关键词： 骨髓间充质干细胞   培养   鉴定   分化   CXCR4   骨髓间充质干细胞   慢病毒载体   间充质干细胞   CXCR4   椎间盘   治疗   纤维环穿刺   椎间盘退变   动物模型   兔   CXCR4   干细胞   椎间盘   趋化   移植  

摘要： 第一部分：兔骨髓间充质干细胞的培养及鉴定目的：体外分离、培养和扩增的新西兰大白兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, MSCs).对培养细胞进行鉴定,为后续实验提供细胞来源。方法：麻醉后无菌获取2周龄新西兰大白兔股骨及胫骨,剪开髓腔,获取骨髓液,用贴壁培养法培养,通过传代纯化筛选得到MSCs,应用MTT法绘制细胞生长曲线,从细胞形态、流式细胞仪分析表面标记物以及成骨、成脂、成软骨分化等方面鉴定MSCS。结果：贴壁培养获取的兔骨髓间充质干细胞经过三代的培养逐渐得到纯化,成熟的干细胞在显微镜下表现为短梭形,轮廓清楚,胞核明显,呈圆形,核质比大。细胞融合后传代培养生长迅速,生长力旺盛,数日即能再次融合,流式细胞仪结果显示MSCs细胞均一性好,97%以上细胞表达干细胞表型CD29、CD90,不表达造血细胞表型CD45及CD34。经过诱导分化培养后MSCs向成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞分化,具有干细胞多能横向分化潜能。结论：利用贴壁法培养获得的兔MSCs,经过传代纯化后可以得到纯度较高的MSCs,所得细胞具有干细胞特性,能多向分化,可作为再生医学的种子细胞。第二部分：CXCR4基因转染兔骨髓间充质干细胞目的：探讨运用慢病毒介导CXCR4基因转染兔骨髓间充质干细胞的方法及其提高细胞体外迁移能力的可行性。方法：用慢病毒表达载体Rabbit CXCR4-pIRES2-EGFP(前期构建)和包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度,慢病毒感染MSCs。转染后用台盼蓝染色观察其细胞活力。通过QPCR的方法从mRNA水平检测CXCR4基因在MSCs中表达,用Western blot法检测CXCR4蛋白的含量。通过Transwell趋化实验来检测经过CXCR4转染后的MSCs向SDF-1趋化能力的变化。结果：CXCR4基因转染后的兔MSCs能成功表达CXCR4,转染后干细胞的CXCR4的基因水平和蛋白水平均显著升高。台盼蓝染色显示转染前后细胞活力无明显改变。Transwell趋化实验表明转染CXCR4基因后的MSCs对SDF-1的趋化能力,比未转染的MSCs明显升高(P<0.05)。加入CXCR4阻断型抗体AMD3100可有效抑制基因修饰细胞向SDF-1的迁移。结论：通过慢病毒载体能成功将CXCR4基因转染至兔MSCs,转染后对干细胞活力无明显影响,转染后干细胞高表达CXCR4,并能明显提高MSCs向SDF-1趋化的能力。第三部分高表达CXCR4的间充质干细胞对正常椎间盘退变的影响目的：初步探讨高表达CXCR4的骨髓间充质干细胞对正常椎间盘退变的延缓作用,为CXCR4-MSCs治疗椎间盘退变提供方法及理论基础。方法：通过慢病毒载体介导CXCR4基因转染兔骨髓间充质干细胞,使后者高表达CXCR4。取15只新西兰大白兔,全身麻醉后经腹膜后入路暴露椎间盘,用21G针头对L3/4、L4/5、L5/6椎间盘穿刺抽吸髓核后,随即向椎间盘注入20μl PBS或106个/mlCXCR4-MSCs或106个/ml MSCs,从而将实验分为：PBS组(对照组)、CXCR4-MSCs组和MSCs组。术后4周、8周从椎间盘高度指数、组织学、C012及Aggrecan mRNA含量改变等方面观察椎间盘改变,评估干细胞治疗椎间盘退变的疗效。结果：基因转染后荧光观察及Western Blot证实干细胞高表达CXCR4。移植术后4周,三组的椎间盘高度指数均较移植前明显下降,但三组之间差异无统计学意义；术后8周,CXCR4-MSCs组椎间盘高度指数降低较少,与PBS组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。移植后4周及8周,组织学可见CXCR4-MSCs组和MSCs组移植后椎间盘退变相对PBS组显著减慢,表现出一定的延缓退变作用。RT-PCR结果表明,术后8周,CXCR4-MSCs组和MSCs组Aggrecan mRNA相对表达量较PBS组多,差异具有统计学意义(P<0.05)；术后8周三组间Col2 mRNA表达无显著性差别。结论：CXCR4基因转染MSCs能移植椎间盘明显提高髓核Aggrecan mRNA表达,提高椎间盘高度指数,延缓椎间盘退变。第四部分：兔椎间盘退变模型的制作与评价目的：建立一种简单、有效、可重复的新西兰大白兔椎间盘退变模型。方法：取健康成年新西兰大白兔18只,体重在4.4±0.27kg,雌雄不限,排除脊柱畸形。1%戊巴比妥钠麻醉后经腹膜后入路暴露L3/4、L4/5、L5/6三个椎间盘,采用21号针头从椎间盘侧前方刺入,采用自制的限制器将穿刺深度控制在5mm,穿刺针在椎间盘内停留5秒,负压抽出髓核组织,反复穿刺三次。以L2/3,L6/7为对照。术后2、4、8周随机选取6只兔子

关键词： 间充质干细胞   急性肺损伤   糖原合成激酶-3β   Wnt/β-catenin信号通路   氯化锂  

摘要： 背景:急性肺损伤(ALI)是一种严重的疾病,也是造成危重患者出现并发症与死亡的主要因素之一。目前最常用于治疗ALI的方法是机械通气,机械通气能够为危重患者提供必要的生命支持,但是会导致肺功能和结构的改变。间充质干细胞(MSCs)疗法是一种很有前景的新疗法,被认为能够治疗急性肺损,但是其治疗机制尚不明确。糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)与多种疾病的发生有关,因此假设GSK-3β能够作为急性肺损伤的治疗靶点。目前的研究中,我们侧重于探究可能增强干细胞疗效的因素,哪些能够改善干细胞治疗的疗效。本研究旨在探索在体内间充质干细胞用于治疗急性肺损伤中,联合使用GSK-3β选择性抑制剂LiCl的作用。方法:实验选用40只成年SD大鼠,随机分为4组:1.对照组(5mg/kg生理盐水),n = 10.2.急性肺损伤组(ALI)(15 mg/kg 脂多糖(LPS)),n=***+MSCs组(LPS作用2 h后,尾静脉注射MSCs治疗),n = ***+MSCs+LiCl 组(LPS 作用 2 h 后,MSCs 和 20 mg/kg LiCl治疗).实验中,每隔24 h注射一次LiCl以保持血药浓度。在第12 h收集血清,用ELSA方法检测炎症细胞因子的浓度变化。实验第7天采集肺组织,RT-PCR方法检测肺泡上皮细胞膜蛋白A,C(SP-A,C)的基因表达以确定肺泡上皮Ⅱ型细胞的变化,以及Wnt/β-catenin信号通路上的β-catenin和GSK-3β基因表达情况。分别在第7、14天利用WB、苏木素和马松染色方法分别检测β-catenin蛋白的表达情况和肺组织变化。最后,用形态学分析表示胶原纤维的面积百分比。结果:结果显示,在LPS模型中,用GSK-3β抑制剂(LiCl)辅助MSCs治疗组可更有效的抑制血清中的炎症因子的表达,且SP-C的mRNA的表达显著升高。此外,实验第7天,与MSCs组相比,MSCs联合LiCl组的炎症细胞浸润程度,肺水肿,病理损伤和胶原沉积均显著下降。第14天与第7天相比,肺组织中β-catenin的蛋白表达,不规则细胞和胶原沉积均显著增多。结论:本研究可以看出GSK-3β抑制剂在体内急性肺损伤早期治疗中(<7天)可明显提高MSCs的治疗作用。但过多的使用GSK-3β的抑制剂则可引起β-catenin的异常表达,即导致纤维化阶段(>14天),同时引起不规则的细胞增殖。

关键词： 骨髓间充质干细胞   CXCL13   质粒   股骨头坏死   趋化   髋关节   股骨头坏死   关节置换   髋关节表面置换   股骨头坏死   直接前入路   髋关节置换   学习曲线   病例对照  

摘要： 第一部分CXCL13转染的骨髓间充质干细胞治疗激素性大鼠股骨头坏死的初步实验研究目的 初步探讨CXCL13转染的骨髓间充质干细胞治疗大鼠激素性股骨头坏死的实验疗效。方法 首先构建CXCL13的质粒,经慢病毒包装后转染大鼠骨髓间充质干细胞。利用脂多糖联合大剂量甲强龙建立大鼠激素性股骨头坏死模型,观察转染了 CXCL13的骨髓间充质干细胞是否增强MSCs的迁移能力。结果 成功构建CXCL13慢病毒质粒。运用LPS联合大剂量甲强龙注射成功建立了早期激素性股骨头缺血性坏死模型。Boyden小室法发现CXCL13转染的骨髓间充质干细胞体外能明显增强正常MSCs迁移率。结论 1 cxc113慢病毒质粒具有感染细胞的能力,兼具CXCL13基因表达的能力。2利用脂多糖联合大剂量甲强龙可以成功建立股骨头坏死模型,造模时间短,效果好。3 CXCL13转染的骨髓间充质干细胞体外可以增强MSCs的迁移率,需要进一步在体内动物实验研究其具体效应及分子机制。第二部分人工髋关节表面置换术治疗股骨头坏死疗效观察目的 探讨人工髋关节表面置换术(hip resurfacing arthroplasty,HRA)治疗年龄<55岁中青年股骨头坏死患者的临床疗效。方法 2008年1月一2009年4月采用HRA治疗Ficat Ⅲ期或Ⅳ期股骨头坏死患者34例,其中男19例,女15例;左髋16例,右髋18例;年龄平均54岁(33～59岁)。病因:酒精性9例,激素性8例,创伤性7例,不明原因10例。病程2～11年,平均5年。股骨头坏死改良Ficat分期为Ⅲ期26例,Ⅳ期8例。采用Harris髋关节评分系统(Harris hip score,HHS)和改良加州大学洛杉矶分校(UCLA)活动评分评估患者临床效果;术后摄X线片评估假体位置是否松动,并测量臼杯外展角、颈干角和股骨假体-股骨外侧皮质长度比判断术后有无股骨头假体塌陷。结果 术后32例患者获随访,平均随访时间78个月(70～84个月)。术后患者切口均Ⅰ期愈合,无切口感染、下肢深静脉血栓形成等术后早期并发症。随访期间均无假体松动、感染、股骨颈骨折、脱位及炎性假瘤等并发症发生。术后3天与6.5年比较患者臼杯外展角、颈干角及股骨假体长度与股骨外侧皮质长度比,差异均无统计学意义(p>0.05)。术后6.5年患者HHS评分和改良UCLA活动评分分别为(95.22±1.47)、(7.70±1.13)分,均显著优于术前的(50.1±2.27)、(3.9±0.9)分,比较差异均有统计学意义(p<0.05)。结论 严格掌握手术指征,HRA可作为治疗年龄中青年Ficat Ⅲ期或Ⅳ期股骨头坏死患者的有效方法。第三部分学习曲线阶段的微创直接前入路与传统后外侧入路THA临床疗效的对比研究目的 对比在学习曲线阶段的微创直接前入路(direct anterior approach,DAA)与传统后外侧入路全髋关节置换术治疗股骨头坏死患者的临床疗效。.方法 回顾性分析2008年1月至2009年12月收治并获随访的48例股骨头坏死FicatⅢ或Ⅳ期并行全髋关节置换手术治疗的患者资料,其中DAA组21例,男11例,女10例,平均年龄(65.2±4.3)岁;后外侧入路组27例,男16例,女11例,平均年龄(63.6±4.0)岁。比较两组患者的手术时间、术中出血量、术后卧床时间及术后并发症,术后一个月时测量髋臼杯外展角及股骨柄假体颈干角。术后1个月、6个月和5年时分别采用Harris髋关节功能评分(HHS)和视觉模拟评分法(VAS)评定髋关节功能及患髋疼痛情况。结果 所有患者术后获随访,时间48～73个月,平均60.4个月。DAA组手术时间[(78.30±5.08)min]较后外侧入路组[(75.61±10.60)min]长,术中出血量[(351.30±21.46)ml]少于后外侧入路组[(362.20±26.15)ml],但差别无统计学意义。术后卧床时间DAA组为(2.05±1.10)天,后外侧组(3.30±1.35)天,两者有统计学差异。术后一月时髋臼杯外展角和股骨柄假体颈干角无统计学差异。术后1个月、6月及5年,两组HHS与髋关节疼痛VAS评分差异均无统计学意义。DAA组有1例术中损伤旋股外侧动脉升支,1例大转子骨折,1例表浅伤口感染。后外侧组发生1例髋关节后脱位。两组末次随访时均无假体松动。结论 采用微创DAA与传统后外侧入路全髋关节置换术治疗股骨头坏死Ficat Ⅲ或者Ⅳ期均可以获得较好疗效,但在学习曲线阶段,针对复杂病例微创DAA较传统的后外侧入路其优势可能并不明显。

关键词： 慢加急乙肝肝衰竭   异体骨髓间充质干细胞   不同时相  

摘要： 目的:对异体骨髓间充质干细胞治疗各个时相慢加急性乙肝肝衰竭的临床治疗效果进行探讨。方法:选取该院2013年1月至2015年1月所收治的66例慢加急性乙肝肝衰竭患者作为观察的对象,按随机数字表法分成常规组与实验组,其中,前者予以常规综合治疗,在此基础之上,对后者患者予以异体骨髓间充质干细胞治疗,然后对两组患者的临床治疗情况比较。结果:两组患者进展期患者存活率相比较,差异无统计学意义(P>0.05);而组间平台期患者存活率相对比,差异显著(P<0.05);另外,实验组平台期患者存活率高于进展期,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在常规治疗的基础之上,对慢加急性乙肝肝衰竭患者予以异体骨髓间充质干细胞治疗,效果显著,可提升患者的存活率,尤其是平台期患者,疗效更为明显,值得在临床上大力推行与应用。

关键词： 芥子气   肺损伤   BMSCs   抗炎作用   氧化应激   免疫调节  

摘要： 芥子气(sulfur mustard,SM,分子式CHClS,化学名二氯二乙硫醚,CAS登记号505-60-2)是一种双功能烃化剂,是糜烂性毒剂的典型代表,也是主要的化学威胁之一。其先后在一战、日本侵华战争及近期的两伊战争等多次冲突中大规模使用,造成了严重的人员伤亡。芥子气结构简单,容易合成,防治困难,易被国内外恐怖分子掌握和利用,造成大量人员伤亡及危害公共安全。据报道近几年伊斯兰国(ISIL)多次在叙利亚和伊拉克使用包括芥子气在内的化学战剂,造成无辜平民的重大伤害。此外,在日军侵华战争遗留的化学武器中,芥子气是主要的化学毒剂之一,对我国人民的健康及环境安全构成重大威胁。因此积极探索芥子气中毒机制,开发有效的防治药物与措施,对国家公共安全、人民群众的健康及环境都具有重大的战略意义。肺是芥子气损伤的主要靶器官之一,急性肺损伤及其继发感染是芥子气早期致死的主要原因。大量研究表明,芥子气导致的肺损伤与炎症、免疫反应和氧化应激有着密切的关系。而近年来研究表明,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)可以修复多种受损组织,而且在治疗肺损伤的方面也具有较好的应用前景。许多动物模型均证实BMSCs能够改善各种原因所致的肺损伤。BMSCs主要分泌多种可溶性细胞因子、活性分子、抑制性因子等,还可以通过直接抑制T细胞增殖、降低巨噬细胞、DC细胞的活性,从而发挥抗炎、免疫调节及抗氧化的作用。本研究首次将BMSCs用于治疗芥子气中毒,考查了BMSCs对芥子气中毒小鼠生存率的影响;研究了BMSCs对芥子气中毒小鼠肺损伤的改善作用,并从炎症、免疫反应和氧化应激三个方面,初步探讨了其可能的作用机制。一、BMSCs对芥子气中毒小鼠生存率的改善作用本课题采用皮下注射的方式建立芥子气中毒的损伤模型,设置不同梯度染毒浓度,摸索实验剂量,建立了稳定的芥子气实验模型。原代分离培养ICR小鼠BMSCs,根据目前公认的鉴定方法对BMSCs进行鉴定:结果显示细胞高表达间质类细胞的标志分子CD29和CD44,但是不表达造血干细胞的标志分子CD34和CD45;且能够成功诱导分化为成骨细胞、成脂细胞。从而确认我们分离出的细胞正是BMSCs,能够用于后续实验研究。尾静脉注入鉴定后的BMSCs,考察BMSCs移植后对小鼠生存率的影响。芥子气染毒后,连续观察14天,发现BMSCs可以显著提高芥子气中毒小鼠生存率(P<0.05)。芥子气染毒后,小鼠出现体重下降、厌食、腹泻,眼睑粘连等症状,死亡时间集中在染毒后第6天左右。与SM组比较,BMSCs治疗组的体重下降幅度、腹泻等症状均有所改善。二、BMSCs对芥子气中毒小鼠肺损伤的改善效应建立小鼠染毒模型后,BMSCs经尾静脉注入小鼠体内,我们从芥子气中毒后使用BMSCs前后肺组织损伤变化对比入手,考查BMSCs对肺组织的病理变化、炎性细胞浸润、肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)浓度、肺湿干重比(W/D)的改善情况。HE染色结果显示,BMSCs可以减轻芥子气中毒小鼠肺组织的病理损伤;且与SM组比较,BMSCs组的病理损伤评分降低(P<0.05)。免疫组化结果显示,BMSCs减少炎性细胞如MPO+中性粒细胞(P<0.01)、CD68巨噬细胞(P<0.01)及CD3T细胞(P<0.01)的浸润。同时BMSCs治疗显著降低了芥子气中毒小鼠肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)浓度(P<0.01)及肺W/D比值(P<0.05)。综上,BMSCs可有效的减轻芥子气引起的肺组织损伤。三、BMSCs改善芥子气中毒小鼠肺损伤的初步作用机制探讨通过ELISA及荧光定量PCR技术,检测了与芥子气相关的主要炎症因子如TNF-a、IL-1b、IL-10的表达情况。实验发现,与SM组比较,BMSCs可以降低肺组织内促炎因子TNF-a、IL-1b表达量(P<0.01),提高抑炎因子IL-10表达量(P<0.01)。进一步免疫组化检测核转录因子NF-kB表达,发现与SM组比较,BMSCs显著下调NF-kB的蛋白表达(P<0.01)。该结果提示BMSCs减轻芥子气引起的炎症反应可能是通过降低TNF-a、IL-1b表达量,增加IL-10的表达量,且抑制NF-kB激活实现的。液相悬浮芯片技术检测小鼠血清中多个趋化因子的含量变化,结果显示,与SM组比较,BMSCs治疗可降低LIX/CXCL5、IP-10/CXCL10、MCP-1/CCL2、MIP-1b/CCL4、RANTES/CCL5、M-CSF的表达(P<0.05),而KC/CXCL1、MIP-2/CXCL2、MIG/CXCL9、MIP-1a/CCL3的表达均无显著性差异,提示BMSCs的免疫调节作用在改善芥子气引起的肺损伤中发挥重要作用。另外,我们检测了肺组织中M

关键词： 间质干细胞移植   脊髓损伤  

摘要： 背景：骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗脊髓损伤（SCI）成为国内外研究的热点，采用何种移植途径更有利于BM-SCs在脊髓损伤处存活、分化，促进神经功能恢复，更适合于临床应用，是当前亟待解决的主要问题。目的：BMSCs通过直接注射、股静脉注射和腰椎穿刺三种途径移植到脊髓损伤大鼠模型内，观察、比较并筛选适于临床应用的移植途径。方法：采用全骨髓法分离培养BMSCs。采用改良Allen’s法建立T10脊髓损伤大鼠模型，建模后3d随机分为模型对照组（A组）、直接注射组（B组）、股静脉注射组（C组）、腰椎穿刺组（D组）。BMSCs移植后3、7、14、21d采用BBB评分方法对各组大鼠评分。免疫组化检测各组5．溴．2．脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）单染的Brdu＋细胞、Brdu＋胶质纤维酸性蛋白（GFAP）3和Brdu＋神经微丝蛋白200（NF-200）双阳性细胞，并计算各组GFAP、NF-200表达的平均光密度值（MOD）。结果：BMSCs迁移至脊髓损伤部位并存活，还可表达GFAP和NF-200。移植后各组GFAP和NF-200的MOD均增加，B、C、D组大鼠功能恢复明显。结论：综合评判和比较三种移植途径，腰椎穿刺是一种侵袭性较小、较为理想的细胞植入方式，相对优于直接注射和股静脉注射，更适于临床应用。

关键词： 酒精性肝硬化   骨髓间充质干细胞   移植   疗效  

摘要： 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗失代偿期酒精性肝硬化(ALC)患者的疗效。方法2007年至2012年在我院行BMSCs移植治疗的失代偿期ALC患者28例,给予基础治疗联合BMSCs移植治疗;按照性别、年龄和并发症进行1:1倾向性评分匹配选择另28例患者为对照,只接受基础治疗。常规检测血肝功能指标,使用计算机断层扫描和DSA造影进行影像学检查。结果接受细胞移植治疗的患者在移植后谷丙转氨酶下降,总胆红素降低,白蛋白逐渐升高,凝血酶原时间及Child-Pugh评分逐渐下降,终末期肝病模型评分于移植后第4周降至(20.6±5.2)分,显著低于移植前的(26.4±5.1)分(P<0.05),也显著低于对照组的(24.7±5.1)分(P=0.009),但至第72周时移植组为(17.5±4.1)分,与对照组的(18.9±6.9)分相比,无显著性差异(P=0.536);两组144周生存率分别为32.1%和25.6%,无显著性差异(P=0.125);进行分层分析结果显示,Child-Pugh B级患者在细胞移植144周生存率为66.7%,显著高于对照组的36.4%(P=0.046),而两组Child-Pugh C级患者生存率分别为12.5%和17.6%,无显著性差异(P=0.788)。结论 BMSCs移植治疗失代偿期ALC患者的近期疗效显著,但远期疗效不显著。移植前患者病情可能影响移植后疗效,但此结论有待更大样本,多中心的随机对照试验来证实。

关键词： 病毒载体介导   干细胞治疗   骨髓间充质   骨质疏松   基因转染   骨保护素   兔  

摘要： 本研究旨在探讨慢病毒载体介导骨保护素基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松。

关键词： 骨髓间充质干细胞   miR-122   细胞移植   肝损伤  

摘要： 目的:探讨miR-122在骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗大鼠急性肝损伤中的作用,阐明相关作用机制。方法:密度梯度离心法分离收集雄性大鼠的BMSCs,分为转染组和对照组,其中转染组BMSCs采用脂质体介导转染miR-122mimics,对照组BMSCs未接受转染。将60只四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝损伤大鼠随机分为肝损伤对照组(静脉注射生理盐水)、普通治疗组(静脉移植普通BMSCs)和实验治疗组(静脉移植转染miR-122的BMSCs)(n=20)。移植细胞后1、7和14d检测大鼠肝功能,肝组织行HE染色观察其病理学改变。结果:转染miR-122mimics后7d,BMSCs中白蛋白(ALB)表达水平明显上调,而甲胎蛋白(AFP)的表达水平则明显下调。移植细胞后1d,与普通治疗组比较,实验治疗组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性差异无统计学意义(P>0.05);移植细胞后7和14d时,实验治疗组大鼠血清ALT和AST活性均低于普通治疗组(P<0.05);HE染色,实验治疗组大鼠肝脏充血、细胞质内空泡变性及肝细胞坏死情况明显好于普通治疗组。结论:上调BMSCs中miR-122表达水平能够促进其分化为肝样细胞,并可明显改善CCl4所致大鼠肝脏损伤。

关键词： 骨髓间充质干细胞   缺血再灌注   脑梗死   移植   凋亡  

摘要： 目的探讨缺血再灌注6 h后经动、静脉途径移植骨髓间充质干细胞疗效的差异。方法将27只大脑中动脉缺血2 h后再灌注SD雌性大鼠模型随机分为颈动脉BMSCs组8只、尾静脉BMSCs组7只、颈动脉PBS组6只和尾静脉PBS组6只。全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs,流式细胞仪检测鉴定;取缺血再灌注后6 h为移植时间点;移植后第7天观察改良神经功能损伤评分(m NSS)以评价神经功能恢复和体能恢复,免疫组织化学检测梗死周围组织GFAP、Bax和Bcl-2,TUNEL法检测梗死周围组织细胞凋亡,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α。结果 BMSCs表面抗原CD90表达率为95.7%、CD29表达率为97.3%、CD106表达率为52.7%、CD11b表达率为6.01%、CD34表达率为2.95%、CD45表达率为2.26%。BMSCs组和PBS组相比较:GFAP阳性细胞数、Bcl-2平均光密度值显著增多;m NSS、血清TNF-α浓度、TUNEL阳性细胞数显著减少;Bax平均光密度值无明显差异。颈动脉BMSCs组和尾静脉BMSCs相比较各项数据无统计学差异。结论在缺血再灌注早期动、静脉途径移植BMSCs疗效无差异,但尾静脉途径因创伤微小、可移植细胞量多,为早期最佳移植途径。