关键词： 颞下颌关节   骨关节炎   动物模型   骨髓间充质干细胞   趋化因子  

摘要： 骨关节炎（osteoarthritis，OA）是最常见的关节疾病，以关节软骨进行性的退变和最终的关节破坏为特征[1]。骨关节炎可造成患者疼痛和运动受限，给患者带来极大的压力。OA的病理机制尚不清楚，多种因素与OA的发生发展有关：创伤、遗传因素、关节位置异常、年龄、营养不良、生物力异常等。OA好发于膝关节、肘关节等负重关节，其中颞下颌关节（temporomandibular joint，TMJ）也是OA的好发部位之一。由于早期OA患者的标本难以获得，动物模型研究成为研究OA进展的有效手段。关节软骨的自我修复能力有限，而自我再生的多为纤维软骨，其力学性能较健康的透明软骨差。目前尚缺少能有效逆转或终止OA进展的药物，临床治疗策略仍以止痛、物理治疗、控制炎症反应、减轻病人痛苦、减缓疾病进程等为主。干细胞治疗是近些年备受关注的治疗方法。有关OA软骨的干细胞治疗的临床和动物实验研究主要是应用影像学、功能学、形态学等指标进行简单的疗效评价，尚未见有关于其疗效的系统研究和其机理研究的系统报道。进行干细胞治疗的关键决定因素是干细胞能被受损组织趋化从而迁移至靶组织。靶组织中表达的趋化因子在干细胞的迁移中起了关键作用。趋化因子基质细胞衍生因子-1（Stromal cell-derived factor-1，SDF-1）和RANTES是主要的介导干细胞迁移的分子，但关于SDF-1和RANTES在OA的干细胞治疗中趋化作用的研究还未见报导。本研究在建立了致病作用确切的咬合源性的颞下颌关节骨关节炎小鼠模型的基础上，系统全面地论证了外源性骨髓间充质干细胞（bone marrow-derivedmesenchymal stem cells，BMSCs）局部注射对颞下颌关节骨关节炎的治疗作用，并从干细胞存活、分化和趋化等方面探索其治疗作用的机制，发现外源性BMSCs局部注射对咬合源性的TMJ OA有积极的治疗效果，且该治疗效果的关键机制是病变髁突高表达趋化因子SDF-1和RANTES，诱导外源性BMSCs迁移并定植于病变髁突中。整个研究分为以下三个部分： 第一部分：单侧前牙反牙合致小鼠颞下颌关节骨关节炎及其机制的实验研究 背景：颞下颌关节紊乱病（Temporomandibular joint disorders，TMD）被认为有多种致病因素，其中咬合因素备受关注。目前，关于咬合是TMD的致病因素还存在很大争议。骨关节炎是TMD的严重的病理变化形式，以软骨退变和软骨下骨异常改建为主要特征。最近，Semaphorin4D（Sema4D）和Plexin-B1被发现可抑制成骨活动，但Sema4D/Plexin-B1在TMJ改建中的表达变化还未见报道。 目的：本研究的目的是建立一个原创性的改变小鼠咬合关系的动物模型，并观察TMJ软骨和软骨下骨的组织学和相关因子的变化，以及Sema4D和Plexin-B1的表达变化。 方法：在小鼠的左侧下颌切牙或上下颌切牙粘接不良修复体，造成左侧切牙的反牙合关系。用HE和甲苯胺蓝染色方法观察TMJ髁突的形态学改变。用组织化学和realtime-PCR手段检测TRAP阳性细胞和M-CSF表达水平，作为破骨活动的指标，成骨活动水平用骨钙素（osteocalcin，OCN）的表达水平来观察。用免疫组织化学和realtime-PCR检测Sema4D和Plexin-B1的表达变化。用双因素的方差分析来比较组间差异。 结果：粘接不良修复体1周和3周后，组织学上观察到软骨的退变和软骨下骨丢失。破骨活动的指标（TRAP阳性细胞数和M-CSF表达水平）在软骨和骨中均增高。OCN在软骨中的表达在3周时升高，但在软骨下骨中在1周时升高，3周时降低。Sema4D在软骨和软骨下骨中的表达在1周时降低，在3周时升高，而Plexin-B1在软骨下骨3周时升高。 结论：单侧前牙反牙合的咬合关系可造成颞下颌关节髁突的异常改建，此过程涉及到软骨退变、成骨和破骨活动的改变，以及Sema4D/Plexin-B1的参与。 第二部分：外源性骨髓间充质干细胞对颞下颌关节骨关节炎的治疗作用 背景：干细胞治疗是目前备受关注的治疗骨关节炎的新方法。骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，是治疗骨关节炎的理想种子细胞。尽管有临床和动物研究报道干细胞对骨关节炎有治疗效果，但目前尚没有资料系统全面地评价骨髓间充质干细胞局部注射对骨关节炎的治疗作用，及其相关分子的表达。 目的：本研究拟系统全面地论证外源性骨髓间充质干细胞对颞下颌关节骨关节炎的治疗作用。 方法：观察拆除不良修复体后，颞下颌关节髁突的变化，以确定髁突病变的咬合源性。在造模3周时，开始每周在关节局部注射外源性的GFP-BMSCs，用HE和micro-CT的方法分析软骨和软骨下骨的形态

关键词： 成人骨髓间充质干细胞   激素性股骨头坏死   骨代谢稳态   Wnt通路   骨髓间充质干细胞   激素性股骨头坏死   骨代谢稳态   过甲基化修饰   51-氮杂胞苷   骨髓间充质干细胞   激素性股骨头坏死   表观遗传重编程   Wnt信号通路  

摘要： 目的人体内骨代谢稳态的维持有赖于骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, MSCs)成骨成脂分化的动态平衡。在外源性糖皮质激素作用下,骨代谢稳态被打破,经各种病理生理变化后逐渐发展为股骨头坏死。本研究旨在调查激素性股骨头坏死患者骨髓间充质干细胞的数目和功能是否异常,并探讨其中Wnt信号通路的变化情况。 方法选择2011-2012年就诊22例激素性股骨头坏死患者,25例股骨颈骨折患者。经患者知情同意与武汉协和医院伦理委员会审批后,在手术室无菌条件下抽取患者股骨骨髓5ml。经密度梯度离心法体外分离、培养MSCs,贴壁细胞传代,取第三代细胞,流式细胞仪进行表面标记物鉴定。22例患者及25例对照均观察骨髓间充质干细胞的集落形成能力,选取每组年龄相匹配的10例分别检测细胞活力、细胞周期、线粒体膜电位水平、细胞内活性氧水平、细胞成骨和成脂分化能力以及Wnt通路的活性和关键因子的表达水平。 结果激素性股骨头坏死组骨髓间充质干细胞的集落形成能力较股骨颈骨折组显著下降(19.6±7.7vs.262±6.2,P<0.001)。激素性骨坏死组的线粒体膜电位水平明显低于股骨颈骨折组,而活性氧水平高于股骨颈骨折组(P<0.05)。激素性股骨头坏死组骨髓间充质干细胞成骨能力显著低于股骨颈骨折组,而成脂分化能力则显著增强。免疫荧光显示Wnt通路上关键因子FZD1、β-catenin在激素性股骨头坏死MSCs上表达明显减弱,LiCL干预后能上调其表达,Wnt通路拮抗因子DKK1的表达则刚好相反。表明激素性股骨头坏死组MSCs中Wnt通路活性明显受抑制,PCR和western blot结果也证实了这点。 结论激素性股骨头坏死患者骨髓间充质干细胞数量和功能均下降,Wnt通路活性明显受抑制。激素通过改变骨髓间充质干细胞的生物学性能并最终引起骨代谢失衡、股骨头坏死。 目的表观遗传调控在干细胞分化过程中具有十分重要的作用。干细胞在从全能性至终末分化的每一阶段,都需建立稳定的表观遗传状态。在人类疾病中,研究最多的表观遗传机制是基因组DNA甲基化修饰。本研究观察激素性股骨头坏死患者骨髓间充质干细胞基因组DNA的甲基化状态及其对MSCs功能失调的影响,并探讨其中的机制。 方法选择2012-2013年就诊20例激素性股骨头坏死患者,22例股骨颈骨折患者。经患者知情同意与武汉协和医院伦理委员会审批后,在手术室无菌条件下抽取患者股骨骨髓5ml。经密度梯度离心法体外分离、培养MSCs,贴壁细胞传代,取第三代细胞,流式细胞仪进行表面标记物鉴定。LUMA技术检测22例患者、20例对照组MSCs及5’-氮杂胞苷(5'-Aza-dC)干预后的MSCs全基因组DNA整体甲基化情况,然后着重对干性基因(Oct、Nanog)和ABCB1基因启动子区CpG岛进行亚硫酸氢盐测序。同时实时定量PCR和WESTERN BLOT检测Oct4、Nanog、ABCB1、Runx2、PPAR-γ/osteocalcin等在转录和翻译水平的表达情况。检测三组细胞增殖能力、线粒体膜电位水平、细胞内活性氧水平、细胞成骨和成脂分化能力。 结果对三组MSCs全基因组DNA整体甲基化情况进行LUMA检测后发现激素性股骨头坏死组MSCs全基因组DNA整体甲基化率要明显高于对照组,5’-氮杂胞苷干预后整体甲基化率降低。亚硫酸氢盐测序进一步显示激素性股骨头坏死组MSCs的Oct4/Nanog和ABCB1基因启动子区的甲基化水平明显高于对照组。15μM5'-Aza-dC能在一定程度上促进激素性骨坏死组MSCs的增殖能力。激素性骨坏死组MSCs的线粒体膜电位水平明显低于股骨颈骨折组,15μM5'-Aza-dC干预后线粒体膜电位明显上升,并且其变化具有浓度依赖性。而活性氧水平高于股骨颈骨折组(P<0.05),15μM5'-Aza-dC干预后活性氧明显降低。15μM5'-Aza-dC能一定程度上恢复激素性股骨头坏死组MSCs成骨与成脂分化的动态失衡。实时定量PCR和WESTERN BLOT检测示：激素性股骨头坏死组MSCs的Oct4、Nanog、ABCB1、Runx2、PPAR-γ、 osteocalcin等基因在转录和翻译水平上较股骨颈骨折组均明显下调,15μM5'-Aza-dC能一定程度上上调这些基因的表达水平。 结论激素性股骨头坏死患者MSCs全基因组DNA存在过甲基化修饰,其中干性基因Oct4、Nanog和ABCB1基因的过甲基化修饰使MSCs丧失干性表型及自我防御能力,进而导致生物学功能失调并最终引起骨代谢失衡,股骨头坏死、塌陷。 目的探讨利用重编程的骨髓间充质干细胞治疗大鼠激素性股骨头坏死的有效性及其机制。 方法

关键词： 骨髓间充质干细胞   心力衰竭   Nkx2.5基因   地黄低聚糖   基因转染  

摘要： 背景：心力衰竭是严重危害人类健康的重要疾病之一。药物、介入及外科心脏移植是目前治疗心力衰竭主要方法，但不能从根本上改善患者的治疗状况，存在很大的局限性。干细胞移植能够再生功能心肌细胞，有望成为治疗心力衰竭的新手段。 目的：研究Nkx2.5基因、地黄低聚糖对骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭的影响及机制。 方法：采用全骨髓差速贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞，P3代骨髓间充质干细胞通过慢病毒转染Nkx2.5基因，培养至P5代以Brdu标记骨髓间充质干细胞用于干细胞移植。腹腔注射阿霉素制造心衰动物模型（累积剂量15mk/kg）。模型复制成功后随机分为5组:心衰对照组、骨髓间充质干细胞移植组、Nkx2.5基因转染骨髓间充质干细胞移植组、地黄低聚糖组、联合治疗组。采用心脏超声检测大鼠的心功能；处死后称取心脏湿重，并计算心脏湿重/体重的比值；心脏标本冰冻切片进行免疫组织化学染色检查；HE常规染色观察心肌的病理改变，Masson染色计算胶原容积分数检测心肌纤维化程度；提取左心室心肌组织的总RNA，实时定量PCR检测大鼠心肌中心肌转录因子MEF2、GATA4，心肌结构蛋白cTnI、CX43，心肌纤维化相关基因TGF-β1、CollagenⅠ的基因表达水平；提取心室心肌组织的总蛋白，Western blot检测MEF2、GATA4、cTnI、CX43的蛋白表达水平。 结果：1.大鼠注射阿霉素后，表现为体重降低，心脏收缩、舒张、泵血功能下降，表明动物复制心衰模型成功。2.大鼠心脏标本Brdu免疫组织化学染色显示骨髓间充质干细胞组、基因转染组、联合组心肌组织中存在干细胞来源的Brdu阳性细胞，说明股静脉注射可以使干细胞归巢进入病变心脏。3.各干预组大鼠体重较心衰组增加，心脏湿重/体重较心衰组改善（P<0.05）。4.与心衰组相比，各干预组左室收缩末直径、容积减小（P<0.05），以联合组的改善最为明显；与心衰组相比，各治疗组FS、EF升高（P<0.05），基因转染组与骨髓间充质干细胞组相比有更大程度的改善（P<0.05），联合组与基因转染组相比FS、EF改善有增大趋势，但无统计学意义（P>0.05）。5.心肌组织HE染色提示：心衰组心肌纤维排列紊乱，部分心肌细胞水肿、脂肪变性，细胞间隙增大，存在局灶性坏死；各治疗组病理改变有所改善，且局部可见较多的毛细血管增生；联合组改善最明显，细胞肿胀减轻，局灶性坏死灶明显减少。6.与正常组相比，心衰组心肌组织胶原容积分数明显升高（P<0.05）；与心衰组相比，各治疗组心肌组织胶原容积分数下降（P<0.05）；基因转染组与骨髓间充质干细胞组心肌组织胶原容积分数无明显差异（P>0.05）；联合组分别与基因转染组、地黄低聚糖组相比下降更为明显（P<0.05）。7.心衰组大鼠TGF-β1、CollagenⅠ的基因表达水平明显升高（P<0.05）；与心衰组相比，各治疗组TGF-β1、CollagenⅠ的表达下降（P<0.05）；联合组分别与基因转染组、地黄低聚糖组相比两基因表达水平明显降低（P<0.05）。8.各实验组心肌组织中特异性结构蛋白cTnI无明显改变。与正常组相比，心衰组CX43基因和蛋白表达水平明显下降（P<0.05）；与心衰组相比，各治疗组CX43表达水平升高（P<0.05）；基因转染组CX43的表达水平较骨髓间充质干细胞组升高更明显（P<0.05）。9.心衰组MEF2、GATA4表达水平较正常组明显下降（P<0.05）；与心衰组相比，各治疗组MEF2、GATA4表达水平升高（P<0.05）；基因转染组MEF2、GATA4表达水平较骨髓间充质干细胞组进一步升高（P<0.05）。 结论： 1.骨髓间充质干细胞、Nkx2.5基因转染骨髓间充质干细胞、地黄低聚糖与联合治疗均可以有效改善心衰大鼠左室收缩泵血功能，抑制心肌纤维化，改善心室重构，以联合治疗的效果最显著。 2.骨髓间充质干细胞、Nkx2.5基因转染骨髓间充质干细胞、地黄低聚糖与联合治疗均可改善心衰心肌的病理改变，减少细胞变性坏死，促进局部毛细血管增生，以联合治疗的改善最明显。各治疗组均可提高心衰心肌中CX43的表达水平，Nkx2.5基因转染骨髓间充质干细胞与联合治疗提高CX43的效果更明显。 3.骨髓间充质干细胞、Nkx2.5基因转染骨髓间充质干细胞、地黄低聚糖与联合治疗均可减少心肌组织中胶原蛋白含量，抑制胶原纤维形成，同时降低心衰心肌中TGF-β1、CollagenⅠ的表达水平，其中联合治疗的胶原形成抑制作用最强。 4.骨髓间充质干细胞、Nkx2.5基因转染骨髓间充质干细胞、地黄低聚糖与联合治疗可增强GATA4、MEF2的表达，发挥改善心功能、抑制心室重构的功能。 5. Nkx2.5基因转染可增强骨髓

关键词： 急性心肌梗死   骨髓间充质干细胞   基质细胞衍生因子1-α   脱细胞基质   临床疗效  

摘要： 前言　　心肌梗死等心血管疾病是一种严重威胁人类生命健康的疾病。随着生活方式的变化，我国冠心病发病率逐年升高。目前临床治疗冠心病有三大方法:药物保守治疗、经皮冠脉支架介入、冠脉搭桥手术。因为心肌的再生能力几乎没有，以上无论哪种方法都无法使梗死心肌恢复收缩功能达到治愈的效果。由于干细胞的多向分化潜能以及无限增殖分裂等特性，近年来，利用干细胞治疗心肌梗死已经成为临床科研的热门领域，以及具有广阔前景的治疗选择。干细胞种类繁多，目前最有希望应用于临床的是骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)和心脏干细胞(cardiacstemcells，CSCs)[1，2,3]。　　BMSCs是存在于骨髓中的具有高度自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞。由于BMSCs不易引起免疫排斥，易于外源基因的导入和表达，而同时又具有比其他间充质干细胞来源更加广泛、更加易于分离培养、可自体移植等特点，BMSCs治疗越来越受到学者们的青睐，被认为是即将被引入临床治疗的最佳干细胞。但是由于移植的BMSCs局部存活细胞少以及向心肌细胞分化能力低，使得BMSCs应用效果受限。解决这一难题，成为干细胞治疗心梗的关键。　　基质细胞衍生因子（Stromalcellderivedfactor1，SDF-1）是一种G蛋白偶联受体的配体，SDF-1为CXC家族成员。在体内SDF-1的形式主要有两种分别为SDF-1α和SDF-1β，以SDF-1α为主。心肌组织损伤后，外周血中循环干细胞数目明显增多，外周血中的循环干细胞随着血液循环可到达各个组织器官，而最终会在哪个组织器官栖息、增殖分化与SDF-1的作用有关。已有研究证实SDF-1能够促进骨髓干细胞的动员，增强细胞的运动能力和细胞黏附到纤维蛋白、间质和内皮细胞的作用[4]。　　但作为细胞因子的SDF-1α并不稳定，单独应用时，半衰期短，其易被蛋白酶水解，其蛋白水解活性以及在梗死区快速的扩散限制了其生物作用，如果能将SDF-1α控释，使其在梗死区达到稳定的浓度进而延长其针对BMSCs作用时间，这可能是基质细胞衍生因子辅助BMSCs治疗的一个关键。　　目前已有多种生物材料应用于传递生物活性物质研究，纤维蛋白[5，6]、胶原[7，8]人工基底膜[9，10]、藻朊酸盐[11]、自组装肽[12]、壳聚糖[13]等。但这些材料都不能充分的还原天然ECM的结构及化学组成[14]。近期已经开发出来源于自体细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）的脱细胞支架组织并应用于细胞工程学[15-18]。这种材料单独注射于小动物的梗死区域后，能够促进细胞的渗透并显示出心梗后的细胞保护作用[19,20]。通过多价粘合剂的肝素介导，ECM与细胞因子共价结合，使其可以作为载体捕捉及释放细胞因子，另外，心脏脱细胞外基质作为模拟原生心肌ECM生物及化学特性的最佳材料[19]，这种渗透性、纤维性的支架组织可以促进缺血区域的渗透性和血管再生[21]。　　由此，本研究将利用心脏脱细胞外基质作为缓释载体，采用体外和体内实验，分三个部分，以脱细胞基质缓释基质细胞衍生因子-1对BMSCs作用作为主要研究内容，研究BMSCs参与心肌再生的机理，尝试不同处理因素干预BMSCs，以增强BMSCs移植的治疗效果，改进干细胞治疗方法。　　关键词:骨髓间充质干细胞;基质细胞衍生因子;脱细胞基质;肝素化;缓释;急性心肌梗死;第一部分脱细胞基质缓释基质细胞衍生因子-1的体外研究　　目的　　用“去细胞化”制备心脏细胞外基质并进行SDF-1α修饰，通过观察SDF-1α的释放规律分析评价心脏脱细胞细胞外基质预载SDF-1α后的缓释情况。　　方法　　离体心脏取自健康成年大耳兔(2.0±0.5kg)，采用1％十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate，SDS)循环灌注的方法得到脱细胞心脏纤维骨架并制成匀浆。利用含有2％肝素、2％EDC及1.2％羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide，NHS)的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液（2-N-morpholoinolethanesulfonicacid，MES）中行肝素固化，进行SDF-1α修饰。利用ELISA测定3h、6h、24h、96h、168h液体浓度绘制释放曲线。　　结果　　通过ELISA计算不同时间点心脏脱细胞释放SDF-1α量，绘制出一条释放曲线。　　结论　　经过ELISA绘制曲线证实，心脏脱细胞外基质通过肝素化摄取并释放SDF-1α，其性质稳定。　　第二部分脱细胞基质缓释SDF-1α联合骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的效果观察　　目的　　动物在体实验采用SDF-1α预载肝素固化的心脏脱细胞细胞外基质与BMSCs共同作用，干预梗死心肌，观察其对梗死心肌的治

关键词： 乳腺增生   骨髓间充质干细胞   WNT   β-catenin   ddk-1  

摘要： 目的：乳腺增生(Hyperplasia of Mammary Gland, HMG)是指乳腺上皮增生又被叫做“乳腺囊性增生症”,是女性常见病、多发病,近年来发病率呈上升趋势。乳腺增生患者有2%的继发癌变率。然而目前对乳腺增生的治疗并不是十分的理想。 本实验经过给已创建乳腺增生模型的大鼠通过尾静脉注射骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells, BMSCs),进而验证间充质干细胞治疗乳腺增生的可行性。采用免疫组化和流式细胞学的方法检测β-catenin蛋白的含量和在细胞内外的表达,探讨间充质干细胞治疗乳腺增生的机制是否为间充质干细胞分泌的dkk-1通过抑制WNT途径中的β-catenin蛋白的表达从而治疗乳腺增生。 方法：将50只SD大鼠等分为正常组、模型组、乳癖消组、三苯氧胺组、BMSCs组每组各10只。模型组、乳癖消组、三苯氧胺组、BMSCs组注射苯甲酸雌二醇与黄体酮建立乳腺增生模型。模型建成后正常组、模型组正常喂养。乳癖消组每天给予乳癖消灌胃共28天,三苯氧胺组给予三苯氧胺灌胃共28天,BMSCs组在第1、8、15、22天分别通过尾静脉注射BMSCs。每周测量右腋下第二对乳头高度及直径。实验结束后经腹主动脉采血检测雌激素和孕激素水平。测量胸腺、脾脏、子宫、卵巢等脏器指数。采用免疫组化和流式细胞学的方法检测β-catenin蛋白的含量和在细胞内外的表达。制作HE切片观察组织细胞的形态。 结果：1乳头直径变化 正常组和模型组治疗前后乳头直径变化较小。BMSCs组经过治疗后乳头直径变化最大,乳癖消组次之,三苯氧胺组变化相对较小。正常组与其它各组均具有统计学差异P<0.05。模型组的改变与其它各组均具有统计学差异P<0.05。BMSCs组与乳癖消组和三苯氧胺组均有统计学差异P<0.05。乳癖消组与三苯氧胺组没有统计学差异P>0.05。提示：BMSCs治疗乳腺增生的效果优于三苯氧胺与乳癖消,三苯氧胺和乳癖消治疗乳腺增生的效果是没有显著差异的。 2乳头高度变化 正常组和模型组治疗前后乳头高度变化较小。BMSCs组经过治疗后乳头高度变化最大,乳癖消组次之,三苯氧胺组变化相对较小。正常组与其它各组均有统计学差异P<0.05。模型组的改变与其它各组均有统计学差异P<0.05。BMSCs组与乳癖消组和三苯氧胺组均有统计学差异P<0.05。乳癖消组与三苯氧胺组没有统计学差异P>0.05。提示：BMSCs治疗乳腺增生的效果优于三苯氧胺与乳癖消,三苯氧胺和乳癖消治疗乳腺增生的效果是没有显著差异的。 3激素水平 雌激素和孕激素各组间均无明显没有统计学差异P>0.05,雌激素与孕激素的比值有统计学差异P<0.05。提示：乳腺增生可能是孕激素和雌激素失调引起的,单独的雌激素与孕激素失调是否是导致乳腺增生的病因还需进一步验证。 4脏器指数 4.1子宫指数 乳腺增生大鼠的子宫指数小于正常大鼠的子宫指数。正常组与各组均有统计学差异P<0.05。模型组与三苯氧胺组有统计学差异P<0.05。乳癖消组与三苯氧胺组有统计学差异P<0.05。三苯氧胺组与BMSCs组有统计学差异P<0.05。提示：乳腺增生大鼠较正常大鼠的子宫质量小。 4.2卵巢指数 乳腺增生大鼠的卵巢指数小于正常大鼠的卵巢指数。正常组与各组均有统计学差异P<0.05。模型组与不不BMSCs组有统计学差异P<0.05。提示：乳腺增生大鼠较正常的大鼠的卵巢质量小。 4.3胸腺指数 各组均无统计学差异P>0.05。提示：乳腺增生对胸腺可能没有影响。 4.4肾上腺指数 正常组与乳癖消组、三苯氧胺组均有统计学差异P<0.05。 5β-catenin表达情况 正常组β-catenin含量最低。BMSCs组和模型组β-catenin含量高。三苯氧胺组和乳癖消组的β-catenin含量低。BMSCs组分别与正常组、三苯氧胺组有统计学差异P<0.05。BMSCs组与模型组、乳癖消组无统计学差异P>0.05。三苯氧胺组与乳癖消组没有统计学差异P>0.05。提示：间充质干细胞并不影响β-catenin蛋白在乳腺组织中的表达。 6β-catenin的免疫组化情况 β-catenin在正常组为细胞膜染色,β-catenin在模型组为细胞浆和细胞核染色,β-catenin在乳癖消组为细胞浆染色,在三苯氧胺组β-catenin为细胞浆染色,在BMSCs组β-catenin为细胞浆和细胞核染色。其中模型组和BMSCs组的染色程度相似,乳癖消组和三苯氧胺组的染色程度相似。提示：间充质干细胞其实不影响β-catenin蛋白在乳腺组织中的表达。 7显微镜下组织细胞形态学

关键词： 自身免疫性肝炎   骨髓间充质干细胞   动物模型   C57BL/6小鼠   细胞移植   示踪   免疫调节  

摘要： 目的 自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis,AIH)是一种病因不明的肝脏慢性炎症性疾病。目前,AIH的治疗主要是应用免疫抑制剂如糖皮质激素,它可单独应用也可与硫唑嘌呤联合应用,但这种治疗方案的完全缓解率并不高,且长期服药存在较多副作用,因此迫切需要寻找和探讨新的有效治疗方法.骨髓间充质干细胞(Bone-marrow-derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)是来源于骨髓中的一种多能干细胞,具有多方向分化的潜能及强大的免疫调节作用,大量动物实验和临床研究证实BMMSCs对多种自身免疫性疾病都有很好的治疗作用。本实验以刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)诱导小鼠建立AIH模型,通过尾静脉途径移植氯甲基苯甲酰胺(Chloromethyl-benzamidodialkylcarbocyanine,CM-Di1)标记的BMMSCs,观察其在AIH中的治疗效果,以及移植后细胞在肝组织内存活、分布情况,并对其可能的治疗机制进行探讨,为临床BMMSCs的应用提供实验基础。 材料和方法 1.小鼠BMMSCs的分离、培养、鉴定及体外标记采用全骨髓贴壁法体外分离C57BL/6、鼠的BMMSCs,并进行传代培养。采取第三代BMMSCs,应用流式细胞仪检测其细胞表型,并采用茜素红染色鉴定其骨向分化能力,以油红0染色鉴定其脂向分化能力。体外应用CM-Dil荧光染料标记第三代BMMSCs,荧光显微镜下观察细胞标记率。 ***模型小鼠的建立将C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为实验A、B、和C组及正常对照组。A组、B组和C组分别由尾静脉注射ConA10mg/kg-1、15mg/kg-1和20mg/kg,而正常对照组由尾静脉注射等体积的磷酸盐缓冲液。于注射后8h取血清检测谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平；取肝脏制作病理切片,根据Knodell肝炎活动指数评分系统对肝组织的炎症程度作出评分；取实验组小鼠心、脾、肺等组织观察有无炎症反应。 3. BMMSCs肝组织中的分布情况及对AIH的治疗效果由尾静脉注射移植CM-Dil标记的BMMSCs,依据不同细胞量,将C57BL/6小鼠AIH模型组分为4组,尾静脉输注ConA,30min后移植CM-Dil标记的BMMSCs。模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、模型Ⅲ组和模型Ⅳ组移植的细胞量分别为1×105,5×105,1×106,1×107；而空白对照组尾静脉输注ConA,30min后注入等体积的磷酸盐缓冲液。24h后处死小鼠,取血清标本检测ALT、AST及肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、干扰素γ (Interferon-γ, IFN-γ)及白细胞介素(Interleukin-4, IL-4)的水平；取肝组织行病理检查其炎症程度并作出Knodell评分；取模型组心、肝、脾、肺组织在荧光显微镜下观察切片组织荧光分布情况。 结果 1.小鼠BMMSCs原代培养在接种48h后可见贴壁细胞,培养到第三代细胞形态趋于统一,细胞排列呈束状、漩涡状或放射状。流式细胞仪检测BMMSCs的表面特异性抗原,结果显示CD29、CD90呈阳性表达,CD34呈阴性表达；经诱导后茜素红染色、油红0染色均呈阳性,符合BMMSCs的特征。体外应用CM-Dil荧光染料标记第三代BMMSCs,24h后荧光显微镜下观察可见CM-Dil标记在细胞膜上发红色荧光,且标记率达90%以上。 2.给以不同剂量的ConA后,A组、B组和C组血清ALT、AST的水平及Knodell评分均明显高于对照组(P<0.05),且随着ConA注射剂量的增加,上述各项检测指标均有增高(P<0.05)。实验组小鼠除肝组织病理可见肝损害,呈炎症改变以外,心、肺、脾未见损伤。 ***移植治疗后,模型Ⅳ组小鼠有4只死亡,其余各组小鼠未见死亡。24h后模型Ⅱ组、模型Ⅲ组小鼠血清ALT、AST的水平及Knodell评分均明显低于空白对照组(P<0.05)；模型Ⅰ组与空白对照组之间比较上述指标无显著性差异(P>0.05)。模型Ⅱ组、模型Ⅲ组小鼠血清TNF-α、IFN-γ及IL-4的水平明显低于空白对照组(P<0.05)；模型Ⅰ组与空白对照组之间比较上述指标无显著性差异(P>0.05)。荧光显微镜下在受损的肝组织内可观察到植入的BMMSCs,而在心、脾、肺等重要脏器并未观察到标记的BMMSCs。 结论 1.小鼠的BMMSCs可采用全骨髓贴壁法在体外分离、培养、传代、扩增。新型荧光染料CM-Dil体外标记BM

关键词： 骨髓间充质干细胞   Mash1基因   移植   癫痫   γ-氨基丁酸   分化  

摘要： 癫痫是发病率最高的中枢神经系统功能障碍，表现为慢性、反复发作的大脑神经元异常放电。世界卫生组织（World Health Organization, WHO）的数据显示，全球癫痫患者约为五千万至一亿，并且全球约5%的人群一生中具有罹患癫痫的风险。癫痫患者中有约30%行药物治疗效果欠佳，而药物治疗之外的手术治疗以及神经电刺激治疗（迷走神经电刺激术（vagus nerve stimulation, VNS）、脑深部电刺激治疗（deepbrain stimulation, DBS））等并不适合于所有癫痫患者特别是无手术指征者，因此，有必要寻找更有效、安全、持久的新治疗方法。 脑内伽马氨基丁酸（gamma-amino butyric acid, GABA）能神经元减少会导致癫痫是目前了解的可能核心机制。研究显示，源自不同类别干细胞（胚胎干细胞（embryonic stem cells, ESCs）、神经干细胞（neural stem cells, NSCs）、间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）等）的GABA能神经元可以抑制痫性发作、延长模型动物生存期，因此，大量学者把目光聚焦于基于干细胞的癫痫治疗策略。但细胞来源无法满足需求成为个中羁绊。 间充质干细胞因具有自我更新和多向分化潜能的特性使其成为细胞治疗策略的优良候选细胞并逐渐成为热点。作为间充质干细胞中的一员，骨髓间充质干细胞（bone morrow mesenchymal stem cells, BMSCs）来源于骨髓，它在人体内分布广泛，易于提取、分离，而且在应用于自体时不存在免疫排斥以及伦理学障碍，有研究显示BMSCs移植治疗可以抑制癫痫动物模型的自发性痫性发作（spontaneous recurrentseizure, SRS）的频率。使用其进行移植治疗并使之与宿主神经元形成突触联系帮助其功能重建是有可能实现的。但针对在癫痫模型中起关键作用的GABA能神经元的间充质干细胞来源的特异性分化以及用其治疗癫痫以促进疗效的研究很少。尽管有研究显示BMSCs可以经条件诱导培养向GABA能神经元样细胞分化，但需使用化学成分（如氯化钾（potassium chloride，Kcl），β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol, BME），维甲酸（retinoic acid， RA）等）或细胞因子（如碱性成纤维细胞生长因子）等，上述方案如果应用于体内则不仅难以实现而且可能产生无法预期的副作用。 碱性螺旋-环-螺旋（basic helix-loop-helix, bHLH）基因在干细胞的增殖与分化过程中起着重要的作用，其中，促分化转录因子哺乳动物无刚毛-鳞甲同源物（mammalian achaete-scute homologue，Mash1）基因作为bHLH家族中的一员，它不仅启动神经干细胞分化成神经元的过程，而且同时决定着神经元亚型的形成，与GABA能神经元的分化形成有着密切的关系。本研究假设，过表达BMSCs中的Mash1基因将可促进其向GABA能神经元样细胞分化。本研究采用慢病毒转染技术使BMSCs过表达Mash1基因，通过条件诱导培养技术诱导分化为GABA能神经元样细胞，对比BMSCs和Mash1过表达的BMSCs向GABA能神经元样细胞分化的比率以验证假设，并且将Mash1过表达的BMSCs移植入癫痫大鼠模型体内，观察其是否具有更进一步抑制癫痫的治疗效果。 第一部分大鼠来源的骨髓间充质干细胞的提取、体外分离、培养和鉴定 目的：建立成熟高效的提取、分离与鉴定BMSCs的方法。 方法：无菌手术取材2～3周龄大鼠的双侧股骨与胫骨，提取骨髓，分别使用全骨髓贴壁培养法和应用Histopaque分离液的密度梯度离心分离法分离细胞并培养，采用流式细胞仪鉴定细胞表面分子标记并通过成脂肪、软骨、骨诱导分化鉴定其多向分化潜能，使用噻唑蓝（3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT）检测增殖曲线。 结果：与全骨髓贴壁培养法相比，密度梯度分离法获得的BMSCs杂质细胞少、细胞形态更标准并且均一，增殖曲线标准（接种第1～3天处于潜伏期，随后进入对数生长期，至第7～9天时进入平台期），同时细胞表面分子标记表达（密度梯度分离法提取并传代得到的用于本实验研究的P3（passage3）代BMSCs低表达CD34抗原（（1.79±0.23）%，图4-A）并且高表达CD105抗原（（98.6±0.68）%，图4-B）、CD90抗原（（98.5±1.02）%，图4-C）和CD73抗原（（98.8±0.98）%，图4-D）及多向分化潜能均符合国际统一规范。

关键词： 股骨头坏死   同种异体脱钙骨   骨髓间充质干细胞   益肾通络法   动物实验  

摘要： 背景:随着激素在临床的广泛使用，激素性股骨头坏死的发病率逐渐上升。尽管有各种各样的理论，然而其发病机制尚不明确，且由于早期诊断率低且缺乏有效的治疗方法，许多患者最终不得不行手术治疗，严重影响患者的生活质量。中医药治疗激素性股骨头坏死疗效满意，且积累了大量的临床经验，但单纯中医治疗也存在不足。探讨如何将中医药的治疗优势与组织工程技术有机结合，寻求一种综合疗法，对提高临床治疗激素性股骨头坏死的疗效，减轻患者经济负担，提高生活质量具有重要意义。　　目的:制备激素性兔股骨头坏死模型（SANFH），通过组织工程骨(BMSCs/DBM)的髓芯减压植骨术联合中药治疗股骨头坏死，观察其对坏死股骨头的骨陷窝数及毛细血管数影响，以期为临床治疗激素性股骨头坏死寻找较好的解决途径。　　方法:本实验分为四个部分。　　第一部分，甲强龙联合脂多糖诱导兔股骨头坏死模型的建立。30只健康雄性新西兰兔，随机分为实验组(20只)和对照组(10只)，实验组耳缘静脉注射脂多糖(LPS)10μ g/kg，24h后肌注甲强龙20mg/kg，1次/d，共3d。对照组注射同等剂量的生理盐水。6周后观察兔股骨头X射线、μCT及病理学等指标的改变。　　第二部分，兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离、培养及鉴定。健康2周龄纯种新西兰大白兔1只，空气栓塞处死后，解剖分离出双下肢，剪断股骨、胫骨两端骨骺，反复冲洗骨髓腔和干骺端，采用全骨髓培养法分离出BMSCs，取第3代细胞观察其形态并绘制生长曲线。　　第三部分，同种异体脱钙骨(DBM)的制备及与兔BMSCs复合培养。健康雄性新西兰兔，空气栓塞处死后，取四肢长骨骨端及髂骨，剖成0.3cm×0.4cm×0.4cm大小骨块，脱水、脱钙、脱脂后，37℃烤箱干燥，玻璃瓶密封后环氧乙烷消毒。将制备好的DBM加入24孔板培养，同时加入密度为5×106/ml的第3代BMSCs，于37℃、5％CO2培养箱中培养，光镜下观察，复合培养1周后备用。　　第四部分，组织工程骨(BMSCs/DBM)的髓心减压植骨术联合中药治疗股骨头坏死的实验研究。成年新西兰兔30只，建立兔激素性股骨头坏死模型，随机分为五组:A髓芯减压+干细胞复合同种异体脱钙骨移植组十中药复方灌胃组;B髓芯减压+干细胞复合同种异体脱钙骨移植组;C髓芯减压+中药复方灌胃组;D单纯中药复方灌胃组;E单纯髓芯减压组。分别于术后2、4、8周时处死动物，行X线、MRI检查，组织病理切片染色后，在光镜下观察新骨痂及新生骨组织的联结情况。所有数据采用SPSS16.0统计软件包，定量指标以均数、标准差描述。多组对比分析，定量资料符合正态分布用方差分析，不符合正态分布用Wilcoxon秩和检验。组间两两比较，P≤0.05为差异有显著性意义，P≤0.01为差异有非常显著性意义，P＞0.05差异无统计学意义。　　结果:实验结果显示:　　第一部分，X线示股骨头密度减低，骨小梁模糊不清，可见一囊状透亮区，股骨头保持完整;μCT示结论:模型组股骨头骨小梁稀疏，股骨头可见部分塌陷;病理:骨小梁纤细，部分骨小梁断裂，髓腔内造血细胞减少，脂肪细胞体积增大，有的融合成泡状。大剂量激素能够成功安全便捷地诱导兔股骨头坏死动物模型。　　第二部分，BMSCs形态观察原代培养7天见散在少量贴壁细胞，呈梭形、多角形或不规则状，周围有大量杂质圆形细胞;传代一次培养后，贴壁细胞数量明显增多，细胞呈梭形、多角形，杂质细胞明显减少;第二次传代后细胞增殖快，呈多角形或不规则状，培养5天即可铺满皿底;至第三代BMSCs细胞外观呈长梭形，紧密排列，符合BMSCs细胞生长形态特征。　　第三部分，BMSCs有效地复合到了同种异体脱钙骨(DBM)上，同种异体脱钙骨具有较好的细胞相容性，BMSCs能在其表面和孔隙内附着、生长、增殖。第6天时，BMSCs与同种异体脱钙骨联合培养细胞增殖达稳定期，构建了理想的组织工程骨，此时为该组织工程骨移植的最佳时机。　　第四部分，(1)X线摄片:术后2周时各组股骨头骨密度均降低，差异无显著性意义。术后4、8周时各组骨密度有不同程度增高，其中A组和B组骨移植区的高密度影高于C、D、E组。　　(2)MRI:术后2周各组均可见明显坏死区低信号改变。术后4、8周各组坏死低信号区未见有明显扩大，但整个股骨头形态尚正常，A、B低信号区范围明显缩小，骨密度增高;C组低信号范围缩小;D、E组两组低信号区基本无变化。　　(3)组织学观察:术后2周各组均可见骨小梁纤细，部分骨小梁断裂，脂肪细胞体积增大;A、B组骨髓间充质干细胞增生，有原始毛细血管形成。术后4周A组可见骨髓间充质干细胞向骨母细胞分化，同时形成纤维状骨痂;B、C组骨痂相对A组较少，仍可见少量空骨陷窝;D、E组骨痂稀少，毛细血管稀少，骨化趋向不明显。术后8周A组修复区域增大，骨细胞更趋于成

关键词： 压力性尿失禁   干细胞治疗   尿道功能   神经功能  

摘要： 研究背景：干细胞可用于治疗女性压力性尿失禁(stress urinary incontinence，SUI)，而且目前正在进行有关的临床试验。然而，干细胞治疗的作用机制并未阐明。　　目的：本研究的目的是检测骨髓间充质干细胞（Bone marrow derived mesenchymal stem cell，BM-MSC）及其分泌物对模拟产伤动物模型功能及结构的恢复作用。　　方法：1、成年雌性大鼠BM-MSC获取及定向分化能力检测。浓缩分泌物(Concentrated conditioned media，CCM)的获取及微阵列蛋白检测;2、模拟产伤动物模型的制备，包括阴道扩张(Vaginal distention，VD)和双侧阴部神经挤压(Pudendal nerve crush，PNC);3、大鼠试验包含两个部分，第一部分含有三个组，分别是假损伤+生理盐水尾静脉注射（n=15），双重损伤+生理盐水尾静脉注射(n=13)，和双重损伤+BM-MSC尾静脉注射(n=16)。第二部分含有三个组,分别是假损伤+浓缩普通培养基(concentrated control media，CM)腹腔注射（n=18），双重损伤+CM腹腔注射(n=19)，和双重损伤+CCM腹腔注射(n=17)。手术三周后进行功能学及组织学检测，功能学检测包括漏尿点压力(Leak point pressure，LPP)，尿道外括约肌(External urethral sphincter，EUS)肌电图(Electromyography，EMG)，和阴部神经感觉支神经电位(Pudendal nerve sensory branch potential，PNSBP)检测。组织学检测包括弹性纤维蛋白染色，神经肌肉接头(neuromuscular junction，NMJ)和阴部神经免疫荧光染色。　　结果：1、从成年雌鼠股骨中获取的骨髓在低氧培养箱中培养，到第三代(Passage3，P3)时利用流式细胞仪分选细胞间黏附分子-1(Intracelluar adhesion molecule，ICAM-1)阳性的MSC，然后使用绿色荧光蛋白(Green fluroscence protein，GFP)慢病毒载体感染MSC。体外培养的MSC用光镜观察主要呈梭形和多角形，连续传代P8和P16后用流式细胞仪进行细胞表面标志检测发现CD29，CD90，CD54和CD45等干细胞标志物表达均呈阳性，P16细胞进行脂肪形成和成骨形成定向分化检测，脂肪形成培养到20-35天后用茜素红S染色观察分化程度，成骨形成20-35天后用油红O和苏木紫染色观察分化程度。P16骨髓间充质干细胞在无血清DMEM普通培养基中培养24h，使用低氧、5％CO2、37℃培养箱。将获得的上清液提取出来，置于离心过滤器中并在离心机中4000rpm离心75分钟获得浓缩50倍的终产物，然后用0.22um过滤器过滤获取的CCM并储存在1.5ml离心管中。CM使用无血清DMEM离心浓缩获得，方法类似。CCM在注射前进行细胞计数和诱导分化试验，结果显示CCM中没有细胞存在并且使用CCM培养的MSC生长速度要显著高于对照组。使用RayBio?大鼠蛋白抗体阵列检测CCM中的蛋白组成发现了63种不同表达强度的细胞因子和趋化因子。　　2、VD+PNC双重损伤延迟了阴部神经和尿道的功能恢复，其中LPP，EUS EMG结果显示到第三周时双重损伤组显著低于对照组，而VD和PNC单独损伤组与对照组相比均无显著差异，阴部神经横断(Pudendal nerve transection，PNT)组在损伤第六周时LPP和EUS EMG仍显著低于对照组。基于以上结果我们使用VD+PND双重损伤模型作为本实验研究模型。　　3、双重损伤+生理盐水或CM注射组在第三周时LPP显著低于对照组，说明尿道功能损伤和抗漏尿压力降低。而接受MSC或CCM注射的双重损伤大鼠三周后的LPP与对照组相比无显著差异，说明MSC和CCM均能促进尿道功能恢复。EUS EMG振幅增加值（峰值-基础值）在双重损伤接受生理盐水或MSC注射治疗后均显著低于对照组，EUS EMG振频和振幅增加值在其他各组中相比均无明显差别，说明MSC和CCM并未促进EUS EMG的恢复。PNSBP振频和振幅增加值（峰值-基础值）在双重损伤+生理盐水或CM注射组均显著低于对照组，而MSC或CCM注射组与对照组相比并无明显差别，说明MSC和CCM均能促进模拟产伤后的神经功能恢复。组织学研究发现，与对照组相比，双重损伤三周后尿道外括约肌横纹减少并且有肌肉萎缩现象。弹性纤维在对照组中表现为连续的长纤维，主要出现在尿道外括约肌外层，与括约肌平行。双重损伤三周后这些平行于括约肌的外层长纤维破坏并纠缠在一起，而括约肌内侧

关键词： 骨髓间充质干细胞   缺氧缺血性脑损伤   神经营养因子   神经功能评估  

摘要： 目的：本课题研究人骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells、BM-MSCs)用于新生重度缺氧缺血性脑损伤大鼠的治疗过程中神经生长因子(nerve growth factor, NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)神经营养素-3(neurotrophin-3NT-3)、胶质细胞源性神营养因子(glia cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)的表达变化及其与疗效的关系；初步分析了干细胞治疗双胞胎脑瘫患儿疗效特点,探讨与遗传基因的相关性。方法：60只6日龄SD大鼠被随机分为手术对照组(NS组)、空白对照组(BC组)和干细胞移植组(MSC组),每组20只,制备重度缺氧缺性脑损伤大鼠模型。将人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)经体外培养、扩增后,经枕大池移植到MSC组模型大鼠的蛛网膜下腔中,NS组用相同体积的生理盐水代替BM-MSCs,BC组于模型建立后不进行任何处理,经上述处理后3天、7天、14天和21天对大鼠进行改良神经功能缺损评分(Modified neurological Severity Scores, mNSS),同时收集大鼠脑脊液检测NGF、BDNF、NT-3、GDNF等神经营养因子的表达；收集8对双胞胎脑瘫患儿,签署知情同意书后行干细胞移植治疗,于移植前及移植后1月、6月进行运动功能评价,应用粗大运动功能量表(Gross Motor Function Measure.88, GMFM88)以及精细运动功能量表(Fine Motor Funetion Measure. FMFM)进行量化评估。结果:MSC组及NS组大鼠在移植后第7、14和21天,其mNSS评分与移植前和移植后第3天相比,均有显著性减低(P<0.05),其中MSC组降分程度大于NS组。而BC组仅在移植后21天出现明显差异并具有统计学差异(P<0.05)。脑脊液检测发现MSC组神经营养因子NGF、NT-3、BDNF及GDNF的表达较移植前有显著增加(P<0.05),而NS组和BC组表达反而有减少(P<0.05)；同卵双生脑瘫患儿接受干细胞移植后,两个体间的粗大运动功能和精细运动功能总评分改善程度有显著关联(r=0.786,P=0.036)。结论：经枕大池移植BM-MSCs后脑脊液中NGF、NT-3、BDNF、GDNF等神经营养因子增加,推断BM-MSCs移植后高表达神经生长因子,在脑损伤大鼠神经功能的修复机制中起到重要作用；同基因的两个双生脑瘫患儿之间运动功能的改善具有显著相关性,而双胎各对子之间运动功能改善程度不具相关性。推断遗传因素参与了脐带间充质干细胞移植对小儿脑瘫患者运动功能改善的作用机制。