关键词： 骨髓间充质干细胞移植   脊髓损伤   研究进展   间充质干细胞   生物学特性  

摘要： 现代交通业、建筑业及体育事业等的飞速发展极大的便利了人们的生产生活,但由此引发的健康和安全隐患也日益突出.脊髓损伤(spinal cord injury SCI)的持续高发就是其在日常生活中的显著表现之一.目前,发达国家的脊髓损伤发病率在28.3～45人/百万人*年,我国每年约有五万人发病,以青少年为主,呈每年递增10%的上升趋势.由于脊髓损伤治疗困难,终身致残率较高,这无疑给家庭及社会带来了沉重的负担.一个多世纪以来,医疗界先后采用了手术吻合、手术减压、药物治疗、局部冷冻、物理康复、大网膜移植、以及应用酶试剂来抑制和消除结缔组织瘢痕等多种方法来治疗脊髓损伤,这些方法虽都在不同程度上缓解了脊髓损伤,但都不能有效地解决病人截瘫这一难题.自20世纪70年代以后,移植治疗脊髓损伤的研究进入了一个全新的阶段,这不仅表现在移植治疗脊髓损伤的专一目的性上,也表现在研究内容的广度和深度上,更表现在所取得的一系列研究成果上.20世纪70年代中期,Friedenstein等[1]首次报道,骨髓标本中小部分贴壁细胞在培养过程中能够分化形成类似骨、软骨的集落.1997年,Prockop[2]成功地分离出骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells ,MSCs),发现其具有多向分化潜能,可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、胶质细胞和成肌细胞.利用骨髓间充质干细胞的多向分化潜能特性及自体移植对免疫排斥反应的豁免,行骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤,吸引着众多学者的关注.

关键词： 骨髓间充质干细胞   移植   心力衰竭   治疗  

摘要： 近年来 ,骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭已成为研究热点 ,本文拟对骨髓间充质干细胞的生物学特性及其移植后对心功能影响的研究现状等方面进行综述。

关键词： 骨髓间充质干细胞移植   造血干细胞移植   恶性淋巴瘤   NHL   安全性   疗效  

摘要： 目的:探讨自体骨髓间充质干细胞(bone marrow-mesenchymal stem cell,BM-MSC)和外周血造血干细胞(PBSC)共移植治疗恶性淋巴瘤(NHL)的安全性和疗效.方法:对1例确诊为NHLⅡ期A组的患者,采用CHOP方案(环磷酰胺750 mg/m2、阿霉素40 mg/m2、长春新碱1.4 mg/m2,第1天静滴;强的松60mg/m2,第1～5天口服)化疗4次.自体PBSC动员前取自体骨髓培养BM-MSC,扩增后计数1×107,冻存.动员方案为美罗华、环磷酰胺加粒系集落刺激因子(G-CSF).采集结果单个核细胞(MNC)2.61 ×10s/kg,CD细胞4.27×106/kg,予-80℃低温冻存.CHOP方案预处理后24h先回输自体PBSC,次日回输自体BM-MSC.结果:移植后白细胞计数(WBC)和血小板计数(BPC)低谷时间为移植后第6(+6)天和+9天,恢复中性粒细胞绝对计数(ANC)>0.5×109/L和BPC＞20×109/L的时间分别为5天和1天.除口腔溃疡和皮肤感染外,无其他严重的移植相关并发症.结论:自体BM-MSC和自体PBSC共移植治疗恶性淋巴瘤安全可行,移植后造血重建快,长期疗效有待进一步积累.

关键词： 生物学特性   体外神经无   静脉移植   体外诱SPSS统计软件  

摘要： 第一部分 rMSCs生物学特性的研究 骨髓中含有两大类细胞群，一个是能产生红细胞、血小板、单核细胞、粒细胞的造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)，它为循环血液提供前体细胞(或称为祖细胞)，这是人所共知的。另一个就是同样符合干细胞定义的非造血性干细胞。这种干细胞样的细胞被称为骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)或间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)。20世纪70年代中期，Friedenstein的先驱性研究揭示了骨髓中存在非造血干细胞这一事实，其后的二十年来，虽然对MSCs多向分化能力的特性了解不断加深，但仍然有不少疑问有待进一步研究。我们对MSCs的分离，培养条件下的生长特性及表面抗原标志进行了观察研究。 利用MSCs具有贴壁生长的特性，分离MSCs。光学及电子显微镜下观察细胞形态。MTT法，测定MSCs生长曲线。以16／cm和3／cm两种不同的细胞接种密度，并添加EGF，bFGF，EGF+bFGF，生长18天后，记数生成的细胞克隆及细胞数。流式 天津医科大学博士学位论文 细胞仪检测MSCs免疫细胞表型。 全骨髓细胞接种后，通过更换培养液，弃去悬浮生长的造血 细胞，ro一14天后，MSCs形态上趋于一致，光镜下呈梭形或纺 睡形的成纤维样细胞。以3个细胞/c扩、16个细胞/c mZ不同的细 胞密度接种于75c扩底面积培养瓶，培养18天后，3个细胞/c扩 和16个细脚cmz组，在Q一MEM中，按照接种单位细胞产量(/ Icell) 生成的细胞数分别为:56.89士8.55，22.5士2.64;克隆数(八OOeells)分别为1 .69士0.37，0.60士0.11。3个细胞 /c扩，明显多于16个细脚cmZ组，统计学分析表明差异有显著性， 表明接种密度对MSCs的影响。EGF、EGF+bFGF对细胞增殖有 显著的促进作用。流式细胞仪免疫细胞表型检测表明MSCs 83.1% 表达CD90，80%表达CD71;只有3.53%表达CD45;3.51%表达 CD 14;3.71%表达 CD34;4.67%表达HLA一DR。 MSCs可以通过其贴壁的特性加以分离，MSCs能较长时间传 代培养并且其形态不发生明显改变，从形态学上尚不能鉴别 MSCs，免疫细胞表型测定有助于识别MSCs。低密度接种培养可 获得较多的细胞量，EGF能刺激MSCs快速增殖。 第二部分rMSCs体外诱导分化为神经元样细胞 骨髓中的HSCs能持续补充循环血细胞;MSCs通常只产生间 天津医科大学博士学位论文 叶源的细胞。发育过程实际上是细胞命运的进行性限制过程:早 期胚胎细胞是全能的，而出生后动物的成体干细胞，即组织特异 性干细胞，据认为只能分化为它们所存在组织中的细胞类型。 MSCs是经典的内胚层细胞，它代表了一个独特的细胞群，尽管不 是全能的，但它们可以自我更新，并分化为不止一种特异的细胞 类型。在体内、体外可以分化为传统上认为属于外胚层的细胞如 神经元，胶质细胞。这些研究动摇了发育生物学的经典理论，这 意味着这些细胞可以再程序化而转分化(transdifferentiated)为其 它胚层的细胞。我们研究MSCs在体外培养中，在多种诱导因子 的作用下，MSCs向神经细胞分化的能力。 对MSCs3代培养细胞分别以3种神经诱导培养液诱导，光 学显微镜下观察细胞形态变化，诱导培养6天后，细胞进行神经 元特异抗体免疫组化染色鉴定，了解细胞分化的情况，记数MSCs 分化为神经元的比率。 细胞在诱导后30科O分钟即开始出现变化，细胞体收缩，细 胞从梭形变为圆形，细胞折光性增强，并有突起形成，细胞有单 极，双极及多极神经元样细胞出现。随时间增加，神经元样细胞 的突起可连成网状。对用诱导培养液3诱导6天的细胞进行免疫 组化染色，神经元样细胞表达NSE，NeuN，及MAP一2，表明其有 神经元蛋白表达，NSE、MAP一2，NeuN的表达率分别为59.83%， 天津医科大学博士学位论文 45.17%和50.83%。 MSCs在神经诱导培养液中能很快分化成神经元样的细胞，免 疫组化染色这些细胞表达神经元特异性蛋白，这种由细胞外信号 触发的分化是快速的，说明MSCs本身具有神经元的基因表达序 列，MSCs是多能的，具有向神经外胚层分化的能力。 第三部分rMSCs静脉移植治疗大鼠脑损伤 进行神经移植的主要障碍在于有限的供体组织。异体胚胎， 胎)匕神经干

关键词： 骨髓间充质干细胞   视网膜   激光   分化   细胞移植  

摘要： 视网膜疾病占重症眼病的一半以上，其中既有先天性视网膜缺损，如视网膜色素变性，也有后天因为外伤或其他疾病产生的视网膜并发症，如普通强光或激光造成的视网膜光损伤、糖尿病并发的眼病等。目前对于较轻的视网膜损伤主要采取抗炎治疗或营养因子治疗，而对重度损伤尚无很好的治疗方法，主要是玻璃体止血、促进凝血的吸收。许多病例因未能及时治疗或无药可救而导致视力下降甚至失明，因此寻找更好的治疗方法对于治疗视网膜疾病至关重要。 干细胞工程的研究为视网膜损伤的治疗提供了一种新的途径。研究者试用了多种干细胞，以期解决视网膜损伤的修复问题，如胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESC）、胚胎视网膜祖细胞、成体哺乳动物眼干细胞等。但都存在着各种缺陷，如异体移植问题、伦理学问题及取材问题等。 骨髓中含有可分化为外周循环血细胞的造血干细胞早已为人所知。此外，人们还发现骨髓中有一群细胞可以分化成多种间质样的细胞，于是将它们称为骨髓间充质干细胞（即Mesenchymal Stem Cells，MSC）。在体外不同条件的作用下MSC可以定向地被诱导分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、肌腱细胞、神经元等不同的细胞。MSC取材相对较容易，来源丰富，体外增殖能力强，适于作为细胞供体进行自体移植。 鉴于MSC便利的取材及其可向神经细胞分化的潜能，本研究期望通过视网膜下移植的方式研究MSC在正常视网膜及激光损伤视网膜中分化为视网膜的可能性，以及分化成的细胞是否具有神经细胞的特性，是否有利于视网膜激光损伤后的组织修复及视功能的恢复。 本研究首先分离、培养并鉴定了MSC。利用骨髓间充质干细胞的密度特性，用一定密度的Percoll对骨髓进行密度梯度分离，再利用骨髓间充质干细胞粘附在培养皿上的特性，去除单核／巨噬细胞，从而达到富集骨髓间充质干细胞的目的，体外传代可达15代以上。对富集纯化的细胞进行流式细胞术表型鉴定，并将MSC诱导分化为脂肪细胞，证明了其具有多向分化能力。自行建立的培养方法已申请 军事医学利学院博}学位论文 专利（专利受理号01141865.6）。如此培养出的MSC既具备增殖快的特点，又保 持了其做为干细胞的多向分化潜能，为进一步研究工作扫一下基础。 为证实MSC可以在正常视网膜分化为视网膜结构，本研究首先分离培养了 雄性大鼠的MSC，将其移植到雌性大鼠视网膜下，4周后利用雌雄标记法进行Y 染色体原位杂交，示踪MSC的分布。光学显微镜观察结果显示，阳性细胞在移 植区域周围与原来的视网膜细胞融合，并形成了典型的内、外核层及节细胞层的 细胞形态。同一视野下同时存在着阳胜和阴性细胞，阳性细胞并非单独存在，而 是形成一定的阳性细胞群，中间夹杂着阴性细胞。其中以外核层的阳性细胞较多， 由外到内逐渐减少，节细胞层最少。整个视网膜形态平滑，未见到玫瑰花结结构 少巨成。 一证明MSC在视网膜卜的分化至少需要3种示踪方法，因此本研究采用了体 外经AAV一加感染MSC的视网膜下移植观察。荧光显微镜观察结果表明，移植 4周后发现视网膜内存在GFP阳性细胞，其中以视网膜色素上皮层、视细胞层为 多，内、外网状层及节细)泡层也有}朴胜细胞的存在。阳性细胞相对较聚集，夕手与 阴性细胞相融合，在光学显微镜卜‘末发现视网膜形态的异常。这一结果不仅说明 MSC在视网膜下分化的定位，也说明MSC司一以被AJ叭z所感染，司一以作为基因 修饰细胞移植的载体细胞。AAV一gfr感染的结果与Y染色体原位杂交结果基木一 致。 以_}二不沙}究只观察了4周时MSC的变化情况，为观察MSC在移植后不同时问 的变化过程，同时用另一种方法再次确证MSC在视网膜下的存在，本研究进一 步采用荧光染料DAPJ对MSC进行标记，分别于移植后10、20、35和50天观察 了视网膜MSC一DAPI的分布情况。MSC在正常视网膜分化有以下特点:①卜lIJ卜l- 细胞随着移植时间的延长，先是顺着移植部位向周围打、一展，阳性细胞所在的部位

关键词： 骨髓间充质干细胞,诱导分化,成心肌细胞,心肌梗死,异体移植,迁移,重组腺病毒载体,绿色荧光蛋白,血管内皮生长因子,血管新生,心功能  

摘要： 研究背景： 急性心肌梗死是严重危害中老年人身体健康的常见病、多发病。目前临床缺乏针对病变冠脉、梗死心肌的再造和再生的根本性治疗方法，虽然发病4-6小时内及时溶栓、介入治疗使梗塞相关血管早期持续开通可挽救濒临死亡的心肌细胞，但绝大多数患者就诊时缺血心肌已有坏死，此时再灌注治疗只能防止梗死范围的扩大，而对于已坏死的心肌无效。由于成人心肌组织无分化再生能力，其坏死心肌细胞只能由成纤维细胞取代而形成无收缩功能的瘢痕组织，终致心衰，甚至猝死，严重影响患者生活质量和寿命。细胞移植修复坏死心肌展示出良好的前景。目前研究多集中在胎儿心肌细胞、胚胎干细胞、骨骼肌干细胞、骨髓干细胞移植等等，但由于供体胎儿心肌获取困难，且同胚胎干细胞一样存在着伦理、法律、免疫排斥反应等问题，难以用于临床；骨骼肌细胞同心肌细胞均是横纹肌细胞，通过骨骼肌干细胞移植的方法修复损伤坏死心肌取得了一些进展，但是骨骼肌干细胞数量极少，约占骨骼肌细胞总数的4％-8％，而且与年龄的增长呈负相关，同时，骨骼肌干细胞定位比较分散，不容易分离获得，要想达到移植所需要的细胞数量非常困难。最近研究表明，骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)具有多向分化潜能，在适宜的刺激条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、神经细胞、骨骼肌细胞及成心肌细胞等，此外，MSCs容易获得，易分离培养，体外扩增能力强，并且不表达共刺激抗原B7等。这些特性使得MSCs倍受心血管医学界的关注，有望成为心肌梗死后心肌再生的理想治疗手段。 研究目的： ①优化MSCs的分离、纯化、扩增的方法；②观察成人MSCs在体外能否分化为成心肌细胞；③观察大鼠MSCs在正常模型和梗死模型心脏组织中的迁移分化状况；④了解MSCs进行同种异体移植对大鼠心肌梗死的治疗作 第三军医大学博士学位论文 用;⑤观察成人MSCs进行异种异体移植对大鼠心肌梗死的治疗效果;⑥探 讨成人MSCs分化的成肌细胞移植联合转染VEGF基因对大鼠心肌梗死的治 疗意义。期望最终能为心肌梗死治疗提供新的思路、新的途径和新的措施， 为干细胞的临床应用奠定基础。 方法与结果: 第一部分:探讨了人MSCS的体外分离、纯化、扩增和向心肌细胞的定向 诱导分化条件。首先采用密度为1.0739/mL的Percon分离液分离成人骨髓中 的单个核细胞，进而获得MSCs，用DMEM一F12+l0%胎牛血清作为基本培养 基，通过及时、反复传代对MSCs进行纯化和扩增培养，平均每2一3天在细 胞达70～80%融合时，传代一次。5.0x 105个原代细胞体外扩增12代后可获 得2.3 x 109个细胞，扩增约4.6x 103倍，细胞形态仍保持均一的长梭形。流式 细胞仪检测扩增后MSCs表面抗原特性，结果表明MSCs强表达干细胞标记 CD29，而不表达造血干细胞特异抗原CD34和淋巴细胞表面抗原CDlla， 属非造血干细胞的另一群干细胞。第2、6、11代hMSCs经诱导后7天，相 差显微镜下见细胞呈长梭形、多核，10天可见肌管样结构;免疫组化检测发 现:第2、6、11代hMSCs诱导后均表达肌钙蛋白I(Tnl)和结蛋白(desmin); RT一PCR显示:诱导后细胞心肌特异因子基因p一肌浆蛋白重链(p一MHC)为 阳性表达，其中第6代MSCs的p一MHC表达较第2、11代高。原代培养72h 细胞(细胞数量少，密度低)，经诱导后无阳性结果。 结果提示:①及时传代可避免MSCs自身分化，也是纯化MSCs的重要 因素之一;②人源MSCs在bFGF辅助下、经5一aza诱导可定向分化为成心 肌细胞;③MSCs的数量，及其高纯度、高扩增能力是定向诱导分化为心肌 细胞的基本条件。 结论:成功优化人MSCs培养、纯化及扩增条件，证明hMSCs能分化为 成心肌细胞。 第二部分:采用结扎左冠状动脉前降支的方法建立大鼠心肌梗塞模型，体 外分离Wistar大鼠骨髓MSCs，扩增及纯化后进行同种异体移植。35只大鼠

关键词： 骨髓间充质干细胞,心肌梗死  

摘要： 一、背景： 心血管疾病一直是全球发病率、死亡率居先的疾病，慢性充血性心力衰竭是心血管疾病最终的共同转归。几十年来在介入治疗、手术治疗领域，心血管疾病的治疗取得了可靠的进展。各种原因，特别是急性心肌梗死所致的心肌细胞丢失、瘢痕形成及心室重构是造成心肌功能恶化的主要因素，也是最终导致慢性充血性心力衰竭的病理基础。心脏移植虽能取代受损心肌，但因供体太少、选择供体困难和存在免疫排斥反应等，难以在临床上推广。介入治疗虽能改善心肌缺血，但坏死心肌不能自主修复。近年来，新兴的平滑肌细胞、骨骼肌细胞和心肌细胞移植以代替受损的心肌细胞，从而改善心脏功能，已成为国外众多学者的研究热点。但自体心肌细胞培养十分棘手，同时获得足够数量的心肌细胞也很困难，平滑肌细胞、骨骼肌细胞与心肌细胞的兴奋-收缩耦联过程及机械性能均有所不同，故自体及异体心肌细胞、平滑肌细胞、骨骼肌细胞的应用受限。最近研究较多的是骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cells，hMSCs)在体外培养、增殖后移植在心肌梗死部位，存活并分化为心肌细胞，改善心脏功能。 目前国内进行人骨髓间充质干细胞增殖和移植治疗心肌梗死与心力衰竭的研究甚少，我们目前进行了三个方面得研究。一、入骨髓间充质干细胞体外培养、增殖;二、人骨髓间充质干细胞异种异体移植治疗新西兰大白兔心肌梗死的研究;三、人自体骨髓间充质干细胞移植治疗扩张型心肌病心力衰竭研究。 二、研究目的： 我们应用1.073g/ml Percoll液密度梯度离心法从正常人骨髓中分离单个核细胞，体外培养，收获单层的贴壁细胞即人骨髓间充质干细胞，在体外培养第四代时，用流式细胞仪对细胞的表面标记物进行分析。将CD29、CD166表达阳性而CD34、CD45表达阴性的人骨髓间充质干细胞移植于兔心肌梗死部位，研究其在心肌梗死部位能否分化成心肌细胞，促进新 浙江大学学位论文 生血管的形成，改善心脏功能。在动物实验成功的基础上进行临床验证。将扩张型心肌病、 心功能IV级患者的自体骨髓间充质干细胞体外培养扩增后，在第二代时行自体移植，经冠状 动脉注射到心肌组织中去，术前及术后行心脏超声和心脏ECT等检查，观察自体骨髓间充质 干细胞移植后能否抑制心室的重构，改善心脏功能。 三、材料、对象与方法： 二、无菌条件下从骼前上棘抽取健康人骨髓 10Inl，加肝素抗凝（200u／ml），用 1．073g／ml Percoll液密度梯度离心法分离出人骨髓中的单个核细胞。收集界面上的细胞，加入DMEMLG （Dulbecco’s Modified Eagle Medium）培养液离心清洗，调节细胞密度至 2－6X10’／ml;接种于50ml纤维培养瓶中，进行原代培养接种。倒置显微镜下逐日观察细胞的生长情况。 2、人骨髓间充质干细胞体外传代培养扩增到第四代时，用0．25％胰酶一0．02％EtoA液将 细胞从培养瓶底消化，离心收集细胞，用PBS漂洗2次，充分去除胎牛血清和胰酶，调整细 胞密度至IX10e个／ml，在2ml的一次性试管中各加入***细胞悬液，分别加人抗人CD34、 CD45、CD166、CD29单抗 20 111，室温下避光反应 15min后，用流式细胞仪进行分析，了解 hMSCS表面抗原CD34、CD45、CD166、CD29等表达情况。 3、我们通过采用开胸冠脉结扎法制备新西兰白兔心肌梗塞模型。在人骨髓间充质干细 胞移植前48h用5一澳尿啼院脱氧核谷（BRDU）标记hMSCS。新西兰白兔左冠状动脉结扎lh 后，将 CD29、CD166表达阳性而 CD34、CD45表达阴性的 5 X 10’个 hMSCS移植于心肌梗死部 位。给予环胞素A口服液抑制免疫排斥反应。术后一月进行心脏超声心动图检查，和心肌梗 死对照组比较心功能hMSCS移植后心功能有无明显改善。4周后处死动物，取心脏行抗BRDU 及抗Troponin免疫组化染色检测移植的细胞在心肌梗死部位有无存活并分化增殖成心肌 细胞。 4、我们在志愿者知情同意的情况下，抽取心脏功能IV级的扩张型心肌

关键词： 骨髓间充质干细胞,大脑中动脉梗塞,脑梗塞,移植,细胞培养  

摘要： 背景及目的：脑血管疾病是常见病、多发病，病死率与致残率均高，幸存者中约3/4不同程度丧失劳动力，重度致残者占40%以上。脑梗塞(cerebral infaction，CI)是脑血管病中最常见者，约占75%。目前尽管对脑梗塞的治疗已取得了显著进展，但对于已发生坏死的脑组织，不能使梗塞区神经细胞再生，对于纠正脑梗塞后出现的神经功能障碍亦没有更好的对策。近年来，国内外进行的细胞移植实验，对中枢神经系统疾病具有潜在的治疗前景。研究发现，骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells ,MSCs)是中胚层来源的具有自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，能分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、成肌细胞和神经细胞等多种细胞成分。为进一步验证MSCs的这一潜能，本研究对大鼠MSCs进行体外分离、培养、扩增以获得大量MSCs，并将体外扩增后的细胞移植到脑梗塞大鼠体内，观察MSCs对脑缺血损伤的修复作用，探索一种治疗脑梗塞的新方法，并为干细胞治疗早日进入临床奠定基础。 方法：采用密度梯度离心结合贴壁筛选的方法从6～8周龄Wistar大鼠骨髓中分离数量有限的MSCs，用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养，3～5d换液一次，直至融合时按1：3进行传代扩增。观察了培养的MSCs贴壁率、生长曲线和细胞周期、超微结构等生物学指标，并诱导其成骨、成脂分化。 建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞(MCAo)模型，用线栓通过颈内动脉插入大脑中动脉起始端，2h后拔除线栓造成脑缺血-再灌注模型。将用DAPI荧光染料标记的MSCs通过立体定向移植到治疗组、假手术组大鼠壳核区，脑梗塞对照组移植不含细胞的培养液。观察移植入脑的MSCs在局部存活、迁移的情况；免疫组化染色了解MSCs的分化；电镜观察MSCs移植后脑梗塞区超微结构的改变；并通过MNSS量表、EEG、SEP等检测指标了解MSCs移植对脑梗塞的治疗效果。并且将用BrdU标记的MSCs经股静脉移植到大鼠体内，了解该途径移植是否可行。 结果：①从大鼠骨髓中分离的单个核细胞具有自我更新能力和多向分化能力(能成骨、成脂分化)，是我们所需要的骨髓间充质干细胞，能在体外环境下进行培养和大量扩增。②MSCs存活情况：移植入脑的MSCs在正常脑组织与梗塞区中能存活至少4W 以上，但随着观察时间的延长，细胞数量逐渐减少，4W内组间无明显差异。③MSCs迁移情况：移植入脑的MSCs能向四周迁移，实验证明梗塞区微环境更有利于MSCs的迁移，移植后第3W在梗塞区的MSCs迁移范围明显大于正常的同部位脑区。④神经丝蛋白(Neurofilament , NF)免疫组化结果移植治疗组与脑梗塞对照组间无明显差异(P>0.05)，两组的NF免疫组化光密度值（Optical density ，OD）和阳性细胞面积均明显低于假手术移植组(P<0.05)。而GFAP免疫组化结果，移植治疗组在移植后2W、4W均比另外两组明显增强(P<0.05)。⑤电镜观察的梗塞区超微结构显示，接受了MSCs移植的大鼠，梗塞区神经元胞浆中出现大量游离核糖体,可能与神经元的损伤修复有关。⑥MNSS量表、EEG、SEP检查结果，MCAo术后大鼠神经功能明显受损，接受MSCs移植后大鼠，各项检查指标于第2W开始恢复，与脑梗塞对照组相比有明显差异。⑦脑局部直接注射移植对脑组织的损伤不明显，假手术移植组，移植前后各项神经功能检查指标无明显改变。⑧经股静脉移植的MSCs，部分可到达脑梗塞局部。 结论： 1. 脑的MSCs能存活至少4W以上，并进行迁移。本实验发现，梗塞区比正常脑组织更利于植入的MSCs迁移。提示MSCs的迁移的原因可能与梗塞区微环境，包括炎症等缺血相关信号、各种细胞因子的生成等有关。 2. 电镜观察的梗塞区超微结构变化可发现，行MSCs移植的大鼠，在梗塞区可见外形呈幼稚状态的细胞(考虑为植入的MSCs)，细胞胞浆少，核致密，常染色质多，围绕在神经元周围，神经元中有较多的游离核糖体，脑梗塞区神经元的胞浆既有变性，又有丰富的游离核糖体，提示神经元处于修复状态。超微结构的变化提示部分移植入脑的MSCs与局部神经元发生整合，并对缺血损伤的脑组织具有一定的修复作用。 3. 免疫组化结果提示移植入脑的MSCs成神经元分化不明显，但能间接证明MSCs在梗塞区被诱导分化为星形胶质细胞，并证明星形胶质细胞对缺血性脑损伤有明显的促进修复的作用。 4. 与对照组相比，行MSCs移植治疗的大鼠，其MNSS量表测定的神经功能明显改善；SEP检查的P1-N1峰峰值、

关键词： 骨髓间充质干细胞   5-氮杂胞苷   肌源性细胞   心功能   干细胞移植   冠状动脉旁路移植术   非体外循环  

摘要： 骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性心脏病的实验研究;目的:研究骨髓间充质干细胞在体外诱导分化为肌源性细胞及移植治疗缺血性心脏病的可行性.方法:1、骨髓间充质干细胞的培养和诱导分化:由新西兰大白兔胸骨获取骨髓间充质干细胞,纯化培养后用不同浓度的5氮杂胞苷(5-azacytidine)诱导,经透射电镜、免疫组化、动作电位等检测诱导后细胞的变化.2、细胞移植术:采取结扎冠状动脉前降支的办法建立兔心肌梗塞模型,分别将未经过和经过诱导的骨髓间充质干细胞移植于心肌梗塞区,通过监测左心室最大压力上升速度(dp/dt)了解移植前后心功能变化.结论:骨髓间充质干细胞可在体外经5-氮杂胞苷诱导后转化为肌源性细胞;移植骨髓间充质干细胞及肌源性细胞均能改善实验动物心肌梗塞后的心功能.非体外循环和常规冠状动脉旁路移植术的对比;目的:初步评价51例非体外循环冠状动脉旁路移植术(off-pump coronary artery bypass grafting,OPCAB)的疗效,并与同期61例常规冠状动脉旁路移植术(coronary artery bypass grafting,CABG)作对比分析.方法:收集1999年11月至2002年11月收治的112冠状动旁路移植患者的临床资料进行回顾性分析,对比非体外循环冠状动脉旁路移植术与常规冠状动脉旁路移植术近期疗效.结论:OPCAB术安全可行,疗效确实,与常规CABG术相比,减少了输血,明显缩短了术后平均呼吸机辅助时间和平均住院日期,减低了手术费以及总住院费用,减轻了患者家庭和社会的经济负担.

关键词： 生物学   治疗   骨髓间充质干细胞   移植   心力衰竭  

摘要： 近年来 ,骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭已成为研究热点 。