关键词： 再生障碍性贫血   骨髓间充质干细胞   治疗   护理  

摘要： 总结了骨髓间充质干细胞(MSC)治疗19例再生障碍性贫血(AA)患者的临床护理经验。主要护理措施包括心理护理、严格无菌操作、MSC悬液回输、MSC回输后不良反应的观察、MSC治疗期间的健康指导等。认为骨髓间充质干细胞治疗再生障碍性贫血患者后,患者骨髓造血功能改善,其中优质的护理质量发挥了关键的作用。

关键词： 骨髓间充质干细胞   慢性阻塞性肺疾病   细胞凋亡   细胞分化   免疫调节  

摘要： 骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)是一类自我更新能力强、细胞特性稳定、可迅速扩增、能长期存活的成体干细胞。具有多分化潜能,可分化为脂肪、骨、软骨和其他间质组织,许多研究表明成人BMSCs不论体内体外都能够分化为各种非造血细胞。BMSCs还具有低免疫原性,可以被成功的用于自体和异体移植。\n 慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种以气流受限不完全可逆为特征的慢性进行性疾病,发病率和病死率都很高。研究认为COPD的发病机制是以炎症过程的上调为特征。炎性细胞聚集并释放活性氧和蛋白水解酶,蛋白酶溶解和氧化损伤的上调及抗蛋白酶溶解、抗氧化的下调等由此导致不可逆的上皮细胞的凋亡、末梢含气腔和肺细胞外基质成分蛋白质水解等,这使得小气道壁受损,肺泡腔扩大,最终导致COPD的发生。近年有研究发现,某些严重的COPD无明显的炎细胞浸润,肺组织细胞的凋亡足以引起肺气肿的发生。现有的治疗方法本质上是对症治疗,目前尚没有有效的治疗手段能逆转肺的病理改变,因此,迫切需要寻找到一种能使肺部组织结构修复和重建的有效方法。\n 研究发现,BMSCs可以在体内、体外分化为肺上皮细胞,能促进肺组织再生,并且分泌多种生物活性物质,包括细胞因子和细胞生长因子等,抑制肺组织细胞凋亡,且通过免疫调节作用,以改善组织损伤部位再生微环境,为损伤修复提供有利的环境,这为慢性阻塞型肺疾病的治疗带来了新的策略。然而,目前BMSCs确切的治疗影响和治疗COPD的作用机制尚不明确,对BMSCs分离纯化的统一标准、最适宜的移植时机和方式、临床疗效、体内可控性和安全性评价等问题是BMSCs临床治疗需要明确的根本问题。\n 本文通过查阅国内外文献资料,从BMSCs的来源和生物学特性、COPD的发病机制、BMSCs治疗COPD的研究现状及可能机制、总结和问题四个方面阐述了骨髓间充质干细胞治疗慢性阻塞性肺疾病的研究进展,并附一篇综述介绍基因多态性与COPD的关系。

关键词： 干细胞治疗   骨髓间充质   椎间盘退变   间充质干细胞   造血干细胞   多向分化潜能   cell   破骨细胞  

摘要： 骨髓中除含有造血干细胞外,还含有另一类由中胚层发育的早期细胞[1],称之为间充质干细胞（mesen-chymal stem cell,MSC）。造血干细胞是血细胞和破骨细胞的起源,而间充质干细胞是成骨细胞的起源,间充质干细胞具有强大的增殖能力及多向分化潜能。

关键词： 骨髓间充质干细胞   Shh基因   转染   缺血性心脏病   细胞治疗   基因治疗   再生   血管新生  

摘要： 冠心病是危及人类健康的一种常见疾病。近年来,随着人民生活水平的提高和饮食结构的改变,我国冠心病发病率呈上升趋势。冠心病已成为当前危害国人身体健康的最主要疾病之一。 由于成熟的心肌细胞属于终末分化细胞,再生能力很弱,一旦心肌遭受不可逆的损伤将导致心肌细胞减少,损伤区难以依靠残余的心肌细胞的增生进行修复,多以纤维瘢痕组织增生来替代坏死的心肌,从而导致心室结构的改变,心肌顺应性下降,心脏壁扩张变薄,导致心功能减退,严重影响患者的生存质量及生活。因此,增加具有完善收缩功能的心肌细胞数目可能成为治疗冠心病的有效途径。传统的治疗方法,无论是药物治疗,手术治疗或者是介入治疗均不能增加心肌细胞,修复梗死心肌。 骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的一类非造血干细胞,是中胚层发育的早期细胞,具有多向分化潜能。同时,由于骨髓间充质干细胞具有多向分化和增殖潜能,易于使外源的基因的得到长期和稳定的表达,并且易与周围组织整合而发挥功能,使其成为基因治疗中非常有价值的运载细胞。 Shh基因能调节基质细胞分泌众多的血管新生因子,促进毛细血管新生和动脉生成,减少心肌细胞凋亡,促进内皮祖细胞迁移,从而更好的增加心梗区血供,恢复心肌细胞数目,改善心功能。 由此,我们设想将细胞移植和血管新生疗法两种方法结合,针对心梗后心肌细胞丧失和相对性缺血缺氧的特点,采用细胞移植技术,联合基因治疗,以求更好的实现心梗后心肌再生和血管新生。 本实验分为两个部分。第一部分：Shh基因转染BMMSC。以密度梯度离心一贴壁培养法获取Wistar大鼠BMMSC,采用电转染法将Shh基因导入BMMSC;第二部分：Shh基因转染BMMSC移植对大鼠心功能的影响。将携带Shh基因的BMMSC直接心肌注射到心梗区及其周缘,定期(1周、2周、4周、8周)通过检测心功能、移植细胞的存活和分化等指标,来检验是否优于独立的细胞治疗或基因治疗。 第一部分：Shh基因转染骨髓间充质干细胞 目的：探讨对大鼠BMMSC进行重组Shh基因修饰的可行性。 方法：1.采用密度梯度离心—贴壁培养法获Wistar大鼠BMMSC。测定其生长曲线,表面标志CD34、CD44、CD45和SH3。2.采用电转染法将PCDNA3.1 (-)-SHH转染BMMSC,在倒置显微镜下观察转染后细胞形态和生长情况的变化,通过Western法鉴定Shh在细胞中的表达情况。 结果：1.采用密度梯度离心—贴壁培养法易获取大鼠BMMSC,检测结果为CD44、SH3阳性,CD45、CD34阴性。***检测证实采用电转染法能成功地将Shh基因转染至大鼠BMMSC中,并获得有效的表达。 结论：真核表达载体PCDNA3.1 (-)-SHH可以成功地在BMMSC中表达,为进一步探讨Shh基因转染BMMSC移植对大鼠心功能及心室重构的影响提供了实验依据。 第二部分：血管内皮细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞移植对大鼠心功能的影响 目的：探讨Shh基因转染BMMSC后心肌移植对缺血性心脏病心功能的影响,并比较联合治疗与基因治疗、细胞治疗单独使用的疗效差别。 方法：采用雄性wistar大鼠,建立心梗模型四周后,随机均衡分入Shh转染MSC组(A组),MSC组(B组),Shh组(C组),Shh基因+MSC组(D组),注射DMEM培养基组(E组),共5组。再按注射后时间将各组分为1周,2周,4周,8周四个亚组,各亚组保证至少10只动物。到各相应时间后以Buxco系统检测心功能。 结果：在第一周时,SLVP在各组间没有明显差异,LVEDP则有A、B、D组低于E组,另外还有A组低于C组,其余各组相比则没有统计学意义,+dp/dtmax测量值中A、C、D组高于E组,-dp/dtmax中有A、C低于E组；第二周时,SLVP中以A、C、D组高于E组, LVEDP在各组间没有差别,+dp/dtmax测量值中有A组高于D组,-dp/dtmax中有A组低于E组；第四周时,A、B、C、D四组在SLVP、+dp/dtmax测量值中均高于E组,而在-dp/dtmax中均低于E组,LVEDP测值中有C、D两组低于E组；到第八周时,A、B、C、D四组在SLVP、+dp/dtmax测量值中均高于E组,而在LVEDP、-dp/dtmax中则均低于E组,此外,在C组与D组的比较中,C组的SLVP、+dp/dtmax测量值均低于D组,而LVEDP、-dp/dtmax测量值均高于D组。在观察各处理组随时间变化心功能的变化情况时,我们发现A、B、C、D四组的心功能在1、2、4、8周均没有明显变化,而在E组中其SLVP、+dp/dtmax呈下降趋势,LVEDP无明显改变,-dp/dtmax则呈上升趋势。 结论

关键词： 促红细胞生成素   间质干细胞   脊髓损伤   移植   BBB评分   神经功能恢复  

摘要： 目的 研究骨髓间充质干细胞与促红细胞生成素联合应用对大鼠脊髓损伤修复的影响 方法 将80只SD大鼠随机分成手术对照组(简称对照组,n=15)、促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)治疗组(简称EPO组,n=15)、大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗组(简称BMSCs组,n=25)和BMSCs联合EPO治疗组(简称联合组,n=25)。造模后第7天EPO组经腹腔注射促红细胞生成素,而BMSCs组、联合组则经损伤脊髓局部注射BMSCs和局部注射BMSCs的同时加用EPO腹腔注射。移植后第3d、1w、3w,BMSCs组、联合组两组分别应用双标免疫荧光法检测5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记BMSCs的神经元中丝蛋白(NF-M)的表达情况,移植后第3周各组取脊髓组织作HE病理切片染色,再用免疫组化观察神经元中丝蛋白(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,每个时间点取5只大鼠,移植后第1d、1w、2w、3w和4w,各组选10只大鼠分别用(BassoBeattie Bresnahan, BBB)法检测大鼠神经功能的恢复情况。所得数据采用组间均数比较t检验进行统计学处理。 结果 1、脊髓病理切片显示联合组较BMSCs组胶质细胞增生更加活跃,炎性细胞浸润和组织水肿显著减轻。 2、双标免疫荧光结果显示移植的BMSCs在宿主脊髓中存活,从第7天开始就有NF-M表达。免疫组化结果显示联合组中NF-M和GFAP阳性细胞数目均比其余组多(P<0.05)。 3、治疗组脊髓损伤修复较对照组明显,神经功能BBB评分也明显提高(P<0.05)。 4、联合组在不同的时间点神经功能BBB评分都较EPO组、BMSCs组高。 结论 1、BMSCs移植与EPO腹腔注射是治疗大鼠脊髓损伤的有效方法； 2、促红细胞生成素在体内有诱导BMSCs向神经细胞分化的能力。 3. BMSCs与EPO联合应用对脊髓损伤修复具有协同作用。

关键词： 大鼠   骨髓间充质干细胞   细胞培养   血管性痴呆   动物模型   Morris水迷宫   认知功能   甘露醇   骨髓间充质干细胞   移植   认知功能   脑源性神经生长因子  

摘要： 第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定 【目的】探讨大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的体外分离、纯化、传代以及鉴定,为移植治疗提供功能稳定的BMSCs。 【方法】无菌条件下取幼年SD大鼠股骨,采用全骨髓培养结合细胞贴壁法分离纯化BMSCs。待细胞生长铺满塑料培养瓶底80%-90%左右时,用0.25%胰蛋白酶控制消化30-60s后传代。倒置相差显微镜下观察原代及传代后的细胞形态。通过成骨诱导分化方法及流式细胞仪对培养扩增的BMSCs进行鉴定。 【结果】大鼠BMSCs在体外可分离、培养及扩增。分离培养的BMSCs形态呈长梭形,为贴壁生长的成纤维样细胞,传代后的细胞形态趋于均一。经诱导BMSCs能分化为成骨细胞,茜素红S可见钙结节阳性,碱性磷酸酶检测显示,胞浆中可见粉红色的阳性颗粒。利用流式细胞仪检测BMSCs的表面标记,几乎均一表达CD44和CD90。CD44和CD90的阳性率分别为89.4%和99.2%,而CD34的阳性率仅为1.82%。 【结论】全骨髓培养结合细胞贴壁法可以成功的建立大鼠BMSCs体外分离和培养体系,且培养的BMSCs纯度高,活力强,性状稳定。BMSCs可通过诱导向成骨细胞分化,具有多向分化潜能。 第二部分血管性痴呆大鼠模型的制备 【目的】探讨制备理想血管性痴呆(Vascular dementia,VD)动物模型的方法,为下一步实验提供可靠的VD动物模型。 【方法】采用间隔3天先后结扎双侧颈总动脉的方法制备VD大鼠模型,利用Morris水迷宫检测各组大鼠的认知功能。 【结果】术后4w,大鼠的成活率高达52.17%。认知功能检测结果表明,与假手术组相比,VD模型组大鼠有明显的认知功能障碍。 【结论】改良后的2-VO制备VD模型,成功率高,重复性好,痴呆症状稳定等优点,可以制备理想的VD模型从而用于基础实验研究。 第三部分甘露醇预处理后行骨髓间充质干细胞移植对血管性疾呆大鼠模型的疗效观察 【目的】观察甘露醇预处理后静脉注射骨髓间质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠认知功能的影响及受试鼠脑组织脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor ,BDNF)表达量的影响。 【方法】尾静脉注射甘露醇(***-1体重)预处理10-30mins后,1×106/mL BMSCs1ml通过尾静脉植入VD大鼠,4w后,利用水迷宫试验、酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测VD大鼠认知功能以及脑组织BDNF含量变化。 【结果】与培养基对照组比较,BMSCs移植治疗组和甘露醇预处理BMSCs移植治疗组大鼠认知功能均改善,模型大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),平台象限区滞留时间延长(P<0.05);与BMSCs移植治疗组相比较,甘露醇预处理BMSCs移植治疗组大鼠认知功能改善,逃避潜伏期缩短(P<0.01),平台象限区滞留时间延长(P<0.05)。海马、额叶皮质BDNF的含量:与培养基对照组比较,BMSCs移植治疗组和甘露醇预处理BMSCs移植治疗组大鼠脑组织中BDNF表达量都增高(P<0.01);与BMSCs移植治疗组相比较,甘露醇预处理BMSCs移植治疗组大鼠脑组织中BDNF的表达量增高(P<0.01)。 【结论】甘露醇预处理后进行静脉注射BMSCs治疗VD大鼠模型,其认知功能改善比单独静脉注射BMSCs治疗模型鼠更佳,其皮质和海马中BDNF的表达量也比单独静脉注射BMSCs治疗模型鼠增高更多。

关键词： 骨髓间充质干细胞   表达   核转染   转染   急性缺血性心脏病   急性心肌梗死模型   细胞移植  

摘要： 急性心肌梗死是指心肌急性缺血、缺氧所引起的心肌坏死,是人类心衰和猝死的重要原因之一。随着我国人民生活水平的提高,其在我国的发病率也不断升高。在急性心肌梗死后,由于心肌细胞严重丧失,直接导致心脏舒缩功能下降、血流动力学改变、心室重构及其他器官的继发性病变。在急性心肌梗死后,梗死区内部及周边的心肌细胞及干细胞的修复作用有限,所以这种修复不足以中止或逆转心梗患者病情的发展。目前在终末期心衰的治疗上,心脏移植在技术上已经比较成熟,但鉴于供体来源少、免疫抑制治疗时间长以及治疗费用高昂等原因,使心脏移植不可能成为常规的治疗方案。在此背景下细胞治疗和基因治疗急性缺血性心脏病逐渐成为临床研究的热点。 骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell, BMMSC)属于骨髓基质干细胞,是骨髓中的具有自我更新能力的多潜能细胞,在一定条件下,能分化成多种功能细胞。具有容易获取,易于培养扩增,低免疫原性,多次传代后生物学特性稳定,无伦理道德问题等优势,在细胞治疗领域有广阔的临床应用前景。同时,BMMSC可作为载体细胞,接受多种基因转染并在体内分化后仍能保持较良好的生物学特性,使转染基因能稳定而持续的表达,以达到治疗的目的；而外源性基因在BMMSC中的表达也有利于增强其移植效应及提高其分化率。由此,我们假设能将Shh基因转入BMMSC中,在确定表达稳定后,再把携带外源性Shh基因的BMMSC移植到急性心肌梗死区,这样基因治疗和细胞治疗就有可能起到二者相互协同、相互促进的作用,其效果可能优于单用。 本实验分为两个部分：第一部分(Shh基因转染BMMSC),以淋巴细胞分离液法获取Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,利用Amaxa的Nucleofector核转染仪将Shh外源性基因转染入大鼠BMMSC,并检测基因表达情况；第二部分(Shh基因转染的BMMSC移植对大鼠心功能的影响),结扎大鼠左冠状动脉前降支制作大鼠急性心肌梗死模型,于模型制作成功后在梗死区直接注射移植携带Shh基因的BMMSC,然后在注射移植后第1、2、4、8周分别检测心功能等指标,以此来判断其治疗效果。 第一部分：Shh基因转染BMMSC 目的：探讨Shh基因转染BMMSC可行性 方法：1.采用淋巴细胞分离液法获取Wistar大鼠的BMMSC。绘制其生长曲线,检测BMMSC表面标志物CD34、D44、CD45和SH3。2.利用Amaxa的Nucleofector核转染仪转染pcDNA3.1 (-)-Shh进入BMMSC,观察转染后BMMSC的形态和生长状况的变化,鉴定Shh基因的表达情况。 结果：1.采用淋巴细胞分离液法可以成功分离大鼠BMMSC,以此为基础可以建立稳定的BMMSC培养体系。*** blot检测证实利用Amaxa的Nucleofector核转染仪能有效的将Shh基因转染至大鼠BMMSC中,并获得稳定的表达。 结论：外源性Shh基因通过Nucleofector核转染仪转染BMMSC后可以稳定表达,为后续研究Shh基因转染BMMSC移植对大鼠急性心肌梗死后心脏功能的影响等提供了基础。 第二部分：Shh基因转染骨髓间充质干细胞移植对大鼠心功能影响 目的：探讨大鼠急性心肌梗死模型的制作,Shh基因转染BMMSC后的注射移植方法以及移植后心功能等指标的变化,并比较与基因治疗和/或细胞治疗的疗效差别。 方法：以冠脉结扎法制作近交系Wistar大鼠急性心肌梗死模型,200只急性心肌缺血模型动物随机分为5组(每组40只)。转基因组(Transfection group, T)在急性心梗模型建立后立即在心肌梗死区移植转染Shh基因的BMMSC,细胞组(BMMSC group, B)在心肌梗死区移植等量的BMMSC,基因组(Gene group, G)在心肌梗死区注射pcDNA3.1-Shh DNA,混合组(Mixed group, M)在心肌梗死区注射等量BMMSC和pcDNA3.1-Shh DNA的混合物,对照组(Control group, C)在心肌梗死区注射等容积的低糖DMEM液。分别于移植后第1、2、4、8周以Buxco XA(Biosystem XA)系统检测大鼠在体心功能,并行免疫组化、电镜检测确定移植细胞的存活及分化。 结果：结扎大鼠左冠状动脉前降支制作的急性心梗模型,制作成功率约为80%。移植治疗1,2周后,Buxco检测心功能显转基因组LVSP、+dp/dt有高于对照组的趋势,但尚不足以提示有显著差异。移植治疗4周后,转基因组Buxco检测心功能显示LVSP高于对照组的对应值(P=0.030),-dp/dt低于对照组的对应值(P=0.028)。移植治疗8周后,B

关键词： 骨髓间充质干细胞   贴壁培养法   密度梯度离心法   独参汤   骨髓间充质干细胞   心肌梗死   心功能   血管内皮功能   VEGF   ICAM-1   VCAM-1  

摘要： 第一部分:大鼠骨髓间充质干细胞体外分离、培养及鉴定 背景:干细胞是一门新兴的技术,其在体外具有自我更新及多向分化的潜能,采用细胞移植的方法干细胞可以用于治疗多种难治性疾病。骨髓间充质干细胞是目前研究最多的干细胞,但它在骨髓中的含量极低,约每100,000个单核细胞中仅含有2-5个,这使科学研究受到极大限制,要想为实验研究提供所需数量及纯度的骨髓间充质干细胞,就需要对其进行有效的体外扩增。因此,使用有效的分离、纯化、培养的方法尤显重要。 目的:目前对骨髓间充质干细胞分离、纯化、扩增比较常用的方法有以下几种:贴壁培养法、密度梯度离心法、流式细胞仪分选法、免疫磁珠分离法、特制培养板筛选法和渗透压筛选法,且各有其优缺点。依据各方法之特点,结合研究需要,通过实验探索并验证行之有效的体外细胞分离、纯化、培养的方法。 方法:采用密度梯度离心法和贴壁培养法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养。 1.每次取Wistar雄性大鼠1只,断颈处死,浸于体积分数为75%乙醇中10分钟,无菌条件下取出大鼠的股骨及胫骨,剔除骨表面附着组织,用无菌PBS将表面冲洗干净。除去骨的两端,使骨髓腔暴露,再将骨关节面祛除后用注射器（60mL）抽取无菌的PBS将骨髓腔多次反复冲洗干净。 2.将收集到的骨髓液加入预先加入50mL DMEM培养基的无菌离心管中,用注射器反复抽吸,将组织打散成为细胞悬液。在淋巴细胞分离液（1.077 Ficoll）上轻轻叠加刚得到的细胞悬液,离心20分钟（转速:2000r/min）,将单个细胞层吸取出来。用DMEM培养基将细胞漂洗两次,离心5分钟（转速:1000r/min）,弃去上清,留取细胞沉淀。然后向细胞沉淀中加入含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养基。将细胞密度调整约为1×10～6/mL,接种于25cm2细胞培养瓶中,在恒温细胞培养箱（温度37℃,饱和湿度CO2体积分数为5%）中培养48小时后,更换培养基,除掉未贴壁细胞,之后每隔3天照此法换液1次。 3.在80%左右的原代细胞融合时予以传代,弃掉旧的培养基,用无菌的PBS漂洗3次后加入0.25%胰酶,室温下进行消化约5分钟,待细胞形态变圆时将其加到含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养基中终止消化。用吸管轻轻吹打,再将消化液转入到15mL的无菌离心管中,离心10分钟（转速:1000r/min）。除去上清取出细胞沉淀,将其加入到含体积分数为15%胎牛血清的DMEM培养基中,按照1:2的比例进行传代。鉴定:用流式细胞学对传代后骨髓间充质干细胞表面标志CD44、CD90、CD34、CD45进行检测。 结果: 1.骨髓间充质干细胞形态观察:新分离接种的细胞镜下观察呈圆形,数量较多,大小不一; 48小时后见多数细胞贴壁生长,呈圆形或椭圆形,体积增大,大多数细胞为单核细胞,此后梭形细胞逐渐出现;7天后细胞多呈梭形,可见明显集落形成,并随集落的不断扩大,融合呈漩涡状或放射状;原代细胞10天左右达85%以上融合,传代后细胞约1周左右达85%以上融合;传至5代细胞形态呈较一致的长梭形。 2.间充质干细胞流式检测: CD44阳性细胞占92.4%,CD90阳性细胞占88.9%,CD34阴性细胞占96.6%,CD45阴性细胞占95.6%。 结论:运用贴壁培养法和密度梯度离心法相结合的方法对骨髓间充质干细胞进行体外培养,可获得足够数量纯度较高的骨髓间充质干细胞。 第二部分:独参汤联合骨髓间充质干细胞对急性心肌梗死大鼠心功能的影响 背景:急性心肌梗死后心功能的改善程度直接关系到其预后,如何更好的改善心梗后心功能是目前热点话题。有研究发现,中药与骨髓间充质干细胞移植相结合可以起到协同增效、优势互补的作用,但选用何种中药对骨髓间充质干细胞进行干预能够对心功能起到更好的改善作用尚在探索之中。 目的:观察独参汤联合骨髓间充质干细胞对大鼠急性心肌梗死后心功能的影响。 方法:选择雌性清洁级Wistar大鼠40只,采用Olivette方法结扎左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型。将造模后的大鼠随机分为4组:①急性心肌梗死对照组（ n=10）:大鼠心肌梗死后注射等量培养基;②干细胞组（n=10）:急性心肌梗死大鼠接受同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗（2×10～6 BMSCs /100μL,分4点注入）;③独参汤组（n=10）:大鼠急性心肌梗死后2小时开始灌服独参汤,每日二次,共用一周;④干细胞组+独参汤组（n=10）:大鼠急性心肌梗死后接受同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗（2×10～6 BMSCs /100μL,分4点注入）,2小时后开始灌服独参汤,每日二次,共用一周。分别于造模前及骨髓间充质干细胞移植后

关键词： 股骨头坏死   大转子骨瓣   骨髓间充质干细胞   临床研究  

摘要： 目的：对股骨大转子骨瓣联合骨髓间充质干细胞治疗股骨头缺血性坏死的临床疗效进行随访观察与总结,探讨股骨大转子骨瓣联合骨髓间充质干细胞治疗股骨头缺血性坏死,特别是早期或早中期(FicatⅡ-Ⅲ)的临床疗效。为临床进行此类手术提供理论及实践依据。 方法：2008年9月至2010年10月对22例(34髋)成人股骨头坏死(ONFH)患者施行股骨大转子骨瓣结合自体骨髓间充质干细胞移植治疗,并获得临床随访的患者按照国际分期标准(Ficat或ARCO)分期、分型进行回顾分析；应用Harris髋关节功能评分系统及手术前后Ficat分期改变予以影像学评价。将确诊的22例34髋患者随机分为治疗组(即应用大转子骨瓣结合骨髓间充质干细胞治疗)和对照组,对照组采用药物促进局部微循环并结合电刺激及高压氧,并配合药物外敷,治疗组和对照组全部患者有髋关节、膝关节疼痛,跛行18例,髋关节功能障碍13例。治疗组和对照组的发病年龄、Ficat分期和致病原因及病变分期等情况进行统计学分析具有均衡性,且表明具有可比性。 结果：对术后22例患者定期进行随访,随访时间3～24个月(平均]6.2月),治疗组髋关节疼痛缓解9例(82%),关节功能改善7例(64%),行走时间延长8例(73%)。术后效果满意率77.8%。术后髋关节保存率为73.0%～92.2%,其中创伤性及特发性术后髋关节保存率及髋关节功能改善较好,激素性及酒精性较差。治疗组与对照组比较,术后优良率与总有效率相比有显著性差异。 结论：施行股骨大转子骨瓣结合自体骨髓间充质干细胞移植治疗方法确实可靠,患者依从性较好,较对照组采用药物促进局部微循环并结合电刺激及高压氧,并配合药物外敷疗效为好,是一种治疗股骨头缺血性坏死,特别是FicatⅡ-Ⅲ期较为有效的治疗方法。

关键词： 骨髓间充质干细胞   肝硬化   大鼠   移植途径  

摘要： 干细胞具有很强的自我更新和分化的能力,在特定环境中可以定向分化为有功能的细胞。国内外的研究已经证实了干细胞在治疗器官损伤及细胞再生中能够发挥很独特的作用,干细胞的研究已广泛涉足到血液系统、骨骼系统、神经系统、心血管系统、消化系统等领域。成体干细胞包括造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)和间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)。造血干细胞已经在血液疾病的治疗中发挥了很好的疗效,为研究者们对干细胞在再生医学的研究增强了信心,给许多疾病的治愈带来了新的希望。间充质干细胞可以来源于骨髓、脂肪、脐血等组织。其中骨髓间充质干细胞作为人体中的一种成体干细胞,数量多,获取方法简单,抽取过程及抽取完后对身体影响较小,逐渐被学者们和临床医生所重视。在特定的环境中,骨髓间充质干细胞可以分化为各种成体细胞,促进损伤器官的修复,改善器官的功能。 在肝损伤的修复中,干细胞可以转分化为肝细胞,分泌白蛋白,促进肝脏的修复,并改善肝脏功能。国内外基础及临床研究,已经证实了骨髓间充质干细胞移植对肝硬化、肝衰竭等疾病具有明确的治疗作用。目前,在我国、日本、欧洲等国相继已经开展了自体骨髓间充质干细胞对肝硬化的临床治疗,疗效确切,目前暂未发现明显副作用的报道。在临床运用中,有关学者及医生提出了关于移植途径的问题,常见有三种移植方式治疗终末期肝病,分别是门静脉途径、肝动脉途径、外周静脉途径,到底哪种途径移植干细胞的疗效更好呢?然而,关于这方面的报道较少,为此我们拟进行该问题的研究,阐明这三种移植途径是否对肝硬化治疗的疗效有影响。 为了模拟临床中的干细胞移植治疗肝硬化的特征,我们建立了大鼠肝硬化模型,并培养大鼠骨髓MSCs,通过常用的三种途径将骨髓MSCs移植到模型大鼠体内,移植后4周观察比较这三种途径移植骨髓MSCs对肝硬化模型大鼠的疗效差别,为临床应用提供参考。 研究方法: 1、购SD雌性大鼠,58只,200～230g,利用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精喂养的方法,并逐渐增加四氯化碳和酒精的浓度,建立肝硬化大鼠模型。2月后将存活下来的肝硬化模型大鼠随机分为肝硬化未移植组(n=8)、门静脉移植组(n=8)、肝动脉移植组(n=8)、尾静脉移植组(n=8)。 2、取健康SD大鼠骨髓,利用全骨髓贴壁的方法原代培养骨髓MSCs。 3、取第3代骨髓MSCs,利用CM-DiI标记MSCs。 4、分别通过门静脉途径、肝动脉途径、尾静脉途径将标记好的MSCs移植到肝硬化模型大鼠体内。 5、移植后4周取肝组织行冰冻切片,Hoechst染核,激光共聚焦显微镜观察干细胞在肝脏的分布及数量。 6、取肝组织行HE和Masson染色,观察肝硬化程度。 7、检测血清白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、直接胆红素、间接胆红素、Ⅳ型胶原等指标。 研究结果 1、激光共聚焦显微镜观察MSCs在肝内分布情况 计数每个视野下定植于肝组织中MSCs数量,三种移植途径分别为:门静脉移植组22.80±2.12,肝动脉移植组25.04±2.36,尾静脉移植组23.36±4.07,无统计学差异(P>0.05),提示三种途径移植MSCs,经过4周后定植在肝脏的MSCs的数量无明显差异。 2、肝脏大体形态改变及病理学检查结果 (1) MSCs移植后4周,观察肝脏大体标本外观,见不同途径移植组的大鼠肝硬化程度均有所减轻;肝硬化未移植组的组织学仍呈现典型肝硬化改变。 (2) HE染色见移植后各组大鼠肝脏切片内肝细胞变性、坏死有所减轻,肝细胞索较规则,小叶结构稍变清晰,汇管区炎细胞浸润减轻。 (3) Masson染色见移植后各组大鼠肝脏假小叶数量减少,肝组织内纤维束减少、变细。但三种不同途径移植组的肝脏病理学改善程度无显著区别。 (4)根据Masson染色结果,按照Chevallier肝纤维化组织学半定量计分系统(SSS)评分,肝硬化未移植组:21.35±2.16,门静脉移植组:11.48±1.66,肝动脉移植组:11.46±1.02,尾静脉移植组:10.75±0.90,统计结果表明三种途径移植MSCs后的大鼠肝脏的纤维组织较未进行MSCs移植的肝硬化大鼠明显减少(P<0.05);但三种途径移植MSCs后的大鼠肝纤维化程度之间无显著差异(P>0.05)。 上述结果提示移植后,肝细胞损伤减轻,肝硬化程度有所改善,但三种不同途径移植组间改善程度无明显差异。 3、血清学检查结果 通过三种途径移植MSCs到肝硬化模型大鼠体内,4周后发现移植组模型大鼠的肝功能均得到明显改善,血清白蛋白较肝硬化未移植组显著