关键词： 骨髓间充质干细胞   肝硬化   肝细胞癌   肝衰竭   治疗进展  

摘要： 骨髓间充质干细胞在适当的条件下可以分化为有功能的成熟肝细胞,为治疗终末期肝病提供了新思路。本文综述了骨髓间充质干细胞治疗肝硬化、肝细胞癌和肝衰竭等肝脏疾病的机制、临床应用价值、移植途径等方面的进展,介绍了在实际应用中存在的问题,并展望了该领域的应用前景。

关键词： 骨关节炎   间充质干细胞   注射,关节内  

摘要： 目的:研究不同浓度骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)的治疗效果,并探究其治疗机制。方法:8周龄近交系SD大鼠32只随机分成4组,每组8只,均采用自身双侧对照研究:对照组、高浓度组(1×107/m L BM-MSCs)、低浓度组(5×106/m L BM-MSCs)及高/低浓度对比组。应用改良Hulth方法诱导膝关节OA。对照组一侧行手术,另一侧行假手术,其余各组均行双侧手术。术后4周处死对照组大鼠采集双侧膝关节标本。各试验组大鼠膝关节内注入相应浓度的BM-MSCs或磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS),切断大鼠双侧坐骨神经及股神经使下肢制动,注射3周后处死各组大鼠并收取双侧膝关节标本。应用Mankin组织学评分评价OA病变程度,RT-PCR检测软骨Ⅱ型胶原mRNA表达,荧光显微镜观察荧光蛋白标记的BM-MSCs在膝关节内分布情况。结果:高浓度组、低浓度组BM-MSCs侧软骨组织标本Mankin评分均明显低于对照侧(5.40±0.51 vs.9.60±0.51;6.60±0.40 vs.10.00±0.32;P均<0.05),高/低浓度对比组高浓度侧Mankin评分略低于低浓度侧(6.40±0.51 vs.7.60±0.75,P>0.05)。RT-PCR结果显示,高浓度组、低浓度组BM-MSCs侧软骨Ⅱ型胶原mRNA含量分别为对照侧的108%±1%和106%±1%,高/低浓度对比组高浓度侧Ⅱ型胶原mRNA含量是低浓度侧的102%±1%。荧光显微镜显示,在软骨表面未见绿色荧光蛋白表达,而在滑膜组织内可见绿色荧光表达。结论:关节腔内注入BM-MSCs可能通过间接机制对OA软骨病变起到保护作用,两种浓度治疗效果无差异。

关键词： 骨髓间充质干细胞   重型脑外伤   不同时间  

摘要： 目的比较不同时间移植骨髓间充质干细胞治疗重型脑外伤的疗效。方法 48只成年SD大鼠随机分为3组治疗组和1组对照组,采用改良的Feeney法自由落体撞击的方法建立大鼠创伤性脑损伤模型,外伤后6 h、24 h、48 h注射骨髓间充质干细胞(BMSCs);以溴脱氧嘧啶尿苷(Brd U)标记干细胞,采用行为测试试验评分观察肢体功能恢复,采用免疫组化法观察并比较4组大鼠制模后第3 d、7 d、14 d海马齿状回及损伤区域Brd U阳性细胞的表达。结果 6 h、24 h、48 h组前肢放置试验和平衡试验评分均优于对照组,24 h组优于6 h、48 h组(P<0.05)。6 h、24 h、48 h组中大鼠海马和损伤区域出现的Brd U阳性细胞数明显多于对照组,24 h多于6 h、48 h组(P<0.05)。结论三个治疗组均可促进肢体功能的恢复,但24 h治疗组治疗效果最为明显。

关键词： 骨髓间充质干细胞   脑梗死   移植  

摘要： 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一类具有多项分化潜能的干细胞,通过诱导BMSCs可分化为各胚层细胞。已有动物实验证明,BMSCs治疗能够促进脑梗死后受损神经组织结构和功能的恢复,其可能的机制有:刺激神经发生和突触的形成,分泌多种神经营养因子和细胞因子,发挥免疫调节作用改变缺血区微环境,促进新生血管的形成等。对BMSCs进行修饰处理后,其治疗脑梗死效果更好,临床试验结果较乐观。

关键词： 血管性痴呆   骨髓间充质干细胞   海马   CaM   CaMKⅡ  

摘要： 目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs)侧脑室移植治疗血管性痴呆(vascular dementia,VaD)模型对大鼠行为学及海马钙调蛋白(calmodulin,CaM)、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法以全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs);流式细胞仪对所培养BMSCs进行表面抗原鉴定;成纤维生长因子(basic fibroblast growth factorbfic,b FGF)和丁羟基茴香醚(beta hydroxy acid,BHA)诱导BMSCs分化为神经元细胞,并对诱导后的细胞,进行神经元特异性的免疫组化鉴定;采用改良四血管法制备Va D模型,设立对照组,造模4 w后将VaD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、BMSCs治疗组。观察4 w后实验大鼠的行为学表现及应用Real-time PCR检测海马CaM、CaMKⅡ表达水平。结果 BMSCs治疗组行为学表现有明显改善。其海马CaM、CaMKⅡmRNA表达比模型组降低(P<0.05)。结论侧脑室移植BMSCs显著改善VaD大鼠行为学表现,并使其海马CaM、CaMKⅡ表达降低。

关键词： 骨髓间充质干细胞   重型脑外伤   bFGF   途径  

摘要： 目的比较不同途径移植bFGF修饰骨髓间充质干细胞治疗重型脑外伤的疗效。方法 48只成年SD大鼠随机分为3个治疗组和1个对照组,脑外伤后经尾静脉组(A组)、脑室和尾静脉联合组(B组)、脑室注射组(C组)移植bFGF修饰BMSCs。采用行为测试试验评分观察肢体功能恢复,采用免疫组化法观察并比较第3、7、14天大鼠海马及损伤区域Brd U阳性细胞表达情况。结果 3个治疗组前肢放置试验和平衡试验评分均优于对照组,3个治疗组前肢放置试验脑室注射组优于联合治疗组和尾静脉注射组,差异均有统计学意义(P<0.05);3个治疗组平衡试验脑室注射组优于联合治疗组和尾静脉注射组,差异均有统计学意义(P<0.05);3个治疗组中大鼠海马第3、7、14天出现的Brd U阳性细胞数A组为(329.42±25.34)、(454.23±17.88)、(303.38±22.14),B组为(370.08±10.53)、(499.32±12.79)、(367.41±20.06),C组为(451.47±22.21)、(585.36±29.54)、(431.06±20.14)。损伤区域第3、7、14天出现的Brd U阳性细胞数A组为(269.17±5.34)、(401.08±12.02)、(233.45±35.42),B组为(279.00±10.53)、(408.08±8.05)、(246.12±31.21),C组为(391.46±19.87)、(475.75±20.64)、(370.21±26.32),均明显多于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);脑室注射组多于联合治疗组、尾静脉注射组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论三种移植方式均可促进肢体功能的恢复,但经脑室移植治疗效果最为明显。

关键词： 挤压伤   急性肾损伤   干细胞治疗   骨髓间充质   急性肾功能衰竭   挤压综合征   肌红蛋白尿   氮质血症  

摘要： 挤压综合征是身体肌肉丰富的部位遭受挤压伤后出现以肌红蛋白尿、高血钾、高血磷、酸中毒和氮质血症等急性肾功能衰竭,以及休克为主要临床特点的一种综合征[1],病死率达40％～ 50％,主要是由于肾损伤后肾脏结构和功能无法恢复所致[2].

关键词： 骨髓间充质干细胞移植   噪声性耳聋   干细胞治疗   静脉移植   感音神经性聋   耳蜗毛细胞   关机   直接损伤  

摘要： 噪声性耳聋（noise induced hearing loss,NIHL）是因长期噪声暴露所导致的感音神经性聋.随着现代社会的发展,工业、交通和生活中所产生的噪声越来越严重,噪声污染除直接损伤听觉功能外,还严重危害着人类的身心健康,被公认为世界七大公害之一[1].连续过度的噪声刺激会导致耳蜗毛细胞的损伤或者缺失,造成暂时性或永久性阈移[2].多年来,研究人员一直致力于NIHL的发生机制及毛细胞损伤坏死后再生性修复的研究,近10年来国内外研究证实,骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells）具有促进血管生成及向耳蜗内各种细胞分化的潜能[3].骨髓间充质干细胞移植为治疗感音神经性聋开辟了新的思路,本文对静脉移植骨髓间充质干细胞在修复噪声引起的听力损伤中的可能机制进行综述.

关键词： 基因工程   充质干细胞   心肌梗死  

摘要： 随着溶栓和急诊冠脉介入的广泛开展,急性心肌梗死(AMI)的死亡率明显降低。但是心肌梗死后心室重构以及缺血性心肌病的发生严重影响了患者的预后。要使心肌细胞再生乃至衰竭的心脏恢复功能仍是一项巨大的挑战。研究提示骨髓间充质干细胞(BMSCs)可参与受损心肌的重建,可以提高左室射血分数,降低左心室收缩末期和舒张末期容积、减少梗死面积并改善左室重构〔1〕。

关键词： 脊髓损伤   骨髓间充质干细胞   神经营养因子-3   分离纯化   功能恢复  

摘要： 脊髓损伤是临床上较常见的而且非常严重的神经系统创伤性疾病，常常导致严重的运动和感觉功能障碍，而且目前临床上尚无行之有效的治疗方法。骨髓间充质干细胞的移植治疗结合基因疗法是当前脊髓损伤治疗研究的热点。在脊髓损伤后，神经营养因子在神经修复中起着非常重要的作用。为了探索一条脊髓损伤治疗的新途径，我们的研究将包含神经营养因子-3基因通过慢病毒转染骨髓间充质干细胞，并在用超顺磁性氧化铁颗粒标记细胞后，经蛛网膜下腔移植到体内，使其在体内能稳定表达神经营养因子-3，同时在移植后，利用磁场的作用靶向传送移植的干细胞到病变区，以加速干细胞向病变区的趋化运动的速率和增加干细胞在病变区的数量，从而使骨髓间充质干细胞的神经修复的作用得到加强、效率得到提高，进一步促进功能恢复，提高治疗效果。同时，我们还能借助MRI观察移植的磁标干细胞在体内的分布。　　第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离、培养、传代、鉴定　　目的：　　使用全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠的骨髓间充质干细胞，将提取的细胞经传代培养后，并从细胞的形态、表面抗原及增值能力方面进行鉴定，为实验提供细胞来源。　　方法:　　1.采用全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠的骨髓间充质干细胞，并对获得分离的细胞进行传代培养，同时对细胞形态进行观察。2.用MTT法测定分离的细胞的生长曲线，对其生长规律进行分析。3.用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞的表面标志物（CD29、CD34、CD44、CD45），以鉴定所培养细胞是否具有骨髓间充质干细胞的特征。　　结果:　　1.经全骨髓贴壁法分离纯化大鼠的骨髓间充质干细胞，呈长梭形，在体外可以培养、传代。2.经MTT法测定第3、4、5代细胞的生长曲线呈S型，且形态相似，具有较强的增殖能力。3.经流式细胞仪检测细胞的表面标记志物，细胞表面的CD29和CD44表达呈阳性，CD34和CD45表达呈阴性，这符合一般骨髓间充质干细胞的特征。　　结论：　　应用全骨髓贴壁法可以分离纯化大鼠的骨髓间充质干细胞，该法操作简单、经济实用、提取率高。所获得的细胞生长增殖旺盛、可进行连续多次传代，可以满足研究使用。　　第二部分大鼠骨髓间充质干细胞的神经营养因子-3基因转染和超顺磁性氧化铁颗粒标记　　目的：　　利用慢病毒将神经营养因子-3转导入骨髓间充质干细胞，使其能稳定表达神经营养因子-3，同时用超顺磁性氧化铁颗粒标记干细胞，为脊髓损伤的细胞移植治疗做准备。　　方法:　　1.首先通过重叠PCR扩增attB1-NTF3-attB2，然后利用Gateway技术构建pDown-NTF3，利用Gateway技术构建包含神经营养因子-3（neurotrophin-3，NT-3）及红色荧光蛋白（red fluorescent protein，DsRed）基因的质粒***3d.P/puro-EF1α>NTF3>IRES/DsRed Express2，最后进行慢病毒包装。2.利用慢病毒对骨髓间充质干细胞转染NT3-DsRed基因。3.实时荧光定量PCR检测转染NT3-DsRed基因的骨髓间充质干细胞的NT3 mRNA的表达。4. Western blotting检测转染NT3-DsRed基因后的骨髓间充质干细胞的NT3蛋白的表达。5.利用浓度为25μg/ml的超顺磁性氧化铁（Superparamagnetic Iron oxide，SPIO）颗粒标记NT3-DsRed基因转染的鼠骨髓间充质干细胞，然后用普鲁士蓝染色检测细胞的标记率。　　结果:　　1.构建的包含NT3-DsRed基因的质粒 ***3d.P/puro-EF1α>NTF3>IRES/DsRed Express2经测序检验完全正确，并能够成功转染293FT细胞，包装好的慢病毒滴度约为1.4×108TU/ml。2.成功转染NT3-DsRed基因后的骨髓间充质干细胞荧光显微镜下可以观察到红色荧光。3.实时荧光定量PCR检测显示转染NT3-DsRed基因的骨髓间充质干细胞的NT3 mRNA表达水平是未转染NT3基因的骨髓间充质干细胞的13倍。4. Western blotting检测结果显示转染NT3-DsRed基因的骨髓间充质干细胞可以高表达NT3蛋白，而未转染NT3基因的骨髓间充质干细胞则不能表达。5.普鲁士蓝染色显示，浓度为25μg/ml的SPIO成功标记转染NT3-DsRed基因的骨髓间充质干细胞，胞质蓝染，胞核呈淡红色，标记率100％。　　结论：　　构建的含NT3-DsRed基因的慢病毒载体，能够将NT3-DsRed基因转移并整合入鼠BMSC的DNA中，并使其高效、稳定地表达NT-3因子。同时浓度为25μg/ml的SPIO能够有效的标记转染NT3-DsRed基因的骨髓间充质干细胞。为进一步的活体实验奠定了基础。　　第三部分磁靶向NT3基因转染