关键词： 白细胞介素-10   间充质干细胞   急性心肌梗死  

摘要： 背景和目的 冠心病在发达国家的发病率和死亡率都居第一位。随着生活水平的提高,我国冠心病的发病率呈逐年增加趋势。通常认为,心肌细胞是细胞分化的终点,没有再生和修复损伤的能力,一旦发生心肌梗死,存活心肌细胞通过细胞肥大而不是细胞增生来代偿。大量坏死的心肌只能由成纤维细胞所填充,最终为瘢痕组织替代,导致局部心肌收缩功能紊乱,心功能不全。目前的治疗手段虽然可以挽救濒临坏死的心肌细胞,但对已坏死的心肌细胞却无能为力,不能解决有功能心肌细胞数目减少这一根本性问题,因此我们必须寻找更为有效的治疗方法。近年,心肌细胞可以再生的观点打破了人们一贯认为心肌不能再生的陈旧概念,这促使研究人员探索各种可能促进心肌细胞再生和增殖的方法来治疗心肌损伤和心力衰竭。目前,干细胞移植治疗重症心肌损伤和终末期心力衰竭已成为新的研究热点,其中骨髓间充质干细胞移植治疗心肌损伤备受瞩目。作为改善心肌梗死病人预后的一种新的治疗方式,干细胞移植可以直接或间接增强心脏的收缩功能。自体干细胞移植无来源困难和免疫抑制剂使用等问题。迄今已有改造的胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES)、骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)和骨骼肌干细胞(skeletal muscle stem cells)等用于再生或替代损伤心肌的研究报道。理论上,到达损伤区域的移植细胞数量越多,治疗效果将越明显,

关键词： 间充质干细胞   神经细胞   β-疏基乙醇   大脑中动脉栓塞   细胞移植  

摘要： 骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSC)是一类来源于骨髓间质的具有自我更新和多向分化能力的多能干细胞,在特定的条件下可以分化为多种组织细胞,如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、神经细胞等。MSC取材方便,易于分离获取,可以在短期内在体外大量扩增,对于解决细胞移植用于神经系统疾病的细胞来源问题具有重大意义,这为脑血管疾病的治疗带来新的希望。 但是,目前MSC用于神经系统疾病的治疗仍存在许多亟待解决的问题,MSC体外定向诱导分化为神经元样细胞的条件及机制尚不明了,它在神经系统疾病病变组织中维持稳定和参与修复的作用机理不清,细胞移植应当在什么时机进行才能使机体获益最大尚不清楚,MSC的示踪、植入的途径、移植后细胞的鉴定等问题还有待于进一步研究。 本研究中我们采用4周龄体质量120-160g的SD大鼠为研究对象,用Percoll淋巴分离液密度梯度离心的方法分离出骨髓单个核细胞,再结合贴壁筛选法分离骨髓间充质干细胞,以低糖型DMEM培养基(DMEM-LG)+15%胎牛血清(FBS)为培养基进行体外培养。

关键词： 骨髓间充质干细胞   细胞培养   急性心肌梗死   细胞移植   二维超声心动图   组织多普勒超声心动图   心脏功能  

摘要： 目的 心血管疾病是全球发病率、死亡率居先的疾病,慢性充血性心力衰竭是心血管疾病最终的共同转归。各种原因所致的心肌细胞丢失、瘢痕形成及心室重构是造成心脏功能恶化的主要原因,也是最终导致慢性充血性心力衰竭的病理基础。因此,近十年来兴起的细胞移植治疗损伤心肌的技术即细胞心肌成形术(celluar cardiomyoplasty,CCM)引起了人们高度的重视,已成为本专业的研究热点。本文拟将大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-drived mesenchymal stem cells,MSCs)进行分离、纯化、扩增并诱导成心肌样细胞,移植到同种异体大鼠的心肌梗死区,研究移植的MSCs对梗死部位和左室整体功能的影响。探讨骨髓间充质干细胞心脏移植对心肌梗死治疗的可行性和有效性。 方法 1、MSCs的分离、纯化、扩增和培养:取10只体重200±20g雌性Wistar大鼠,无菌条件下采集双侧股骨、胫骨骨髓,用培养液冲至培养瓶中,通过及时、反复传代对细胞进行扩增纯化。作为供体细胞来源。 2、MSCs向心肌样细胞的诱导及鉴定:第3代细胞加入诱导剂5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)5umol/L,24h换液去除诱导剂,每日在倒置显微镜下观察细胞分化过程中的形态变化。应用免疫组化法鉴定细胞肌动蛋白及肌钙蛋白的表达,对分化形成的心肌样细胞进行鉴定。 3、大鼠心梗模型的建立及细胞移植:将30只体重200±20g的雌性Wistar大鼠用水合氯醛腹腔麻醉、气管插管连接微型呼吸机进行通气。液氮冷冻大鼠

关键词： 骨髓   间充质干细胞   同种异体移植   急性心肌梗死   组织多普勒超声心动图  

摘要： 目的 建立大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)体外分离、培养、传代及诱导分化的实验方法;观察MSCs能否经体外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导分化为心肌样细胞:探讨MSCs同种异体移植治疗急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)的可行性。 方法 2月龄健康雌性Wistar大鼠55只,5只用于提供MSCs;余50只用于建立AMI模型,随机分为两组,MSCs移植组和对照组各25只。 取大鼠双侧股骨、胫骨、肱骨,用DMEM培养液反复冲洗骨髓腔,将冲洗液移入培养瓶培养。以贴壁筛选法分离、纯化MSCs。当MSCs达80%融合时消化传代。MSCs传至第3代覆盖瓶底达50%时开始加入终浓度为10μmol/L的5-aza诱导,作用24h。以后每代细胞覆盖瓶底达50%时均给予5-aza诱导1次。用荧光相差显微镜观察各代细胞的形态改变和生长分化情况。以传至第15代达80%融合、5-aza诱导13次、培养达4个月之久的MSCs作为移植细胞备用。少量移植细胞用于透射电镜观察和免疫组化鉴定心肌特异性蛋白,余者均在5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine,BrdU)标记后用于移植。 应用液氮冷冻法制作大鼠AMI模型,选择梗死灶及其周围共四个位点为注射点,移植组每点注入MSCs悬液70μl(4～5×10～6个细胞),对照组注入等量DMEM液。分别于术前1天、术后1周、术后4周行组织多普勒超声心动图(Tissue Doppler Echocardiography,TDE)检查,以收缩期峰值速度(Systolic Peak Velocity,Vs)、左室舒张末容积(Left Ventricle End Diastolic Volume,LVEDV)和左室射血分数(Left Ventricle Ejection Fraction,LVEF)为指标评价心功能。移植组于

关键词： 骨髓间充质干细胞   急性心肌梗死   诱导分化   介入治疗   心肌再生   左室重构   心脏功能   小型猪  

摘要： 研究背景 急性心肌梗死(Acute myocardial infarction，AMI)是全球范围内严重威胁人类健康的临床常见病。现有的心肌梗塞内科药物治疗及血运重建治疗方法存在着无法逆转梗死期坏死的心肌，对终末期心力衰竭疗效差的缺陷。而心脏移植作为治疗终末期心衰的有效手段，也存在着价格昂贵、供体来源有限、免疫排斥等问题，难以临床广泛应用。最近，随着对干细胞(stem cell)研究的不断深入，采用生物学技术将不同组织来源的干细胞，在体外分离、培养、扩增后，通过不同的转运途径进行干细胞移植治疗，以期替代、修复或改善受损心肌组织的生物学功能的心肌细胞重塑治疗(Cellulare cardiomyoplasty，CCM)作为一种治疗心脏疾病的全新模式，可能成为心肌梗死治疗的“捷径”，显示出良好的临床应用前景。其中，寻找细胞移植治疗的理想种子细胞是心肌细胞重塑治疗的关键。 研究目的 通过对以下几方面问题的研究：1)优化骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)的分离、纯化、扩增的方法；2)观察MSCs在体外诱导分化为功能性心肌细胞的能力；3)建立小型猪AMI模型，模拟AMI患者临床成功血运重建治疗后经冠状动脉干细

关键词： 心肌梗塞   细胞移植   同种异体   骨髓间充质干细胞   基因转染Cx43   心功能   缝隙连接细胞间通讯功能  

摘要： 应用骨髓细胞进行心肌细胞移植代替损伤的心肌及疤痕组织的研究己受到广泛的关注,为心肌疾病的治疗提供了新的途径。有充分的证据表明:在缺血心肌或其他心脏疾病中,与缝隙连接形成相关的Cx43 表达显著减少及表达位置异常,这种变化成为心律失常及心肌功能障碍的基础。我们以SD 大鼠为研究对象,提取、纯化及标记骨髓间充质干细胞,体外建立转染Cx43 的基因工程细胞;建立大鼠急性心肌梗死模型;在梗死区内经局部注射移植基因工程细胞,研究急性心肌梗死后同种异体移植的基因工程细胞存活、再生心肌及改善心功能的作用,为临床上应用同种异体基因工程骨髓间充质干细胞治疗多种原因所致的心肌损伤探索理论依据。全文由三个部分组成: 第一部分骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化和鉴定 目的为实验作细胞材料准备。方法体外分离、培养和纯化骨髓间充质干细胞,光镜和电镜观察细胞的结构,流式细胞仪鉴定。结果分离培养的骨髓间充质干细胞为成纤维样细胞,增值能力强,传六代仍能保持原始的未分化状态。第三代以后细胞纯度达97%以上。结论所培养的细胞为骨髓间充质干细胞,第六代的细胞是作为移植细胞的理想选择。 第二部分基因重组质粒pBudCE4.1Cx43体外转染骨髓间充质干细胞 及其表达产物和功能的测定 目的用基因重组质粒pBudCE4.1Cx43 转染大鼠BMSCs,观察Cx43 基因在BMSCs 中的瞬时及稳定表达。方法取第六代BMSCs,用脂质体法将基因重组表达质粒

关键词： 帕金森病   Nurr1基因   骨髓间充质干细胞   中脑腹侧细胞   诱导分化   细胞移植   大鼠模型  

摘要： 帕金森病(PD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病，黑质致密部多巴胺能神经元选择性变性、缺失是其主要的病理特征，临床上以静止性震颤、运动迟缓、肌张力增高和姿势平衡障碍为主要表现。 　　近年来国内外均有研究证实MSC移植治疗PD大鼠有效，但由于目前没有统一的移植标准(如移植部位，移植细胞数目，移植前细胞存活率以及是否添加各种细胞因子等)，所报道的治疗效果差异很大，而且所有这些实验结果都是建立在移植前后或与对照组比较得出的结论;缺乏与现有成熟治疗手段的对比，所以其疗效的确切价值尚无法评价。 　　本研究拟通过基因工程和细胞工程相结合的方法，构建真核表达质粒pcDNA3.1/Nurr1，采用LIPOFECTAMINE2000脂质体介导法将Nurr1基因转染MSC，经G418筛选获得稳定表达的Nurr1-MSC细胞株。探讨在不同细胞因子和诱导剂作用下Nurr1基因对MSC的诱导情况;并将Nurr1-MSC、MSC、VMC和生理盐水(对照组)分别移植PD大鼠纹状体尾状核头部，检测移植术前1周至术后8周PD大鼠行为学变化，高效液相测定纹状体多巴胺及其代谢产物含量，比较不同方法治疗PD模型鼠的疗效，为MSC和Nurr1-MSC的临床潜在应用提供理论和实验依据。研究目的1、探讨在不同细胞因子和诱导剂作用下，过表达Nurr1的MSC是否可以体外分化为神经元或DA能神经元。2、探讨过表达Nurr1的MSC移植到PD大鼠纹状体内的存活，迁移以及体内是否可以分化为多巴胺能神经元。3、以假手术组(对照组)和胎鼠中脑腹侧细胞(VMC)组为参照，观察Nurr1-MSC、MSC移植治疗PD大鼠行为学改善程度，检测脑内纹状体DA及其代谢产物的水平变化，评估Nurr1-MSC、MSC、VMC移植治疗PD大鼠的疗效，探讨Nurr1-MSC、MSC治疗PD的临床潜在应用价值。

关键词： 骨髓间充质干细胞   移植   脑缺血再灌注   神经营养因子   凋亡   大鼠  

摘要： 目的:脑血管疾病是神经系统的常见病及多发病,由于神经元受损伤后很难再建立起正常的突触联系,因此,一直是临床治疗的难题。近年来,进行细胞移植以替代或修复受损的脑组织一直是研究的热点。目前,用于中枢神经移植的供体细胞有多种,其中,骨髓间充质干细胞(MSCs)是来自骨髓的非造血干细胞。研究发现,和其它干细胞相比,MSCs来源丰富、取材简便;容易分离纯化培养;免疫原性弱;克服了伦理道德问题;因此,已越来越受到研究者的重视。MSCs具有强大的增殖能力和多向分化潜能。研究已证实,在适宜的体内或体外环境下,MSCs可以分化为神经元样细胞,移植到脑内后,能明显改善脑损伤大鼠的神经功能。但这些细胞是否能同宿主神经细胞建立突触联系,如何参与了宿主神经功能的重建,还没有被研究证实。因此,MSCs具体作用机制仍不清楚。本实验旨在线拴法制作大鼠脑缺血再灌注模型,通过颈动脉移植MSCs到大鼠体内,观察MSCs移植对大鼠缺血性脑损伤后神经功能恢复的作用并探讨其作用机制。 方法:将84只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组和MSCs治疗组;假手术组12只,其余每组各24只。每组又根据再灌注时间的不同随机分为2d、4d、6d、8d四个时间点,假手术组每个时间点各3只,其余每组每个时间点各6只。体外培养MSCs;线拴法制作脑缺血2小时再灌注模型。模型组仅造模,MSCs治疗组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组在缺血2h再灌注24小时后分别经颈外动脉将标记5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)的2×10～6MSCs悬

关键词： 骨髓间充质干细胞   脊髓损伤   细胞移植  

摘要： 背景 脊髓损伤常导致损伤平面以下感觉、运动功能不可逆、永久性丧失,给患者造成极大伤害,给家庭及社会造成极大负担。中枢神经系统损伤后,轴突所处的微环境比轴突本身更影响其再生。细胞移植可替代丢失的神经细胞,它分泌的各种神经生长因子可促进轴突的再生,桥接神经缺损后遗留的空隙,改善CNS的轴突再生环境,为轴突的生长提供物理支架,符合联合治疗脊髓损伤理念,因此细胞移植成为目前脊髓损伤修复领域研究的热点。目的 研究静脉移植BMSC对脊髓损伤的修复作用。力弦(1)体外分离、培养、扩增、纯化、BrdU标记10只同种异体SD大鼠的BMSC。(2)WD法制成同种大鼠脊髓损伤完全瘫痪动物模型,制模后7天随机分为A、B、C三组,A组18只,作为BMSC移植组,B组16只,作为对照组,C组12只,作为空白手术对照组。(3)A组经鼠尾静脉移植2×10～6/ml的BMSC细胞悬液1ml,B组移植1mlL-DMEM液,C组作为空白手术对照组。(4)组织学及免疫组织化学观察移植后2、3、6w检测BMSC在损伤段脊髓的存活、分布、分化,检测损伤段脊髓内GAP-43、NF及巢蛋白的表达,移植后每周用BBB评分评估各组后肢运动功能。结果 BMSC能在体外大量扩增、经6次传代后,无细胞衰老征象。移植后2w BMSC主要分布于损伤段及邻近节段脊髓内,约占移植细胞数的4.9%,移植后6、8w,细胞数量明显减少,但仍可检测到存活的BMSC。移植后2w,BMSC形态大多变为园形或椭圆形,部分阳性标记的细

关键词： DCM   对照组   自体移植   细胞移植   扩张型心肌病   心功能   治疗   增殖分化   骨髓间充质干细胞   动物  

摘要： 目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)自体移植于扩张型心肌病后的增殖分化情况和对心功能的保护作用。方法 日本大耳白兔随机分为4组:(1)扩张型心肌病(DCM)细胞移植组(n=12);(2)DCM对照组(n=12);(3)DCM假手术组(n=12);(4)正常对照组(n=10)。分离培养DCM细胞移植组MSCs后,前3组动物用盐酸阿霉素建立兔DCM模型,第4组注射等量生理盐水。模型建立成功后第3周,将5溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记的MSCs自体移植到细胞移植组心肌内,对照组注射培养基,假手术组只开胸,不做注射。4周后采用超声心动图和血流动力学参数评价各组动物的心脏结构和功能,并取移植区心肌组织行免疫荧光染色以观察移植细胞的增殖分化情况。另选部分心肌组织做HE染色查看心肌组织形态学改变。结果 与正常对照组相比,DCM各组心功能明显受损。细胞移植4周后,可以在移植组心肌内找到BrdU标记的阳性细胞,且一部分表现为心肌特异性肌钙蛋白T染色阳性,一部分Ⅷ因子相关抗原染色阳性并参与形成新生血管,其他组中没有发现。且细胞移植组心功能较对照组和假手术组有明显改善。组织学检查示前3组均有心肌细胞变性坏死。结论 MSCs自体移植到DCM后有可能增殖分化为心肌样细胞和血管内皮样细胞并改善心功能。