关键词： 自身免疫性   重症肌无力   骨髓间充质干细胞治疗   神经细胞分化   烯醇化酶   免疫细胞化学  

摘要： 目的:　　 1、建立Lewis大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离、培养及鉴定的方法，探讨β-巯基乙醇定向诱导其向神经样细胞分化的可行性，并观察神经元特异性烯醇化酶NSE、胶质纤维酸性蛋白酶GFAP的表达。　　 2、腹腔输注mAb35以探讨建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMGExperimental autoimmune myasthenia gravis)的方法。　　 3、探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的治疗作用及TSG-6（tumor necrosis factor alpha-stimulated gene-6）、MMP-9在其作用中发挥的可能机制，为其应用于临床治疗提供一定的理论依据及实验基础。　　 方法:　　 1、BMSCs用全骨髓培养法分离培养获得，观察所培养的细胞形态，通过流式检测细胞表面的CD90、CD29、CD45等标志抗原的表达率，然后用化学诱导剂β-ME定向诱导干细胞向神经元样细胞分化，对诱导后的细胞行免疫细胞化学和WB检测，观察细胞表面NSE及GFAP的表达情况，与未诱导细胞进行对比。　　 2、本实验建立EAMG动物模型的方法选用的是腹腔输注mAb35，其是一种AChR特异性单克隆抗体，动物成功建模后应用HE染色法观察两组大鼠腓肠肌冰冻切片中炎性细胞的浸润情况，并且应用免疫荧光技术观察大鼠肌肉切片中的AChR数量的改变情况，并分别收集两组大鼠的血清，采用间接ELISA方法检测两组大鼠血清中AChR-Ab含量。　　 3、选取清洁级环境下饲养的Lewis雌性大鼠30只，将其分为BMSCs移植组(n=10)、EAMG模型对照组(n=10)和正常对照组(n=10)。移植组和模型对照组腹腔注射mAb35建立EAMG模型。分离培养Lewis大鼠的BMSCs进行鉴定后，调整密度至1.5×106/600μL PBS，移植组尾静脉注射细胞悬液600μL，模型对照组和正常对照组同期给予600μL PBS。对3组动物进行Lennon临床评分，实验结束时ELISA法检测血清中AChR-Ab含量，免疫荧光技术观察腓肠肌AChR数量的变化，应用real time RT-PCR研究腓肠肌AChRα、MMP-9 mRNA的表达。体外用10ng/ml TNF-α培养BMSCs24h后用ELISA检测细胞上清TSG-6，并用realtime PCR检测细胞内TSG-6 mRNA表达的改变。　　 结果:　　 1、倒置相差显微镜下的BMSCs形态以长梭形为主，流式细胞仪结果示细胞表面标记物CD90、CD29、CD45的表达率分别为99.04％、98.53％、0.01％;化学诱导剂β巯基乙醇诱导后的细胞其细胞形态发生了相应的变化，原本呈长梭形的细胞胞体收缩成球形或者不规则形状，显微镜下所见细胞的折光性较前有明显增强，较多的长突起出现在细胞胞体上，显微镜下这些突起类似于神经元样细胞的树突和轴突;免疫细胞化学染色示NSE阳性表达率为57.6％±8.2％，而GFAP表达为阴性;WB结果示诱导后细胞NSE表达量增加。　　 2、实验通过腹腔被动输注mAb35上清成功建立了EAMG大鼠动物模型，该方法的成模率为100％，光镜下发现PTMG组肌肉冰冻切片中炎性细胞浸润增多，荧光显微镜下可见PTMG组肌肉切片中AChR表达量明显下调，ELISA法检测结果示PTMG组血清中的AChR-Ab含量明显高于健康对照组。　　 3、移植组Lennon评分、AChR-Ab含量、AChR mRNA表达均低于模型对照组(P＜0.05);免疫荧光检测示模型对照组未见红色荧光，移植组大鼠可见断断续续较为微弱的荧光;TNF-α处理的BMSCs分泌的TSG-6含量明显增高(P＜0.01)，TSG-6 mRNA表达量也增高(P＜0.05);模型对照组MMP-9表达提高（vs正常对照组P＜0.05）;而移植组vs正常对照组差异无统计学意义。　　 结论:　　 1、全骨髓培养法可以获得稳定且高纯度的BMSCs;β-巯基乙醇能够在体外定向诱导培养的BMSCs向神经元样细胞分化。　　 2、mAb35可成功建立EAMG Lewis大鼠模型。　　 3、尾静脉输注BMSCs可以改善EAMG模型的临床表现，BMSCs可能通过分泌TSG-6并通过抑制删P-9发挥作用。

关键词： 骨髓干细胞   脊髓损伤   疗效  

摘要： 目的 观察自体骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植治疗脊髓损伤的疗效及安全性.方法 选取本院在2011年8月～ 2012年7月间收治的50例脊髓损伤患者,将50例患者分为观察组与对照组,每组25例.对照组采用综合康复治疗,观察组在采用综合康复治疗的同时,再采用自体骨髓间充质干细胞移植治疗.并在治疗后的3个月对两组的患者的运动能力、感觉能力、日常生活能力以及膀胱功能能力进行对比.结果观察组患者的运能能力、感觉能力、日常生活能力以及膀胱功能能力相较于对照组明显改善,P＜0.05;观察组出现7例低热、2例头痛、1例腹胀、1例肢体麻木的不良反应,对照组出现了12例低热、12例头痛、12例腹胀、7例肢体麻木的不良反应,两组对比差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 在针对脊髓损伤时采用自体骨髓间充质干细胞移植治疗,疗效安全有效,值得在临床推广.

关键词： 骨髓间充质干细胞   右心室肥厚   肺血管肌化   野百合碱   肺动脉高压   钙信号   GAPDH   增殖   迁移   组胺   过氧化氢   GAPDH   肺动脉高压  

摘要： 肺动脉高压(PAH)是一种严重且致命的疾病。其特点是肺动脉压升高和肺的病理改变,如内皮损伤,肺血管平滑肌细胞增殖和迁移所导致的肺血管腔减小,以及最终伴发的右心室肥厚和终末期心脏衰竭。但是肺动脉高压至今缺乏高效特异性的治疗方法,尽管常规疗法有显著进步,预后却仍然不理想。近年来干细胞被成功应用于多种疾病的治疗。由于它所具有的,相比一般药物治疗更高的安全有效性,干细胞治疗已成为疾病治疗策略的研究热点,并被运用于对肺动脉高压的治疗研究中。 最近在脂肪分化、关节损伤等疾病模型中发现干细胞治疗的疗效存在性别差异。而对于干细胞治疗肺动脉高压效果的性别差异和其潜在的机制却未有研究。本研究在探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗肺动脉高压性别差异的实验中,发现雌性BMSCs无论以性别匹配或不匹配方式治疗野百合碱(MCT)诱导的小鼠肺动脉高压均比雄性BMSCs有更好的治疗效果,表现为右心室肥厚和肺阻力血管肌化程度有更大幅度的降低。体外实验中在炎症、氧化应激状态下,BMSCs的[Ca2+]i动力学、增殖和迁移能力均有显著的性别差异。 出乎意料的是,我们发现雌性BMSCs的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白水平比雄性BMSCs高得多。GAPDH最近已被证明是一种多功能蛋白质,具有不同的功能。我们通过分子生物学技术敲除雌性BMSCs的GAPDH或在雄性BMSCs过表达GAPDH,均能逆转上述细胞生物学行为和治疗效果的差异。综上,我们的实验结果表明GAPDH在雌性BMSCs通过调节细胞内[Ca2+]i信号及相关的细胞行为,从而在治疗肺动脉高压过程中发挥比雄性BMSCs更加优越的治疗作用。 第一部分骨髓间充质干细胞性别对小鼠肺动脉高压疗效的影响 目的： 干细胞引入体内后,为特异性示踪其定位与变化,现多采用将雄性干细胞引入雌性动物体内,藉由Y染色体来特异示踪,因此不可避免地忽视了干细胞性别差异对治疗效果的影响。本实验利用分离自同胎生雌性和雄性小鼠的不同性别骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察干细胞性别差异对肺动脉高压治疗效果的影响。 方法： 本实验采用8周龄体重在22g左右的C57小鼠,尾静脉注射60mg/kg的野百合碱MCT诱导肺动脉高压模型,在MCT注射三天后分组静脉给予2×106个不同性别BMSCs治疗,28天后以右心肥厚指数RV/(LV+S)(右心室／(左心室+间隔))和肺组织病理切片所显示的肺血管肌化程度(1muscularization)为指标,评估治疗效果。 结果： (1)光学显微镜下可见单个BMSC呈梭形多角形,细胞融合后呈铺路石样；流式鉴定细胞表面标志：CD29-PE+(99.96%±0.03%); CD34-PE-(0.34%±0.13%); CD45-APC-Cy7(1.97%±0.38%)。 (2)在对MCT诱导的肺动脉高压治疗中,雌性小鼠右心肥厚指数造模后明显增加(0.278±0.009vs0.357±0.019,p<0.05),雌性BMSCs降低右心肥厚指数的作用表现出明显优于雄性BMSCs的作用(0.275±0.026vs0.311±0.022,p<0.05)；且在雄性小鼠,雌性BMSCs也同样表现出明显优于雄性BMSCs的作用(0.2835±0.028vVs0.326±0.045,p<0.05)。 (3)在对MCT诱导的肺动脉高压治疗中,雌性小鼠肺动脉肌化(muscularization)造模后明显增加(38.3%±2.9%vs82.3%±7.8%,p<0.05),但是雌性BMSCs降低肺动脉肌化的作用明显优于雄性BMSCs的作用(41.7%±5.8%vs55.3%±5.0%,p<0.05)；且在雄性小鼠,雌性BMSCs也同样表现出明显优于雄性BMSCs的作用(40.0%±4.8%vs54.0%±6.9%,p<0.05)。 结论： 在MCT诱导的小鼠肺动脉高压模型中,雌、雄BMSCs均可以有效减缓模型小鼠右心室肥厚和肺动脉肌化程度,从而起到有效治疗肺动脉高压的作用,而雌性BMSCs则表现出更优于雄性BMSCs的治疗效果。 第二部分离体实验研究骨髓间充质干细胞性别差异的生物机制 目的： 骨髓间充质干细胞(BMSCs)在被引入发生肺动脉高压的人和动物体内后必然置身于不同的病理内环境,比较常见的包括氧化应激、炎症反应等等。BMSCs要发挥其修复内皮和治疗肺动脉高压的作用,必须能够适应这些微环境。观察并比较在氧化应激、炎症反应时雌、雄BMSCs生物学行为包括钙信号、增殖和迁移能力、connexin43表达等方面的差异,以期阐明BMSCs在肺动脉高压治疗中表现出来的性别差异的机制。 方法：

关键词： 骨髓间充质干细胞   溃疡性结肠炎   干细胞移植  

摘要： 目的：通过自体骨髓间充质干细胞移植治疗UC患者，来探讨骨髓间充质干细胞治疗溃疡性结肠炎的可行性。 方法:病例选择2012月11至2013年2月在山西医科大学第二医院普外科干细胞移植治疗组治疗的13例UC患者作为治疗组，在同一时间段内从我院消化内科选择15例采用传统氨基水杨酸类药物及激素治疗作为对照组。治疗组单独行自体骨髓间充质干细胞移植，其方法是通过采集UC患者自体骨髓100ml，当日在GMP实验室分离出BMSCs,并培养、增殖到一定数量,在纤维结肠镜下用4mm结肠粘膜下专用注射针对直结肠溃疡病变部位粘膜下进行多点局部注射自体骨髓间充质干细胞，取骨髓血当日在GMP实验室分离出60ml干细胞悬液局部注射一次，以后每间隔2周局部注射一次。通过复习所有研究对象的原始电子病历档案资料，整理、分析比较出两组患者治疗前后的临床症状、体征的变化，及纤维结肠镜下肠壁炎症损伤改善程度和组织病理学变化，并通过相应评分标准，进行统计学分析得出结果。 结果:1.治疗组UC患者自体BMSCs移植术后2周,4周,其临床症状和体征较对照组显著好转。2.治疗组UC患者在行第3次行自体BMSCs移植时，在纤维结肠镜下观察到（相当于治疗后4周的治疗效果）肠粘膜炎症明显减轻，血管纹理清晰，原有溃疡脓苔、粘膜充血、水肿都逐渐消失并愈合，与对照组比较效果显著。3.治疗组UC患者行自体BMSCs移植术后4周，病理组织学检查显示：可见正常肠道粘膜上皮细胞，仅可见少量炎性细胞浸润；而对照组仍有中性粒细胞浸润和肠上皮细胞的破坏，呈急性或慢性炎症，有隐窝脓肿形成。4.治疗组患者行自体BMSCs移植术后,有2名患者出现肛周自行有分泌液流出，量少，用3%高渗温盐水+甲硝唑灌肠，并每日坐浴，症状逐渐消失。治疗患者都没有出现发热、过敏等现象。 结论:自体骨髓间充质干细胞移植治疗溃疡性结肠炎可以显著改善患者的临床症状和体征，减轻肠道炎症反应和修复受损肠道粘膜，较传统药物治疗具有明显的效果，极大地改善患者的生活质量,其方法安全、有效、无不良反应，具有较高的临床可行性和应用价值，望成为治疗UC最有效的方法。

关键词： 大鼠骨髓间充质干细胞   胰腺-十二指肠同源盒-1基因   分泌胰岛素样细胞   糖尿病  

摘要： 背景和目的： 糖尿病已成为一种常见的慢性代谢性疾病,已经对人类的健康造成了严重的威胁,尤其是心血管的并发症更给人们带来了严重的危害。胰岛p细胞功能受损是糖尿病发病的重要环节,1型糖尿病(1type diabetes mellitus T1DM)是由于自身免疫破坏了胰岛β细胞而造成的胰岛素绝对缺乏,而2型糖尿病(2type diabetes mellitus T2DM)则是由于胰岛素抵抗和p细胞减少而引起胰岛素相对缺乏。因此,胰岛移植将成为最为有效的治疗糖尿病的方法。但由于胰岛移植需要大量的胰岛细胞,供体的缺乏,以及移植后需要长期应用免疫抑制剂使得胰岛移植的应用受到限制。近几年的研究则倾向于选择干细胞并将其诱导分化为胰岛素样细胞进行移植来治疗糖尿病。 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)是一类具有多向分化潜能的非造血干细胞,同其他干细胞相比,BMSCs在体外更易于分离培养,而且易于外源基因的转染及其稳定表达,自身骨髓MSCs移植可以避免免疫排斥反应,因此BMSCs是胰岛p细胞的理想来源。 胰腺-十二指肠同源盒-1(Pancreatic duodenal homeobox-1PDX-1)是胰腺的特异性转录因子,对于胰腺的早期发育及晚期的增生分化发挥着重要作用,并且对维持胰腺β细胞的功能也发挥着重要作用。 本研究拟通过脂质体将含有PDX-1基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-PDX-1转染到第3代和第5代的大鼠BMSCs中,并将其诱导分化为胰岛样细胞,构建糖尿病大鼠模型,将胰岛样细胞通过尾静脉移植到糖尿病大鼠中,通过对血糖、胰岛素、C肽及糖耐量实验和胰腺免疫组织化学方法对两代的BMSCs治疗糖尿病疗效进行比较和分析。 材料与方法： 1.大鼠BMSCs的体外培养鉴定及PDX-1的转染和诱导： 1.1采用全骨髓贴壁培养法分离、培养大鼠BMSCs;1.2细胞免疫荧光法鉴定BMSCs;1.3通过脂质体将PDX-1到转染大鼠BMSCs;1.4采用二甲基亚砜对转染的大鼠BMSCs进行诱导分化;2.将已分化的大鼠BMSCs的移植到糖尿病大鼠体内： 2.1通过腹腔注射佐链脲霉素制作糖尿病大鼠模型;2.2将大鼠分为正常组、模型对照组、移植组A和移植组B;2.2通过尾静脉将已分化的大鼠BMSCs移植到糖尿病大鼠模型中;2.3监测血糖、胰岛素、C肽和体重及糖耐量实验;2.4对胰腺组织进行免疫荧光组织化学分析。 结果： 1.采用直接贴壁培养法分离大鼠BMSCs,于第三代细胞行免疫荧光法测定大鼠CD29、CD34和CD44的表达,结果显示CD29和CD44的表达为阳性,CD34的表达为阴性,说明所培养的细胞符合BMSCs的特征。 2.采用脂质转染技术对第3代和第5代的BMSCs进行PDX-1转染,RT-PCR鉴定结果显示第3代和第5代BMSCs中均检测到PDX-1的特异性扩增条带,在对照组中未检测到,说明PDX-1已成功转染大鼠BMSCs,然后以二甲基亚砜和高糖为诱导剂,对转染的第3代和第5代BMSCs进行诱导,转染的BMSCs逐渐聚集并形成胰岛样细胞团,未转染的BMSCs并没有出现类似的变化,双硫腙染色对细胞团进行染色,结果显示为胰岛样细胞团。 3.采用大剂量佐链脲霉素腹腔注射法进行造模,注射后大鼠血糖一直维持在28.6±3.49mmol/L,显示造模成功。 4.在移植后的第3天血糖开始下降,第6天血糖下降显著(P<0.05),其中在9天后移植组B血糖较移植组A血糖下降显著(P<0.05)。移植后的第2周胰岛素和C肽量开始显著升高,其中移植组B的胰岛素和C肽量在第3周较移植组A的胰岛素和C肽水平显著持升高(P<0.05),移植后移植组和移植组A的糖耐量较模型组有显著改善(P<0.05),胰腺免疫荧光组织化学组显示移植后胰岛样细胞能不仅能在胰腺组织中存活并能分泌胰岛素。 结论： PDX-1转染的第5代BMSCs和第3代BMSCs诱导分化后,具有胰岛素分泌功能,且在移植治疗糖尿病模型大鼠的降血糖效果中第5代BMSCs优于第3代BMSCs。

关键词： 胰腺炎   骨髓间充质干细胞   移植途径   动物模型   损伤修复  

摘要： 目的:探讨不同途径移植pkh26标记的大鼠BMSCs治疗胰腺炎的最佳移植途径。\n 方法:无菌条件下按照全骨髓贴壁培养法取3周龄健康SD雌性小鼠的股骨及胫骨骨髓，进行分离纯化BMSCs。取体重250-300g雌性SD大鼠160只，腹腔注射15％L-精氨酸制做胰腺炎模型，造模后随机分模型组及治疗组，并在12h，24h，48h，72h测模型组大鼠的血清淀粉酶，在24h，48h，72h，1周测模型组大鼠的血脂肪酶。取模型大鼠120只，将治疗组分为尾静脉组、胰腺局部注射组、肠系膜上静脉组，每组各40只，各实验组均移植红色荧光染料Pkh26标记的BMSCs。细胞移植术后12h，24h，48h，72h，1周测血清淀粉酶、血脂肪酶，3周观察Pkh26标记的BMSCs的定位及HE染色观察胰腺组织病理学变化。\n 结果:细胞移植术后12h，24h，48h，72h，1周尾静脉注射组血清淀粉酶和血脂肪酶水平与模型组比较差异有统计学意义，肠系膜上静脉组、胰腺局部注射组与相应的模型组比较显著下降(P＜0.05)，胰腺局部注射组与肠系膜上静脉组比较显著下降(P＜0.05)，但是仍高于对照组。尾静脉组各时间点胰腺内可见极少量Pkh26标记的BMSCs，肠系膜上静脉组2周时胰腺内可见散在亮红色荧光的细胞，数量少，3周时数量稍多，胰腺局部注射组2周及3周胰腺内均可见较多红色荧光的细胞，对照组各时间点均未见Pkh26标记细胞。大鼠L-精氨酸诱导急性胰腺炎1周后胰腺组织肿大，质软呈无光泽暗红色，胰腺有的分叶结构模糊消失，间质充血水肿并有中性粒细胞及单核细胞浸润，局限性脂肪坏死。尾静脉注射组各时间点与模型组比较病理组织学改变有所改善，肠系膜上静脉组2周时较相应模型组病理组织学有所改善，肠系膜上静脉组3周时胰腺细胞坏死，充血，炎性细胞浸润继续好转，胰腺局部注射病理组织学改善情况较肠系膜上静脉组更明显。\n 结论: BMSCs经尾静脉、肠系膜上静脉、胰腺局部注射移植于胰腺炎大鼠模型体内，明显改善了受损胰腺的功能，对胰腺炎损伤具有修复作用，胰腺局部注射移植途径优于其他移植途径。

关键词： 间充质干细胞   重症急性胰腺炎肾损害   毛细血管内皮屏障   水通道蛋白1   基质金属蛋白酶9   血管扩张刺激磷蛋白  

摘要： 目的：本研究旨在通过经鉴定的同种异体骨髓间充质干细胞（mesenchymal stemcells, MSCs）移植到重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)肾损害的动物模型体内，观察MSCs对SAP合并肾损害的治疗效果，并探讨其对毛细血管渗漏的干预机制，为MSCs用于治疗SAP合并肾损害提供理论依据。 方法： 1、建立SAP肾损害的大鼠模型，检测腹水量、腹水淀粉酶（amylase, AMY），血清AMY、肌酐（creatinine, Cr）、尿素氮（urea nitrogen, BUN）以及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β, IL-1β）水平变化，观察胰腺、肾脏病理形态及毛细血管内皮超微结构变化； 2、体外培养MSCs，通过细胞形态检测、生长曲线观察，细胞表面抗原流式鉴定以及体外定向诱导分化法结合检测来所培养的细胞； 3、通过MSCs移植到SAP动物体内，检测血清AMY、Cr、BUN以及TNF-α、IL-1β水平，观察胰腺、肾脏病理形态及毛细血管内皮超微结构变化，并检测胰腺、肾脏组织中水通道蛋白1（aquaporin1, AQP1）、基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9, MMP-9）、血管扩张刺激磷蛋白（vasodilator stimulatedphosphoprotein, VASP）mRNA及蛋白水平改变。 结果： 1、胆胰管逆行注射牛磺胆酸钠配合胆胰管结扎法能成功建立SAP合并肾损害的动物模型；SAP合并肾损害发生时，腹水量增加，腹水AMY、血清AMY、Cr、BUN、TNF-α、IL-1β明显升高，胰腺以及肾脏组织出现毛细血管内皮屏障的破坏，并随时间增加而破坏加重； 2、全骨髓贴壁法和密度梯度离心法联合培养的细胞形态典型，高度表达CD29、CD90，低表达CD34、45，且能被诱导分化为成骨、成脂细胞，符合MSCs特性；CM-Dil对其染色，染色荧光强，且细胞活性未见明显下降； 3、MSCs可抑制血清TNF-α、IL-1β的过度表达，抑制SAP大鼠胰腺、肾脏中AQP1、VASPmRNA及蛋白的下降，抑制SAP大鼠胰腺、肾脏中MMP-9mRNA及蛋白的升高，减轻SAP大鼠胰腺、肾脏毛细血管内皮屏障的破坏。 结论：在SAP肾损害发生时，移植的MSCs能够归巢到胰腺、肾脏受损区域，抑制炎症因子过度表达，调节血管内皮细胞结构相关蛋白的表达平衡，减轻毛细血管内皮屏障的破坏，维护内皮屏障的完整性，从而最终达到治疗SAP合并肾损害的目的。

关键词： 骨髓间充质干细胞   硫酸软骨素蛋白多糖   硫酸软骨素酶   视网膜色素变性   凋亡  

摘要： 视网膜变性是一类难治性疾病，其中最常见的有年龄相关性黄斑变性（age relatedmacular degeneration，AMD），视网膜色素变性（retinitis pigmentosa，RP)等，全世界有数百万人因此永久致盲，危害性极大。因视网膜属于终末神经组织，神经细胞再生困难，此类疾病的治疗非常棘手。 骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells, BMSCs)是一种具有多向分化潜能的成体干细胞，可分化为视网膜神经元细胞或胶质细胞，可抑制神经细胞的凋亡，可分泌多种具有营养功能的细胞因子。但是BMSCs在视网膜下腔移植后，大部分细胞主要集中在注射区域，难以迁移、整合入视网膜，从而限制了BMSCs在病变视网膜上发挥其修复作用。 有研究证实，胶质细胞和硫酸软骨素蛋白多糖(chondroitin sulfate proteoglycans，CSPGs)是Müller细胞迁移入RCS大鼠视网膜的障碍，用硫酸软骨素酶（chondroitinaseABC，ChABC）降解CSPGs后可促使Müller细胞在视网膜上大量移行。那么，BMSCs在变性视网膜内迁移困难的原因可能也和视网膜上CSPGs形成的屏障有关。本实验拟将ChABC处理的BMSCs移植到视网膜变性大鼠视网膜下腔，观察ChABC降解CSPGs后BMSCs在视网膜上的迁移情况，以及对视网膜细胞凋亡的影响，从而寻找提高BMSCs移植治疗视网膜变性疗效的途径。研究目的： 建立碘酸钠诱导视网膜色素变性大鼠的动物模型。建立体外分离、培养、鉴定、标记大鼠骨髓间充质干细胞的方法。视网膜下腔注射硫酸软骨素酶处理的BMSCs，探讨降解CSPGs对于BMSCs治疗视网膜色素变性的作用。研究方法： 1、4周龄的SD大鼠40只行腹腔注射碘酸钠（NaIO3，3%，100mg/kg），注射后14d、28d、90d、180d后分别处死动物取眼球行视网膜HE染色。体外分离SD大鼠骨髓细胞，密度梯度离心法培养BMSCs，分别行流式细胞仪及成骨、成脂鉴定，BrdU标记BMSCs。 2、造视网膜色素变性模型，分为A组不干预组，B组BMSCs注射组，C组BMSCs+ChABC注射组，D组PBS注射组。28d后将硫酸软骨素酶（chondroitinaseABC，ChABC）处理或未处理的BMSCs注射入大鼠视网膜下腔，14d后处死大鼠并取出眼球，行视网膜细胞凋亡、免疫荧光、免疫组化检测。实验结果： 1、大鼠腹腔注射NaIO3后RPE细胞变形、萎缩，视杆视锥层结构紊乱，外核层呈波浪状改变，光感受器细胞数目逐渐减少。BMSCs在体外快速增殖、传代，P3代后细胞CD34、CD45阴性，CD44、CD90阳性的百分率始终高于95%，并能进行成脂、成骨分化，用BrdU标记BMSCs的标记率可达90%以上。 2、(1)免疫荧光显示：B组BMSCs注射组BrdU标记发绿色荧光的BMSCs主要分布于视网膜下腔，仅少量BMSCs迁移至外核层以内的视网膜，细胞迁移率为（7.2±3.71）%，C组BMSCs+ChABC注射组BrdU标记发绿色荧光的BMSCs大部分迁移至视网膜外核层，细胞迁移率为（68.6±6.09）%。B组与C组的BMSCs迁移率相比，统计学有显著性差异（P<0.01）。（2）视网膜下腔注射BMSCs14d后视网膜感光细胞凋亡率：A组不干预组（41.7±2.75）%，B组BMSCs注射组（34.4±3.44）%，C组BMSCs+ChABC注射组（32.2±3.08）%，D组PBS注射组（40.9±2.96）%，B组、C组与A组、D组分别进行比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）免疫组化显示，BMSCs在眼内表达GFAP。结论： 1、腹腔注射碘酸钠可成功建立视网膜变性动物模型，密度梯度离心法培养BMSCs时间短、效率高，BrdU可作为BMSCs的合适标记物。 2、降解CSPGs可以提高BMSCs在视网膜上的迁移能力，BMSCs眼内注射后可降低视网膜变性大鼠光感受器细胞的凋亡率，从而保护光感受器细胞。

关键词： 糖尿病大鼠   间充质干细胞   勃起功能障碍   阿扑吗啡   细胞示踪  

摘要： 目的：目前在我国以及世界上，男性勃起功能障碍（erectiledysfunction, ED）的发病率一直很高，且有逐年上升的趋势。随着生活水平提高、饮食习惯及社会环境的改变，糖尿病的发病率也在逐年增高，并且在糖尿病患者中有35％-75％有不同程度的勃起功能障碍。目前，治疗勃起功能障碍的一线药物为磷酸二酯酶-5（PDE-5）抑制剂，但并非对所有的ED患者都有效，如在治疗糖尿病性ED患者时其疗效不甚理想。近年来，随着干细胞研究的不断深入，使干细胞移植修复组织损伤、改善组织重塑成为现实。本实验目的是探讨骨髓间充质干细胞治疗糖尿病性阴茎勃起功能障碍的效果。 方法：雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制造糖尿病动物模型。12周后颈后皮下注射阿扑吗啡，来筛选糖尿病性ED大鼠模型。模型制成后大鼠分为三组：分别为正常对照组、糖尿病性ED未治疗组（阴性对照组）和糖尿病性ED干细胞治疗组。采用全骨髓法分离和培养骨髓间充质干细胞（bone marrow derived mesenchymal stem cell, BM-MSC）。当BM-MSC培养第三代时，用DiI标记干细胞，并注射于大鼠阴茎海绵体内。注射后分别在3天、7天、2周、4周时用ELISA测定血中VEGF的浓度。4周后测定各组大鼠的ICP值，并用免疫组化法测定各组大鼠阴茎海绵体中nNOS神经纤维和平滑肌细胞的含量。 结果：与阴性对照组及糖尿病性ED组相比干细胞治疗组ICP值明显增高，但两组的ICP值均低于正常对照组。组织学显示，干细胞治疗组大鼠阴茎海绵体中的nNOS神经纤维和平滑肌细胞数量明显高于糖尿病性ED未治疗组，但两组数量也均比正常对照组少。干细胞治疗组大鼠血中的VEGF浓度在注射后3天与未治疗组相比明显升高，并且7天达到高峰。 结论：糖尿病可引起神经和血管平滑肌的病变，BM-MSC治疗可改善这些不良的情况，为ED治疗提供了新的治疗方向。通过本课题的研究，可以得出以下结论：1、骨髓间充质干细胞治疗糖尿病性ED，能明显改善其勃起功能；2、骨髓间充质干细胞治疗糖尿病性ED，能明显增加阴茎海绵体nNOS神经纤维和海绵体平滑肌的含量；3、骨髓间充质干细胞治疗糖尿病性ED，血中VEGF浓度显著增加，且7天时达到高峰；4、骨髓间充质干细胞培养第三代时，细胞较纯且数量较多适合用于实验；5、制作糖尿病性大鼠模型时，链脲佐菌素腹腔注射剂量在65mg／kg时较易成模型；6、糖尿病性勃起功能障碍的发病机制有很多因素，至少存在神经和血管因素；7、目前，骨髓间充质干细胞治疗机制尚未清楚，但干细胞分泌的因子（如VEGF等）起到一定的作用。

关键词： 阿托伐他汀   骨髓间充质干细胞   急性心肌梗死  

摘要： 目的:研究阿托伐他汀对改善骨髓间充质干细胞以治疗急性心肌梗死的治疗情况。方法:选取42例在2007年1月;012年12月来我院接受骨髓间充质干细胞治疗的急性心肌梗死病患进行研究,将其进行随机均分为3组,每一组为14例病患,他们分别为对照组,观察组1、观察组2。对照组为AMI常规治疗组,观察组1为只使用阿托伐他汀进行治疗,观察组2为使用阿托伐他汀治疗的同时使用MSCs移植。结果:对照组、观察组1、观察组2均无死亡病例,病患获得康复。各组小组间治疗前后的血脂指标变化比较无统计学意义,P>0.05。同位素心肌代谢显像评价存活心肌方面,观察组2明显优于观察组1和对照组。结论:使用阿托伐他汀改善骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死是有效的,联合MSCs移植后,发现其治疗的效果与传统治疗方法相比更加理想,值得在临床上进行推广。