关键词： 重症急性胰腺炎   毛细血管渗漏   骨髓间充质干细胞   动物模型  

摘要： 本研究共包括三大部分，每部分都通过建立SAP大鼠模型进行研究。第一部分观察SAP大鼠小肠毛细血管渗漏现象；第二部分探索SAP大鼠小肠毛细血管渗漏的机制；第三部分采用BMSCs进行治疗，观察BMSCs对SAP大鼠小肠毛细血管渗漏的治疗效果、研究其可能的机制，为临床寻找如何阻止SAP患者小肠毛细血管渗漏的方法提供动物实验依据。 第一部分 重症急性胰腺炎大鼠小肠的毛细血管渗漏 目的：观察SAP大鼠小肠毛细血管渗漏现象，研究SAP大鼠小肠毛细血管渗漏的大小与时间的变化关系，及其与病变程度的关系。 方法：通过建立重症急性胰腺炎大鼠模型，采用硝酸镧电镜示踪、异硫氰酸荧光素标记白蛋白等方法观察SAP时肠道毛细血管渗漏现象，肠组织伊文氏蓝含量测定判定SAP肠道毛细血管渗漏的大小，检测血清及腹水的生化指标，胰腺及小肠的病理评分。 结果：与假手术组相比各时间点SAP大鼠血清白蛋白降低、淀粉酶升高、腹水量、腹水白蛋白增多、胰腺及小肠病理评分增加(p<0.001)，从6h至24h SAP大鼠血清白蛋白逐渐降低、腹水量、腹水白蛋白逐渐增多、胰腺及小肠病理评分逐渐升高(p<0.05)。SAP模型6h、12h、24h组小肠组织依文思蓝含量分别为13.40±3.06ng/mg、21.88±3.75ng/mg及39.46±4.67ng/mg明显高于假手术组5.07±1.49ng/mg、5.62±2.46ng/mg及4.90±1.76ng/mg(p<0.001)，从6h至24h小肠组织依文思蓝含量逐渐升高(p<0.05)。小肠毛细血管渗漏大小与小肠病理评分（r=0.93P0.001）、胰腺病理评分（r=0.85P0.001）、腹水量（r=0.78P0.001）及腹水白蛋白（r=0.58P0.001）的变化呈正相关，与血清白蛋白间的变化呈负相关（r=-0.81P0.001）。 结论：SAP时大鼠肠道毛细血管发生了渗漏，血清白蛋白降低，腹水量升高，腹水白蛋白含量上升；随着时间的推移SAP小肠毛细血管渗漏越严重；SAP时大鼠小肠毛细血管渗漏的大小，决定了SAP小肠的病理变化程度，小肠毛细血管渗漏越明显，小肠病理变化就越明显；同时SAP大鼠胰腺的病变程度又影响了小肠的毛细血管渗漏大小，胰腺病理变化越明显，小肠毛细血管渗漏越严重。 第二部分 重症急性胰腺炎大鼠小肠毛细血管渗漏机制探讨 目的：探索重症急性胰腺炎大鼠小肠毛细血管渗漏机制。 方法：通过建立重症急性胰腺炎模型，免疫组化、实时荧光定量PCR及WesternBlotting方法测定大鼠小肠组织VASP、MMP-9基因与蛋白的改变，电镜下观察小肠毛细血管内皮的改变，探索重症急性胰腺炎小肠毛细血管内皮屏障改变的可能因素，及毛细血管内皮屏障改变对重症急性胰腺炎小肠毛细血管渗漏的影响。 结果：与假手术组相比6h，12h及24h组SAP大鼠小肠组织VASP、MMP-9基因及蛋白表达明显升高，毛细血管渗漏也相应增加（P＜0.05）。相比12小时组，24小时组SAP大鼠小肠毛细血管渗漏增加，但VASP、MMP-9基因及蛋白的表达却是降低的（P＜0.05）。免疫组化显示12小时组小肠组织VASP、MMP-9表达最强。电镜下观察各组小肠毛细血管基底膜见肿胀、毛细血管内皮细胞间隙增宽、部分线粒体及内质网肿胀或脱颗粒现象，24h组可见毛细血管内皮细胞胞膜溶解等现象。 结论：SAP时释放的各种炎症介质、内毒素及细胞因子，通过MMP-9对毛细血管内皮基底膜进行降解，通过VASP介导的细胞骨架蛋白重构改变毛细血管内皮细胞之间的连接与间隙，以及通过直接对毛细血管内皮细胞进行攻击致其凋亡坏死，改变了SAP大鼠小肠毛细血管的内皮屏障，通透性增加，导致肠道毛细血管渗漏的发生。 第三部分 同种异体骨髓间充质干细胞移植对重症急性胰腺炎大鼠小肠毛细血管渗漏的治疗 目的：采用BMSCs进行治疗，观察BMSCs对SAP大鼠小肠毛细血管渗漏的治疗效果、研究其可能的机制，为临床寻找如何阻止SAP患者小肠毛细血管渗漏的方法提供动物实验依据。 方法：幼龄SD大鼠骨髓提取、培养及纯化BMSCs，用于治疗大鼠重症急性胰腺炎模型，实时荧光定量PCR及Western Blotting方法测定大鼠小肠组织VASP、MMP-9基因与蛋白的改变，电镜下观察小肠毛细血管内皮的改变，肠组织伊文氏蓝含量测定判定治疗前后毛细血管渗漏的大小，免疫组化方法了解BMSCs在肠组织的分布情况，检测血清及腹水的生化指标、血清IL-1β及TNF-α水平，胰腺及小肠的病理评分。 结果：经鉴定成功提取培养及纯化了BMSCs，并用于治疗。与模型组相比，BMSCs治疗组6h，12h及24h组大鼠小肠组织VASP

关键词： 间质干细胞移植   贫血,再生障碍性/外科学/护理  

摘要： 2007-02-2009-02我科将亲缘骨髓间充质干细胞（BMSC）应用于再生障碍性贫血（再障）治疗,取得了较好的效果,现将护理体会报告如下。

关键词： 骨髓来源   间充质干细胞   急性胰腺炎   治疗  

摘要： 急性胰腺炎是多种病因导致的胰腺水肿、出血,甚至坏死的炎症性疾病,有较高的发病率及死亡率,目前仍缺乏特异性的治疗方法.而骨髓来源的间充质干细胞(marrow-derived mesenchymal stemc ells,BMSCs)作为一种具有多向分化潜能的细胞,可跨越中胚层向内、外胚层的其他组织细胞转化,并具有再生、修复及抗炎的作用.目前的研究已证明,BMSCs有治疗急性胰腺炎的潜能.主要通过向损伤部位迁移并增殖,转化为胰腺干细胞,参与组织再生;修复血管内皮,改善血流;调控炎症相关的细胞因子,减轻炎症反应以及免疫调节功能来发挥其治疗作用,为临床上急性胰腺炎的治疗提供了新的思路.

关键词： 干细胞   细胞移植   腹膜   损伤   纤维化   条件培养基  

摘要： 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)治疗急性腹膜纤维化的作用方式。方法取SD大鼠114只,制作急性膜腹粘连模型,其中6只在腹膜刮伤后24h经尾静脉(n=3)或腹腔(n=3)注入MSCs,采用活体成像示踪法观察MSCs的分布并对两种方式注射后MSCs的示踪效果进行比较;其余108只大鼠随机分为无血清条件培养基(CM)治疗组、MSCs治疗组和对照组(每组36只),取CM、MSCs(5×106)或PBS各1ml于腹膜刮伤24h经尾静脉注射,然后对各组进行粘连评分、Masson染色、免疫荧光法观察腹膜炎症、纤维化及间皮细胞修复情况。结果活体成像示踪可见,MSCs经尾静脉注入后主要在肺脏积聚,经腹腔注入后主要在肝脏积聚,而损伤腹膜区均未见积聚。与对照组相比,CM与MSCs治疗可同等程度地改善腹膜粘连的肉眼评分(P<0.05)。病理Masson染色显示,与对照组相比,CM与MSCs治疗可同等程度地减轻腹膜损伤后2d的炎症细胞浸润,减少4、6和14d胶原纤维数量。免疫荧光分析发现,CM可增加腹膜损伤后2、4和6d的间皮细胞数量,并减少4、6和14d的成纤维细胞数量及转化生长因子β1的(TGF-β1)表达水平。结论 MSCs减轻急性腹膜纤维化的作用并非通过细胞定植实现的,而可能是与分泌可溶性细胞因子有关。CM可促进间皮修复、抑制炎症从而减轻腹膜纤维化。

关键词： 低氧诱导因子-1α   骨髓间充质干细胞   心肌梗死   大鼠  

摘要： 目的观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在骨髓间充质干细胞(BMMSCs)治疗大鼠急性心肌梗死中的作用,并与单纯BMMSCs移植作比较。方法①BMMSCs的提取、培养、标记。②建立急性心肌梗死模型。将大鼠随机分为4组,对照组、单纯BMMSCs组、HIF-1α反义寡核苷酸组、HIF-1α错义寡核苷酸组。术后4周,测定大鼠左室收缩压、舒张末压、压力变化最大上升与最大下降速率,检测细胞移植情况及新生血管密度。结果①大鼠血流动力学检测:与对照组、HIF-1α反义寡核苷酸组相比,BMMSCs组与HIF-1α错义寡核苷酸组左室收缩压、压力变化最大上升与最大下降速率均明显升高,舒张末压明显降低。②心肌超微结构检测:BMMSCs组与HIF-1α错义寡核苷酸组大鼠心肌超微结构损伤少于其他两组。③心肌血管密度:BMMSCs组与HIF-1α错义寡核苷酸组大鼠梗死心肌内血管密度高于其他组。结论 HIF-1α反义寡核苷酸对BMMSCs治疗急性心肌梗死具有抑制作用,BMMSCs对大鼠急性心肌梗死的部分治疗作用可能是通过HIF-1α介导的。

关键词： 间充质干细胞   放射性肺损伤   放射治疗  

摘要： 放射性肺损伤后期表现为肺纤维化,临床反应重,常导致放疗患者呼吸衰竭而死亡。目前尚无理想的治疗方法。骨髓间充质干细胞具有自我更新及多向分化潜能,可以归巢到受损的肺部,通过诱导分化进行组织修复,有可能使其成为治疗放射性肺损伤的有力手段。

关键词： 充质干细胞   再生障碍性贫血   T淋巴细胞  

摘要： 目的：研究利用人骨髓间充质干细胞（MSC）治疗再生障碍性贫血（AA）的机制。方法：对人骨髓间充质干细胞进行分离培养得到T淋巴细胞。然后用植物血凝素（PHA）$U激AA患者的T淋巴细胞增殖体系，加入不同剂量的MSC，通过流式细胞术计算CD＋3T细胞CD2（IL-2R）的表达率，以确定MSC对AA患者T细胞的影响作用。结果：AA患者T淋巴细胞增殖及CD25明显受到MSC指定剂量的抑制作用。

关键词： 骨髓间充质干细胞   干细胞治疗   心肌梗死   基因修饰   BMSCs   组织分离   心脏收缩功能   培养扩增  

摘要： 骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）是一类从成体骨髓组织分离、培养扩增、并且在体内或体外能保持其生长特性的干细胞.且在适当条件下可诱导分化为软骨细胞、脂肪细胞、骨细胞及心肌细胞等.充分利用BMSCs多种独特的细胞特性,并联合外源基因,可增强其治疗效应,适合应用于多种组织的治疗,特别是心血管系统.将BMSCs移植到梗死心肌组织后,能够防止病理性心室重构,增强心脏收缩功能,促进心功能恢复等作用.本文就目前实验室及临床研究关于BMSCs由供体分离扩增及其细胞特性、移植前的加工改造和如何移植到心肌损伤部位等进展,进行详细的阐述.

关键词： 骨髓间充质干细胞   缺血性脑卒中   细胞移植  

摘要： 骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSC）又称为骨髓基质细胞,是来源于中胚层的一系列基质干细胞的混合群体,主要的特点是能够自我更新和多向分化,能够分化成为包括成骨细胞、脂肪细胞等在内的多种细胞。

关键词： 肝细胞生长因子   糖尿病   闭塞性动脉硬化症   糖尿病足  

摘要： 目的探讨利用肝细胞生长因子（HGF）基因联合骨髓间充质干细胞治疗糖尿病周围动脉硬化闭塞症（PAD）和糖尿病足的临床疗效。方法将Fontaine分级Ⅲ-Ⅳ级的糖尿病PAD及糖尿病足患者30例完全随机分为2组。研究组（16例）采用携带入HGF基因的质粒DNA（HGF-PVAX1）4mg联合骨髓动员后的干细胞，局部注射于患肢腓肠肌；对照组（14例）于患肢腓肠肌局部注射单纯骨髓动员后的干细胞。分别于移植术后1、3、6个月比较2组在干细胞局部注射治疗前后的临床疗效。结果2组患者间歇性跛行有好转。研究组术前与术后6个月的下肢踝／肱指数（ABI）分别为（0．346±0．036）、（0．596±0．036），对照组是（0．379±0．031）、（0．468±0．032）。2组术后与术前相比，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；术后研究组ABI水平高于对照组，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。研究组术后皮温平均为（35．9±1．8）℃，术前为（33．4±2．1）℃；对照组术后皮温平均为（33．1±1．3）℃，术前为（33．7±1．5）℃。2组皮温变化程度比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。2组移植后3个月复查下肢动脉彩色超声，股浅动脉、胭动脉未见明显变化。研究组移植前足背动脉血流量≥20ml／min者8例，15—19ml／min者4例，1—14ml／min者2例，0ml／min者2例；移植后≥20ml／min者10例，15～19ml／min者2例，1～14ml／min者2例，0ml／min者2例。对照组移植前足背动脉血流量≥20ml／min者6例，15～19ml／min者3例，1—14ml／min者3例，0ml／min者2例；移植后≥20ml／min者7例，15～19ml／min者2例，1—14ml／min者3例，0ml／min者2例。研究组移植后足背动脉血流量改善情况好于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。2组间不良反应发生率差异无统计学意义。结论注射HGF-PVAX1联合骨髓干细胞移植可在一定程度上改善肢体缺血，可能成为治疗PAD的一种新手段。但其远期疗效和安全性还有待观察。