关键词： 干细胞   骨髓间充质干细胞   5-氮杂胞苷   心肌细胞   急性心肌梗死   移植  

摘要： 本研究旨在观察5-氮杂胞苷在体外对MSCs的诱导分化和增殖作用.同时利用球囊扩张选择性堵塞冠状动脉分支方法建立小型猪心肌梗死模型,将诱导分化后的自体MSCs移植到心肌梗死部位,观察移植治疗效果.本实验重在探讨骨髓MSCs移植治疗是否能够成为一种崭新而有效的替代治疗梗死后坏死心肌组织的方法,并为下一步临床应用奠定实验基础.本实验在体外应用5-aza诱导MSCs,从各个角度证明诱导后的MSCs具有心肌细胞的性质,但是尚未分化完全.另一方面,利用介入方法成功建立了小型猪心肌梗死模型,将体外诱导的自体MSCs移植进入梗死部位,证明MSCs能够在局部存活.为将来骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死提供了良好的理论依据和技术参数条件.

关键词： 骨髓间充质干细胞   脊髓损伤   诱导分化   神经元   神经干细胞   脑源性神经营养因子   神经生长因子   凋亡   细胞移植  

摘要： 目的:该实验研究骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,MSCs)对脊髓损伤的治疗作用.在体外诱导MSCs向神经细胞分化,探讨MSCs神经诱导的可能性和特征,检测MSCs是否表达和分泌有神经保护、营养作用的因子如BDNF和NGF,研究MSCs分泌的因子在体外对脊髓神经元和神经干细胞的保护作用,研究MSCs移植对脊髓损伤的治疗作用,探讨MSCs移植治疗脊髓损伤的机理.结论MSCs在体外有诱导分化成神经元的能力,MSCs表达和分泌神经营养因子BDNF和NGF,MSCs分泌的因子在体外可以减少脊髓神经元和神经干细胞凋亡.MSCs移植后能在脊髓中存活,减少脊髓神经细胞凋亡,促进损伤修复,改善脊髓损伤后的运动功能,但是没有分化成为神经细胞,说明MSCs的作用主要是通过分泌神经营养因子取得的.MSCs移植对脊髓损伤有治疗作用,为脊髓损伤的治疗提供了新的手段.

关键词： 间充质干细胞   细胞分化   急性心肌梗塞   自发性高血压大鼠   动脉粥样硬化  

摘要： 第一部分旨在证明人的骨髓间充质干细胞(MSC)分化为心血管组织的潜能。用5-氮胞杂苷诱导MSC向心肌细胞分化，用VEGF-B诱导向血管内皮细胞分化。异丙肾上腺素法制成NOD／SCID小鼠心肌损伤模型，经尾静脉注入标记的MSC。免疫荧光法检测MSC的体内外分化。结果显示，在体外，经诱导的MSC表达肌凝蛋白重链和肌钙蛋白Ⅰ，表达Ⅷ因子相关抗原和CD31。在体内，标记的MSC表达阳性的肌凝蛋白重链和Ⅷ因子相关抗原。以上结果说明MSC可分化为心肌和血管血管内皮细胞，是心血管再生医学的理想种子细胞。 第二部分研究猪的自体骨髓间充质干细胞(MSC)经冠脉内注射治疗急性心肌梗塞(AMI)的有效性和可行性。球囊阻塞法制成AMI模型。经冠脉注入经标记的MSC，4周后，核素心肌断层显像检测相对心梗面积、心肌灌注评分和射血分数，经导管检测左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、压力升高最大速率(+dP／dt)和压力下降最大速率(-dP／dt)。免疫荧光法分析MSC的植入和分化。结果显示，和对照组相比，细胞治疗组射血分数显著增加[(44.1±4.3)％对(39.0±5.2)％，p＜0.05]，心肌灌注评分(30.0+5.3对41.8±8.8，p＜0.01)和相对心梗面积[(28.6±4.7)％对(33.5±3.4)％，p＜0.05]显著降低，LVSP(87.1+8.7mmHg对78.0+4.4 mmHg，p＜0.05)、+dP／dt(1818.1±116.7mmHg／s对1610.64±114.5 mmHg／s，p＜0.01)和-dP／dt(1800.9±88.5mmHg／s对1618.4+65.7mmHg／s，p＜0.01)显著增加，LVEDP(9.4±1.7mmHg对12.6±2.8 mmHg，p＜0.05)显著降低。标记的MSC在心肌中表达阳性的肌凝蛋白重链、连接蛋白43、平滑肌肌动蛋白和Ⅷ因子相关抗原。因此，MSC在体内分化为心肌和血管组织，可改善AMI猪的心功能。 第三部分研究自发性高血压大鼠(SHR)间充质干细胞(MSC)生物学特性的改变。取SHR和WKY骨髓和主动脉的贴壁细胞，经CD105免疫磁珠分选，测定其生长曲线和倍增时间，流式细胞仪检测其免疫表型，进行纤维母细胞集落形成

关键词： 间充质干细胞   肝细胞生长因子   基因治疗   慢性肝损伤  

摘要： 慢性肝脏疾病以肝细胞变性、坏死、纤维化为主要病变，一旦肝纤维化形成，就成为不可逆的病变，严重影响肝脏功能和患者的生活质量。因而促进肝脏细胞再生和抗纤维化是治疗肝脏疾病的关键。肝细胞生长因子（HGF）能够促进肝脏细胞再生，抗纤维化及促进干细胞向肝脏细胞分化。骨髓干细胞具有向肝脏细胞分化或与肝脏细胞融合的特性，在肝脏细胞再生和修复中具有重要的作用。本研究利用四氯化碳所致慢性肝损伤的模型，观察了高表达HGF的骨髓间充质干细胞对慢性肝损伤的治疗作用，为基因修饰干细胞治疗损伤性疾病提供了实验依据。 骨髓干细胞中包括基质细胞来源的间充质干细胞（MSC）和造血干细胞（HSC）等多种干细胞成份。我们扩增并纯化了携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体（Ad-GFP）；分离纯化了人骨髓MSC和脐带血CD34+细胞；利用Ad-GFP评价了腺病毒感染MSC和HSC这两种不同类型成体干细胞的效率。实验结果表明，在MOI为150时，腺病毒感染MSC的效率达到98.38％，HSC为13.55％。Ad-GFP感染造血细胞来源的细胞系Mo7e，Jurkat细胞的效率也较低。研究表明，腺病毒感染细胞的过程是通过细胞膜上特异性受体（CAR）介导的。我们应用RT-PCR的方法检测MSC和HSC细胞腺病毒特异性受体（CAR）表达。结果显示，MSC高表腺病毒特异性受体（CAR），而HSC的CAR表达较低，表明腺病毒感染骨髓MSC和HSC的效率与CAR的表达呈相关性。 鉴于骨髓中MSC具有向肝细胞分化的潜能和腺病毒的高感染效率，我们选择MSC作为携带HGF基因治疗慢性肝损伤的靶细胞。我们分离并扩增了雄性大鼠的骨髓MSC；利用携带HGF的重组腺病毒感染MSC，利用ELISA方法检测了骨髓MSC表达外源性HGF基因的能力，结果显示，Ad-HGF感染MSC后细胞培养上清中浓度明显升高，最高表达量可达128ng／mL，并且HGF的表达时间可以维持2W以上。为评价骨髓MSC携带HGF对慢性肝损伤的治疗效果，我们建立了雌性大鼠的四氯化碳（CCl4）慢性肝损伤模型，静脉注射HGF基因修饰MSC进行治 布眨创匕论文 中文摘要 疗。治疗5周后，利用肝脏形态学、组织学变化及肝功能指标评价治疗效果。模 型组大鼠肝脏表面粗糙、无光泽、边缘变钝，MSC治疗组和HGF基因修饰MSC 治疗组部分肝叶边缘变钝，无光泽;肝功能检测结果显示，HGF基因修饰MSC治 疗组的AST、ALT明显好转，与正常对照组无显著差异，MSC治疗组的AST、 ALT也有所恢复，但效果不如前者;肝脏组织病理结果显示模型组肝小叶破坏、 纤维结缔组织增生、假小叶形成、假小叶内肝细胞空泡化显著;MSC治疗组肝细 胞空泡明显而纤维结缔组织增生较模型组少;HGF基因修饰MSC治疗组的纤维化 和细胞变性均不显著;我们利用雄性大鼠的sry为标记，通过原位杂交检测到损伤 肝脏中存在sry阳性的细胞，表明MSC参与了肝脏组织再生。 总结:骨髓MSC高表达腺病毒特异性受体CAR，因此，腺病毒能够有效感染 MSCs;腺病毒介导HGF基因在骨髓MSC中高表达;HGF基因修饰的MSC能够 参与肝再生，对慢性肝损伤具有较好的治疗效果。本研究将基因治疗与细胞治疗 相结合，为损伤性疾病的治疗提供了新途径。

关键词： 无神经节细胞症   动物模型   短路电流   离子转运   苯扎氯铵  

摘要： 目的: 建立一种适合MSCs移植的实验性巨结肠大鼠模型，探讨巨结肠模型结肠上皮离子转运的变化。 方法: 8-9周龄SD大鼠90只，随机分为两组。所有大鼠在氯胺酮麻醉下开腹，实验组用0.1%苯扎氯铵（BAC）处理大鼠降结肠浆膜40分钟，温盐水冲洗后关腹，对照组用生理盐水代替苯扎氯铵。分别于术后1、2、3、4、8周进行大体观察、钡灌肠X线检查，结肠测压、取处理段结肠行病理学检查，循环水浴药理学测定平滑肌收缩功能，利用短路电流技术检测结肠上皮离子转运的变化。 结果: BAC处理后1周，实验组大鼠出现腹胀，处理段结肠狭窄，反射性收缩消失，对乙酰胆碱敏感性增强，近端结肠扩张有大便堆积，且随着时间延长症状加重。病理学检查发现BAC处理后1周结肠神经节细胞明显减少、空泡变，3周后完全消失。短路电流检测提示，与对照组比较，实验组大鼠结肠上皮各时间点跨膜电压、基础电流明显降低，而钠离子吸收电流占基础电流的百分比升高。另外，由Forskolin所引起的氯离子分泌电流也明显高于对照组，但DPC阻断 Forskolin所引起的Isc的百分比下降且小于1（对照组大于1），而结肠跨膜电阻两组之间无差异。 结论: 1、采用0.1%BAC处理降结肠浆膜成功建立了实验性巨结肠模型，为下一步进行结肠内MSCs移植分化为神经细胞的研究奠定了基础。2、实验性巨结肠模型动物结肠粘膜屏障功能未受损伤，但结肠上皮离子转运功能紊乱，提示巨结肠大便排空困难除与失神经之后的平滑肌和括约肌功能失调有关外，可能还与结肠离子转运的变化有关。

关键词： 骨髓细胞   神经细胞分化   骨髓间充质干细胞   中枢神经系统疾病   治疗  

摘要： 近年来发现 ,骨髓间充质干细胞 ( MSCs)不但能分化成骨、软骨、脂肪等中胚层起源的细胞 ,而且能分化成神经元和神经胶质细胞等外胚层起源的细胞。许多学者将 MSCs移植进一些中枢神经系统疾病动物模型中 ,如 :遗传性脱髓鞘性神经病、脑卒中、脑外伤等 ,获得一些疗效 ,为中枢神经系统 ( CNS)疾病的治疗探索一条新途径。这些研究表明 MSCs是细胞治疗和基因治疗 CNS疾病的种子细胞之一 。

关键词： 骨髓间充质干细胞   基因治疗   造血系统   端粒酶活性   细胞培养   基因工程细胞  

摘要： 干细胞是广泛存在于造血系统具有多种分化潜能和自我更新能力的细胞.近年来造血干细胞(HSC)的体外扩增及定向诱导分化、基因治疗都取得了重要进展,但对于造血以外组织干细胞的研究则起步较晚.

关键词： 骨髓间充质干细胞   细胞治疗   骨髓造血微环境   基因表达   调节机制   急性髓性白血病   治疗  

摘要： 骨髓间充质干细胞是骨髓造血微环境的重要组分,其首要作用在于支持造血,此外它还具有干细胞的特性,即自我更新和多向分化的潜能。因此,这种细胞将有可能用于联合造血干细胞移植以提高造血干细胞移植成功率和作为组织工程学的种子用于修复受损或有遗传缺陷的组织和器官,如骨发育不全和心肌梗死后的心肌等。然而,其分离方法很粗糙,还没有一个令人满意的分离和鉴定的方法,这是制约其用于细胞和基因治疗的重要因素。另外,弄清在分化过程中基因表达的调节机制,有利于体外控制这种干细胞的定向分化。最后,间充质干细胞回巢到骨髓或其他组织是成功进行细胞治疗的关键所在。

关键词： 骨髓间充质干细胞移植   治疗   心肌梗死   研究进展  

摘要： 近年来,尽管对缺血性心脏病及扩张型心肌病的预防及治疗取得了一些进展,但由缺血性心脏病及扩张型心肌病导致的充血性心力衰竭的发生率和致死率仍不断增加,尤其是在急性心肌梗死发生后,由于心室重构,心肌细胞数量的减少,导致心功能下降.心脏移植是治疗晚期心衰的方法之一,但心脏供体不足等问题使这种治疗方法的应用受到了限制.心肌细胞移植作为一种全新的治疗方法应用于改善心功能及心肌活力,为此类心脏患者改善预后带来了希望.目前用于心肌细胞移植研究的干细胞主要有胚胎心肌细胞、骨骼肌细胞、骨髓间充质干细胞(MSCs)[1～3].骨髓间充质干细胞因其具有容易获得、无排斥反应、不涉及医学道德伦理问题等优点正日益受到关注.本文主要综述近年来骨髓间充质干细胞移植领域研究的若干进展.

关键词： 骨髓间充质干细胞   心血管疾病   生物学特征   研究进展   细胞移植  

摘要： 间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSCs）是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞，主要存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，在一定的诱导条件下能分化为成骨细胞、成软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、内皮细胞、神经细胞、骨骼肌细胞及心肌细胞。由于不同的文献对其有不同的命名，即集落形成单位成纤维细胞（CFU-F）、骨髓基质成纤维细胞（MSF）、骨髓基质细胞（MSC）、间充质干细胞（MSC）或间充质祖细胞（MPC）。由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓MSCs，并仅就其生物学特征、多向分化潜能及在心血管疾病治疗中的研究进展作一综述。