关键词： 肝纤维化   骨髓间充质干细胞   临床治疗  

摘要： 大多数慢性肝病发展到终末期会发生肝纤维化，如果可以研究出阻止甚至逆转这一病变过程的治疗方法，那么大多数的慢性肝病可能治愈。虽然肝移植是各种终末期肝病治疗公认的有效方法，但是肝供体的匮乏和移植费用的高昂严重限制了大多数患者进行肝移植治疗。干细胞可以快速进行自我更新，具备高度增殖以及多向分化等潜能。近年来干细胞一直是研究的热点，并逐步由实验室研究向临床研究过渡，对各种类型的干细胞的研究也不断深入。骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，BMSCs）在组织工程领域及临床治疗方面具有巨大的潜力，其具备分化为肝细胞和胆管细胞的能力并行使其部分功能，且有取材方法简便多样、体外培养成活率高、自身移植时无免疫排斥反应以及无医学伦理道德束缚等特点而成为目前治疗肝纤维化及其他终末期肝病的选择。虽然大多数实验证实进行BMSCs移植对肝纤维化的干预治疗是有效的，但仍然存在争议。目前的实验均为一次性移植BMSCs的研究，但是骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗肝纤维化是否可以反复进行呢？本实验即针对这一疑问进行研究。　　方法:将80只SD(Sprague-Dawley)随机分为四组:A组（空白对照组）;B组（肝纤维化模型组）;C组（一次性移植BMSCs组）;D组（两次移植BMSCs组）。通过检测大鼠血清中透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、层粘连蛋白(LN)的水平比较一次性移植BMSCs的肝纤维化大鼠与间隔一个月经过两次移植BMSCs的肝纤维化大鼠的治疗效果。　　结果:通过测定肝纤维化程度的几个指标发现经过一次移植骨髓间充质干细胞的肝纤维化大鼠和经过两次移植骨髓间充质干细胞的肝纤维化大鼠在治疗效果上无明显差异。　　结论:两次移植骨髓间充质干细胞较单次移植对SD大鼠肝纤维化的治疗效果无明显差别。

关键词： 心肌梗死(MI)   整合素连接激酶(ILK)   间充质干细胞(MSCs)   干细胞移植  

摘要： 研究背景 心肌再生能力低下是心肌梗死(MI)后多种治疗方法效果不佳的主要原因。虽然一些研究证实了骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗MI有效,但是心功能改善十分有限。其中移植细胞归巢率低是其疗效不佳的主要原因。因此提高移植细胞归巢能力是改善MSCs移植疗效的关键因素之一。将细胞移植与基因治疗相结合,用促进归巢的基因修饰MSCs,使其高表达,增加MSCs向MI局部的归巢效应,是可能策略之一。整合素连接激酶(ILK)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在正常心肌细胞中有较高表达。ILK通过激酶区与整合素β1胞浆区结合,与细胞归巢关键分子密切相关。我们的前期研究发现ILK基因可以调节细胞生长、存活、增殖及分化。但ILK对MSCs归巢的作用尚不清楚。因此,本项目拟用SPIO标记ILK基因转染的MSCs,建立猪MI模型后进行移植治疗,应用MR动态观察移植细胞向缺血心肌迁移、归巢的变化及对心功能的影响。本项目有望为提高MI细胞治疗疗效提供新的理论和科学依据。研究方法 1、以表达ILK及绿色荧光蛋白GFP(ad-GFP/ILK)或仅表达GFP(ad-GFP)的腺病毒载体转染体外培养的猪MSCs,确认转染成功后,观察体外高表达ILK基因对MSCs的细胞活力、增殖能力、迁移能力及细胞凋亡的影响;2、用超小超顺磁性纳米氧化铁颗粒(USPIO)标记MSCs,体外MR检查,并检验USPIO标记对MSCs的细胞活力、增殖能力、迁移能力及细胞凋亡的影响;3、经冠脉球囊封堵方法构建猪心肌梗死模型,一周后再次经冠脉随机移植ILK-MSCs、MSCs(均为5×107细胞)或PBS,移植后24h、3天、1周及2周进行MR分子影像学检查,观察移植细胞归巢情况;心肌首过灌注成像观察局部心肌血流灌注情况;延迟增强观察梗死心肌面积;心脏电影成像观察局部心脏功能状态;2周后冰冻切片观察GFP表达情况;普鲁士蓝染色观察细胞内铁的分布;HE染色观察梗死心脏形态;Masson染色检测纤维化程度;Ki67染色观察细胞增殖情况;CD31及vWF染色观察血管新生情况;Caspase3染色检测细胞凋亡情况。4、统计学处理应用SPSS17.0统计软件,所有数据以均数士标准差表示,两组间均数比较采用独立样本t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)最小显著差数(LSD)法,p<0.05(双侧)提示有显著的统计学差异。研究结果 1、体外实验中,高表达ILK基因能促进MSCs的细胞活力(p<0.001)、细胞增殖(p<0.001)、细胞迁移能力(p<0.001),同时减少细胞凋亡(p<0.001);2、USPIO标记MSCs的标记率达到100%,本实验的最佳标记浓度为50ug/ml,最低检测到的细胞数为1×104/0.5ml细胞;MR信号随标记浓度、细胞数及代数减低。3、在体MR内实验显示,MR显示MSCs及ILK-MSCs移植后3天的MR低信号区面积及信号变化幅度均较24h增大(P<0.05),而1周时面积较3天增大(P<0.05),但信号变化幅度较3天减低(P<0.05),2周后面积及信号变化幅度均较1周时减低(P<0.05)。两组比较,ILK-MSCs组移植后24h、3天及1周时MR低信号面积及信号变化幅度均较MSCs组大(P<0.05),而2周时MR低信号面积及信号变化幅度均较MSCs组小(P<0.05)。心肌首过灌注显示ILK-MSCs组移植后随时间相对灌注值较MSCs及PBS组高(P<0.05),MSCs组较PBS组高(P<0.05);延迟增强成像发现ILK-MSCs组细胞移植后梗死面积较移植前减小,MSCs组面积变化不大,而PBS组较移植前面积增大;心功能成像发现ILK-MSCs组局部心功能较另外两组改善明显(P<0.05);ILK转染组GFP及USPIO颗粒较对照组多;ILK转染组的MSCs移植能降低纤维化程度(P<0.001),减少细胞凋亡(p<0.001),增加血管密度(p<0.001),增加细胞增殖(p<0.001)。研究结论 本研究首次在在体证实,ILK-MSCs移植能够提高移植细胞的归巢率,促进梗死心肌周围心肌细胞增生,减少凋亡,促进血管新生,减少胶原增生,最终明显提高猪心肌梗死MSCs移植的疗效。本研究结果为提高缺血性心脏病的细胞治疗疗效提供了新的方法.。

关键词： 股骨头坏死   骨髓间充质干细胞   中药治疗  

摘要： 目的:探究股骨头坏死患者采用骨髓间之干细胞的治疗效果。方法:选取2012年8月-2014年1月收治的54例股骨头坏死患者进行治疗,随机分组,实验组32例给予骨髓间充质干细胞的治疗,对照组22例患者采用中医治疗,对比患者疗效。结果:实验组治疗有效率为87.5%,对照组治疗有效率为63.6%,治疗效果差异较大,有统计学意义(P<0.05)。实验组安全率为96.9%,对照组安全率为95.5%,差异小,无统计学意义(P>0.05)。结论:股骨头坏死患者采用骨髓间充质干细胞的治疗,可明显缓解病情,并发症较少,并促进关节功能的良好恢复,值得推荐。

关键词： 慢病毒   microRNA-1   骨髓间充质干细胞   移植   心肌梗死  

摘要： 目的： 通过携带miRNA-1的慢病毒载体（Lentivirus vector,LV）转染大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells），观察miR-1过表达慢病毒载体转染的BMSCs移植治疗大鼠心肌梗死（Myocardia infarction,MI）的作用及其相关机制，以期为心肌梗死寻找新的治疗策略。 方法： 以全骨髓培养法获取BMSCs，并予以扩增、鉴定；构建携带绿色荧光蛋白（GFP）的miR-1慢病毒载体并转染BMSCs，建立miRNA-1基因修饰BMSCs（GFP作为细胞标记）；通过冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠心肌梗死（AMI）模型。将30只大鼠通过随机平分法分为空白对照组、假手术组（Sham组）、心肌梗死组（Vehic组）、未转染病毒组（BMSCs组）、miR-1重组慢病毒组（miR-1/BMSCs组），每组6只，在AMI建模1天后，经尾静脉注射途径分别以100μl生理盐水或2×106/100μl相应BMSCs分别干预各实验组并继续饲养28天。分别于建模前及建模后28天超声心动图观察心脏功能及结构改变；饲养28天后处死大鼠，留取血液标本酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组血清血管内皮生长因子（VEGF）的浓度；留取心脏标本计算心脏左室质量指数，伊红-苏木素（Hematoxylin Eosin,HE）染色观察心肌病理变化，免疫组织化学方法（Immunohistochemistry,IHC）检测血管Ⅷ因子表达；免疫荧光检测心肌细胞特异蛋白cTnT及connexin43的表达。 结果： 原代培养的BMSCs48小时后有少量贴壁细胞，呈短棒状或扁平多角形；最初3天细胞生长较慢，见少量小集落形成，之后快速增殖，流式细胞仪检测BMSCs的表面标志性抗原显示CD29、CD44阳性，而CD34、CD45阴性，符合BMSCs特征；成功构建miR-1过表达慢病毒载体（病毒滴度3×108TU/μl）并转染BMSCs，四天时转染效率达90%以上并检测到miR-1高水平表达。建模前各组大鼠超声心动图检测指标无明显差异，建模28天时BMSCs组及miR-1/BMSCs组超声检测指标较Vehic组改善，其中miR-1/BMSCs组改善尤为明显。ELISA提示相较空白组及Sham组，其他各组血清VEGF浓度均明显升高，其中miR-1/BMSCs组VEGF浓度升高最显著；HE染色显示其结构破坏及瘢痕形成均明显轻于其他实验组；血管Ⅷ因子免疫组织化学检测同样显示miR-1/BMSCs组毛细血管密度较其他各组显著升高。免疫荧光检测显示miR-1/BMSCs组大鼠心肌梗死区部分BMSCs表达心肌细胞特异蛋白cTnT及connexin43。 结论： 心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞能改善心肌梗死后SD大鼠心功能，并能一定程度抑制或逆转心室重构，miR-1基因修饰BMSCs可进一步增强大鼠心肌梗死治疗效果；miR-1基因修饰BMSCs可能通过提升BMSCs向心肌细胞分化效率及促进VEGF等有益因子旁分泌作用实现心肌梗死的治疗效应。

关键词： 骨髓间充质干细胞   大鼠   诱导分化   细胞   归巢   胞膜   表达   肠损伤   放射   刺激  

摘要： 第一部分SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及其生物学特性鉴定 目的:SD大鼠BMSCs的体外分离、培养和纯化，以及生物学特性鉴定，为整个课题打下基础。 方法：联合采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养法，分离培养和纯化BMSCs，同时显微镜下观察细胞生长状况。流式细胞仪鉴定细胞表面标记物，鉴定其向成骨、成脂分化潜能。 结果：分离培养的BMSCs呈梭形、大小均一，类似成纤维细胞样。流式结果显示BMSCs表面CD44、CD90阳性表达，而CD45阴性表达。P3代BMSCs可向成骨、成脂诱导分化。 结论：本部分实验成功分离培养了BMSCs，纯度高、形态均一，可用于之后的 相关实验研究。 第二部分VEGF刺激骨髓间充质干细胞后CXCR4表达的实验研究 目的：探讨BMSCs经VEGF刺激后对其归巢的影响 方法：将第一部分分离培养的BMSCs随机分成3组，A组：空白对照组，完全培养基培养；B组：在BMSCs的完全培养液中加入VEGF，使最终VEGF浓度为10ng/ml。C组：在BMCs的完全培养液中加入VEGF，使最终VEGF浓度为50ng/ml。流式细胞分别测量刺激48h后各组胞膜和胞膜内CXCR4的表达。 结果：各组BMSCs胞膜和胞膜内均有CXCR4表达，且胞膜内高于胞膜的表达，其中C组表达均最高，P<0.05 结论：1、BMSCs和经VEGF刺激的BMSCs胞膜和胞膜内均有CXCR4表达；2、VEGF刺激BMSCs后，胞膜和胞膜内CXCR4表达增高；且50ng/ml浓度下表达最高； 第三部分SDF-1在放射性损伤的肠组织中的表达 目的：1、建立急性放射性肠损伤的模型；2、进一步探讨VEGF对BMSCs的归巢影响。 方法：90只雌性的SD大鼠随机分成3组（每组30只），即对照组（A组）、BMSCs治疗组（B组）和经VEGF刺激的BMSCs的治疗组（C组）。B组和C组在照射后4小时内通过尾静脉注射1×106/ml的雄性大鼠BMSCs悬液1ml及经50ng/ml的VEGF刺激48小时后的BMSCs悬液1ml；A组于照射后4小时内尾静脉输注生理盐水1ml。造模后第1、3、7、14、21天每组随机处死6只大鼠，留取全血与两份末端回肠标本。显微镜下观察肠道组织结构，测量绒毛高度及隐窝深度；ELISA法测量血清中瓜氨酸和VEGF的浓度。免疫组化SP法检测造模后3天肠组织SDF-1的表达。 结果：1、成功建立了放射性肠损伤模型；造模后第3、7、14天，C组大鼠精神状态，运动量，饮食量，排泄状况均优于A组、B组，而造模后第1、21天三组大鼠之间无明显差异。HE染色结果显示，造模后第3、7、14天，C组肠道结构较A、B组完整，肠粘膜上皮细胞坏死少，伴有的炎性细胞较少，而腺体结构却较丰富。通过测量肠道绒毛高度和隐窝深度评估肠道功能，造模后第3、7、14天，同一时期绒毛高度和隐窝深度，C>B>A，P<0.05有统计学差异。造模后第1、21天，同一时期绒毛高度和隐窝深度，各组无统计学差异，P>0.05. 2、免疫组化SP法测量各组受损肠组织SDF-1的表达量，发现C组SDF-1的表达量明显高于A、B组，且B组表达量高于A组。 结论：1、直线加速器建立放射性肠损伤模型的剂量为12Gy； 2、放射性肠损伤可以自我修复，周期在2～3周左右； 3、经VEGF刺激的BMSCs能够促进急性放射性肠损伤的修复，能提高其修复的效率，但从远期效果来看无明显差异； 4、经VEGF刺激的BMSCs能通过提高BMSCs的归巢率促进损伤肠道修复，机制与SDF-1/CXCR4轴有关。

关键词： 髓芯减压   骨髓间充质干细胞   股骨头无菌性坏死  

摘要： 目的:观察髓芯减压联合自体骨髓间充质干细胞治疗45例股骨头无菌性坏死的的临床效果及安全性。方法:采取随机原则对2011年11月至2012年3月期间在我院骨科住院治疗的54例患者分成两组,对照组接受髓芯减压治疗,治疗组接受髓芯减压联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗治疗。结果:术后随访一年,治疗组的Harris评分为(86.78±9.48)分,对照组为(71.18±8.36)分,两组相互比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组的优良率为84.38%,对照组的优良率为55.17%,治疗组的优良率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:髓芯减压联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗股骨头无菌性坏死效果显著,优于单纯髓芯减压治疗。

关键词： 骨髓间充质干细胞   干细胞治疗   静脉留置针   心血管疾病   多向分化潜能   护理操作技术   MSCs   静脉输液  

摘要： 骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells，MSCs）是存在于骨髓中除造血干细胞以外的另一类具有“无限”增殖和多向分化潜能的干细胞，是实现糖尿病的自体细胞治疗的一种新型方式。糖尿病已成为人类继心血管疾病和肿瘤之后的第三大疾病，若将自体MSCs诱导分化为胰岛细胞，可望解决细胞来源和免疫排斥问题。临床上多通过静脉输液输送骨髓间充质干细胞达到体内，此方法是实现治疗目的重要手段之一，也是主要的护理操作技术。对于日常静脉输液的多是为患者采用常规输液方式完成穿刺技术。由于骨髓间充质干细胞为特殊制品，为了安全、准确输入体内，达到有效治疗的目的，笔者采用置入静脉留置针的方法输入骨髓间充质干细胞，效果较好，现报道如下。

关键词： 间充质干细胞   脑干出血   自体  

摘要： 目的探讨自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑干出血的疗效。方法 41例接受自体骨髓间充质干细胞移植患者(干细胞治疗组)和41例接受常规治疗患者(对照组),实施美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分和日常生活能力指数(Barthel index)评分,并比较两种治疗方法的差异。结果干细胞治疗组在治疗后14d、3个月NIHSS评分显著低于对照组(P<0.05);干细胞治疗组在治疗后3个月Barthel index评分及Barthel index加分幅度显著高于对照组(P<0.05);干细胞治疗组治疗后3个月疗效优于对照组。结论自体骨髓干细胞治疗可有效改善脑干出血患者的预后。

关键词： 骨髓间充质干细胞   脑卒中   临床研究  

摘要： 目的研究骨髓间充质干细胞在临床脑卒中治疗过程中的效果和优势。方法将41名脑卒中住院患者分为实验组与对照组,其中实验组为(23名)骨髓间充质干细胞治疗,未接受骨髓间充质干细胞治疗的则为对照组(18名)。在接受骨髓间充质干细胞治疗一个月后,按照NIHSS评分标准对实验组和对照组的治疗前后神经功能的实际情况测试,并且做出统计分析。结果接受骨髓间充质干细胞治疗的实验组的神经功能恢复能力要强于未接受骨髓间充质干细胞治疗的对照组,其中实验组的手术前后的统计学结果为P<0.05,骨髓间充质干细胞的治疗效果明显。而对照组的统计学结果P>0.05,不具有统计学意义,效果低于骨髓间充质干细胞的治疗。结论骨髓间充质干细胞治疗脑卒中效果良好且副作用小。但是由于样本量小,观察期限比较短,所以其长期恢复水平以及并发症有待于进一步观察。

关键词： 甘草酸二胺   骨髓间充质干细胞   肺纤维化   肺泡Ⅱ型细胞   大鼠  

摘要： 目的探讨甘草酸二胺对骨髓间充质干细胞(MSC)移植治疗博来霉素(BLM)所致的大鼠肺纤维化的干预作用。方法造模并移入MSC后,腹腔注射甘草酸二胺28d,测定相关生化指标,PCR检测移植MSC向肺脏的迁移、免疫荧光染色观察肺泡Ⅱ型细胞(ATⅡ)的数量。结果与MSC组相比,甘草酸二胺+MSC组(GMSC组)大鼠肺组织羟脯氨酸(HPY)和血清MDA含量降低,而超氧化物歧化酶(SOD)活力升高。sry基因表达明显增多(P<0.01),肺组织ATⅡ增多。结论甘草酸二胺对MSC治疗肺纤维化有协同作用,其机制可能与机体内的抗氧化和促进MSC向肺组织的移入和向ATⅡ的转化有关。