内皮生长因子、Bcl-2基因表达水平均明显高于对照组。结论:冠心病患者骨髓间质细胞移植后可以提高心肌梗死后心脏收缩功能,减轻左心室重塑。作用机制可能为新血管生成增加、细胞外基质改变、旁分泌、抗凋亡和心肌再生等共同作用的结果。

关键词： 骨髓   干细胞移植   脑卒中   大脑中动脉梗塞   细胞分化  

摘要： 目的研究骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠缺血性脑卒中的治疗作用及治疗机制。方法采集人志愿者骨髓,密度梯度离心法分离、培养 BMSC;建立大脑中动脉栓塞缺血2 h 再灌注大鼠模型,根据神经损伤评分将符合标准的60只脑缺血模型大鼠随机分为治疗组(BMSC 移植组,48只)和对照组(D-Hanks 液注射组,12只),24 h 后在脑缺血边缘区皮层分别注射 hBMSC 悬液和 D-Hanks 液;移植后第4天开始进行粘贴物移除实验、转棒实验及 Morris 水迷宫实验的循环测试至第32天;治疗组分别在移植后1、2、3及4周分批次处死大鼠,通过免疫荧光技术动态追踪 BMSC 并检测细胞的迁移和分化。结果移植后第1、2周细胞大量存活并向病灶迁移,第3周细胞存活数量明显减少,第4周存活细胞极少;hBMSC 在大鼠脑内没有明确表达微管相关蛋白(MAP)2、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(GalC)等神经细胞的特异蛋白。治疗后1周水迷宫平均逃逸时间,治疗组为(69±10)s,对照组为(120±0)s,P<0.05,至第4周两组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后第10天转棒实验(10 r/min)平均潜伏期,治疗组为(167±18)s,对照组为(37±19)s,P<0.05,至实验终期差异仍有统计学意义。治疗后第13天粘贴物移除实验平均潜伏期,治疗组为(33±8)s,对照组为(84±13)s,P<0.05,至实验终期差异仍有统计学意义。结论 BMSC 脑内移植可以显著改善脑缺血大鼠神经功能的恢复;移植细胞在大鼠脑内可以向病灶周围迁移,但是细胞存活有一定时限性;BMSC 在大鼠脑内没有明确分化为经细胞。