关键词： 支气管肺发育不良   超声   脂多糖   骨髓间充质干细胞治疗  

摘要： 目的探讨超声引导下注射骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)治疗胎兔支气管肺发育不良(BPD)的作用及可能机制。方法检测BM-MSCs细胞表面标志物、三系分化能力、慢病毒包装与感染能力。将新西兰孕兔随机分为A组(正常组)、B组(LPS组)和C组(LPS+BM-MSCs组),每组选取3只新西兰孕兔、10只胎兔。于孕23 d在超声引导下B、C组经右肺组织注射脂多糖(LPS),A组注射等量生理盐水。孕27 d超声引导下A、B组经右肺组织注射生理盐水,C组注射BM-MSCs。孕29 d后行剖宫产分离胎兔肺组织。采用苏木精-伊红(H-E)染色观察肺组织病理改变,RT-PCR检测肺组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、肺泡表面活性蛋白A(SPA)、肺泡表面活性蛋白B(SPB)和肺泡表面活性蛋白C(SPC)mRNA的表达。结果BM-MSCs细胞表面标记物CD29和CD44阳性,CD11b/c和CD45阴性,具有三系分化能力。慢质-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)感染所有rBM-MSCs需24 h。不同组别中,B组肺组织辐射状肺泡计数(RAC)数量较A组明显减少;C组肺组织RAC数量较A组稍减少,较B组稍增加,差别有统计学意义(P<0.05)。与A组比较,B组胎兔肺组织肺泡壁增厚,炎性细胞浸润,肺泡结构简化,数量减少,部分表现为充气不均匀;与A组比较,C组胎兔肺组织肺泡壁稍增厚,肺泡少量炎性细胞浸润;与B组比较,C组肺组织肺泡壁变薄,肺泡数量增多,炎性细胞浸润减少。与A组比较,B组胎兔肺组织中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α和VEGF mRNA的表达上升,C组较B组表达下降;与A组比较,B组胎兔肺组织中SPA、SPB和SPC mRNA的表达下降,C组较B组表达上升,差别有统计学意义(P<0.05)。结论超声引导下注射LPS可引起支气管肺发育不良,BM\|MSCs胎肺注射治疗可减轻肺组织病理变化,推测可能通过分泌各种因子减轻炎症反应,促进肺泡发育、损伤修复和血管重建。

关键词： 骨髓间充质干细胞   缺氧缺血性脑损伤   小胶质细胞   神经元  

摘要： 目的观察骨髓间充质干细胞移植治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤对小胶质细胞和神经元表达的影响。方法将10日龄C57BL/6小鼠60只按随机区组法分为假手术组、缺氧缺血组、安慰剂组和干细胞组,每组15只小鼠。缺氧缺血组、安慰剂组和干细胞组均进行缺氧缺血模型制备,假手术组仅颈部切口后缝合。安慰剂组造模完成后用脑立体定位仪下在前囟点注射磷酸盐缓冲液,干细胞组造模完成后用同样的方法在同一位置注射骨髓间充质干细胞。干细胞组移植7 d后,取4组小鼠的脑组织,用透射电镜观察其脑组织超微结构,采用免疫荧光染色观察4组小鼠左侧脑皮质神经元和小胶质细胞表达情况,并进行比较。结果干细胞移植7 d后,干细胞组神经元形态改善,神经纤维肿胀减轻。干细胞移植7 d后,皮质区神经元的表达存在组间差异[F(3,8)=88.080,P<0.05],干细胞组小鼠左侧皮质神经元表达显著多于缺氧缺血组和安慰剂组,差异均有统计学意义(P<0.05);干细胞移植7 d后,皮质区小胶质细胞的表达存在组间差异[F(3,8)=11.331,P=0.003],干细胞组小胶质细胞的表达显著低于缺氧缺血组和安慰剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤可能通过抑制小胶质细胞表达来诱导神经元再生,减轻炎症反应。

关键词： 骨髓间充质干细胞   骨质疏松症   成骨分化   成脂分化   迁移归巢  

摘要： 骨质疏松症(osteoporosis,OP)是一种以骨量快速降低和骨小梁微观结构变稀疏,以及因此导致骨强度降低和骨折风险增加为特征的,与机体代谢、内分泌紊乱高度相关的全身性骨骼疾病[1-2]。在我国有着数量庞大的OP患者群体,40岁以上人口中女性患病率高达20.6%,男性发病率也有5.0%[3]。患者因骨质流失,骨强度降低导致的骨质疏松性骨折和长期慢性全身骨痛等极大地降低了患者生活质量,提高了远期死亡风险[4-5]。

关键词： 山奈酚   骨髓间充质干细胞   辅助性T淋巴细胞   调节性T淋巴细胞   溃疡性结肠炎  

摘要： 目的观察山奈酚联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗溃疡性结肠炎小鼠的疗效并探讨其机制。方法3周龄雄性C57BL/6J小鼠处死后提取BMSCs,12只6周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组、造模组、造模与山奈酚治疗组以及造模与山奈酚联合BMSCs治疗组,每组3只。对照组小鼠自由饮用正常灭菌双蒸水,其余3组小鼠自由饮用含3%葡聚糖硫酸钠的灭菌双蒸水建立溃疡性结肠炎模型,造模与山奈酚治疗组、造模与山奈酚联合BMSCs治疗组小鼠同时给予每日山奈酚灌胃,造模与山奈酚联合BMSCs治疗组在造模第1天、第4天和第7天尾静脉注射提取的BMSCs,其余组小鼠灌注同样量的溶解剂。造模结束后10 d,每天测量小鼠体质量,10 d后取出小鼠结肠,测量小鼠结肠长度。采用流式细胞术检测小鼠结肠组织辅助性T淋巴细胞(Th17)、调节性T淋巴细胞(Treg)比例,ELISA法检测小鼠血浆白细胞介素17A(IL-17A)、IL-10,RT-qPCR法检测小鼠结肠组织IL-17A、IL-10 mRNA。采用HE染色观察小鼠结肠黏膜组织病理学改变,免疫组织化学染色观察小鼠结肠组织肠上皮紧密连接蛋白occludin及ZO-1表达情况。结果结肠长度对照组>造模与山奈酚联合BMSCs治疗组>造模与山奈酚治疗组>造模组(P均<0.05);造模结束后1~10 d,对照组体质量逐渐上升,造模组体质量逐渐下降,造模与山奈酚治疗组、造模与山奈酚联合BMSCs治疗组体质量自第6天开始逐渐上升,且造模与山奈酚联合BMSCs治疗组体质量高于造模与山奈酚治疗组。结肠组织Th17比例造模组>造模与山奈酚治疗组>造模与山奈酚联合BMSCs治疗组>对照组,结肠组织Treg比例对照组>造模与山奈酚联合BMSCs治疗组>造模与山奈酚治疗组>造模组(P均<0.05)。血浆、结肠组织IL-17A表达造模组>造模与山奈酚治疗组>造模与山奈酚联合BMSCs治疗组>对照组,IL-10表达对照组>造模与山奈酚联合BMSCs治疗组>造模与山奈酚治疗组>造模组(P均<0.05)。HE及免疫组化染色结果显示,与造模组比较,造模与山奈酚治疗组、造模与山奈酚联合BMSCs治疗组结肠黏膜组织损伤程度减轻,肠上皮紧密连接蛋白occludin及ZO-1表达增加,且造模与山奈酚联合BMSCs治疗组对结肠黏膜组织损伤的改善作用更加明显。结论山奈酚联合BMSCs治疗溃疡性结肠炎小鼠能够提高疗效,其机制可能与调节Th17/Treg平衡以修复肠道上皮屏障有关。

关键词： 股骨头坏死   间质干细胞   干细胞移植   激素性股骨头坏死   骨髓间充质干细胞  

摘要： 激素性股骨头坏死的病因和发生机制尚未完全阐明,且缺乏有效的治疗方法。随着干细胞治疗技术在各大学科的应用,许多学者开始研究干细胞的性质和功能,并应用于激素性股骨头坏死的治疗中。单纯的干细胞移植效果不佳,但对干细胞进行移植前修饰可以提高其疗效。该文就骨髓间充质干细胞治疗激素性股骨头坏死的研究进展进行综述。

关键词： 皮肤深Ⅱ度烧伤   骨髓间充质干细胞   愈合面积   肥大细胞糜蛋白酶  

摘要： 目的:分析在皮肤深Ⅱ度烧伤治疗中应用骨髓间充质干细胞的效果。方法:选取2020年4月—2021年8月试验动物中心购入的50只仓鼠作为研究对象,采用随机数字表法分为对照组与观察组,各25只。观察组采用骨髓间充质干细胞处理烧伤部位,对照组采用等量生理盐水处理创面,对比两组创面愈合面积、皮肤肥大细胞糜蛋白酶mRNA表达水平。结果:治疗3 d、1周、2周时,观察组创面愈合面积大于对照组,差异有统计学意义(P=0.001)。治疗1 d、3 d、1周、2周时,两组均测出糜蛋白酶基因;观察组治疗1周时,mRNA测定水平最高;治疗1、2周时,观察组糜蛋白酶mRNA水平高于对照组,差异有统计学意义(P=0.001)。结论:骨髓间充质干细胞治疗皮肤深Ⅱ度烧伤,可促进烧伤创面的愈合。

关键词： 心肾相交   骨髓间充质干细胞   精   心力衰竭   心肌损伤   补肾填精  

摘要： 细胞凭借自我增殖及多向分化的潜能成为当前医学的新热点,亦是冠心病心肌损伤的热门治疗方向,而骨髓间充质干细胞因其取材简便、免疫原性低、来源广等优势成为最具潜力的种子细胞,是治疗心力衰竭的理想选择。中医学说认为“精”与干细胞存在相关性与一致性,肾藏精,主骨生髓,可通过补肾填精调控骨髓间充质干细胞。由肾论治心病,从心肾相交理论探讨骨髓间充质干细胞治疗心力衰竭,为中西医治疗心力衰竭提供新思路。参考文献37篇。

关键词： 电针   骨髓间充质干细胞   大鼠   化疗型卵巢功能不全   卵母细胞   归巢   凋亡   趋化因子受体  

摘要： 背景:骨髓间充质干细胞治疗卵巢功能不全有不错的效果,但仍存在归巢效率低、效果欠佳等问题。目的:探讨电针疗法联合骨髓间充质干细胞治疗化疗型卵巢功能不全的效果。方法:从32只SD大鼠中随机选择8只做正常组,其余随机分为卵巢功能不全组、干细胞组、联合组,每组8只,采用腹腔注射环磷酰胺溶液制备卵巢功能不全动物模型。造模结束后,正常组不做处理,卵巢功能不全组尾静脉注射1 mL生理盐水,干细胞组与联合组尾静脉注射1 mL骨髓间充质干细胞悬液(细胞数为2×106),联合组大鼠进行电针治疗,30 min/d,持续7 d,治疗结束后取心脏血与卵巢组织观察疗效。结果与结论:①与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠血清雌二醇激素水平明显升高,卵泡刺激素水平明显降低;②与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠卵巢卵母细胞数量明显增加;③与干细胞组相比,联合组的骨髓间充质干细胞归巢水平明显增加(P=0.0043),CXCR4蛋白表达水平升高(P=0.036);④与卵巢功能不全组相比,干细胞组及联合组大鼠卵巢凋亡细胞明显减少,Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高;与干细胞组相比,联合组Bax表达水平明显降低(P=0.0284),Bcl-2表达水平明显升高(P=0.0364);⑤结果显示,电针能促进骨髓间充质干细胞归巢,并增强骨髓间充质干细胞的抗凋亡作用。

关键词： 低强度超声   骨髓间充质干细胞   糖尿病足溃疡   创面愈合   血管新生  

摘要： 糖尿病足溃疡（Diabetic foot ulcer,DFU）是糖尿病最常见的并发症,是糖尿病患者被截肢的重要因素,严重影响了病人的生活质量。目前国内外对其尚无特效疗法,只能对症处理,且复发率高。寻求治疗DFU的有效方法,已经成为DFU相关研究重要任务。 干细胞具有自我更新和多向分化的潜力,这使得干细胞疗法成为促进组织再生和修复的新选择。骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）可以摆脱细胞毒性T细胞和自然杀伤细胞的溶解等,不会引起同种异体反应。因此非常适合干细胞治疗,在DFU的治疗中显示出巨大的潜力。然而由于BMSCs不会在损伤组织中滞留,也不会存活很长时间,通常会在24小时内逐渐消失,细胞需求量大,移植后增殖活性差以及抗凋亡活性差等的限制,降低了治疗效果。因此,寻找能克服其局限性的辅助疗法显得极为重要。 低强度超声（Low-intensity ultrasound,LIUS）是一种安全有效的超声治疗方法。课题组前期研究证实,LIUS不仅能促进BMSCs的增殖、分化和迁移,LIUS预处理BMSCs还可有效增强BMSCs的抗凋亡活性,促进普通皮肤创面的愈合。结合文献报道和前期研究,认为LIUS预处理BMSCs可能对于DFU这种难愈性慢性伤口同样具有良好的疗效,因此,设计了本次研究,旨在证实LIUS与BMSCs联合应用在DFU中的疗效,并对其机制进行了探讨,以期促进干细胞在DFU临床应用中的发展。 目的 本研究旨在验证LIUS联合BMSCs对DFU的疗效,深入研究并阐明其机制,为DFU的干细胞治疗提供理论基础。 方法 1.建立SD大鼠DFU模型:（1）采用高脂高糖饮食联合腹腔注射35mg/kg链脲佐菌素建立SD大鼠2型糖尿病模型。（2）分组进行手术:包括Nt&Vl组（钝性分离股动脉鞘后截断股神经以及结扎股动脉,n=16）;Nt组（仅截断股神经,n=16）;Vl组（仅结扎股动脉,n=16）;Control组（仅钝性分离股动脉鞘,n=16）,然后在各组大鼠右后肢足背制作方形1cm×1cm溃疡创面。（3）彩色多普勒超声检测术侧血流信号。（4）步态分析观察术后步态变化。（5）观察伤口愈合情况,比较各组溃疡创面愈合率和最终愈合时间。（6）H&E染色观察创面组织病理学变化,对新生血管进行计数。（7）Masson染色观察胶原纤维生成情况。（8）免疫组化检测溃疡创面组织CD31的表达。（9）ELISA检测溃疡创面组织愈合关键因子（VEGF-A、EGF、NGF）分泌水平的变化趋势。 2.检测LIUS联合BMSCs对DFU的治疗效果:（1）建立上一部分研究中确定的SD大鼠DFU模型,分组进行治疗:包括Control组（n=30）、BMSCs组（n=30）、LIUS+BMSCs组（n=30）,超声参数为声强30m W/cm2,占空比20%,频率0.3MHz,时间20min持续7d。（2）观察溃疡创面愈合情况,比较各组溃疡创面愈合率和最终愈合时间。（3）H&E染色检测溃疡创面愈合期间病理变化并计数增殖期新生血管。（4）Masson染色观察溃疡创面重塑期的胶原纤维情况。 3.探究LIUS联合BMSCs促进DFU愈合的分子机制:（1）免疫荧光染色对溃疡创面中CD86、CD206和PGP-9.5进行特异性染色。（2）ELISA检测溃疡创面中血管生成、神经元再生和再上皮化等重要过程相关因子VEGF-A、SDF-1、PDGF、CXCR4、NGF、EGF、FGF-7的变化。（3）免疫组化对溃疡愈合过程中炎症相关因子和血管内皮细胞标记物IL-1β、IL-10、IL-6、TNF-α、CD31、和TGF-β1进行特异性染色。（4）q RT-PCR分析溃疡创面中VEGF、SDF-1、CXCR4相关m RNA表达情况。（5）钙荧光探针Fluo 3-AM检测BMSCs胞内钙离子浓度。（6）RNA-Seq转录组测序检测LIUS预处理对BMSCs基因表达的影响。 结果 1.建立SD大鼠DFU模型的研究:（1）Nt&Vl组溃疡创面愈合最慢,各时间点溃疡愈合率低于其他各组（P<0.05）,最终愈合时间晚于其他各组（P<0.05）。（2）Nt&Vl组和Vl组未检测到股动脉血流信号,而Control组和Nt组血流信号明显。（3）Nt&Vl组和Nt组右后肢平均输出强度率和输出面积均低于左后肢。Nt组和Nt&Vl组右后肢平均输出强度率和输出面积均低于Control组和Vl组（P<0.05）。（4）Nt&Vl组炎症浸润较其他组严重,新生血管数量少于其余组,未见皮肤附属器（毛囊,分泌腺等）。（5）Nt&Vl组溃疡创面胶原沉积少于其他组（P<0.05）。（6）Nt&Vl组和Vl组血管内皮细胞少于Control组和Nt组（