关键词： 骨髓间充质干细胞   miRNA-21   心肌梗死  

摘要： 目的:通过过表达或抑制micro RNA-21(mi R-21)在SD大鼠骨髓间充质干细胞SD-BMSCs(MSCs)内的表达,评估其在治疗心肌梗死的效果上的变化,并研究其作用机制。方法:采用全骨髓差异贴壁法分离培养SD大鼠MSCs至第4代,使用脂质体转染法转染mi R21-agomir(过表达)及mi R-21 antagomir(抑制)调控mi R-21在MSCs内的表达,转染成功后收集细胞并收集条件培养基,用于后续研究。体内实验中,建立SD大鼠心肌梗死模型后,采用心肌内注射方法,分别将MSCsmi R-21 agomir组、MSCsmi R-21antagomir组、MSCs未转染组及PBS移植至心梗及周边区域,通过检测大鼠心梗后心功能变化及心梗面积评估治疗效果。体外实验中,购买原代脐静脉内皮细胞(HUVEC),心肌细胞系H9C2细胞,子宫颈癌细胞系Hela细胞。以Hela细胞为载体,通过双荧光素酶报告验证mi R-21的靶点是否为Jagged1。同时利用收集的MSCs转染组产生的培养基和MSCs未转染组产生的培养基及含有10%FBS+双抗的DMEM/HIGH培养基(空白对照),用作以下两个实验,一是处理HUVEC细胞72小时后在Matrigel基质胶上培养,于12小时观察成管样结构;二是处理H9C2细胞72h后加入CCK-8溶液孵育1个小时,检测细胞增殖情况。结果:体内实验中:MSCsmi R-21 antagomir组平均LVEF(%)变化值:17.14±2.63,MSCs mi R-21 agomir组LVEF(%)变化值:13.09±1.74,MSCs未转染组LVEF(%)变化值:13.34±2.25,三组与对照组LVEF(%)变化值:7.09±4.23相比,心功能恢复效果更佳,差异有统计学意义(P<0.05),三组之中,MSCsmi R-21antagomir组与心功能恢复效果最佳,与其他两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。通过Masson染色分析心梗面积发现心梗区域纤维化组织与正常心肌面积所占横截面外周径比值(%):MSCsmi R-21 antagomir组最小,为10.50±3.15,与MSCsmi R-21 agomir15.91+4.12、MSCs未转染组20.34±3.25、PBS组37.09±6.23均有统计学差异(P<0.05)。心梗区域纤维化组织与正常心肌面积所占横截面面积比值(%)MSCsmi R-21 antagomir组同样最小,为8.31±2.35,与MSCsmi R-21 agomir组19.91+4.93、MSCs普通组25.14±2.19、PBS组31.04±5.93均有统计学差异(P<0.05)。通过双荧光素酶报告基因验证,我们发现mi R-21可与Jagged1的m RNA 3’UTR段结合,说明mi R-21对Jagged1具有调控作用。q RT-PCR显示,转染mi R-21 antagomir的MSCs内的Jagged1、NOTCH、VEGF等基因全部上调。体外管样生成实验中,MSCsmi R-21 agomir培养基组体外管样结构连接长度(11976.14±866.62)与MSCsmi R-21 antagomir培养基组(12196.52±858.00)、MSCs未转染培养基组(12275.09±561.74)之间均无统计学差异(P>0.05),但三组与空白组之间均有统计学差异(P<0.01);CCK8实验中,抑制了mi R-21在MSCs内的表达后,其条件培养基促心肌增殖的能力得到了明显的增强。结论:抑制了mi R-21在MSCs内的表达后,其治疗心肌梗死的能力得到了增强。mi R-21可与Jagged1 m RNA结合,对其产生调控。抑制了mi R-21在SD大鼠MSCs的表达后,Jagged1,Notch,VEGF等基因上调。MSCs产生的条件培养基具有促进心肌细胞增殖的能力,抑制了mi R-21在其内的表达后,这种能力得到了提升。MSCs产生的条件培养基也具有促进管样结构生成的能力,但这种能力与mi R-21的表达无关。

关键词： 骨髓间充质干细胞   microRNA-211   STAT5A   迁移   心肌梗死  

摘要： 背景：骨髓间充质干细胞(MSCs)移植修复梗死心肌已经成为研究的热点。MSCs迁移到损伤心肌区域是修复组织至关重要的一步,但很多研究均表明经血管移植时,迁移到受损区域的MSCs极少。因此,研究调控MSCs迁移的相关机制至关重要。我们前期研究证实,缺氧预处理能提高MSCs的迁移能力,同时缺氧预处理也能上调miR-211的表达。根据相关文献报道,miR-211能调控多种肿瘤细胞的迁移。因此,我们推测miR-211在MSCs迁移过程中起重要作用。本课题的目的就是研究miR-211对MSCs迁移能力的调控作用及具体机制。 方法和结果：体外的Transwell迁移实验提示,miR-211过表达能提高MSCs的迁移能力,而下调miR-211的表达能降低MSCs的迁移能力。miR-211过表达或表达下调的雄性MSCs经尾静脉移植到雌性大鼠急性心梗模型中,2天后检测GFP表达和SRY基因来定性和定量MSCs迁移到梗死周边区的能力。实验结果提示miR-211过表达能增加MSCs迁移梗死周边区的细胞数量。心梗28天后,与PBS及MSCs对照组相比,miR-211过表达的MSCs组大鼠心功能改善,疤痕面积缩小。Targetscan等生物信息学软件预测STAT5A可能是miR-211的靶基因,双荧光素酶报告基因系统、RT-PCR和蛋白电泳,证实miR-211能结合至STAT5A的3’-UTR区,调控STAT5A的转录。体内和体外功能学实验提示,上调STAT5A能抑制MSCs的迁移能力,下调STAT5A能提高MSCs的迁移能力。miR-211过表达诱导的迁移能力增加,能被STAT5A抑制。根据文献报道,STAT3在MSCs的迁移中起到及其重要的作用,且缺氧预处理也能调控STAT3的活性。我们预测STAT3与miR-211可能有相互作用。染色质免疫共沉淀和荧光素酶报告基因实验验证STAT3可以直接结合到miR-211的启动子区域并能调控miR-211的表达。 结论：STAT3/miR-211/STAT5A信号通路在MSCs的迁移过程中起到关键作用。经静脉移植miR-211过表达的MSCs改善心梗后心功能。

关键词： SD大鼠   骨髓间充质干细胞   全骨髓贴壁法   细胞培养   流式细胞仪   骨髓间充质干细胞   慢病毒载体   转染   神经营养因子-3   超顺磁性氧化铁   脊髓损伤   骨髓间充质干细胞   蛛网膜下腔   神经营养因子-3   修复  

摘要： 脊髓损伤是临床上较常见的而且非常严重的神经系统创伤性疾病,常常导致严重的运动和感觉功能障碍,而且目前临床上尚无行之有效的治疗方法。骨髓间充质干细胞的移植治疗结合基因疗法是当前脊髓损伤治疗研究的热点。在脊髓损伤后,神经营养因子在神经修复中起着非常重要的作用。为了探索一条脊髓损伤治疗的新途径,我们的研究将包含神经营养因子-3基因通过慢病毒转染骨髓间充质干细胞,并在用超顺磁性氧化铁颗粒标记细胞后,经蛛网膜下腔移植到体内,使其在体内能稳定表达神经营养因子-3,同时在移植后,利用磁场的作用靶向传送移植的干细胞到病变区,以加速干细胞向病变区的趋化运动的速率和增加干细胞在病变区的数量,从而使骨髓间充质干细胞的神经修复的作用得到加强、效率得到提高,进一步促进功能恢复,提高治疗效果。同时,我们还能借助MRI观察移植的磁标干细胞在体内的分布。第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离、培养、传代、鉴定目的：使用全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠的骨髓间充质干细胞,将提取的细胞经传代培养后,并从细胞的形态、表面抗原及增值能力方面进行鉴定,为实验提供细胞来源。方法: 1.采用全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠的骨髓间充质干细胞,并对获得分离的细胞进行传代培养,同时对细胞形态进行观察。2.用MTT法测定分离的细胞的生长曲线,对其生长规律进行分析。3.用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞的表面标志物(CD29、CD34、CD44、CD45),以鉴定所培养细胞是否具有骨髓间充质干细胞的特征。结果: 1.经全骨髓贴壁法分离纯化大鼠的骨髓间充质干细胞,呈长梭形,在体外可以培养、传代。2.经MTT法测定第3、4、5代细胞的生长曲线呈S型,且形态相似,具有较强的增殖能力。3.经流式细胞仪检测细胞的表面标记志物,细胞表面的CD29和CD44表达呈阳性,CD34和CD45表达呈阴性,这符合一般骨髓间充质干细胞的特征。结论： 应用全骨髓贴壁法可以分离纯化大鼠的骨髓间充质干细胞,该法操作简单、经济实用、提取率高。所获得的细胞生长增殖旺盛、可进行连续多次传代,可以满足研究使用。第二部分大鼠骨髓间充质干细胞的神经营养因子-3基因转染和超顺磁性氧化铁颗粒标记目的： 利用慢病毒将神经营养因子-3转导入骨髓间充质干细胞,使其能稳定表达神经营养因子-3,同时用超顺磁性氧化铁颗粒标记干细胞,为脊髓损伤的细胞移植治疗做准备。方法: 1.首先通过重叠PCR扩增att B1-NTF3-att B2,然后利用Gateway技术构建p Down-NTF3,利用Gateway技术构建包含神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)及红色荧光蛋白(red fluorescent protein,Ds Red)基因的质粒p ***3d.P/puro-EF1α>NTF3>IRES/Ds Red Express2,最后进行慢病毒包装。2.利用慢病毒对骨髓间充质干细胞转染NT3-Ds Red基因。3.实时荧光定量PCR检测转染NT3-Ds Red基因的骨髓间充质干细胞的NT3 m RNA的表达。*** blotting检测转染NT3-Ds Red基因后的骨髓间充质干细胞的NT3蛋白的表达。5.利用浓度为25μg/ml的超顺磁性氧化铁(Superparamagnetic Iron oxide,SPIO)颗粒标记NT3-Ds Red基因转染的鼠骨髓间充质干细胞,然后用普鲁士蓝染色检测细胞的标记率。结果: 1.构建的包含NT3-Ds Red基因的质粒p ***3d.P/puro-EF1α>NTF3>IRES/Ds Red Express2经测序检验完全正确,并能够成功转染293FT细胞,包装好的慢病毒滴度约为1.4×108TU/ml。2.成功转染NT3-Ds Red基因后的骨髓间充质干细胞荧光显微镜下可以观察到红色荧光。3.实时荧光定量PCR检测显示转染NT3-Ds Red基因的骨髓间充质干细胞的NT3 m RNA表达水平是未转染NT3基因的骨髓间充质干细胞的13倍。*** blotting检测结果显示转染NT3-Ds Red基因的骨髓间充质干细胞可以高表达NT3蛋白,而未转染NT3基因的骨髓间充质干细胞则不能表达。5.普鲁士蓝染色显示,浓度为25μg/ml的SPIO成功标记转染NT3-Ds Red基因的骨髓间充质干细胞,胞质蓝染,胞核呈淡红色,标记率100%。结论： 构建的含NT3-Ds Red基因的慢病毒载体,能够将NT3-Ds Red基因转移并整合入鼠BMSC的DNA中,并使其高效、稳定地表达NT-3因子。同时浓度为25μg/ml的SPIO能够有效的标记转染NT3-Ds Red基因的骨髓间充质干细胞。为进一步的活体实验奠定了基础。第三部分磁靶向NT3基因转染的BMSCs治疗大鼠脊髓

关键词： 缺血再灌注   脑梗死   骨髓间充质干细胞   移植   凋亡   动物模型  

摘要： 目的:探讨大鼠缺血再灌注(ischemia-reperfusion)6小时分别经动、静脉途径移植骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)后,对血清肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;缺血半暗带处星形胶质细胞(GFAP)、血管内皮生长因子(VEGF)、B淋巴细胞瘤-2基因蛋白(Bcl-2)、bcl-2相关x蛋白(Bax)、凋亡细胞数、神经功能缺损评分(mNSS)和体重计数的影响以及干细胞在器官分布有无差异,初步探讨BMSCs治疗急性脑梗死的具体机制和比较动、静脉移植途径差异。方法:1、采用改良线栓法栓塞阻隔大鼠大脑中动脉供血供氧,制作MCAO模型。2、采用全骨髓贴壁分离法提取、提纯和扩增培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测鉴定细胞表面抗原,氯甲基苯甲酰胺(CM-dil)染色标记BMSCs以示踪。3、MCAO6小时后分别经颈动脉、尾静脉途径移植等剂量的BMSCs和被标记的BMSCs。4、移植后第7天观察记录神经功能缺损评分和体重计数。5、酶联免疫吸附剂测定血清TNF-α水平。6、免疫组化测定GFAP、VEGF、Bcl-2和Bax表达。7、原位末端标记法测定缺血半暗带处凋亡细胞数。8、荧光观察BMSCs在脑组织、肺脏、脾脏、肝脏、肾脏和心脏的分布差异。结果:1、流式细胞仪检测细胞表面抗原结果示:CD90表达率为95.7%、CD29表达率为97.3%、CD106表达率为52.7%、CD11b表达率为6.01%、CD34表达率为2.95%、CD45表达率为2.26%。2、颈动脉BMSCs组mNSS评分显著小于颈动脉PBS组,尾静脉BMSCs组mNSS评分显著小于尾静脉PBS组,颈动脉BMSCs和尾静脉BMSCs组相比较mnss评分无差异;颈动脉bmscs体重计数显著大于颈动脉pbs组,尾静脉bmscs组体重计数显著大于尾静脉pbs组,颈动脉bmscs和尾静脉pbs组体重计数比较无差异。3、gfap阳性细胞主要集中在梗死中心周边缺血半暗带处,移植组阳性细胞数显著大于pbs组,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组相比较无差异。vegf阳性细胞数在缺血半暗带处强表达,尾静脉bmscs组阳性表达强于尾静脉pbs组,颈动脉bmscs和颈动脉pbs组阳性表达无差异,但颈动脉bmscs组有增高趋势,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组阳性表达无差异。4、vegf在尾静脉bmscs组显著大于尾静脉pbs组,颈动脉bmscs组和颈动脉pbs组无统计学差异,但颈动脉bmscs组有增高趋势,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组无统计学差异。5、bcl-2阳性细胞普遍见于梗死侧和健侧大脑半球,脑梗死缺血半暗带处阳性表达最为强烈。暂且不论移植途径差异,bmscs组阳性细胞累积光密度值显著多于pbs组。颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组阳性细胞累积光密度值无差异。bax阳性细胞主要集中表达于缺血半暗带处,颈动脉bmscs组、尾静脉bmscs组、颈动脉pbs组和尾静脉pbs组阳性细胞累积光密度值比较无差异。6、颈动脉bmscs组血清tnf-α浓度值显著低于颈动脉pbs组,尾静脉bmscs组显著低于尾静脉pbs组,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组血清tnf-浓度值无统计学差异,颈动脉pbs组较尾静脉pbs组血清tnf-α浓度值有增高趋势,但无统计学差异。7、凋亡细胞主要出现在缺血半暗带处,健侧未见阳性细胞。bmscs组凋亡细胞数显著小于pbs组,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组阳性细胞数无差异。8、示踪标记的bmscs主要集中于肺脏和脾脏,梗死周围组织可见干细胞分布,健侧未见;肝脏和肾脏干细胞分布较少,心脏未见干细胞荧光信号,颈动脉bmscs组和尾静脉bmscs组中同一器官干细胞分布数量无统计学差异。结论:bmscs可通过增强gfap、vegf的表达,维持神经血管单元的完整性,增加bcl-2的表达、减少凋亡细胞数,降低炎症因子tnf-α水平,以促进缺血再灌注后神经功能的恢复。在缺血再灌注6小时经颈动脉和尾静脉途径移植bmscs后干细胞在各器官分布和疗效无差异。但尾静脉途径创伤微小,可接受细胞量多,为脑梗死早期最佳移植途径。

关键词： 冠心病   心肌梗死   骨髓间充质干细胞   细胞因子  

摘要： 目的:骨髓间充质干细胞(MSC)治疗心肌梗死(MI)是MI治疗可选择的治疗手段之一,MSC可以通过旁分泌机制分泌多种细胞因子,发挥其抑制凋亡、促进血管新生、调节心室重塑、改善心脏功能的作用。与MSC移植治疗MI的动物实验不同,其临床试验的效果并不确切。其原因可能是临床患者常合并其他疾病,如糖尿病等。目前关于糖尿病人的MSC的生物学特性及其基因表达差异尚无报道。本研究的目的是比较糖尿病来源与非糖尿病来源的MSC在基因表达方面存在的差异,及其在治疗心肌梗死方面的差异,发现可能引起这些差异的关键细胞因子(Bcl-2、Bcl-x L),并验证通过MSC修饰Bcl-x L是否可以增加MSC的存活率、改善心脏功能。方法:本实验通过Affymetrix全基因组基因芯片技术进行MSC功能基因表达谱分析,以期发现冠心病合并糖尿病(CAD+DM)患者与冠心病非糖尿病(CAD)患者MSC基因表达的差异。并通过慢病毒转染基因修饰MSC的方式研究h Bcl-x L在增加MSC在心肌梗死区域存活率、促进血管新生、抑制凋亡、改善心脏功能等方面的作用。主要内容包括三部分:1、冠状动脉旁路移植(CABG)术中获取患者骨髓,体外扩增MSC,收集第3代细胞进行流式细胞仪筛选鉴定、绘制生长曲线、提取RNA制作基因芯片、比较基因表达差异。2、CAD+DM与CAD患者MSC移植到大鼠心肌梗死区域,观察其对于心肌梗死的治疗作用(抑制凋亡、改善心脏功能),以及Bcl-2、VEGF等表达情况。3、应用慢病毒载体转染系统转染h Bcl-XL-IRES2-EGFP融合基因达到过表达,同时单独转IRES2-EGFP作为对照。通过荧光显微镜、WB方法验证病毒转染效率;流式细胞技术测定是否增强细胞抗凋亡的能力、ELISA测定MSC在低氧培养基上清中细胞因子变化,确定基因修饰后细胞分泌功能的变化。进而进行治疗心肌梗死的动物实验,观察是否能够提高MSC在梗死区的存活率、抑制梗死区域的细胞凋亡、减少瘢痕形成、促进血管新生、改善心脏功能。结果:1、糖尿病患者来源的MSC具有MSC的生物学特性:表达CD29、CD44;不表达CD34、CD45,体外培养发现其增殖能力显著低于非糖尿病患者来源的MSC;2、Affymetrix基因芯片证实:CAD+DM组与CAD组MSC相比较,功能蛋白表达基因中涉及细胞凋亡、细胞因子、细胞内信号传导系统的基因有27个,其中13个基因表达明显上调,分别为TNFRSF10B、TNFRSF21、NGF、CAV2、ITGA8、TNS1、ITGA2、AKT3、MBP、MAP2、INHBA、FST、PLA2G5;有14个基因表达明显下调EPR1、BIRC5HELLS、BCL2、HGF、CASP1、SEPP1、ITGA9、MAP2K6RUNX3、TGFBR2、RUNX2、CTNNB1、CDC42。3、CAD+DM组与CAD组MSC细胞移植到大鼠心肌梗死边缘区均能显著抑制心肌细胞凋亡、改善心脏收缩功能,但CAD+DM组这些作用与CAD组相比显著降低,可能与CAD+DM组移植后Bcl-2表达显著低于CAD组有关。4、慢病毒可以安全、有效的转染h Bcl-x L-IRES-EGFP融合基因、IRES-EGFP融合基因到MSC内,EGFP的共转染可以确定转染效率并测定后续动物实验中MSC的存活率。研究显示,病毒转染未影响MSC的生物学特性,过表达h Bcl-x L可以增加MSC分泌细胞因子和抗凋亡能力,Western Blot检测、Annexin V/PI检测、ELISA检测显示,h Bcl-x L基因修饰的MSC表达h Bcl-x L显著增加、抗凋亡能力增强、分泌VEGF、IGF-1、PDGF等细胞因子增加(p<0.05)。5、h Bcl-x L基因修饰的MSC移植治疗心肌梗死的在体实验提示:过表达h Bcl-x L的MSC在移植区域的存活率提高、可以显著降低梗死边缘区心肌细胞凋亡、促进毛细血管新生、减少瘢痕组织形成、改善心脏功能(p<0.05)。结论:1、糖尿病来源的MSC在细胞增殖等方面与非糖尿病来源的MSC存在显著差异,两者存在基因表达差异,其Bcl-2表达显著降低;2、糖尿病来源的MSC治疗大鼠心肌梗死疗效与非糖尿病来源的MSC相比显著降低;3、应用慢病毒转染系统转染使MSC高表达Bcl-x L后可以显著提高MSC在低氧条件下的抗凋亡能力、显著增加VEGF、IGF-1、PDGF等细胞因子的分泌。4、高表达Bcl-x L的MSC移植到心肌梗死区域可以显著提高MSC的存活率、抑制细胞凋亡、促进血管新生、抑制瘢痕形成、改善心脏功能。

关键词： 异基因造血干细胞移植   慢性广泛性皮肤移植物抗宿主病   骨髓间充质干细胞   临床疗效  

摘要： 目的：通过前瞻性随机对照试验观察骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stromal Cells, MSCs)用于治疗糖皮质激素耐药的广泛性皮肤慢性移植物抗宿主病(Chronic Graft-Versus-Host Disease, cGVHD)患者的临床疗效及安全性。 方法：收集浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心共24例异基因造血干细胞移植后合并慢性广泛性皮肤移植物抗宿主病并经过常规免疫抑制治疗3个月及以上临床症状无明显改善的cGVHD患者,通过随机数字方法对其进行分组,8例对照组病人继续原有的免疫抑制治疗,16例试验组病人在原有的免疫抑制治疗基础上联合MSCs输注；随访时间为2011年1月至2014年12月,期间通过观察比较两组患者病变皮肤改善状况、临床症状缓解率、不良反应的发生以及总体生存率(Overall Survival,OS)、治疗相关死亡率(Treatment Related Mortality, TRM)、无进展生存率(Progression Free Survival, PFS)等来评价MSCs的临床治疗疗效及安全性。病变皮肤改善状况通过改良的皮肤厚度评分(Modified Rodnan Skin Score, MRSS)、病变累及的体表面积(Body Surface Area, BSA)百分比以及卡氏行为状态评分(Karnofsky Performance Score, KPS)进行评估。不良反应包括皮疹、发热、氧饱和度改变等输注相关反应、继发感染及严重不良事件。 结果：试验组皮肤病变程度较前好转,MSCs输注后1月、2月、3月、6月、12月患者的KPS分别为60.00±13.66、63.13±11.38、65.63-12.09、66.92±11.82、68.18±14.71,3个月KPS与输注前(58.75±12.58)对比有显著性差异(P=0.013)。MSCs输注后1月、2月、3月、6月、12月患者的MRSS分别为20.00±11.25、18.62±10.72、18.06±9.25、16.38±8.69、15.82±±9.78,3月、6月、12月MRSS与输注前(22.63±11.65)对比有统计学差异(P<0.05)。MSCs输注后1月、2月、3月、6月、12月患者的BSA(%)分别为66.19±28.77、64.94±30.65、63.81±±31.60、60.92±30.70、58.64±29.03, MSCs输注后12月BSA%与输注前(68.88±30.03)对比有显著性差异(P=0.039)；患者出现症状改善时间从1个月至6个月不等。对照组总有效率25%(2/8)；试验组总有效率87.5%(14/16),其中疗效评估达到部分缓解的有37.5%(6/16)；两组间有显著性差异(P=0.04)。试验组和对照组移植后1年OS分别为93.75%、87.5%,2年OS分别为87.5%、87.5%；1年PFS分别为93.75%、87.5%,2年PFS分别为87.5%、87.5%；1年TRM分别为6.25%、12.5%,2年TRM分别为12.5%、12.5%；两组数据均无统计学差异(P>0.05)。MSCs输注期间1例出现水痘病毒感染,1例出现充血性皮疹,1例合并肺部感染,1例合并口腔溃疡明显,经积极对症处理后均完全康复。对照组随访期间1例合并肺部感染,1例合并肠道感染,经积极对症处理后均完全康复。随访至2014.12.31,试验组有2例患者、对照组有1例患者因移植相关并发症死亡。 结论：输注骨髓间充质干细胞能够改善糖皮质激素耐药的广泛皮肤慢性移植物抗宿主病的临床症状且不增加血液系统恶性疾病的复发率,安全性好,是治疗cGVHD的新途径。MSCs作用的持久性以及输注时间、剂量、途径等仍需进一步探索,其在临床治疗移植物抗宿主病中有广阔的应用前景。

关键词： 膝关节   骨关节炎   骨髓间充质干细胞   临床疗效  

摘要： 目的本研究的目的在于评估早期膝骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)患者接受关节腔内注射自体骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)的临床疗效。分析自体BMSCs对膝骨性关节炎的影响,为临床寻求治疗早期膝骨性关节炎提供一种新的思路与方法。方法纳入对象为河南省人民医院自2013年9月至2014年7月间收治的10例早期膝骨性关节炎患者,符合中华骨科杂志2007版的骨性关节炎诊治指南的诊断标准,其中男性4例,女性6例,平均年龄48.4岁(从42—57岁),就诊前病程3个月—23个月,平均10.6个月,患者膝关节有行走或上下楼疼痛、僵硬、摩擦感、下蹲受限等症状。入院后常规检查,与患者充分沟通,排除有重要脏器严重器质性病变、血液系统特别是凝血功能异常、精神心理疾病等情况的患者。然后在消毒室中行骨髓穿刺术,经患者髂后上棘处穿刺抽取骨髓约100ml,在实验室中分离出骨髓间充质干细胞,并培养扩增至107个水平(从0.92×107个到1.13×107个),后经皮注射入患膝关节中。治疗后分别在1个月、3个月、6个月时予以定期随访,随访标准参照膝关节损伤和骨关节炎结果评分(Knee Injury and Osteoarthritis Outcome Score,KOOS),Lysholm评分,视觉模拟评分法(Visual Analogue Scale,VAS)来评估膝关节疼痛,并在末次随访中调查患者满意度。结果治疗后所纳入研究的患者均获得随访,没有不良事件的发生。在末次随访中,7例患者症状显著减轻,2例好转,KOOS平均评分从治疗前的61.19分到6个月随访时的78.62分。Lysholm评分从治疗前的49.64分到6个月随访时的86.70分,VAS评分也从治疗前的4.5分到研究最终为1.9分。治疗前、后KOOS评分、Lysholm评分及VAS评分对比具有统计学意义(P<0.05)。结论膝关节腔内注射由自体髂骨获取的骨髓间充质干细胞能减轻早期膝骨性关节炎患者疼痛、肿胀、僵硬等症状,有助于提高膝关节的功能,治疗早期膝关节OA是有效的。

关键词： MESENCHYMAL stem cells   ENDOTHELIAL cells   STEM cell treatment   HYPERTENSION -- Treatment   MICROCIRCULATION disorders   NEOVASCULARIZATION   TREATMENT  

摘要： Systemic arterial hypertension (SAH), a clinical syndrome characterized by persistent elevation of arterial pressure, is often associated with abnormalities such as microvascular rarefaction, defective angiogenesis, and endothelial dysfunction. Mesenchymal stem cells (MSCs), which normally induce angiogenesis and improve endothelial function, are defective in SAH. The central aim of this study was to evaluate whether priming of MSCs with endothelial growth medium (EGM-2) increases their therapeutic effects in spontaneously hypertensive rats (SHRs). Adult female SHRs were administered an intraperitoneal injection of vehicle solution (n = 10), MSCs cultured in conventional medium (DMEM plus 10% FBS, n = 11), or MSCs cultured in conventional medium followed by 72 hours in EGM-2 (pMSC, n = 10). Priming of the MSCs reduced the basal cell death rate in vitro. The administration of pMSCs significantly induced a prolonged reduction (10 days) in arterial pressure, a decrease in cardiac hypertrophy, an improvement in endothelium-dependent vasodilation response to acetylcholine, and an increase in skeletal muscle microvascular density compared to the vehicle and MSC groups. The transplanted cells were rarely found in the hearts and kidneys. Taken together, our findings indicate that priming of MSCs boosts stem cell therapy for the treatment of SAH.

关键词： 干细胞   骨髓干细胞   鼻内移植途径   骨髓间充质干细胞   干细胞移植  

摘要： 背景:动物实验发现骨髓间充质干细胞移植后可促进脑损伤的修复。目的:综述经鼻内途径移植骨髓间充质干细胞到颅内的现状。方法:应用计算机检索1999年1月至2014年1月PubMed相关文章,检索词为"bone marrow mesenchymal stem cell,brain injury,transplantation",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索1999年1月至2014年1月万方数据库相关文章,检索词为"骨髓间充质干细胞、脑损伤、移植",并限定文章语言种类为中文,最终纳入符合标准的文献38篇。结果与结论:近年来,较多的研究证实骨髓间充质干细胞移植能明显改善脑损伤模型动物的脑神经功能。许多研究者对移植的方法和途径进行了细致的研究和探索,并取得了多方面的进展。文章比较了骨髓间充质干细胞进入颅内的不同移植途径,重点从鼻黏膜的处理、移植入脑的路径、干细胞的标记与颅内观察、动物实验4个方面对经鼻内移植的途径进行了介绍,可见经鼻内途径将骨髓间充质干细胞移植到颅内,作为一种非侵袭性移植方法是具有广阔应用前景的。

关键词： 骨髓间充质干细胞   重型脑外伤   大鼠  

摘要： 目的比较不同数量骨髓间充质干细胞治疗重型脑外伤的疗效。方法 48只成年SD大鼠随机分为3组治疗组和1组对照组,采用改良的Feeney氏法建立大鼠创伤性脑损伤模型,外伤后注射5×105(A组),2×106(B组),1×106(C组)BMSCs;采用行为测试试验评分观察肢体功能恢复,采用免疫组化法观察并比较4组大鼠制模后海马齿状回及损伤区域Brd U阳性细胞的表达。结果 A、B、C组前肢放置试验和平衡试验评分均优于对照组,C组优于A、B组(P<0.05)。A、B、C组中大鼠海马和损伤区域出现的Brd U阳性细胞数明显多于对照组,C多于A、B组(P<0.05)。结论三个治疗组均可促进肢体功能的恢复,但1×106治疗组治疗效果最为明显。