关键词： 蛇床子素   骨质疏松症   骨髓间充质干细胞   信号通路   临床治疗  

摘要： 背景：骨质疏松症（osteoporosis,OP）是一类最常见的代谢性炎性骨质疾病，表现为全身骨密度降低，骨小梁数量减少，骨质微结构受损。其在口腔颌面部表现为颌骨骨量急剧丧失，加剧患者牙周骨组织的吸收与破坏，是导致天然牙的丧失的最主要原因。骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs）是具有多向分化潜力和免疫调节能力的一类细胞，运用BMSCs的免疫调节功能治疗骨质疏松症等炎性疾病已受到广泛研究，但其治疗效果有待提高。因此，如何提高BMSCs的免疫调节能力，进而更有效的治疗骨质疏松症，已成为研究人员研究的热点与面临的挑战。研究发现，中药小分子化合物蛇床子素已被证实具有多种药理学和生物学作用，因其能够调节细胞生物学特性如细胞增殖、分化、凋亡等受到关注。然而，蛇床子素能否增强BMSCs的免疫调控功能，从而将其运用到骨质疏松症的治疗中以获得更好的治疗效果，其相关分子机制缺乏研究。　　目的：探究骨质疏松症来源的BMSCs免疫调节能力与正常小鼠来源的BMSCs相比是否存在异常及所涉及的相关信号通路是否存在改变，并对该信号通路是否受到蛇床子素的调控进行研究，检测应用蛇床子素干预后能否影响骨质疏松症来源的BMSCs免疫调节能力，并进一步探究蛇床子素对BMSCs免疫调节能力的具体作用分子机制，为临床治疗骨质疏松症提供新思路和实验依据。　　方法：　　1.用雌性8周龄C57BL/6J小鼠构建雌激素缺乏所致的骨质疏松症模型（OVX）与假手术模型（Sham）。术后4周在Micro-CT对两组小鼠动物模型进行观察分析，评估是否构建成功。培养OVX组BMSCs(O/BMSCs)及Sham组BMSCs(S/BMSCs)。使用流式细胞仪对两组BMSCs表面抗原标记进行检测。对O/BMSCs与S/BMSCs进行相同条件下的成骨及成脂诱导，对两组BMSCs的多向分化能力进行鉴定及分析，并验证其增殖能力。　　2.运用蛋白组学研究分析蛇床子素干预后的BMSCs信号通路表达差异，筛选差异明显的免疫相关信号通路。检测O/BMSCs、S/BMSCs及经蛇床子素干预后的O/BMSCs细胞免疫相关凋亡信号通路Fas/FasL基因及蛋白表达差异。以及分别将O/BMSCs、S/BMSCs及经蛇床子素干预后的O/BMSCs与T淋巴细胞体外共培养，检测三组BMSCs凋亡T淋巴细胞的能力。　　3.选取雌性8周龄健康的C57BL/6J小鼠，进行OVX手术构建骨质疏松症模型及其假手术对照Sham模型，随机分组后通过尾静脉将O/BMSCs、S/BMSCs及经蛇床子素干预后的O/BMSCs注射入对应小鼠中进行细胞治疗，运用micro-CT分析各组经过细胞治疗后骨质疏松症小鼠的骨参数。运用Elisa检测各组小鼠炎性因子TNF-α,IFN-γ,IL-1β和IL-6的表达水平，并检测各组T淋巴细胞凋亡水平。　　4.运用蛇床子素干预正常健康小鼠BMSCs，运用westernblot及Real-timePCR检测来源于正常健康小鼠个体BMSCs与蛇床子素干预正常健康小鼠BMSCs中Fas/FasL信号通路的表达差异，以及将正常健康小鼠个体BMSCs与蛇床子素干预正常健康小鼠BMSCs与T淋巴细胞体外共培养，运用流式细胞仪检测两组BMSCs凋亡T淋巴细胞水平。　　5.选取雌性8周龄健康的C57BL/6J小鼠，通过OVX手术构建骨质疏松症模型及其假手术对照组Sham小鼠模型，将分离培养的正常健康小鼠个体BMSCs与蛇床子素干预后的正常健康小鼠BMSCs通过尾静脉注射入相应小鼠体内，运用micro-CT分析各组经过细胞治疗后骨质疏松症小鼠的骨参数。运用Elisa检测各组小鼠炎性因子TNF-α,IFN-γ,IL-1β和IL-6的表达水平，并检测其凋亡T淋巴细胞的水平。　　结果：　　1.术后4周，对OVX组小鼠动物模型与Sham组小鼠动物模型股骨干骺端进行Micro-CT检测后发现，与Sham组小鼠相比，OVX组小鼠骨密度、骨小梁数量减少，骨小梁空隙增多。两组BMSCs细胞形态基本一致，两组细胞均表达MSCs表面标志，且都拥有多向分化的能力。两组细胞相比，S/BMSCs的成骨分化能力较O/BMSCs强，而成脂能力相对较低;两组细胞增殖能力没有明显差异。　　2.O/BMSCs、S/BMSCs及蛇床子素干预后的O/BMSCs三者相比，Fas和FasL基因表达水平无明显差异，而O/BMSCsFas和FasL蛋白表达水平明显低于S/BMSCs和蛇床子素干预后的O/BMSCs，且S/BMSCs和蛇床子素干预后的O/BMSCsFas和FasL蛋白表达水平无明显差异;O/BMSCs组T淋巴细胞凋亡水平明显弱于S/BMSCs组T淋巴细胞及蛇床子素干预后的O/BMSCs组T淋巴细胞凋亡水

关键词： 胰腺肿瘤   外泌体   骨髓间充质干细胞   肿瘤相关巨噬细胞  

摘要： 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌的外泌体调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化对胰腺癌的治疗作用。方法取4周龄C57BL/6雄性小鼠10只, 体重约20 g, 提取BMSC分泌的外泌体并用PKH26标记。取4~6周龄雌性BALB/c-nu/nu品系裸鼠30只, 无特定病原体级, 体重(18.56±0.85)g, 建立胰腺癌裸鼠模型, 并将其分为3组, 每组10只:空白对照组经鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS);门静脉治疗组经门静脉注射含外泌体的PBS悬液;尾静脉治疗组经尾静脉注射含外泌体的PBS悬液。8周后处死裸鼠, 检测胰腺组织中PKH26表达阳性的细胞百分比, 测定原位肿瘤体积、抑瘤率, 观察肿瘤转移情况、腹水情况、瘤重、瘤肝重。随后检测外周血M1型以及M2型巨噬细胞活化标志物的基因表达、外周血胰腺癌细胞标志物B7-H4、肿瘤糖类抗原199的表达以及胰腺肿瘤组织细胞中Survivin和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果门静脉治疗组抑瘤率(72.4±21.6)%与尾静脉治疗组抑瘤率(70.1±20.7)%相比, 差异无统计学意义(t=0.24, P=0.811)。与空白对照组裸鼠相比, 门静脉治疗组与尾静脉治疗组裸鼠的肿瘤体积、瘤重、瘤肝重、肝转移率、肝转移灶数量、腹水发生率和其他器官转移灶总数均降低, 差异具有统计学意义(均P<0.05)。与空白对照组相比, 门静脉治疗组和尾静脉治疗组裸鼠的iNOS、CD68升高, 而Arginase、CD206、B7-H4、肿瘤糖类抗原199、Survivin和MMP-9均降低, 差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论 BMSC分泌的外泌体可抑制TAM向M2表型转化, 并诱导其向M1表型转化, 进而抑制胰腺癌的增殖、侵袭、转移能力, 达到抑癌的作用。

关键词： 骨质疏松   绝经后骨质疏松症   骨髓间充质干细胞   中药   补肾  

摘要： 随着人口老龄化进程加快,骨质疏松症已成为研究热点之一。绝经后骨质疏松症(PMOP)作为骨质疏松症的主要类型,是导致老年女性骨折及死亡的隐形杀手。目前治疗骨质疏松症的药物以抑制骨吸收和促进骨形成为主,由于存在诸多不良反应患者依从性低。而中医药防治骨质疏松因疗效确切,副作用小易被接受。中医治疗以补肾为主,具体治法分为温阳补肾、滋阴补肾、阴阳双补、补肾活血等。补肾方剂主要通过发挥类似雌激素作用,调控骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的增殖、分化、自噬等相关途径的基因及蛋白,维持骨吸收及骨形成平衡,治疗PMOP。因此,研究补肾中药对BMMSCs干预的机制,能为防治PMOP药物的研究和发展提供新方向。

关键词： 水凝胶   骨髓间充质干细胞   组织修复   子宫内膜损伤   组织工程  

摘要： 背景:水凝胶作为一类组织工程的支架材料,为移植细胞在体内增殖分化提供了良好的物理支持。目的:探讨水凝胶搭载骨髓间充质干细胞对大鼠受损子宫内膜的修复效果。方法:将分离培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞进行CM-Dil标记,然后制备成泊洛沙姆407-骨髓间充质干细胞复合物。取30只8周龄SD雌性大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、水凝胶组、干细胞组、复合物组,除假手术组外,其余4组建立子宫内膜机械损伤模型,然后每侧宫角分别注射0.2 mL PBS、泊洛沙姆407水凝胶、骨髓间充质干细胞悬液或泊洛沙姆407水凝胶-骨髓间充质干细胞悬液。观察7 d后取出子宫组织,进行苏木精-伊红染色、免疫荧光染色和酶联免疫吸附检测。结果与结论:①与假手术组相比,模型组、水凝胶组、干细胞组与复合物组内膜厚度变薄(P<0.05),其中水凝胶组、干细胞组和复合物组内膜厚度较模型组均有明显改善(P<0.05),复合物组改善最明显,但水凝胶组与干细胞组间差异无显著性意义(P>0.05);②与干细胞组相比,复合物组CM-Dil标记的骨髓间充质干细胞迁移至子宫内膜数量更多(P<0.01),并且两组细胞均具有向子宫内膜间质细胞分化潜能;③与模型组相比,水凝胶组、干细胞组和复合物组子宫内膜组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和和肿瘤坏死因子α水平明显下降(P<0.01),其中,干细胞组和复合物组白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平显著低于水凝胶组(P<0.05),干细胞组白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平低于复合物组(P<0.01),但两组白细胞介素1β水平无显著差异(P>0.05);④结果表明,泊洛沙姆407水凝胶搭载骨髓间充质干细胞治疗子宫内膜损伤具有可行性,为修复受损子宫内膜提供新思路。

关键词： 骨髓间充质干细胞   CD133^(+)肾脏细胞   急性肾损伤  

摘要： 目的:研究骨髓间充质干细胞(MSC)与分化抗原簇蛋白133(CD133)+肾脏细胞治疗急性肾损伤的机制。方法:选取6~8周龄雄性C57 BL/6的48只小鼠作为实验对象,根据不同的治疗方案将48只小鼠分为正常对照组、缺血再灌注损伤(I/R)组、I/R+MSCs组及I/R+CD133^(+)组4组,每组12只。比较各组小鼠术后不同时间点血清尿素氮(BUN)与肌酐(Cr)水平、ATN评分、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白细胞介素⁃10(IL⁃10)、肝细胞生长因子(HGF)及骨形态发生蛋白⁃7(BMP⁃7)水平。结果:I/R+MSCs组、I/R+CD133^(+)组术后BUN、Cr水平、ATN评分、TNF⁃α水平均显著高于正常对照组;术后4、7 d的BUN、Cr水平、ATN评分、TNF⁃α水平均低于I/R组,其中I/R+MSCs组以术后8 d最为显著(P<0.05);I/R+CD133^(+)组以术后4 d最为显著(P<0.05)。I/R+MSCs组、I/R+CD133^(+)组术后IL⁃10、HGF、BMP⁃7水平均低于正常对照组,高于I/R组(P<0.05)。与I/R+MSCs组比较,I/R+CD133^(+)组术后BUN、Cr水平,ATN评分及TNF⁃α水平较低,IL⁃10、HGF、BMP⁃7水平较高。结论:骨髓MSCs、CD133^(+)肾脏细胞均可通过内分泌方式调控细胞因子,促进由I/R诱导的AKI恢复,但CD133^(+)肾脏细胞对AKI的修复作用更为显著。

关键词： 骨性关节炎   骨髓间充质干细胞   IGF1基因   慢病毒   大鼠   实验研究  

摘要： 目的基于动物实验探讨IGF1基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗骨性关节炎(OA)的作用。方法取40只SPF级雄性Wistar大鼠,10~12周龄,体重280~320 g,按照随机数字表法分为BMSCs+IGF1组、BMSCs组、模型组,每组10只,采用膝关节前交叉韧带切断法建立OA模型,其余10只大鼠用于BMSCs的分离。BMSCs+IGF1组大鼠膝关节腔内注射0.1 ml IGF1基因慢病毒转染BMSCs(1×107个),BMSCs组大鼠膝关节腔内注射0.1 ml BMSCs(1×107个);模型组大鼠膝关节腔内注射0.1 ml生理盐水。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)、CTX-Ⅱ、白介素(IL)-1α、IL-6水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测大鼠膝关节软骨组织中骨钙素(OC)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达水平;采用Western blot检测大鼠膝关节软骨组织中β-catenin、Wnt1、GSK-3β的蛋白表达水平。结果BMSCs表面抗原CD29、CD34、CD45、CD105高表达,慢病毒转染效率(90.36±2.18)%;BMSCs+IGF1组大鼠膝关节软骨完整,无明显退化,关节面平整,其他两组均存在不同程度软骨退变,关节面不平。与模型组比较,BMSCs组血清CTX-Ⅰ、CTX-Ⅱ、IL-1α、IL-6水平,OC、GSK-3β、ALP、Runx2 mRNA表达水平,β-catenin、Wnt1、GSK-3β蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与BMSCs组比较,BMSCs+IGF1组以上指标均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IGF1基因慢病毒转染BMSCs能有效改善OA大鼠的病理损伤,能明显促进膝关节损伤修复。

关键词： 中药   骨髓间充质干细胞   缺血性脑卒中   作用机制   外泌体  

摘要： 脑卒中是威胁人类健康的主要疾病之一,其中缺血性脑卒中约占70%。缺血性脑卒中具有病理机制复杂、发病率高、致残率高和死亡率高的特点。目前,对缺血性卒中有效的临床治疗措施非常有限,迫切需要开发新的有效的治疗措施以改善患者预后。近年来,骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对包括缺血性脑卒中在内的多种疾病展现出巨大的治疗潜力,成为一个新的研究热点,但由于BMSCs移植后在人体中的归巢率和存活率低等问题,其对缺血性卒中的临床疗效有待进一步提升。中药具有多成分、多途径、多靶点等特点,其对缺血性脑卒中的良好疗效受到广泛关注。中药与BMSCs移植均具有良好的整体脑保护作用,二者联合对缺血性卒中的疗效明显优于单独应用,作用机制包括提高BMSCs移植效率、促进血管新生、增强神经可塑性、改善神经炎症、增强神经保护、调控血脑屏障及外泌体。这种中药与现代前沿细胞疗法相结合的治疗方法体现了中西医结合的优势所在,为缺血性脑卒中的防治和提高BMSCs移植疗效提供了新的模式和思路。

关键词： 干细胞   骨髓间充质干细胞   慢性阻塞性肺疾病   Wnt3a   Wnt/ß-catenin信号通路   白细胞介素10   肿瘤坏死因子α  

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)治疗呼吸系统疾病具有广泛的应用前景,近年来研究显示Wnt/β-catenin信号通路在调控BMSCs定向分化及促进旁分泌方面起重要作用。目的:探讨激活Wnt/β-catenin信号通路对BMSCs移植治疗慢性阻塞性肺疾病的影响。方法:采用全骨髓贴壁法提取大鼠BMSCs,用Wnt3a慢病毒转染大鼠BMSCs。采用气管内注入脂多糖联合烟熏法构建慢性阻塞性肺疾病大鼠模型,造模完成后经尾静脉植入BMSCs、GFP-BMSCs、Wnt3a-BMSCs,模型组和正常对照组经尾静脉注入PBS,分别在第7,14,28天处死各组大鼠,苏木精-伊红染色观察肺组织病理改变,ELISA检测动脉血中白细胞介素10、肿瘤坏死因子α水平。结果与结论:①苏木精-伊红染色病理结果显示:3个BMSCs移植组较模型组病理改变明显改善,其中Wnt3a-BMSCs组改善相对明显;②在相同时间点,3个BMSCs移植组动脉血中肿瘤坏死因子α水平低于模型组(均P<0.05),其中BMSCs组、GFP-BMSCs组差别不大,但Wnt3a-BMSCs组明显低于其他两组(P<0.05);3个BMSCs移植组动脉血中白细胞介素10水平高于模型组(均P<0.05),其中BMSCs组、GFP-BMSCs组差别不大,但Wnt3a-BMSCs组明显高于较其他两组(P<0.05);③结果表明,过表达Wnt3a(Wnt/β-catenin信号通路激活)的BMSCs植入慢性阻塞性肺疾病大鼠体内,可显著改善肺组织病理形态,提高抗炎因子白细胞介素10水平,降低促炎因子肿瘤坏死因子α水平,增强BMSCs的抗炎作用。

关键词： 骨髓间充质干细胞   骨缺损   股骨头坏死   骨关节炎   脊髓损伤   软骨   椎间盘   进展  

摘要： 骨髓间充质干细胞具有分化形成软骨细胞、成骨细胞、神经细胞等多向分化潜能,具有促进骨与软组织的修复且取材方便、易于培养的优势,目前已有大量研究显示,其在治疗骨科疾病领域得到了广泛的关注。近年来,骨髓间充质干细胞应用于骨科疾病治疗的基础和临床研究已成为热点,笔者就近年来骨髓间充质干细胞用于治疗骨科疾病的应用现状和疗效做一综述。

关键词： 化疗型卵巢早衰   骨髓间充质干细胞   归巢   尾静脉   凋亡  

摘要： 目的:观察电针联合大鼠骨髓间充质干细胞对大鼠化疗型卵巢早衰的治疗效果并探究电针影响骨髓间充质干细胞的机制。方法:1.从大鼠胫、腓骨中分离BMSCs进行培养,并对其表面标记物表达水平以及成骨、成脂分化能力进行鉴定;2.腹腔注射环磷酰胺溶液制备化疗型大鼠卵巢早衰的动物模型;3.动物模型制备完成后,连续5d取大鼠阴道涂片,通过亚甲蓝染色观察大鼠动情周期变化来确定造模是否成功;4.动物分为正常组、POF组、干细胞组、联合治疗组,干细胞组和联合治疗组大鼠尾静脉注射2×10个BMSCs。联合治疗组进行连续7d的电针治疗。5.对移植后各组大鼠进行血清激素、卵巢组织切片及卵泡计数、BMSCs归巢及颗粒细胞凋亡进行检测。结果:***细胞形态为长梭形。流式细胞检测CD29、CD44、CD90、CD45的阳性表达率为95.24%,98.55%,99.73%,2.79%,并可在特定诱导条件下分化为脂肪细胞和骨细胞。2.经过环磷酰胺造模后,大鼠出现活动量减少、进食进水量减少、毛发光泽消失。阴道涂片亚甲蓝染色发现动情周期紊乱或延迟,证明造模成功。3.治疗结束后,两个治疗组的大鼠血清雌二醇含量明显升高,血清卵泡刺激素含量明显下降(P<0.05)。4.卵巢组织病理结果发现治疗后的生长阶段卵母细胞数量增多,颗粒细胞结构明显致密,数量增加。***归巢水平检测发现,联合治疗组归巢到卵巢的BMSCs明显多于干细胞组(P<0.01),趋化因子受体CXCR4蛋白表达水平升高(P<0.05)。6.环磷酰胺造模后卵巢组织颗粒细胞凋亡明显增加,经过治疗后的两组凋亡细胞数量明显减少,而联合治疗组的凋亡细胞数量则更少(P<0.05)。与干细胞组相比,联合治疗组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达增高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论:1.采用骨髓贴壁法,成功培养出BMSCs;2.采用腹腔注射环磷酰胺的方法可成功制备化疗型卵巢早衰大鼠模型;3.电针联合BMSCs治疗化疗型卵巢早衰可获得更好的疗效。